Étude de la synergie avec des molécules conventionnelles

2. Résultats

2.5. Étude préliminaire sur l‟utilisation des molécules de Pyridazinones en thérapie

2.5.1. Étude de la synergie avec des molécules conventionnelles

Plusieurs études ont rapporté que le blocage de plusieurs voies de signalisation cellulaire potentialise l‟action des drogues chimiothérapeutiques et inhibe les résistances. Afin d‟augmenter les chances de guérison lors des traitements chimiothérapeutiques un co-traitement ou bien une polychimiothérapie serait bénéfique. C‟est-à-dire que la plupart des traitements anticancéreux véhiculent plus d‟une seule drogue pour avoir un meilleur traitement possible. De nombreux cancers sont traités avec une bi voire une tri-chimiothérapie. Par exemple, les études faites par Sharma et al. (2006), reporte que le cisplatine est souvent associé à de nombreux autres agents anticancéreux. Ces derniers peuvent avoir la même cible (le carboplatine, l‟oxaliplatine, etc.) ou une cible différente (la gemcitabine, les taxanes, le 5-FU, etc) (Sharma et al., 2006). Selon les études reportées par Yamashita et al., 2010, le co-traitement chimiothérapeutique ne permet pas d‟obtenir un effet cumulatif des agents utilisés séparément. Mais ces associations présentent une meilleure activité anti-tumorale et durable et on observe aussi une amélioration de l‟inhibition des résistances (Yamashita et al., 2010).

De nombreuses études ont indiqué que la combinaison avec d‟autres médicaments cytotoxiques pourrait non seulement améliorer le taux de réponse, mais aussi réduire la réaction indésirable de ces médicaments. En effet, le traitement combinatoire avec différentes molécules synthétiques pouvait augmenter les potentiels thérapeutiques des médicaments conventionnels, démontrant ainsi un traitement pertinent ciblé du cancer du sein. De plus, nous avons mis en évidence l‟utilisation des deux molécules de pyridazinones, 6f et 7h, en thérapie combinatoire avec des drogues conventionnelles contre les cellules cancéreuses humaines MCF-7 et MDA-MB-468. Ce test a été réalisé dans le but d‟explorer un éventuel effet synergique en calculant l‟indice de combinaison au moment du traitement en combinant l‟une des deux molécules les plus cytotoxiques (6f ou 7h) avec trois molécules anticancéreuses conventionnelles (le Méthotrexate, le Cisplatine ou le Paclitaxel) contre les deux lignées tumorales mammaires hormono-dépendante et non hormono-dépendante MCF-7 et MDA-MB-468, respectivement.

Les résultats portés sur les Tableaux 4 et 5 résument l‟effet de la combinaison de la molécule 6f avec d‟autres drogues contre la lignée MCF-7 et MDA-MB-468, respectivement. D‟après le Tableau 4, chez la lignée MCF-7, l‟interaction entre la molécules 6f (2,2 μM) et la MTX a montré qu‟à des concentrations supérieures à 4,68 μM de MTX on assiste à un effet synergique. Une additivité modérée est observée quand cette concentration est entre 1,17 et 2,34 μM et un effet antagoniste apparait quand cette dernière est inférieure ou égale à 0,58 μM. Pour les drogues de CisP et de Pacli, on remarque une différence non significative, en les comparant avec le traitement combiné au MTX. L‟effet synergique a été obtenu avec les 3 premières concentrations chez les deux drogues respectivement. D‟autre part, l‟effet additif apparait à partir de la concentration de 1,45µM pour le CisP et à partir de 2,5µM pour le Pacli.

Tableau 4. Analyse de l'indice de combinaison du co-traitement de la lignée tumorale MCF-7 par la molécule 6f (IC30) combinée à des concentrations variables des drogues conventionnelles (Méthotrexate, Cisplatine ou Paclitaxel).

Molécule 6f* MTX* CisP* Pacli* IC¹ IC² IC³ Descri¹ Descri² Descri³

2,2 18,85 11,66 20 0,5 0,03 0,01 Syn. Syn. Syn. 2,2 9,37 5,83 10 0,61 0,54 0,3 Syn. Syn. Syn. 2,2 4,68 2,91 5 0,76 0,77 0,8 Syn. Syn. Syn. 2,2 2,34 1,45 2,5 0,9 1 1,02 Addit. Addit. Addit. 2,2 1,17 0,72 1,25 1 1,3 1,7 Addit Antag. Antag. 2,2 0,58 0,36 0,63 1,6 1,6 2 Antag. Antag. Antag. 2,2 0,29 0,18 0,31 1,84 1,9 > Antag. Antag. Antag. 2,2 0,14 0,09 0,16 > > >> Antag. Antag. Antag.

Toutes les expériences ont été répétées au moins trois fois. Les données représentent la moyenne ± écart type. MTX= Méthotrexate, CisP=Cisplatine, Pacli= Paclitaxel, IC= Indice de combinaison, Syn.= Synergie, Addit.= Additivité et Antag.= Antagonisme.

Chez la lignée MDA-MB-468 (Tableau 5), l‟interaction entre la molécules 6f (2,2 μM) et le CisP a montré que jusqu‟à 0,72µM, un effet synergique spectaculaire a été observé (p <0,01) tandis que l‟effet antagoniste s‟observe à partir de 0,3 µM de CisP. Cependant, dans le cas du traitement par le MTX on assiste à un effet synergique juste au-delà de 9,37 µM, un effet additif à 4,68 µM et un effe²t antagoniste qui apparaît à partir de 2,34 µM. Quant au

*La concentration en µM.

1Indice de combinaison entre la molécule 6f et le MTX.

Indice de combinaison entre la molécule 6f et le CisP.

traitement au Pacli on remarque un effet synergique au-delà de 2,5 µM, un effet additif à 2,5 et un effet antagoniste à partir de 4,5 µM du Paclitaxel.³

Tableau 5. Analyse de l'indice de combinaison du co-traitement de la lignée tumorale MDA-MB-468 par la molécule 6f (IC30) combinée à des concentrations variables des drogues conventionnelles (Méthotrexate, Cisplatine ou Paclitaxel).

Molécule 6f* MTX* CisP* Pacli* IC¹ IC² IC³ Descri¹ Descri² Descri³

2,2 18,85 11,66 20 0,36 0,36 0 Syn. Syn. Syn. 2,2 9,37 5,83 10 0,18 0,19 0 Syn. Syn. Syn. 2,2 4,68 2,91 5 1 0,1 0 Addit. Syn. Syn. 2,2 2,34 1,45 2,5 1,12 0,53 1,96 Antag. Syn. Antag. 2,2 1,17 0,72 1,25 3,34 2,09 0,89 Antag. Syn. Syn. 2,2 0,58 0,36 0,63 4,5 - 1,5 Antag. Antag. Antag. 2,2 0,29 0,18 0,31 > - 1,55 Antag. Antag. Antag. 2,2 0,14 0,09 0,16 > - - - -

Comme le montre le Tableau 6, l‟effet combiné de la molécule 7h et des drogues conventionnelles sur la viabilité cellulaire de la lignée tumorale MCF-7 a présenté une diminution de 25% de la viabilité cellulaire par rapport au contrôle non traité. En effet, au-delà de 4,68 µM du co-traitement avec le MTX, un effet synergique a été établi, avec une additivité importante qui apparait à 4,68 µM, bien qu‟à partir de 2,34 µM on assiste un effet antagoniste. D'autre part, la viabilité des cellules, traitées par 7h et CisP combinés, a diminué de 50%. Ces résultats indiquent et suggèrent un effet synergique entre 7h et CisP sur la cytotoxicité de MCF-7 à partir de 1µM. Quant au co-traitement au Paclitaxel, on constate un effet synergique très significatif qui va jusqu‟à la concentration de 0,58 µM suivi par une additivité importante à 0,29 et 0,19 µM respectivement.

Le même co-traitement par la molécule 7h combinée aux drogues a été effectué sur la lignée MDA-MB-468 (Tableau 7). Après l‟interaction entre les molécules on assiste à un effet synergique à partie de 9,37 µM, 5,83 µM et 5µM des molécules MTX, CisP et Pacli,

*La concentration en µM.

1Indice de combinaison entre la molécule 6f et le MTX.

Indice de combinaison entre la molécule 6f et le CisP.

respectivement. Cependant l‟effet additif n‟est apparu qu‟avec le co-traitement par le CisP (5µM).⁴

Tableau 6. Analyse de l'indice de combinaison du co-traitement de la lignée tumorale MCF-7 par la molécule 7h (IC₃₀) combinée à des concentrations variables des drogues conventionnelles (Méthotrexate, Cisplatine ou Paclitaxel).

Molécule 7h* MTX* CisP* Pacli* IC¹ IC² IC³ Descri¹ Descri² Descri³

3 18,85 11,66 20 0,05 0,21 0,09 Syn. Syn. Syn. 3 9,37 5,83 10 0,7 0,65 0,34 Syn. Syn. Syn. 3 4,68 2,91 5 1,03 0,98 0,53 Additi. Syn. Syn. 3 2,34 1,45 2,5 1,5 0.87 0,63 Antag. Syn. Syn. 3 1,17 0,72 1,25 1,97 1,05 0,8 Antag. Additi. Syn. 3 0,58 0,36 0,63 2,01 1,73 0,98 Antag. Additi. Syn. 3 0,29 0,18 0,31 2 1,87 1,09 Antag. Additi. Additi. 3 0,14 0,09 0,16 > 2,65 1,76 Antag. Additi. Additi.

Toutes les expériences ont été répétées au moins trois fois. Les données représentent la moyenne ± écart type. MTX= Méthotrexate, CisP=Cisplatine, Pacli= Paclitaxel, IC= Indice de combinaison, Syn.= Synergie, Addit.= Additivité et Antag.= Antagonisme.

Tableau 7. Analyse de l'indice de combinaison du co-traitement de la lignée tumorale MDA-MB-468 par la molécule 7h (IC₃₀) combinée à des concentrations variables des drogues conventionnelles (Méthotrexate, Cisplatine ou Paclitaxel).

Molécule 7h* MTX* CisP* Pacli* IC¹ IC² IC³ Descri¹ Descri² Descri³

3 18,85 11,66 20 0 0.58 0,3 Syn. Syn. Syn. 3 9,37 5,83 10 0 0,51 0,51 Syn. Syn. Syn. 3 4,68 2,91 5 >> 1,05 0,56 Antag. Additi. Syn. 3 2,34 1,45 2,5 >> >> 1,67 Antag. Antag. Antag 3 1,17 0,72 1,25 >> >> 1,92 Antag. Antag. Antag 3 0,58 0,36 0,63 >> - >> Antag. - Antag 3 0,29 0,18 0,31 >> - >> Antag. - Antag 3 0,14 0,09 0,16 >> - - Antag - -

Indice de combinaison entre la molécule 6f et le MTX.

2Indice de combinaison entre la molécule 6f et le CisP

3Indice de combinaison entre la molécule 6f et le Pacli.

La concentration en µM.

2.5.2. Étude de la synergie avec certaines molécules naturelles (Les

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