Conclusions par objectif

Les substituts cutanés produits par la méthode d’auto-assemblage développée au LOEX sont intéressants tant pour des applications en milieu clinique qu’en recherche appliquée. En effet, le fait qu’ils soient complètement autologues, sans matériel exogène, permet de réduire les risques de rejet lors d’une greffe en plus d’augmenter leur ressemblance avec la peau normale humaine. En outre, leur méthode de production est d’autant plus intéressante qu’elle permet d’obtenir, en plus des substituts cutanés sains, des substituts cutanés ayant un phénotype psoriasique. Les substituts produits par cette méthode ont donc un potentiel pour des études dermopharmacologiques et de toxicité avec des produits destinés aux peaux saines, mais également avec des molécules ou des formulations ayant un potentiel pour le traitement du psoriasis. Toutefois, afin que ces études soient optimales, une bonne connaissance de l’ensemble des caractéristiques des substituts produits de même que le développement de méthodes de conservation des substituts cutanés sont souhaitables. L’objectif des études présentées dans ce mémoire était donc, dans un premier temps, d’investiguer le potentiel de la congélation comme moyen de conservation des substituts cutanés sains sur une période de 2 mois ainsi que, dans un second temps, de caractériser les lipides épidermiques des substituts sains et psoriasiques. Pour ce 2e _{objectif, deux}

comparaisons ont été effectuées, soit une première entre la composition lipidique des substituts sains et celle de la peau normale humaine et une seconde entre la composition lipidique des substituts sains et psoriasiques. Les conclusions suivantes, en lien avec les objectifs de départ, ont pu être tirées :

1) Les impacts d’une congélation à -20°C sur certaines caractéristiques physicochimiques des substituts sains produits par auto-assemblage ont été analysés. Plus spécifiquement, la perméabilité de ces substituts à l’acide benzoïque de même que l’organisation des lipides de leur couche cornée ont été évaluées avant et après la période de congélation de 2 mois. Trois populations cellulaires saines ont été utilisées pour la production de substituts cutanés et trois biopsies de peau normale humaine ont été utilisées comme contrôles pour ces analyses. Les analyses de perméabilité ont été réalisées avec de l’acide benzoïque radioactive et un système de cellules de type Franz afin de montrer que la congélation augmente la perméabilité des substituts cutanés. En effet, la quantité cumulée de molécule

ayant passé au travers des substituts frais et congelés en fonction du temps de même que le flux de cette molécule sont augmentés de façon significative entre 1h et 24h. Les mêmes analyses réalisées sur des biopsies de peau humaine n’ont, quant à elles, pas montré de différences significatives tant au niveau de la quantité cumulée que du flux. L’organisation lipidique de la couche cornée a également été investiguée par ATR-FTIR afin d’évaluer l’impact de la congélation sur cette organisation. La fréquence correspondant à l’élongation asymétrique du groupement CH2 a été mesurée entre 28 et 80°C. Aucune différence

significative n’a été observée dans cet intervalle de températures, ni pour les substituts cutanés, ni pour les biopsies de peau humaine. Ces résultats montrent que la fonction barrière de la couche cornée des substituts cutanés est affectée par le processus de congélation même si l’organisation de ses lipides n’est pas perturbée de façon détectable. L’ensemble de ces résultats permet de conclure que la congélation des substituts cutanés avec la méthodologie utilisée dans cette étude ne constitue pas une voie envisageable pour la conservation des substituts cutanés produits par la méthode d’auto-assemblage.

2) La composition des lipides épidermiques des substituts sains et psoriasiques produits par la méthode d’auto-assemblage a été analysée par chromatographie en phase gazeuse. Trois populations cellulaires saines et trois populations cellulaires psoriasiques ont été utilisées pour la production de substituts cutanés. La composition lipidique de l’épiderme de trois biopsies de peau normale humaine a aussi été analysée. Deux différentes comparaisons ont été effectuées et ont permis de cibler des différences et ressemblances entre la composition lipidique des fractions phospholipides et triglycérides des échantillons. La première comparaison, effectuée entre les substituts sains et la peau normale humaine, a permis de montrer une diminution significative de la proportion d’acide linoléique dans les substituts cutanés. Elle a également permis de montrer que la proportion d’acides gras saturés et insaturés est conservée dans ces mêmes substituts. La deuxième comparaison, effectuée entre les substituts cutanés sains et psoriasiques, a permis de montrer une tendance à une accumulation de l’acide arachidonique dans les phospholipides des substituts psoriasiques. Également, une augmentation significative des acides gras C :18 dans la fraction « Triglycérides » des substituts psoriasiques a pu être observée. L’ensemble de ces résultats permet de conclure que nos substituts cutanés sains présentent des ressemblances avec la

peau normale humaine, mais ont une importante lacune au niveau de la quantité d’acide linoléique. En raison de l’importance de ce dernier et de ses métabolites dans la fonction barrière et dans l’inflammation, il est souhaitable de pallier à ce manque. Cela permettra, nous l’espérons, d’augmenter la présence des marqueurs d’inflammation et donc le phénotype psoriasique dans les substituts pathologiques.