TABLE DES MATIERES
DEDICACES ………..I REMERCIEMENTS ………..II AVANT-PROPOS………V SOMMAIRE ……….VII RESUME………..XIV ABSTRACT ………XVI LISTE DES SIGLES ET ABREVIATIONS ………..XVIII LISTE DES TABLEAUX ………..XX LISTE DES FIGURES ………...XXII
INTRODUCTION GENERALE ………..1
PREMIERE PARTIE: DONNEES BIBLIOGRAPHIQUES ………..5
I. L’OSTEOMYELITE ………..6
I.1. CLASSIFICATION DES OSTEOMYELITES ………..6
I.2. PATHOGENESE BACTERIENNE ………..8
I.3. LE TERRAIN ……….8
I.3.1. Infection osseuse et diabète ………..8
I.3.2. Ostéomyélite et polyarthrite rhumatoïde……… ..…..9
I.4. ASPECTS CLINIQUES ………..9
I.4.1. L’ostéomyélite hématogène ………..9
I.4.2. Les ostéomyélites par inoculation directe ou par contiguïté …………..9
I.4.3. L’ostéomyélite chronique ………10
I.5. TRAITEMENT ………...10
I.5.1. Traitement médical ………...10
I.5.2. Traitement chirurgical ………10
II. LES IMPLANTS ………...10
II.1. LES IMPLANTS NON BIODEGRADABLES ………11
II.2. LES IMPLANTS BIODEGRADABLES ………11
III. REPONSE DE L’HOTE A UN IMPLANT ………12
III.1. REACTION INFLAMMATOIRE AIGUË ………12
III.2. REACTION INFLAMMATOIRE CHRONIQUE ………13
III.3. REPARATION TISSULAIRE ………13
III.4. REACTION GRANULOMATEUSE ………14
IV. LE SULFATE DE GENTAMICINE ………14
IV.1. PROPRIETES PHARMACOCINETIQUES………15
IV.2. MODE D’ACTION ………16
IV.3. PRECAUTIONS ………16
IV.4. TOXICITE DES AMINOSIDES ………17
IV.4.1. Mécanisme d’action toxique au niveau rénal ………17
IV.4.2. Caractéristiques sémiologiques de la néphropathie ………17
IV.4.3. Histologie ……… ……...18
IV.4.4. Toxicité auditive ……….. 18
V. LA MONOLEINE ………...19
V.1. PROPRIETES PHYSICO-CHIMIQUES ………19
V.2. TOXICITE ………...20
V.3. LES METABOLITES DE LA MONOLEINE ………20
V.3.1. Le glycérol ………...20
V.3.2. L’acide oléique ………21
VI. ETAPES DE DEVELOPPEMENT D’UN MEDICAMENT ……….22
VI.1. LES PRE-REQUIS A L’EXPERIMENTATION CLINIQUE ………….22
VI.1.1. Dossier technique et analytique ………22
VI.1.2. Etudes pharmacologiques ………23
VI.1.3. Etudes toxicologiques ………23
VI.2. L’EXPERIMENTATION CLINIQUE ………27
VI.2.1. Phase I………...27
VI.2.2. Phase II ………...27
VI.2.3. Phase III ………...28
VI.2.4. Etudes après AMM ………...28
VII. BONNES PRATIQUES DE FABRICATION DES MEDICAMENTS STERILES………...28
VII.1. GENERALITES ………28
VII.2. SURVEILLANCE MICROBIOLOGIQUE DES ZONES A ATMOSPHERE CONTROLEE ………...30
VII.3. PRODUITS STERILISES DANS LEUR RECIPIENT FINAL ………….31
VII.4. PREPARATION ASEPTIQUE ………31
VIII. ESSAIS DE STERILITE ET DES ENDOTOXINES BACTERIENNES DE
MEDICAMENTS STERILES ………32
VIII.1. ESSAIS DE STERILITE ………32
VIII.2. ESSAIS DES ENDOTOXINES BACTERIENNES ………33
VIII.2.1. Historique, nature et toxicité des endotoxines ………….33
VIII.2.2. Techniques de recherche et de quantification des endotoxines bactériennes ………...34
VIII.2.3. Mise en œuvre d’un test LAL par la technique de gélification………...34
DEUXIEME PARTIE : NOTRE ETUDE ………38
CADRE DE L’ETUDE ………...39
OBJECTIFS ………...40
CHAPITRE I: FABRICATION D’IMPLANTS BIODEGRADABLES DESTINES AU TRAITEMENT D’OSTEOMYELITES CHRONIQUES ………41
INTRODUCTION ………...42
I. MATERIEL ET METHODES ………42
I.1. DETERMINATION DE LA CONTAMINATION PARTICULAIRE DE L'AIR DES DIFFERENTS COMPARTIMENTS DE LA "SALLE BLANCHE"…… ……….44
I.2. CONTROLE DE LA BIOCONTAMINATION DE L'AIR DES DIFFERENTS COMPARTIMENTS DE LA "SALLE BLANCHE" ………45
I.3. CONTROLE DE LA BIOCONTAMINATION DES SURFACES DE TRAVAIL……… ………... 47
I.4. PREPARATION DES IMPLANTS……… ...47
II. RESULTATS ET DISCUSSIONS ………50
II.1. DETERMINATION DE LA CONTAMINATION PARTICULAIRE ET DE LA BIOCONTAMINATION L'AIR DES DIFFERENTS COMPARTIMENTS DE LA "SALLE BLANCHE" ………...50
II.2. CONTROLE DE LA BIOCONTAMINATION DES SURFACES DE TRAVAIL……….52
II.3. PREPARATION… ………...53
CONCLUSION ………...53
CHAPITRE II: CARACTERISATION PHYSICO-CHIMIQUE DES IMPLANTS ET
CINETIQUE DE LIBERATION DE LA GENTAMICINE ………54
INTRODUCTION ………...55
I. MATERIEL ET METHODES ………55
I.1. CARACTERISATION PHYSICO-CHIMIQUE ………55
I.1.1. Observation macroscopique ………55
I.1.2. Microscopie sur platine chauffante (Hot Stage Microscopy ou HSM).55 I.1.3. Calorimétrie différentielle à balayage (Differential Scanning Calorimetry ou DSC)………..55
I.1.4. Diffraction des rayons X (DRX) ………56
I.1.5. La thermogravimétrie (TGA)………56
I.1.6. Etude rhéologique ………...57
I.1.7. Détermination de la teneur en eau ………57
I.1.8. Détermination de la teneur en éthanol résiduel ………57
I.1.9. Identification et dosage des acides gras libres ………58
I.2. CINETIQUE DE LIBERATION DU SULFATE DE GENTAMICINE ….60 I.3. ETUDE DE STABILITE ………62
II. RESULTATS ET DISCUSSIONS ………63
II.1. CARACTERISATION PHYSICO-CHIMIQUE ………63
II.1.1. Observation macroscopique ………63
II.1.2. Observation microscopique ………64
II.1.3. Calorimétrie différentielle à balayage (Differential Scanning Calorimetry ou DSC)………..………..65
II.1.4. Diffraction des rayons X (DRX) ………67
II.1.5. La thermogravimétrie (TGA) ………68
II.1.6. Etude rhéologique ………….………...71
II.1.7. Détermination de la teneur en eau ………73
II.1.8. Détermination de la teneur en éthanol résiduel .………74
II.1.9. Identification et dosage des acides gras libres ………75
II.2. CINETIQUE DE LIBERATION DU SULFATE DE GENTAMICINE ….76 II.3. ETUDE DE STABILITE ………80
CONCLUSION ………...82
CHAPITRE III: CONTROLE MICROBIOLOGIQUE DES MATIERES PREMIERES
ET DU PRODUIT FINI ………...83
INTRODUCTION ………...84
I. MATERIEL ET METHODES ………84
I.1. ESSAI DE STERILITE ………84
I.1.1. Choix des milieux de culture ………84
I.1.2. Etude des propriétés nutritives des milieux de culture …… ……85
I.1.3. Etude de la stérilité des milieux de culture ………86
I.1.4. Etude de la fertilité des milieux en présence des échantillons à tester.86 I.1.5. Essais de stérilité du myristate d'isopropyle et de l'eau peptonée additionnée de polysorbate 80 (Tween 80) à 1% ………87
I.1.6. Essai de stérilité de l’eau utilisée pour la préparation de l’implant ….88 I.1.7. Essai de stérilité de la monoléine ………88
I.1.8. Essai de stérilité du sulfate de gentamicine ………88
I.1.9. Essai de stérilité de l’implant ………89
I.2. RECHERCHE ET DOSAGE DES ENDOTOXINES BACTERIENNES IN VITRO………..90
I.2.1. Vérification de la sensibilité déclarée du lysat ………90
I.2.2. Détermination de la Concentration Limite en Endotoxines bactériennes (CLE) de l'implant, et de la Dilution Maximale Significative (DMS) ………91
I.2.3. Extraction, recherche et dosage in vitro à proprement dits des endotoxines bactériennes dans les implants ………91
II. RESULTATS ET DISCUSSIONS ………92
II.1. ESSAIS DE STERILITE ………92
II.1.1. Etude de la fertilité et de la stérilité des milieux de culture ……….…92
II.1.2. Etude de la fertilité des milieux en présence des échantillons tester …...92
II.1.3. Essais de stérilité du myristate d'isopropyle et de l'eau peptonée additionnée de polysorbate 80 (Tween 80) à 1% ...93
II.1.4. Essais de stérilité des matières premières ………93
II.1.5. Essai de stérilité de l’implant………93
II.2. RECHERCHE ET DOSAGE DES ENDOTOXINES BACTERIENNES IN VITRO………..94
II.2.1. Vérification de la sensibilité déclarée du lysat ………94
II.2.2. Détermination de la Concentration Limite en Endotoxines bactériennes (CLE) de l'implant, et de la Dilution Maximale Significative (DMS) ………94
II.2.3. Recherche et dosage in vitro à proprement dits des endotoxines bactériennes dans les implants ………...95
CONCLUSION ………...96
CHAPITRE IV : ETUDES TOXICOLOGIQUES IN VITRO ………97
INTRODUCTION ………...98
I. MATERIEL ET METHODES ………98
I.1. TEST D’HEMOLYSE IN VITRO ………98
I.2. TEST DE CYTOTOXICITE IN VITRO ………99
I.3. TEST DE GENOTOXICITE IN VITRO ………..100
I.4. ANALYSE STATISTIQUE ………..102
II. RESULTATS ET DISCUSSIONS ………..103
II.1. TEST D’HEMOLYSE IN VITRO ………..103
II.2. TEST DE CYTOTOXICITE IN VITRO ………..104
II.3. TEST DE GENOTOXICITE IN VITRO ………..106
CONCLUSION ……….109
CHAPITRE V: ETUDES TOXICOLOGIQUES PRECLINIQUES CHEZ L’ANIMAL………110
INTRODUCTION ……….111
I. MATERIEL ET METHODES ………..111
I.1. ANIMAUX D’EXPERIENCE ………..111
I.2. PROCEDURE D’IMPLANTATION ………..112
I.3. MONITORING CLINIQUE DES SOURIS ………..112
I.4. EVALUATION DE LA REACTION TISSULAIRE LOCALE ………...112
I.4.1. Evaluation de l’œdème ………..112
I.4.2. Examen histologique ……… ……….112
I.5. EVALUATION DES EFFETS RENAUX ET HEPATIQUES ..…………...113
I.5.1. Examen macroscopique ………..113
I.5.2. Examen histologique ……….………….113
I.5.3. Exploration fonctionnelle ………..113
I.6. EFFET SUR LE METABOLISME DES TRIGLYCERIDES ………...114
I.7. ANALYSE STATISTIQUE ………..114
II. RESULTATS ET DISCUSSIONS ………..114
II.1. MONITORING CLINIQUE DES SOURIS ………..114
II.2. EVALUATION DE LA REACTION TISSULAIRE LOCALE ………...115
II.2.1. Evaluation de l’œdème ………..115
II.2.2. Examen histologique ……….120
II.3. EVALUATION DES EFFETS RENAUX ET HEPATIQUES…...………...121
II.4. EFFET SUR LE METABOLISME DES TRIGLYCERIDES ………...123
CONCLUSION ……….124
CHAPITRE VI: ETUDE D’EFFICACITE ET DE TOLERANCE CLINIQUES ...126
INTRODUCTION ……….127
I. PROTOCOLE EXPERIMENTAL ………..127
I.1. CRITERES D’INCLUSION DES PATIENTS ………..128
I.2. BILAN PRE-THERAPEUTIQUE ………..129
I.2.1. Bilan clinique ………….……….129
I.2.2. Bilan radiologique ……… ……….129
I.2.3. Bilan biologique ………. ..……….129
I.3. TRAITEMENT REÇU ………..130
I.4. SUIVI DES PATIENTS TRAITES ………..131
I.5. CRITERES D’EFFICACITE ET DE TOLERANCE DU TRAITEMENT ...132
I.6. CONSIDERATIONS ETHIQUES ………..133
II. RESULTATS ……….133
II.1. EFFICACITE DU TRAITEMENT ………..133
II.2. TOLERANCE AU TRAITEMENT ………..136
III. DISCUSSIONS ……….136
III.1. EFFICACITE DU TRAITEMENT ………..136
III.2. TOLERANCE AU TRAITEMENT ………..138
CONCLUSION ……….139
CONCLUSION GENERALE ………..140
REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES ………..143
ANNEXES ………..I NOTE D’INFORMATION AU PATIENT ……….II FORMULAIRE DE CONSENTEMENT ……….V CAHIER D’OBSERVATION ………...VI
PUBLICATIONS ……….VII
