Effets in vivo du torasémide sur la signalisation du RM cardiaque

3.1.2.1 Etat de la question

Ce travail a été effectué à la suite de l’étude in vitro, pour compléter cette dernière et déterminer l’effet du torasémide dans un système intégré. Pour ce faire, nous avons soumis 27 souris C57BL/6JRj au modèle DOCA-Sel pendant 6 semaines.

3.1.2.2 Objectif de l’étude

Le but de ce travail a été de montrer si le torasémide peut diminuer voire prévenir totalement certains effets délétères induits par le modèle DOCA-Sel sur le cœur de souris. L’expression de gènes impliqués dans le remodelage matriciel et le stress oxydatif, dont certains sont spécifiquement induits par la voie de signalisation du RM, a été analysée dans le cœur. Comme dans l’étude in vitro, l’efficacité du blocage du RM par le torasémide a été comparée à celle de la spironolactone.

3.1.2.3 Protocole d’activation du RM in vivo



Tableau 2. Paramètres physiologiques des souris soumis au modèle DOCA-Sel. Ctrl: souris contrôles; DOCA : souris uninéphrectomisées, traitées à la DOCA et avec de la boisson salée; DOCA+S: souris DOCA traitées avec la spironolactone; DOCA+T: souris DOCA traitées avec le torasémide ;

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Le modèle DOCA-Sel seul ou avec l’ajout de spironolactone ou de torasémide ne modifie pas le poids du corps des animaux (Tableau 2). Le modèle DOCA-Sel induit seulement une hypertrophie rénale qui est également présente chez les souris DOCA+S. L’expression de la sous-unité Į du canal épithélial sodique (ĮENaC), cible du complexe aldostérone/RM au niveau du néphron distal, est doublée chez les souris DOCA par rapport aux souris contrôles et ni la spironolactone, ni le torasémide n’ont d’effet sur cette modulation d’expression (Figure 10).

Figure 10. Effet du torasémide sur l’expression rénale de la sous-unité Į du canal épithélial sodique ENaC chez des souris soumises à un modèle d’activation minéralocorticoïde. Ctrl: souris contrôles; DOCA: souris uninéphrectomisées, traitées à la DOCA et avec de la boisson salée; DOCA+S: souris DOCA traitées avec la spironolactone; DOCA+T: souris DOCA traitées avec le torasémide.

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3.1.2.4 Le torasémide diminue l’expression de certains gènes participant au remodelage de la matrice extracellulaire cardiaque

L’expression relative de l’ARNm de Sgk-1 dans le cœur est augmentée dans le modèle DOCA-Sel comparée aux souris contrôles. Par contre, son expression est diminuée partiellement chez les souris DOCA+S ou DOCA+T. Les gènes codant pour des protéines influençant le remodelage matriciel cardiaque ont été analysés. Les expressions du collagène III et de l’inhibiteur tissulaire des métalloprotéases matricielles de type 1 (TIMP-1, pour

tissue inhibitor of matrix-metalloproteinase-1) sont augmentées chez les souris DOCA par

rapport aux souris contrôles, alors qu’elles sont partiellement inhibées chez les souris DOCA+S et DOCA+T (Figure 11). L’augmentation du collagène I est totalement diminuée chez les souris DOCA+T, ou partiellement chez les souris DOCA+S. Le facteur anti- hypertrophique ANP172, également produit sous l'effet de l'étirement mécanique de la paroi du cœur210, est augmenté par 5 fois chez les souris DOCA et DOCA+S par rapport aux souris contrôles. Par contre, son expression est diminuée de moitié chez les souris DOCA+T (Figure 11).

Figure 11. Effet du torasémide sur l’expression cardiaque de gènes impliqués dans le remodelage matriciel. Ctrl : souris contrôles; DOCA : souris uninéphrectomisées, traitées à la DOCA et avec de la boisson salée; DOCA+S : souris DOCA traitées avec la spironolactone; DOCA+T : souris DOCA traitées avec le torasémide.

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#_{p<0,05 vs DOCA.}

3.1.2.5 Le torasémide n’intervient pas dans la modulation de l’expression des sous-unités de la NADPH oxydase

Nous nous sommes intéressés à la modulation de la NADPH oxydase. Ce complexe enzymatique, composé de six sous-unités, catalyse le di-oxygène en espèce réactive de l’oxygène, provoquant ainsi un stress oxydatif dans la cellule. L’expression de ses deux sous- unités transmembranaires (gp91phox ou NOX-2 et p22phox) et d’une de ses-unités cytoplasmiques p47phox ont été quantifiées dans le cœur des souris. Les expressions des sous- unités gp91phox et p47phox sont augmentées chez les souris DOCA par rapport aux souris contrôles. Ces augmentations sont prévenues totalement chez les souris DOCA+S, alors que les souris DOCA+T ont un niveau d’expression de ces deux sous-unités proche des souris DOCA (Figure 12). Au contraire, l’expression de la sous-unité p22phox n’est affectée dans aucun des groupes étudiés.

Figure 12. Effet du torasémide sur l’expression cardiaque des sous-unités de la NADPH oxydase. Ctrl : souris contrôles; DOCA : souris uninéphrectomisées, traitées à la DOCA et avec de la boisson salée; DOCA+S : souris DOCA traitées avec la spironolactone; DOCA+T : souris DOCA traitées avec le torasémide.

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3.1.2.6 Conclusions de l’étude et discussion

Nos résultats obtenus avec le modèle DOCA-Sel chez la souris sont compatibles avec la majorité des études déjà publiées. Si la dose, la durée ou encore le fond génétique peuvent varier, les différentes études rapportent une augmentation de la fibrose cardiaque, de certains marqueurs de l’inflammation et des sous-unités de la NADPH oxydase, avec la DOCA par rapport aux souris contrôles. L’augmentation de l’expression de la sous-unité Į du canal épithélial sodique, cible du complexe aldostérone/RM au niveau du néphron distal, valide l’efficacité du modèle DOCA-Sel à activer le RM. Ni la spironolactone, ni le torasémide ne sont capables de bloquer l’augmentation d’ĮENaC. On aurait pu s’attendre à ce que la spironolactone, en bloquant le RM, induise une diminution de l’expression de cette sous- unité. Toutefois, il est probable que l’efficacité de la spironolactone dépende des cibles. Dans ces conditions, certaines pourraient ne pas être inhibées par cette dose d’antagoniste du RM, comme ĮENaC, alors que d’autres y seraient sensibles comme les sous-unités gp91phox et p47phox de la NADPH oxydase. L’analyse de la modulation des gènes impliqués dans le remodelage et dans le stress oxydatif montre des réponses similaires ou différentielles entre la spironolactone et le torasémide. La spironolactone diminue partiellement l’augmentation de l’expression de Sgk-1, CTGF et des collagènes I et III, connus pour être modulés via le RM. Le torasémide a un effet analogue sur la modulation de l’expression de ces gènes. Au contraire, l’ANP montre un profil de modulation très variable selon les groupes. Nos données montrent que la DOCA entraîne une augmentation de l’expression de l’ANP, en réponse à l’augmentation de la pression artérielle, à l’hypertrophie et au remodelage cardiaque induits

par le modèle DOCA-Sel. La dose de spironolactone utilisée ne diminue pas l’expression de l’ANP, contrairement au torasémide. Ce dernier pourrait avoir un effet diurétique plus fort que la spironolactone induisant une baisse plus importante de la pression artérielle, ce qui expliquerait l’absence d’augmentation de la masse cardiaque et la diminution de l’expression de l’ANP. Malheureusement, nous n’avons pas mesuré la pression artérielle des animaux. L’analyse de l’expression de la NADPH oxydase est également un bon exemple du possible effet différentiel entre la spironolactone et le torasémide lors d’un stress minéralocorticoïde. En effet, la modulation du stress oxydatif, représenté ici par les sous-unités gp91phox, p22phox et p47phox de la NADPH oxydase apparait spécifique de la signalisation du RM car seule la spironolactone peut l’inhiber. Le traitement à la DOCA induit l’augmentation de l’expression de gp91phox et p47phox, mais ne module pas l’expression de p22phox. Ces résultats sont en accord avec des études faites chez la souris soumises au modèle DOCA-Sel où seule l’expression de gp91phox est augmentée178. Avec l’ajout de spironolactone, l’expression de gp91phox et p47phox est totalement prévenue alors que l’ajout de torasémide n’a aucun effet sur leur expression. Il est à noter le modèle DOCA-Sel chez le rat induit une augmentation de l’expression de la sous-unité p22phox 58, qui est entièrement prévenue par l’éplérénone dans le cœur.

En conclusion, ces résultats in vivo ont permis d’élargir nos connaissances sur les propriétés intrinsèques du torasémide et son incapacité à bloquer le RM. Selon la voie de signalisation considérée, le torasémide et la spironolactone peuvent agir de la même manière ou de manière distincte.