Des tests d atta he e t ellulai e, utilisant des cellules souches mésenchymateuses isolées à partir du stroma de la moelle osseuse (HBMSCs), ont été réalisés au laboratoire de Bioingénierie Tissulai e BIOTI“ à Bo deau . Ils pe ette t de ua tifie l adh sio d u t pe ellulai e su u e surface plastique et/ou sur des matériaux modifiés ou non à différents temps après ensemencement et e, pa le dosage de l a ti it d u e e z e l soso iale : la N a t l β-D-hexosaminidase [190].
Tige
Gaine
thermo-
rétractable
et silicone
Vis
2 µm 10 µm173
Avant la réalisation du test, les matériaux à tester ont été préalablement incubés 15 min en milieu IMDM (Iscove's Modified Dulbecco's Medium) dépourvu de rouge phénol et de sérum.
Le test a été réalisé en plaques de 96 puits dont la surface est de 0,32 cm2 avec un
ensemencement de 50 000 cellules/cm2.
Les plaques ont été incubées à 37 °C et sacrifiées après 1 h, 3 h et 6 h. Cinq échantillons de chaque série ont été utilisés pour les temps 1 h et 3 h et quatre pour le temps 6 h. Deux échantillons de chaque série ont également été traités sans cellules à un seul temps.
Les résultats sont comparés à ceux obtenus sur la surface témoin : le plastique utilisé en culture cellulaire. Les sultats so t e p i s e pou e tage d atta he e t pa appo t à la su fa e témoin plasti ue ep se ta t le % d atta he e t à ha ue te ps.
Da s ette tude l atta he e t ellulai e a t étudié pour la surface sablée mordancée actuellement utilisée par le partenaire industriel (SLA), la surface sablée mordancée développée dans ce travail (SLA 311) ainsi que la surface SLA 311 revêtue par électrodéposition durant 1 minute. Nous pouvons observer un très bon attachement sur ces différents supports avec environ 70% pour SLA et “LA à et heu es et % pou l ha tillo e tu Figure IV-29).
L ha tillo e tu pa le p o d d le t od positio e se le do pas fa o ise l atta he e t ellulai e. Cepe da t, d aut es tudes plus pouss es telles ue des essais de prolifération cellulaire so t essai es pou o lu e su l effet de e e te e t.
Des e te e ts o te us pa le t od positio o t e t e effet l a lio atio de l e p essio de la phosphatase al ali e et de l ost o al i e ui so t tous deu des p i ipau marqueurs de la diff e tiatio des ost o lastes et do de la ofo atio osseuse lo s d u e étude in vitro ai si u u e eilleu e appositio osseuse o e a t les tests in vivo [107], [116].
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Figure IV-29 : Diagramme représentant le pourcentage d'attachement cellulaire par rapport à un témoin plastique pour les surfaces SLA, SLA 311 et revêtues par électrodéposition pendant un temps de 1 minute
Pour conclure cette étude sur l la o atio d u e te e t de CaP pa le procédé d le trodéposition, les paramètres retenus permettant de répondre au cahier des charges de ce t a ail de th se o siste e l utilisatio d u e solutio le t ol ti ue dont la concentration en calcium est de 0,0420 M et de 0,0252 M pour le phosphate afin de conserver un rapport Ca/P de l électrolyte égal à , . L le t ol te est maintenu à 60 °C avec une agitation de 270 rpm et un potentiel de -1,6 V/ECS est appliqué durant 1 minute. Le revêtement obtenu ne modifie pas la rugosité du substrat, toujours comprise entre 1 et 2 µm. La surface revêtue présente une mouillabilité élevée, le revêtement possède une épaisseur comprise entre 1 et 2 µm et est adhérent au substrat. Ce revêtement est biphasé et composé de cristaux de DCPD sur un « tapis » d OCP. Il devrait alors fa o ise l ost ointégration des implants mais des tests in vitro et in vivo complémentaires sont nécessaires. Pour la suite de ce travail, le support multi-échantillons décrit précédemment, d o t a t l aspe t i dust ialisa le de e p o d , sera utilisé afin de produire un nombre plus i po ta t d ha tillo s pou l tude du dopage des e te e ts de CaP pa des io s antibactériens.
SLA
SLA 311
Echantillons revêtus
Attachement cellulaire en fonction du temps pour les surfaces SLA, SLA 311
Chapitre V
Dopage du revêtement de phosphate
de calcium avec un agent
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Afin de lutter contre les infections post-opératoires et principalement la péri-implantite, l i o po atio d u age t a ti a t ie da s le e te e t de CaP a été étudiée. Pour cela, le choix s est po t su des io s a a t des p op i t s a ti a t ie es à sa oi l a ge t, le ui e et le zi comme décrit dans le Chapitre I [124]. Ces agents cationiques sont en effet capables de substituer u e pa tie des io s al iu o posa t le e te e t is e pla e su l i pla t. Le ut i i est de d fi i p e i e e t u p oto ole pe etta t l ajout de es l e ts a ti a t ie s da s les e te e ts puis d tudie l i flue e de eu -ci sur la composition et la microstructure du revêtement. Enfin, les propriétés biologiques des échantillons dopés ont été évaluées et en pa ti ulie l effet du e te e t dop su le d eloppe e t d u od le de iofil à ase de plusieu s sou hes a t ie es d i t t pou u e appli atio e ilieu u al.
Des sels de it ates des io s a ti a t ie s d i t t pou ette tude so t utilis s a ils poss de t u e o e solu ilit da s l eau e ui a pe is de les dissoud e fa ile e t et d o te i des solutio s a ueuses de es sels ui o t t ises e œu e soit lo s des p o d s de e te e t étudiés soit en post-traitement des revêtements. Les sels suivants ont été utilisés :
- Cu(NO3)2, 2,5H2O, ACS 98-102%; solubilité de 1378 g/L d eau à °C [191] ;
- Zn(NO3)2, 6H2O, 99%; solubilité de 1800 g/L d eau à °C [192] ;
- AgNO3, ACS 99,9% ; solubilité de 1220 g/L d eau à °C [193].