La présence d'hydraxine e t un pH 9,5 permettent une transformation ccun-lutamate en 2-oxoj
(Bernt ec Bergmeyer, 1963).
p l H e du glutamate en 2-oxoglutarate couplée a une réduction du SAD en HADH
L-Glutamte + IAD • EJ) * hydraxine —••
2-Oxoglutarate hydratone • HADH + HH^ * ' Le pH est maintenu à 9»5 grace à un tampon Tris {kO nM)HCl-hydraiine (1*12 mM)-EDTA (2,69 x*0. On aesure l a variation d'abaorbacce apràs addition in déahydrogénaae glutaaique (solution dans l e glycerol : 100 gg de protéine/ml), « un milieu contenant l e tampon, du HAD (environ 0,65 * * 0 , de l'ADP (0,1*36 mM) e t l ' é c h a n t i l l o n .
fe.5.9 Doeaç* dm l'atpartatt
La méthode de dosage de l'aapartate (Pfleiderer, 19é3a) e s t basée 'sat'•"'•' l e s equations suivantes :
. . . . "s.
L-Aspartate + 2roxoglutarate •*-*• L-Glutmmete • oxaloacétate (it.^9) .
Oxaloacétate + NADH + H ++ L-Malate • HAD (fc.30)
Fructois-6*~phosphate •*-»- GlucoiwHi-pbospbate ( l i . 2 l ) A pH T,k [taopor; Tris (128 nM)HClJ e t en présence de HADP en e x c è s ( e n
v i r o n 0,56 aM) et de MgCl ( 1 0 , 2 «M), l ' a d d i t i o n de glucose6phosphate d e h y d r o -genase ( 2 , 5 VS de p r o t é i n e / a i ) provoque une alignent at ion de l a c o n c e n t r a t i o n en HADPH é g a l e a l a c o n c e n t r a t i o n en glucose-6~phosphate. L'addition u l t é r i e u r e d s phosphoglucoie ioooeraje (5 ug de protéine/tal) permet de doser l e f r u c t o s e f i -phosphftte,
La méthode proposée par !*nprecht e t Trautscnold ( 1963) permet de do«er l'ATP (Equ. fc.22 e t U . 2 3 ) .
Glucose + ATP •*-+ Glucose-6~pho*phate + ADP C».22) GiucoBe-6-phosphate + HADP —*• 6-Phosphogluconolactone + HADPH + H ('f-23)
Le Kdlieu d ' i n c u b a t i o n e s t l e mêwtt que pour l e dosage du g l u c o c c 5 phcsphate mai» c o n t i e n t eu p l u s du glucose (12,5 oM) • Apres dosage du g l u c o s e -6-pboapha.te (par a d d i t i o n de glucose-6-phosphate déshydrogénase : 2 , 5 Wg de pro- . t é i n e / a l ) , OA peut d é t e m i n e r l a concentration en ATP a p a r t i r de l a v e r i c t i u i i d'absorbance 2 3**0 (ou 366) nm observée après l ' a d d i t i o n d'hexokinase (5 U5 de p r o t é i n e / s u ) . Le dosage d'ATP e s t effc *^ué sur das é c h a n t i l l o n s nos traite:» au J l o r i s i l .
1».5«6 Dosage du glitooëê
La détermination de l a concentration en g l u c o s e ( 8 1 e i n , 1963) e a t b i r £ « . sur l s f Iqu. h.22 e t lu23- La- a i l i e u d'incubation c o n t i e n t un tasapon T r i s ( 3 8 , 5 rN)-HCl 3H 8 , 0 , du MgClg ( 3 , 6 5 « * 0 , de l'AIT' (0,37 "«M), du ÏA9P* (environ 0 , t 3 jdti)\.de. l a ^ucose-6^-piwfphate déshydrogén*»* ( 2 , 5 us da p r o t é i n e / n l K a t 0,1 s i
d ' é c h a n t i l l o n . La t o r s » t i o o de HADPH aprte a d d i t i o n d'nexokinase (5 »ig d« pro- "
*•*":: ne»/ni) cat. mesurée apectrophotométriqueseiit, U . 5 . 7 Doaag* du oitrate
Le p r i n c i p e du dosage du c i t r a t e e s t dérivé de c e l u i de Dagley (1?63) (Equ. U.2U à l t . 2 7 ) .
Uk aOSagC Bnsj9K^iq.UB O.U a i = / i n > A / « ; c voire y u w i l U M v c . n t u u ** uv w o e
_WJ,«pbntphata (Bûcher e t Hchorst, 19&3) e s t r e a l i s e par addition auccesBive de g l y -c e r o l - 1 -phosphate dehydrogenase ( 1 3 , 3 ug de p r o t é i n e / a i ) e t de t r i one-phosphate iaoaéraae ( 2 , 7 yg de p r o t e i n e / m l ) - c l d o l a a e ( 3 3 , 3 W6 de p r o t é i n e / m l ) à un m i l i e u d ' i n c u b a t i o n contenant un tampon t r i é t h a n o l a a i n e ( 17,U nM)HCl-EDTA (1T CH) pH 7 , 6 , du JtADH (environ 0,102 vH) e t 1 ml d ' é c h a n t i l l o n (Equ. 1».11«, k.\5 e t U. 1 6 ) .
F r u c t o s e - 1 , 6 - P +-> Glycéraldéhyde-3-P + dihydroxyacétone-P (^.lU) OlycéraldShj'de-3-P -*-• Dihy.lrûxyacétone-P (U. 15
Dihydroxyacétone-P + EADH + H+ *-• Glycerol-1 -P + NAD+ (1*.1<S) W.5.*» Do»O0« Ai l o o t o t » , A* glycéroZ-I-pfcoapTiaic et du malate
Les c o n c e n t r a t i o n s en l a c t a t e (Honorât, 1963a)» g l y c e r o l - 1 - p h o s p h a t e (Hoborat, 19^31») e t » a l a t e (Honorst, 1963c) sont déterminées enzymatitiuement en m i l i e u a l c a l i n poux f i x e r l e s protons l i b é r é s e t en pretence d'taydratine pour p i é g e r l e aubstrat oxydé formé (Equ. 4.17» ^.18 e t U . 1 9 ) .
L-Lactate + HAD • hydrazine —•• Pyruvate hydxnxooe + MADH + HO (U.iT) . L-Glycéirol-1-P • KAD + hydraiine —»•
Diaydroxyacétone-F hydraxone + XADH • H^O4- 1 ;'
LHalate + HAD + hydrazine + Mal a t e hydrazone + HADE + H O (U.19) -Ba maintenant l e pH à 9>5 avec du tampon Tri» iko H«}HC1 - hydrajijJH . . (51V «M) - EEWEA ( 2 , 6 9 nM) e t en présence d'un -r.cès de HAD+ (environ Q>65 *H) ,'•
l ' c x y . l a t i o n d e s e u b s t y a t s e a t t o t a l e aprd» l ' a d d i t i o n de» enxysea correspondant»
( d e h y d r o g e n a s e l a c t i q u e : 50 ug de protÉine/aû ; g l y r f r o l - 1 - p h o a p h a t é d<»^rdro~':':
jj.iîriaHe : 20 ug de p r o t i i n e / c l e t dêshySrogéhnse eftlique : "«25 vg dé pr©t$in*/mTV.' ' 1»-5-5 Dosage du glucooe-B-vhoephate, de fmctose-6-phosphate et de l'ATP
De gluco»e-6-phosphate e t l e fructose-6-pbcspfcate «ont dosée s u i v a n t l a uéthode de Hohorst (l963d) (Equ. fc.20 e t U . 2 1 ) .
Acétomcétate • IAB&*'.• H *-»• y-tjurvxrhutfrnit + HAD (b>9\
A pH T,0 i t en présence d'un excès de RAÏS, la. réduction du metabolite à doser e s t complète. Lo milieu d'incubation contient de tampon phosphate de potassium
(1*7.5 mM) PH 7 , 0 , du «ADR (environ 0,16* vti) e t l ' é c h a n t i l l o n . Les concentration»;
en pyruvate, 2-oxoglutarnte et acétoacétate »ont égales à l a diminution de con-centration en KADH observée api3s l ' a d d i t i o n des déshydrogénases l a c t i q u e , gluta-aique e t 3-hydroxybutyrique (aux concentrations respective» de 1 2 , 5 , de 25 et 25 ug 4t protéine par ml de milieu d'incubation).
U.5.2 Dotagm du pyruvate, du photphoinolpyruvat*, du t-phowphoçlyoérat* mt du 3-phoerphoglycérai*
Les substrats sont déterminé» successivement dans l a même cuvette par -'.' l a méthode entymatique de Czok e t Eckert (1963).
3~Pbosphoglycérate -*-•• 2~Fhospboglycerate (U. 10) 2-Phocphoglycérate +*• PhosphorfnoZpyxuvate ( h. 11 )
PhOBphorfnoZpyruvate •+ ATP *•• Pyruvate + ATP (U.12) Pyruvate + HAM + H •*-+ L-Laetate • IAD (**.13) Le milieu d'incubation comporte du taapon Tris (0,1 M)-HC1 pH 7 , 5 , du','
HfiClg (16,T M), du KC1 (0,1 M), de l'ADP (0,57 •#«), du HADH (environ 0,12 M) e t -1 ml d'échantillon. Les additions successives de deahydrogénase lactique (8,33 U£ de protéine/ml), de pyruvate kinase (3,33 v& de protéine/ml), d'eriol»»* (6,6' ug de protéine/ml) e t de pbcmphoglycévate mutas* (16,67 eg de protéine /ml) proW quent quatre diminutions successives de l'abaorbmoce A 3*0 (où 366) nra S p a r t i r : 3ecq.U!_lIcs cr. peut ^.êt^rrr-îner les conc^trst^^rr- des n é t i b o l i t e n , pyruvnte, phors phoJnolpyruvmte, 2-phospnoglycérate e t j-pjioapôpglycérmte.
I».5 DOSAGE DES XTABOLITES BEPtfTQîZS ET MVSCULAlFFr
Des rata n â l e s Wiatar de 200 i. 300 grssnes sont tués par d i s l o c a t i o n do l a coloca* Ttrtébralô au niveau du. cau« Le t i s s u ( f o i e ou musclé de l a patte eut prélevé «usai rapidement que possible et comprimé entre deux blocs m é t a l l i -que» r e f r o i d i s mx préalable dans te l ' a j o t e l i q u i d e ( s e l o n l a méthode de Wollenberger et al, i 9 6 0 } . Le tenpa éocmlÉ «rtre l a d i s l o c a t i o n de l a colonne v e r t e -bral* e t l e refroidissement du t i e s u eat mu msodsn» de \~ secondes pour l e f o i e
• t de 30 «ecoodes pour l e s muscle». La. poudre, obtenue par p u l v é r i s a t i o n dons un a o r t i e r c c o t e s s o t de l ' a s c t e l i q u i d e , «rt d é p r ô t é i n i s l B «rec de l ' a c i d e p e r calorique 0 , 6 M (k n l p a i . g . d e ti**u Crtia). Après homogénéisation arec un p i e -ton en verre jusqu'à dêcongélatica ccsaplS-te, l e s protéines sont éliminées par ce .trifugatics peodaat 10 a n S 8O00 v* g et à h ° C Le surnageant e s t n e u t r a l i s é arec K„3Q, 5 M ert l e p r é c i p i t é de. XC1Q. éaicLcé par c e n t r i f u g a t i o n . La s o l u t i o n surnageante (pour l e f o i e ) e s t agitée jpeadant 30 secondes a-/ec du F l o r i s i l a f i n d'élindnex l e s T l i v i n e s J l e F l o r i s i l *sfc Ê l l s i s * yv. e ^ t r i f u g a t i o n e t l a s o l u -t i o n surnage«i-te u -t i l i s é e pour les. ioss^s^*.
La plupart des dosages e o r s i s t e s t en l e mesure au r.pectrophotom5tre de l ' a p p a r i t i o n ou ùt l a d i s p a r i t i o n da 3ÏADK eu du HADPE après l*addition des enzy£
; mas appropriés- Les l e c t u r e s d'absorfeanee sont effectuées 3 3^0 ou 366 rua au'":'S SDectrop&oiamètre Gilford, ou EppeadorX,, Lee enzymes, l e s substrat s e t l e s coear .,-, ./.*yme« u t i l i s é s proviennent de la. firme 3oehringer-Ifannheia ; l e F l o r i s i l provitu
" d e l à txxne J^cb-Light.
I4.5.I Dotage an pyruvate* du Z-xicosïytaxcfce et de l'acétoaeétate
,:_v; ,:•;-; te pjTïrsvta (Bûcher••-.«t aZ.» J^S3Î, l e 2-ojcoglutar»te' ( B e r g ^ ^ • . Berct, 1963} e t l**w:étoacétate (HeUmnfcr et Williantaon, 1963) s o n t d é t e r m i n é e
dans ^.,5 "d 3"échantillon p»r eCVL:tton successive des déshydrogën&ses l a c -t i q u e , gio-taaniîjufi e -t 3-bydro3Qr-t2-tyri-tra» (Equ. h.T, V.B e -t V-9).
îTrinrate + IÀDH ••• 3 *+ L-Lactate + HAD* (U.71
-109-4 . 1 8 IUFiAJE.nCZ ÙE LA CmAHZM SUB LË HEUMCISME LIPMIQUE SI LA CET0QEM5SE
La mesure du potentiel d'oxydo-réduction du système HADH-NAD mitocboo-driol a été effectuée à l'aide du couple 3-hYdroxybutyrate/acétoacëtate. A cette occasion, noua avons observé cher, l e s rats injectés de cystamine, indépendamment d'une variation du rapport, une hausse de l a concentration t o t a l e en corps céto-niques. Les corps cétoniques sont formés exclusivement dans l e foie à partir d'aoétyî-CoA ; i l » ne peuvent ê t r e roeteVîlJsé? dans .le foie osais gont oxydén d<sns beaucoup d'autres t i s s u s , en particulier le muscle cardiaque, l e s muscles s t r i é s et l e r e i n . La hausse de concentration en corps cétoniques dans l e sang doit r é sulter d'une production hépatique dépassant la capacité d ' u t i l i s a t i o n par l e s t i s -sus extra-hépatiques.
Une stimulation de l a cétogenèse est souvent associée à une augmentation de l a fourniture d'acides gras l i b r e s . Puisque l a vitesse d'oxydation des acides gras, et donc de production d'acétyl-CoA, est proportionnelle à l a concentration en acides gras l i b r e s , on peut se demander s i l a stimulation de l a cétogenèse ne résulte pas d'une action lipolytique de l a cystamine.
On observe, 1*5 minutes après l ' i n j e c t i o n de cysteusine, une hausse de l a teneur sanguine en glycerol sans modification significative de l a teneur en acides gras libres ; i l est possible que l e s codifications de concentration en a c i -des gras soient transitoires par suite d'une réestêrification e t d'une oxydation importantes. Les catecholamines libérées après l ' i n j e c t i o n de cystamine seraient responsables de l a stimulation de l a lipolyse puisque l a cystaaine additionnée au milieu d'incubation du t i s s u adipeux, ne stimule pas 1» lipolyse mais au contraire l ' i n h i b e , lorsque l a concentration est de 1 S 10 mM,
En conséquence, l a suite des réactions aboutissant à l a formation ac-crue de corps cétoniques serait l a suivante : l e s catecholamines libérées stis&le—
raient, par l'intermédiaire de 1'adenylate cyclique, l a transformation de l a l i -pase inactive en li-pase active (Steinberg, 1966) ; i l doit en résulter une
hydro-lyse des triglycérides en glycerol e t en acides gras libres qui passent dans l é nang i ces derniers sont repris dans l e foie ou leur oxydation en acétyl-CoA « s i stiardée par l ' a f f l u x de substrat e t par 1'adenylate cyclique (Heisnerg e t alr,
1969?> La hausse de concentration en acétyl-CoA, substrat pour l e cycle de llsgrr;
droxyisétbylglutaryl-CoA e t l'inhibition de 1& c i t r a t e synthase par l e s acyl-CoA sont des conditions suffisantes pour causer une hypercétonèmie.
M O
-IL faut remarquer çae l e s n o t i f i c a t i o n s ufc*er*€*# che* lea r a t s à jeun sont d i f f é r e n t e s . L'injection d« cyataaine t e sxiaule paa l a ?&togenè8e bien que l a l i p o l y s e s o i t stimulée. Puisque l e jeûne praroqpe déjà une hypercêtonémie consécutive à l'augmentation de l a fourniture dTacltylCoA par oxydation des a c i -des gras l i b r e s , i l est possible que l a v i t e s s e de l a cétogenëse s o i t maximale dana ces conditions e t qu'ose hausse supplénertaire de l a concentration en a c ê t y l
-C h a p i t r e 5
ROLE DE L'HYPOXIE DANS L'EFFET PROTECTEUR DE LA CYSTAMUE
1 1 2
-INTROOXTI»*
L'injectiou de cyatamine provoque» cher le r a t e t chez l a souris» une réduction doo poto.ntiols d'oxydo-réductioa cytorl p,sm.que et mitochondrial. Ces modifie**.,.;.._ ' , •• •. • ..'„, .;.",.». luUlc prclJ' '.:':"•, -~ rsnque 'î'oxygëne nu nivt»mi de certains ti33unk entraînant une réduction d« l ' a c t i v i t é de l a chaîne r e s p i r a t o i r e . Cette coïisïf'^uence de l'hypoxie est maxissale de 30 à Uj minutée après 1* i n -j e c t i o n chea le r a t et 10 minutes après l ' i n -j e c t i o n chez l a s o u r i s . La cystéamine et l a cyateiue, d'autre p a r t , cystéamine modifient pas l ' é t a t d'oxydoréduction t i s s u -l a i r e .
L ' e f f i c a c i t é p r o t e c t r i c e de l a cystaaine varie avec l ' i n t e r v a l l e 4e temps séparait l ' i n j e c t i o n de l ' i r r a d i a t i o n .
Chez l e r a t , on observe une bonne protection après 10 minutes, une p r o -t e c -t i o n rédui-te apr?^ 20 Td«u-t*s e -t une pro-tec-tion de nouveau impor-tan-te après kj minutée. Chez l a s o u r i s , l a courbe de radioprotection présente également 2 maxima mais 2 et 10 minutes après injection de cyst amine. Dans l e cas. dé l à c y s - :;
téamine» l a courte observée eues l e r a t est sasfelable à c e l l e obtenue avec l a cys~
tamine mais l a protection e s t moindre ; chez I* s o u r i s , on n'observe plus qu'un seul pic de protection, 10 minutes après l ' i n j e c t i o n . Bafin, après administration de cysteine au r a t , l a protection est faible et r e s t e inchangée de l a 10 & l a 90e minute (Bacq et Beausariase, 1965 ; Bets et al.t 196T) {Pig. 1.2, 1.3 et 1.1»).
On «"amp-rque que l'hypoxie causée pas* l a cyst amine se manifeste chez l e r a t comas cfce?. l a s o u r i s , au moment ou l'o:k tffcaerve l e second pic de protection4 . Lorsque es pic e s t sciaa importent ou inexistant (cystéamine, c y s t e i n e ) , l ' é t a t d'oxydo-réduction n ' e s t psa modifié.
i l sesftie, par conséquent, erîsit'ir ur.s r e l a t i o n entre l'hypoxie e t l e second pic d* rsdioprotectiGS. Puisque i'Lyysxâe e s t provoquée chez l e r a t par l ' i n t e r m é d i a i r e des catecholamines, l ' i n j e c t i o n préalable de substances a n t i - a d r é - • nergiqué£ ou iiyspatbJLcolytiques inhibant l'hypoxie» nous permettra de t e s t e r l a v a l i d i t é de l'hypothèse suivant laquelle l ' h y p o ï i s contribuerait à l a protaetiw:"-."'••
observés à ce mcaseixL.
-113-mTERIEL ET IC7H0DCS
Des rats mâles Y/istar de 150 à 200 grammes reçoivent, U5 minutes avant l ' i r r a d i a t i o n , une injection intrapéritonéale " isotonique " de cystamine (68 œg de l a b&se/kg) ou de ïïaCl (0,15!; M). Le nembutal («0 mg/kg par voie intraperito-ne aie) et; l e dichloroisoprotérénol (10 mg/kg par voie sous-cutanêe) sont injectés respectivement 10 e t 30 minutes avant l a cyst amine ou l e NaCl. La rëserpine est injectée à raison de 1 mg/kg par voie intrapéritonéale pendant h jours à interval-l e s de 2k heures.
Chaque expérience comporte quatre groupes d'animaux : (a) un groupe de rats témoins injectés de NaCl ; (b) un groupe de rats injectés de cystamine ; (c) un groupe de rats injectés d'une substance sympathicolytique ou anti-adrSnerçiqua avant l'administration de HoCl ; (d) un groupe de rats injsctës d'une substance sympathicolytique ou anti-adrénergiaue avant l'administration de cystamine.
Les rats sont irradiés par paires (un rat injecté de NaCl et un rat i n -j e c t e de cystamine) dans une cage de p l e x i g l a s . Pour homogénéiser l e champ, l a cage est placée sur un plateau tournant. L'irradiation X est effectuée à l'aide
* * •
d'un Stobilipan Siemens dont les caractéristiques sont les suivantes : 195 k7 20 mA, filtre k ou 5 mm Al, distance focale de 35 cm. Les animaux reçoivent une doBe totale de 900 B en 3 minutes.
Le pourcentage de survie est déterminé pendant les 30 jours suivant l'irradiation.
Le pourcentage de survie des rats injectés non irradiés est de 100 %.
Les différences obtenues entre les k groupes ont été analysées à l'aide du test du x corrigé pour la continuité.
Nous remercions Monsieur le Professeur Betz et Mademoiselle Beaumariàge (service de physiopathologie) grace auxquels les irradiations ont pu être effectuées. .
-*u-RESULTATS ET DISCUSSION
L'injection de cystamine, 1*5 minutes avant l'irradiation X avec une do-se provoquant environ 100 % de mortalité chez les rats contrôles, confère une bon-ne protection au rat. Le pouroeutagû do survie est cz. zzycinQ de 8l f< ; Bets Ct al. (1967) observent dans les mêmes conditions uns 3urvie de 73 % + 6.
L'injection préalable de nembutal, en diminuant la libération de cate-cholamines, supprime 1'hypoxic Parallèlement, on observe une baisse de l'effi-cacité protectrice de la cystamine puisque le pourcentage de survie passe de 95 % à kO % i cette diminution est statistiquement significative (P < 0,01). L'hypoxie pourrait être un mécanisme de protection mais pas le seul puisque sa suppression n'entraîne pas une abolition de l'effet protecteur de la cystamine mais seulement une diminution (Fig- 5«l).
De façon comparable, l'injection préalable de dichloroisoprotérênol qui supprime l'hypoxie provoquée par la cystamine, fait tomber l'effet protecteur de ce disulfure de 75 % à ko %. La différence entre ces deux pourcentages est sta-tistiquement significative puisque 0,01 < P < 0,02 (Fig. 5.2).
La depletion des stocks de catecholamines par des injections répétées de réserpine supprime l'hypoxie mais aussi la protection. Le pourcentage de sur-vie qui était de 75 % chez les rats injectés de cystaaine tombe à hO % chez les rats traiteB à la résarpine avant l'injection de cystamine (différence statisti-quement signifieetive : 0,02 < P < 0,05). La protection offerte par la cystamine est supprimée chez les rats réserpinés ; on n'observe pas de différence statisti-quement significative entre la survie de rats réserpinés injectés de cystamine ou de IJaCl (Fig. 5-3).
On observe, par conséquent, non seulement une corrélation dans le tamps entre l'hypoxie et le second pic de radioprotection mais l'abolition de cette hy-poxie diminue l'efficacité protectrice de la cystamine. Ces résultats sont en
! accord avec l'hypothèse selon laquelle la protection observée H5 minutes après l'injection de cystamine résulte, en partie» de l'hypoxie tissulaire.
La radiorésistance observée peut être due a la concentration réduite
•d'oxygène ou à ses conséquences métaboliques telles que la réduction des coenzymes
| l* " * ' • • " * • • " ' • " ' : • • • • • • • " • - • - • -. •.-.- . " . • . . . • • , • . . - . - . . ••.. - • -, - • . : . .• • . . • - - • • - . . • • . , . „ . . , ' , . ^•-j!'^k' , . ^ :i?î ftfii
•=•• >.. , ••• - 1 1 5 - . ..'i:-fc
i;rf
e t t r a n s p o r t e u r s d ' é l e c t r o n s . En e f f e t , selon Laser 0951*) e t Cohen at all (1957) l a réduction des coenzymes e t transporteurs d ' é l e c t r o n s s e r a i t associée à tin c e r -t a i n degré de radiopro-tec-tion -t a n d i s que leur oxyda-tion p r o d u i r a i -t une augmen-ta- augmenta-t i o n de l a r a d i o s e n s i b i l i augmenta-t é .
I l faut remorquer que, chez l e r a t à jeun depuis U8 h qui ne manifeste pas de signes d'hypoxie, l a p r o t e c t i o n observée 1*5 minutes après i n j e c t i o n de c y s
-tumine «ut comparable à c e l l e obtenue lorsque l e s r a t s sont nourria (Fig. 5«'0«
Nous n'avons pas d ' e x p l i c a t i o n s à proposer à ce sujet mais l e s conditions métaboliques dans l e s t i s s u s d'animaux à jeun ne sont pas identiques à c e l l e s qui p r é -valent dons l e s t i s s u s d'animaux n o u r r i s .
Ces quelques expériences ne constituent qu'une première approche du pro-blème mais nous indiquent t o u t e f o i s qua l'hypoxie causée par l a cystamine ou ses
conséquences métaboliques peuvent contribuer à l a r a d i o p r o t e c t i o n .
Chapitre 6