Méthodes de typage sanguin au chevet du patient

5.2.1. Cartes d’agglutination

Elles sont proposées par les laboratoires DMS (RapidVet®-H, DMS Flemington, New-Jersey) et permettent l’observation directe de la réaction d’agglutination. Les premières cartes ont été commercialisées en 1995 et contenaient des anticorps polyclonaux comme réactif anti-A et de la lectine de Triticum vulgaris comme réactif anti-B. En 2002, le format des cartes a été modifié et des MoAbs murins anti-A lyophilisés ont remplacé les anticorps polyclonaux anti-A.180

Les cartes actuelles sont divisées en trois zones distinctes: une première zone contrôle ne contenant aucun réactif, une deuxième zone imprégnée de MoAbs anti-A lyophilisés, et une troisième zone imprégnée de lectine anti-B lyophilisée (figure 15). Concernant la technique, une goutte de solution saline tamponnée (PBS) est déposée dans la zone contrôle avec une goutte de l’échantillon du sang anti-coagulé à tester. Les deux gouttes sont ensuite mélangées. Si de l'agglutination est observée, les globules rouges doivent être lavés trois fois avant de recommencer le test. Lorsque le contrôle est négatif (aucune auto-agglutination), une à deux gouttes de PBS sont déposées dans la zone B et dans la zone A, respectivement; suivi par une goutte de sang dans chaque zone. Si l’antigène est présent (i.e., le patient est positif pour le groupe sanguin testé), une agglutination des globules rouges sera visible sur la carte (figure 14). L’agglutination peut être gradée selon différentes échelles en fonction des auteurs : 0 : pas d’agglutination ; 1+ : plusieurs petits agglutinats OU petits agglutinats observés après 30 secondes; 2+ : quelques larges agglutinats et nombreux petits agglutinats OU petits agglutinats observés après 15 secondes; 3+ : quelques larges agglutinats dans une suspension claire OU larges agglutinats observés après 10 secondes; 4+ : un seul large agglutinat dans une suspension claire OU larges agglutinats observés après 5 secondes.181

Figure 14 - Typage sanguin avec des cartes d’agglutination RapidVet®-H

Chat de groupe A à gauche; chat de groupe B à droite. Les contrôles négatifs (auto-agglutination saline screen) autorisent l’interprétation du test; d’après41_;

Les cartes ont été comparées à différentes méthodes de typage dans plusieurs études.120, 142, 154, 180, 181 _Elles

identifient avec précision les antigènes A et B chez les chats sains de groupe A ou B, avec des réactions habituellement fortes (2+ à 3+). Les antigènes A et B ont par contre été mal-identifiés chez certains chats de groupe AB. Des réactions absentes à faibles dans la zone contenant le réactif anti-A ont conduit à une mauvaise classification des chats AB comme étant de groupe B.142, 152, 181 _{Plus rarement, des chats de type}

A ont été classés comme type B ou AB avec les cartes.154, 181 _{Ainsi, bien que les cartes soient}

raisonnablement précises, elles démontrent une sensibilité faible pour la détection du groupe AB (61 %) et une spécificité inférieure à 95 % pour la détection du groupe B.142

5.2.2. Immunochromatographie

Les tests d’immunochromatographie sont fondés sur la détection des réactions d’agglutination grâce à l’hémoglobine contenu dans les globules rouges. Les globules rouges dilués dans une solution tampon vont migrer par capillarité et se fixer sur les anticorps monoclonaux anti-A et anti-B incorporés sur un papier de chromatographie. L’hémoglobine va créer une ligne rouge sombre à l’endroit où les globules rouges se sont fixés, indiquant un résultat positif. Deux sociétés proposent actuellement des tests par immunochromatographie : Alvedia (Limonest, France) et le Laboratoire DMS (RapidVet®-H IC). Le test d’Alvedia se compose d’une bandelette de papier de chromatographie imprégnée en trois niveaux distincts avec des MoAb anti-A, des MoAb anti-B et une lectine de contrôle. Le sang anti-coagulé du receveur est mélangé avec trois gouttes d’une solution tampon. La bandelette d’immunochromatographie est placée au contact du mélange pendant environ 2 minutes jusqu’à ce que la suspension des globules rouges diffuse tout le long de la bandelette. La bandelette est ensuite placée dans un portant pour faciliter l'interprétation du résultat (figure 15).

Figure 15- Typage sanguin par IC avec le QuickTEST A+B (Alvedia)

Le RapidVet®-H IC se présente sous la forme d’un demi-cercle avec trois fenêtres et un puit. Une goutte de l’échantillon de sang est mélangée avec un diluant, puis trois gouttes du mélange sont déposées dans

Exemple d’un chat de groupe A, indiqué par la présence d’une ligne rouge dans l’espace « A » (tête de flèche noire) et une absence de ligne dans l’espace « B » (tête de flèche ouverte). Une ligne rouge solide doit être visualisée dans l’espace contrôle (noté « C ») pour que le test soit valide.

le puit, associées à trois gouttes d’une solution tampon. Le mélange peut alors migrer sur trois bandelettes de chromatographie distinctes disposées en T inversé, la première contenant des MoAbs anti-A, la deuxième des MoAbs anti-B et la dernière contenant une « substance », probablement une lectine, qui se lie à tous les globules rouges (contrôle). Le résultat peut être interprété en 5 à 10 minutes (figure 16).

Figure 16 - Typage sanguin par IC avec le RapidVet-H IC®

Dans plusieurs études, les tests d’immunochromatographie du laboratoire Alvedia montraient une meilleure précision pour le typage sanguin que les cartes d’agglutination. En fonction des études, la sensibilité et la spécificité de ces tests variaient de 97,7 à 100 % pour la détection de l’antigène A, et de 95,7 % à 100 % pour la détection de l’antigène B. Certaines erreurs de typage (type A en type AB, et type AB en type A ou B) étaient décrites.181, 182 _{Les résultats obtenus paraissent répétables et reproductibles en}

utilisant différents types d’échantillons de sang : sang avec EDTA, sang avec CPDA-1, échantillons stockés jusqu’à 1 mois à température ambiante ou réfrigérés. De plus l’hémolyse de l’échantillon ou la présence d’une auto-agglutination ne semblent pas affecter les résultats. 182

Le RapidVet®-H IC a montré un pourcentage d’accord de 96,1 % avec une technique en tube et une technique en gel chez 105 chats. Une sensibilité de 100 % pour la détection des antigènes A et B était rapportée. La spécificité était de 100 % pour la détection de l’antigène A et de 95 % pour la détection de

Exemple d’un chat de groupe A (en haut à gauche), d’un chat de groupe B (en haut à droite) et d’un chat de groupe AB (en bas au milieu), indiqué par la présence d’une ligne rouge dans les fenêtres A ou B. Une ligne rouge doit être visualisée dans l’espace contrôle pour que le test soit valide; d’après183_{; © Sage Publications, avec permission}

l’antigène B. Ainsi, quatre chats de type A étaient mal-classifiés en type AB et un chat AB avait un résultat de typage ininterprétable avec le test d’immunochromatographie.183

5.2.3. Tube de gel

Une technique sur tube de gel RapideVet®-H GEL est disponible auprès du laboratoire DMS. Les tubes utilisés contiennent un gel de composition inconnue et imprégné d’anticorps ayant un degré de réactivité différent pour les antigènes des groupes A, B et AB. Un échantillon de 50 !L de sang anti-coagulé et dilué est placé dans un tube pour le typage et dans un tube de contrôle positif. Les tubes sont ensuite centrifugés. Ce test nécessite une centrifugeuse avec un rotor à angle fixe pour permettre une bonne interprétation des résultats. Le contrôle doit être positif, c’est-à-dire les globules rouges retenus à la surface du gel, pour autoriser l’interprétation du test. Trois résultats distincts sont obtenus basés sur le degré d’agglutination (figure 17). Une précision globale de 98,5 % est rapportée par le laboratoire (tableau 16). Aucune étude externe au laboratoire n’a comparé cette technique aux autres techniques de typage.

Figure 17- Interprétation du RapidVet®-H GEL Caractéristiques du test RapidVet®-H GEL

Les mêmes précautions s’appliquent pour l’interprétation des tests par carte, immunochromatographie ou tube de gel. Un résultat non concluant ou difficilement interprétable doit absolument mener à un

Caractéristique du test Type A Type B Type AB

Sensibilité 98,0 100,0 94,8

Spécificité 97,4 100,0 98,7

Précision 97,7 100,0 97,7

©DMS Laboratories, www.rapidvet.com

la technique en tube, négatifs pour les cartes). Lorsque le typage doit être réalisé dans des conditions non urgentes, comme le recrutement de futur donneur ou le typage de chatte reproductrice, des tests en laboratoire sont recommandés.142, 181-183