Chapitre IV. Résultats et Discussion
IV. 2.7 2 Système CIE LAB
IV.3. Identification de lactobacilles isolés à partir de miels frais Algériens
IV.3.1. Isolement des lactobacilles
À l'issue du pré-enrichissement des échantillons des miels frais dans le bouillon MRS, suivi d'un ensemencement en masse sur quatre milieux solides différents (MRS, MRS supplémenté de 0,8% de CaCO3, MRS supplémenté de 0,1% de cystéine et 2% de fructose et
Rogosa), nous avons obtenu différentes colonies rondes ou de formes diffuses, de contours réguliers ou irréguliers, de couleurs pales transparentes et d’autres opaques (Fig. 78).
IV.3.1.1. Screening des bactéries du genre lactobacillus
Environ 883 colonies développées sur les isolats, présentant l’aspect macroscopique caractéristique de la flore lactique, ont été purifiés puis soumis au test de la catalase. Ce test a révélé que 39% des colonies testées sont positives pour la réaction de la catalase et 61% sont
Figure 78 : Aspect macroscopique des colonies isolées à partir de miels frais sur différents milieux de culture. A : milieu MRS, B : MRS-CaCO3, C : MRS-fructose+cysteine, D : Rogosa
IV.3. Identification de lactobacilles isolés à partir de miels frais
Algériens
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négatives (Fig. 79). Seules les colonies à activité catalasique négative ont été sélectionnées, repiquées sur bouillon MRS et testées pour la coloration de Gram.
L’aspect microscopique des isolats a ainsi révélé deux formes de cellules : coccidé ou bacillaire. Les coques sont disposées en paires (diplocoques) ou en courtes chainettes et à Gram positif (33%) ou négatif (11%), tandis que les bâtonnets présentent des cellules courtes, isolées associées en paire ou en petite chainette de type Gram positif (15%) ou négatif (2%°) comme l’illustre la Figure 79.
Au total 431 isolats ont été reconnus comme bactéries lactiques sur la base de l’absence d’une activité catalasique et un type Gram positif, dont 31% sont de forme bacillaire et sont présumés faisant partie du genre lactobacillus et 69% sont de forme coccidé et sont présumés faisant partie du genre entérocoque, streptocoque ou pédiocoque selon leurs différents modes d’association (Kandler et Weise, 1986 ; Stiles et Holzapfel, 1997) comme l’illustre les figures
80 et 81. Dans cette partie de notre recherche nous nous sommes intéressés uniquement aux bactéries lactiques du genre lactobacillus. Ces dernières ont donc été conservées dans le lait écrémé à la température de – 20°C pour des études approfondies.
Figure 79 : Répartition en pourcent des bactéries isolées à partir de miels frais
39% 2% 15% 11% 33% cat+ Batonet cat-/Gram- batonet cat-/gram+ cocci cat-/Gram- cocci cat-/Gram+
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IV.3.1.2. Aspect macroscopique des isolats
L’observation macroscopique des colonies obtenues sur gélose MRS a montré qu’elles sont de couleur blanchâtre, de forme circulaire ou lenticulaire à contour régulier avec un
Figure 80 : Répartition en % des bactéries lactiques isolées à partir de miels algériens
Figure 81 : Aspect microscopique après coloration de Gram de bactéries lactique isolée
de miel (grossissement 100X). A : lactobacilles LB65, B : lactobacilles LB01, C : Coque lactique
31%
69%
lactobacilles
Coques lactiques
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diamètre variant entre 2 à 5 mm (Fig. 82). Sur bouillon, les isolats présentent un trouble homogène qui caractérise le groupe des bactéries lactiques (Fig. 82).
En dépit des nombreuses propriétés antimicrobiennes du miel, ce dernier n’est pas un produit stérile. Il contient des microorganismes comprenant des espèces tant pathogènes que bénéfiques. Parmi les bactéries bénéfiques détectés, les plus recherchées sont les bactéries lactiques. La présente étude a permis de mettre évidence la présence de la flore lac tique dans les miels frais algériens. Ces résultats concordent avec ceux obtenus par certains chercheurs qui ont signalé la présence des bactéries lactiques dans le miel. (Ruiz et Rodriguez, 1975 ; Bahiru et al, 2006 ; Lee et al., 2008 ; Ibarguren et al., 2010 ; Tajabadi et al., 2013 ; Sinacori et al., 2014). On constate cependant que les coques lactiques sont dominantes par rapport aux lactobacilles. Ces bactéries peuvent être originaires des plantes (nectar et pollen), du sol ou bien de l’eau. En outre, le tube digestif des abeilles mellifères s'est révélé être une source importante de contamination microbienne du miel. En effet, au cours du processus de production du miel, les abeilles introduisent certaines bactéries dont les bactéries lactiques (Lactobacillus,
Bifidobacterium, and Enterococcus) dans le nectar à partir de leur microbiote intestinal (Silva et al., 2017b ; Tajabadi et al., 2011 ; Pajor et al., 2018).
Actuellement, l'étude des bactéries lactiques du genre lactobacillus provenant de diverses sources naturelles dont le miel présente un intérêt croissant en raison de leurs activités métaboliques diversifiées et une capacité d’adaptation à différents environnements. Cette diversité est responsable de leur large gamme d’applications à l’échelle industrielle (Streit et
al., 2007). En industrie agro-alimentaire ces microorganismes représentent l'un des principaux
groupes impliqués dans la fermentation souhaitable et contribuent à la bio-conservation des aliments (Pisano et al., 2014). Ils sont principalement utilisés en tant que « starter » dans les
Figure 82 : Aspect macroscopique de colonies de lactobacillus sur milieu MRS incubée à 37°C / 48h. A : MRS agar, B : MRS Bouillon
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produits alimentaires fermentés où ils permettent de développer certaines caractéristiques organoleptiques et d'augmenter la durée de conservation sans l’utilisation de conservateurs chimiques (Hugenholtz et Kleerebezem, 1999 ; Dortu et Thonart, 2009 ; Abee, 1995). D'après certains auteurs, certaines caractéristiques du miel tel que la saveur, l'arôme et la texture sont en partie dues aux métabolites produits par les bactéries lactiques présentes dans le jabot de l'abeille (Steinkraus 1995 ; Mato et al 2006 ; Olofsson et Vasquez 2008). En industrie pharmaceutique les lactobacilles sont exploités en tant que probiotique. En effet, ils constituent avec les bifidobactéries les deux principales sources de bactéries probiotiques utilisées dans les produits alimentaires (Heyman et Heuvelin, 2006). Les probiotiques sont définis comme des micro-organismes qui sont correctement administrés pour conférer des avantages pour la santé
(FAO / OMS, 2002), Ils apportent des bénéfices à l’hôte en conférant une balance de la
microflore intestinale, et en jouant également un rôle important dans la maturation du système immunitaire (Yateem et al., 2008). Différentes études ont démontré le rôle préventif aussi bien que curatif de ces bactéries sur plusieurs types de diarrhées(Mkrtchyan et al., 2010). D’autres
ont cité leur capacité de diminuer les allergies liées aux aliments grâce à leur activité protéolytique (El-Ghaish et al.,2011). En apiculture, l’utilisation de lactobacilles isolées à partir
d’estomacs d’abeilles comme complément alimentaire pour les abeilles en substitution de l’utilisation de produits chimiques (antibiotiques, pesticides) a permis le renfoncement du système immunitaire des abeilles et s’est avérée efficace dans la lutte contre la maladie de la varroase(Mathialagan et al., 2018). Uehara et al. (2006) ont démontré la capacité des souches de Lactobacillus crispatus, utilisées sous forme de suppositoires pour empêcher la colonisation du vagin par les bactéries pathogènes et de prévenir ainsi les rechutes chez les femmes qui souffrent d’inflammations fréquentes et répétées de la vessie. Dans l'industrie avicole, la supplémentation en probiotiques, en particulier Lactobacillus, s'est révélée efficace pour augmenter le poids, pour améliorer le taux de conversion des aliments et réduire la mortalité chez les poulets de chair (Huang et al., 2004). De plus, ces bactéries lactiques sont actuellement exploitées en médecine humaine et vétérinaire en tant que nouvel agent antimicrobien et médicament naturel pour lutter contre les maladies infectieuses, en substitution, aux traitements médicaux existant qui sont de moins en moins efficace en raison de la surutilisation d'antibiotiques et de l'apparition d'agents pathogènes résistants aux antibiotiques.
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