Matériel et Méthodes
II. Les Tests Comportementaux
IV.1. Dispositif expérimental
L’apprentissage et le rappel de l’AOPG se déroulent dans des cages spécialement conçues au laboratoire: les lickomètres, permettant d’enregistrer les lapements de l’animal (Figure 16).
La cage, constituée d’un cylindre en Plexiglas qui permet d’observer le comportement de l’animal, présente une base en plastique recouverte d'une grille métallique. Un tube en verre, fermé par un bouchon en plastique laissant passer une fine tubulure en verre coudée qui entre dans la cage, sert de biberon. Un fil en argent placé dans ce biberon et la grille métallique sont connectés à un boîtier électronique. Celui-ci permet de détecter chaque contact de la langue de l’animal avec l’eau contenue dans le tube de boisson. Le signal est transmis sur un ordinateur qui va permettre de suivre le nombre de lapements en temps réel (interface Labview). Le nombre de lapements peut être enregistré et stocké pour chaque sujet afin d’être ensuite analysé.
IV.2. Protocole.
Les rats sont d’abord placés en restriction hydrique: les biberons sont retirés des cages d’habitation et les animaux n’ont accès à l’eau que dix minutes par jour pendant deux jours.
A partir du troisième jour, les animaux sont soumis au protocole de l’AOPG qui se décompose en quatre phases :
• Phase d’habituation: les rats sont introduits dans les lickomètres pour les habituer au contexte expérimental (salle d’expérimentation et lickomètres). Ils ont alors accès pendant dix minutes chaque jour à l’eau contenue dans le biberon du dispositif. Un papier filtre non odorisé entoure l’embout du tube de boisson à 1,5 cm de son extrémité. Les sujets apprennent à effectuer la totalité de leur prise
Biberon Grille métallique Tube en plexiglas Lickomètre Sortie informatique
Figure 16: Dispositif expérimental permettant l’enregistrement du nombre de lapements
d’eau quotidienne pendant ce laps de temps. Lorsque la consommation des animaux est devenue stable, on procède à la session d’acquisition.
• Phase d’acquisition: une solution de la saccharine (0,1%, Sigma) remplace l'eau du biberon et nous déposons sur le papier filtre proche de l'embout 5µL d’une solution de benzaldéhyde (Sigma) diluée au 1/5 dans de l’huile minérale. Ainsi, nous présentons aux rats deux stimuli conditionnels (SC) simultanément: un goût sucré et l’odeur d’amande amère. Nous avons choisi ces deux composés car la saccharine n’entraîne pas d’effet métabolique après son ingestion et que l’odeur libérée par le benzaldéhyde stimule le système olfactif, sans composante trigéminale. Comme les jours précédents, le rat dispose de dix minutes pour boire, puis nous le replaçons dans sa salle d’habitation. Trente minutes plus tard, nous injectons par voie i.p. soit du chlorure de lithium (LiCl, Sigma, , 20mL/Kg, 0,2M) aux sujets du groupe Li, soit du chlorure de sodium (NaCl, 20mL/Kg, 0,9%) à ceux du groupe Na. Le LiCl (stimulus inconditionnel, SI) induit un malaise viscéral et rend les rats malades. Le NaCl sert de témoin afin de vérifier que l’injection, elle-même, ne déclenche pas de phénomène d’aversion.
• Phase de récupération: pendant les deux jours suivants, les rats disposent de dix minutes par jour dans les lickomètres pour consommer de l’eau. Cette phase permet d’éteindre la peur vis-à-vis du contexte expérimental que les animaux pourraient développer suite à la phase d’acquisition. En outre, elle permet aux animaux du groupe Li de récupérer du malaise viscéral qu’ils ont subi avant de tester l’AOPG.
• Phase de test de l’AOPG: nous examinons si les rats sont aversifs pour les SC utilisés lors de l’acquisition. Pour tester l’aversion au goût, nous plaçons de la saccharine (0.1%) dans le biberon mais pas d’odeur sur le papier filtre. Pour tester l’aversion à l’odeur, le biberon est rempli d’eau mais nous déposons 5 µL de benzaldéhyde, diluée au 1/5 dans l’huile minérale, sur le papier filtre. Les animaux sont placés dans les lickomètres pendant dix minutes dans les deux cas. Ainsi, nous prenons en compte quatre groupes de sujets dont les noms et conditions expérimentales sont résumés dans le tableau 5.
Conditions expérimentales Nom du groupe
Acquisition Test Li-O
Benzaldéhyde (O) +Saccharine (G) ↓30’
LiCl
O
Li-G
Benzaldéhyde (O) +Saccharine (G) ↓30’
LiCl
G
Na-O
Benzaldéhyde (O) +Saccharine (G) ↓30’
NaCl
O
Na-G
Benzaldéhyde (O) +Saccharine (O) ↓30’
NaCl
G
Tableau 5 : Noms des groupes et conditions expérimentales lors de l’AOPG (O : odeur, G : goût).
Nous considérons que les animaux sont aversifs uniquement si leur nombre de lapés en présence du goût ou de l’odeur diminue d’au moins 30% par rapport à celle relevée le jour de l’acquisition.
La force de l’aversion peut être estimée par le calcul du coefficient d’aversion (CA) par la formule suivante:
CA = (Nacq – Ntest) / Nacq
avec Nacq le nombre de lapements fait le jour de l’acquisition et Ntest le nombre de lapement effectué le jour du test.
La valeur du CA varie entre -1 et 1: plus elle est proche de 1 et plus l’animal exprime une aversion forte. Inversement, quand le CA est inférieur à zéro, c’est que le rat n’est pas aversif.
Quatre vingt dix minutes plus tard, les rats sont sacrifiés afin de procéder à la détection immunocytochimique des protéines Fos et Zif268. En plus des quatre groupes expérimentaux (Li-O, Na-O, Li-G et Na-G), nous sacrifions un cinquième groupe d’animaux : le groupe
contrôle de base (C). Ces animaux nous permettent de déterminer le taux d’expression basal de Fos et Zif268.