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5.1 Conclusions
Les travaux de recherche effectués dans le cadre de cette thèse ont permis d’élucider en partie l’utilité des IVIG dans la gestion de la GvHD. En effet, on sait désormais que l’administration hebdomadaire d’IVIG à hautes doses permet de ralentir l’incidence de la GvHD et la mortalité qui y est reliée. Cette prévention de la GvHD est dépendante des cellules NK, sans lesquelles les IVIG perdent tout intérêt thérapeutique dans la prévention de la GvHD. Les IVIG à hautes doses ne semblent pas diminuer la rapidité et la qualité de la reconstitution immunitaire, bien que le modèle utilisé ne permette pas de tester l’efficacité fonctionnelle de la reconstitution observée. Qui plus est, nos travaux ont permis de confirmer que l’usage des IVIG dans les protocoles cliniques de prophylaxie de la GvHD, tels qu’ils existent aujourd’hui, ne serait pas un usage efficace de cette ressource clinique très prisée et malheureusement limitée. En effet, on a démontré très clairement que les lymphocytes T activés sont nécessaires et indispensables pour l’obtention de l’effet bénéfique des IVIG dans l’expansion des cellules NK du greffon, qui dispensent la protection contre le développement de la GvHD. Puisque le retrait des immunosuppresseurs dans la gestion post-HSCT des patients n’est pas envisageable, ceci invalide du coup la recommandation du retour des IVIG dans la prophylaxie de la GvHD. Par contre, le recours aux cellules NK pour la gestion du développement de la GvHD devrait être étudié, comme suggéré par nos résultats et plusieurs observations cliniques.
Malheureusement, nos travaux n’ont pas permis de déterminer le mécanisme d’action des IVIG dans la prévention de la GvHD. Par contre, on peut dire avec assurance qu’elles permettent la prolifération des cellules NK cytotoxiques. Les IVIG n’affectent ni la survie, ni la prolifération, ni l’activation des lymphocytes T. Elles ne semblent pas non plus avoir d’effet sur la survie des APC, d’origines murine ou humaine, bien qu’on n’ait pas évalué la fonctionnalité de ces cellules post-traitement aux IVIG. Bien que les IVIG n’affectent pas la présence des APC, elles pourraient être responsables de la perte de leur fonctionnalité, les empêchant ainsi d’apprêter et de présenter des antigènes aux lymphocytes T effecteurs, diminuant ainsi l’incidence de la GvHD. Par contre, les très faibles quantités d’APC au sein de notre modèle rendent très difficile la réalisation des tests permettant de valider cette hypothèse en demeurant fidèlement dans ce contexte expérimental particulier. Le besoin de développer un modèle in vitro permettant de tester un tel mécanisme sur les cellules humaines est donc pressant. Bien que les lymphocytes T semblent être activés autant dans le groupe contrôle que dans le groupe expérimental, le contexte expérimental particulier (cellules humaines dans organisme murin) peut embrouiller les résultats observés, en outre par l’activation xénogénique des lymphocytes T. Aussi, il ne faut pas
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oublier que les lymphocytes T sont peut-être déjà même activés avant leur injection chez la souris, ce qui pourrait aussi influencer les résultats observés.
5.2 Perspectives
Comme plusieurs auparavant, on a décrit des effets bénéfiques découlant directement de l’utilisation des IVIG, sans toutefois pouvoir suggérer un mécanisme d’action précis. Il serait donc intéressant et pertinent d’évaluer précisemment le rôle des fragments Fc et F(ab’)2 des IVIG dans la prévention du
développement de la GvHD. Bien que de nombreuses équipes aient démontré que le fragment Fc des IVIG est responsable de leur effet anti-inflammatoire, notre laboratoire n’a rien démontré en ce sens. Une perspective de travail pour la complétion de ce projet serait de tester l’efficacité des fragments Fc et F(ab’)2 dans leur capacité à induire l’expansion et l’activation des cellules NK responsables de la
prévention de la GvHD dans le modèle murin xénogénique. La digestion des IVIG avec la pepsine et la papaïne permet l’isolation des fragments F(ab’)2 et Fc respectivement (309), lesquels pourraient ensuite
être utilisés pour la prophylaxie de la GvHD, tel que décrit précédemment et ainsi améliorer la compréhension de leur mécanisme d’action.
Tout comme plusieurs groupes de recherche qui concentrent leurs efforts à comprendre comment la glycosylation et la sialylation peuvent affecter l’effet des IVIG, on pourrait également entreprendre de traiter les IVIG à la PGNase F (peptide N-glycosidase F) (168) et à la neuraminidase (309), ce qui les déglycosyle et les désialyle, respectivement. Ainsi, on pourrait évaluer la contribution de la glycosylation et de la sialylation des IVIG sur leur effet préventif contre le développement de la GvHD dans le modèle murin xénogénique.
On pourrait également utiliser des IVIG biotinylées pour le traitement de la GvHD dans le modèle murin xénogénique, de façon à pouvoir tracer sur quelles cellules les IVIG se fixent et/ou sont internalisées (113), ce qui permettrait également d’élucider une partie de leur mécanisme d’action dans la prévention de la GvHD.
Les modèles murins de GvHD s’étant améliorés depuis l’époque du commencement de ce projet de recherche, on pourrait également envisager d’utiliser le modèle NSG-Ab0DR4 (257) qui permettrait le
développement d’une GvHD humaine allogénique, plutôt que xénogénique, en choisissant un donneur de huPBMCs de profil HLA-DR4 négatif. L’utilisation de ce modèle permettrait de valider les résultats
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déjà obtenus dans un contexte allogénique humain, et d’augmenter la pertinence pré-clinique des résultats qui pourraient ultérieurement être obtenus dans ce modèle.
Ces expériences relativement simples permettraient de cerner la portion active des IVIG, et aussi les récepteurs sur lesquels elles se fixent afin d’induire l’expansion et l’activation des cellules NK qui préviennent le développement de la GvHD, ce qui permettrait par la suite d’orienter les futures études sur l’élucidation précise de leur mécanisme d’action.