L'examen microscopique :

Matériels et réactifs : - Lames et lamelles - Microscope optique - Lugol - Soudan III

- Solution aqueuse à 2% de sulfate de Bleu de Nil

Méthode d'examen :

Prélever une petite parcelle de matières fécales, la diluer sur une lame dans une goutte de Lugol ; recouvrir d'une lamelle puis examiner au microscope ; lire toute la lame d’abord à l'objectif 10 puis 40, et noter la présence ou l'absence des éléments suivants :

Elément Aspect au microscope Signification

Fibres musculaires

- Bien digérées : petits fragments jaunes claires non striés et arrondis.

- Mal digérées : gros

fragments striés jaunes foncés voire brunâtres à angles aigus.

- Fibres musculaires mal digérées Maldigestion.

99 Amidon

- Intra ou extracellulaire colorable en brun foncé par le Lugol. - En grande quantité transit accéléré ou alimentation riche en féculents. Cellulose

- Cellule végétale assez

volumineuse colorée en brun foncé, normalement détruite par la flore microbienne.

Transit accéléré.

Oxalate de Ca2+

- Petits cristaux, incolores, octaédriques, sous forme "d'enveloppe de lettre" ou de "sablier". Signification inconnue. Cristaux de Charcot Leyden - Aiguilles bilancéolées en aiguilles de boussole.

Témoins d'un état allergique

Cellules épithéliales

- Grandes, irrégulières, avec un noyau volumineux.

Témoignent de l'état de la muqueuse intestinale.

Hématies-Leucocytes

- Hématies : Cellules arrondies biconcaves anucléées avec un centre clair.

-Leucocytes : Cellules plus grandes avec des noyaux et granulations.

- Identifiés par des lésions terminales ou des lésions hautes avec transit accéléré.

Flore iodophile

- Flore colorée en violet : navettes (Clostridium) et bâtonnets (Leptothrix).

-Normalement elle est rare.

Renseigne sur la motricité

Flore non iodophile

-Flore de putréfaction Gram + ne prend pas la coloration de Lugol.

- Normalement la flore Gram + prédomine dans les selles.

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Recherche des lipides :

A l’état frais :

- Graisses neutres : globules réfringents.

- Acides gras : globules identiques aux graisses, ou aiguilles fines et longues.

- Savons : aiguilles courtes. Interprétation :

 Insuffisance pancréato-biliaire : prédominance des graisses neutres.  Trouble de l'absorption : prédominance des acides gras et savon. Méthodes d'identification :

Méthode aux Soudans

Réactifs : Solution de Soudan III déjà préparée.

Technique : Mélanger une parcelle de selle avec une goutte du colorant sur une lame examen au microscope.

Résultats : - Coloration orangée des graisses neutres,

- plus faible ou nulle des acides gras, savons et huile de paraffine.

Méthode au Bleu de Nil

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Technique : Mélanger une parcelle de selle avec une goutte du colorant  examen au microscope.

Résultats : Les graisses neutres: se colorent en rouge violacé.

Les acides gras et savons : se colorent en bleu. Huile de paraffine: incolore.

4 – L'analyse chimique :

4.1. Mesure du pH :

- Imprégner le papier PH de la dilution fécale et noter la valeur. - La valeur normale du pH est entre 6,5 et 7,5.

- Il varie en fonction de : La flore de fermentation et de putréfaction et des sécrétions intestinales.

4.2. Recherche du mucus soluble :

- Sa présence témoigne d'une irritation de la muqueuse intestinale.

Technique :

- Mélanger dans un tube à centrifuger 2,5ml de la dilution fécale à 10% avec Dilution fécale à 10% homogène.

Papier-PH.

Dilution fécale à 10% homogène.

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7,5 ml de solution d'acide acétique cristallisable à 5%; - Attendre 15 à 20 min.

Résultats :

- Normalement le liquide reste trouble entre les particules +/- grossières. - Si mucus++ il y a floculation complète avec clarification du liquide.

4.3. Dosage des acides organiques :

Méthode de Bailenger, Clyti et Hir :

Principe :

Les acides organiques de fermentation sont déplacés de leurs sels de calcium par l'acide chlorhydrique titré. Lorsque celui-ci est en excès, il provoque le virage d'un réactif indicateur. Les résultats sont exprimés en nombre de millilitres d'HCl N correspondant à 100 g de selles.

Technique : - 20 ml de filtrat; +30ml ED;

+2 gouttes de phénol phtaléine. Dilution fécale clarifiée et filtrée. Phénolphtaléine.

HCl en solution aqueuse à 2%. HCl N/5.

Bleu de bromophénol. Papier-PH.

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- Neutraliser avec HCl aqueux à 2% jusqu'à décoloration (vérifier le pH préalablement avant de neutraliser) puis revenir à une teinte légèrement rosée avec NaOH N/10; rajouter 2 gouttes de bleu bromophénol puis goutte à goutte HCl N/5 jusqu'à virage au jaune

Résultats : I II

- n ml HCl N/5 correspondent à 20 ml d'une dilution fécale à 10%. Soit 2g de selles.

- (n50):5 = 10n ml HCl N pour 100 g de selles.

 Valeurs normales = 14 à 16 ml HCl N/100 g de selles.

 Une valeur supérieure à la normale traduit une fermentation exagérée.

5 – Compte-rendu :

- Noter les résultats des différents examens et donner l'interprétation correspondante. 20ml filtrat + 30ml ED +2 gttes Phénolphtaléine Verser HCl jusqu'à décoloration Revenir à une teinte rosée par rajout de goutte de NaOH N/10 (1) Verser HCl jusqu'à virage au jaune +2 gttes de bleu de bromophénol (2) HCl 2%

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VI. Discussion :

Dans notre discussion, nous allons faire le point sur quelques problèmes rencontrés durant la mise en place de l’unité et les analyses de la coprologie fonctionnelle, et donner quelques recommandations pour que tout praticien de cette discipline puisse bien mener les analyses en bonnes conditions. Il faut souligner que la mise en place de cette unité n’a pas nécessité de matériel ou d’appareillage particulier ou onéreux, c’est donc une technique facilement implantable dans n’importe quel laboratoire hospitalier ou de ville. Par ailleurs la cotation en B selon la nomenclature en vigueur est de 150 B (arrêté du ministre de la santé n° 1796-03 du 14 joumada 111426 (21 Juillet 2005) fixant la nomenclature des actes d’analyses de biologie médicale). Enfin, le rendu des résultats avec interprétation est fait 48 heures après le prélèvement.