HPLC ANA 45
Série 1100 avec passeur automatique 1200 Détecteurs DAD
Pour les étudiants
Différents modules de la chaine HPLC Ana 45
Utilisation de l’HPLC Ana 45 pour les étudiants
Eléments de l’HPLC et le logiciel
Appareil
Vous allez travailler avec une HPLC avec :
Four à effet peltier pour thermostater la colonne
Passeur automatique (entouré en bleu)
Pompe quaternaire (entouré en orange) La voie B ne fonctionne pas !
Dégazeur
Détecteur DAD (entouré en rouge)
Logiciel OpenLab Chemstation
Dans le plan du système chaque composant est représenté par un icône. L’état en cours est affiché avec le codage de couleurs décrit ci-dessous :
Couleur Etat
Gris Jaune
Vert Bleu Rose Rouge
Inactif ou éteint Non prêt
Prêt Exécution En attente injection
Erreur
Acquisition en temps réel
Pour visualiser en temps réel les informations de l’appareil, cliquer sur « change » à partir de
« Online Plot » et choisir les informations que vous voulez voir en temps réel (ligne de base, pression dans le système, pourcentages d’éluants,
…).
(Entouré en vert)
Analyse
Chargement d’une méthode existante
Cliquer sur l’icône « Method and Run Control » situé en bas à gauche et entouré en rouge.
Vérifier que la méthode sélectionnée est « ………… » à partir du menu déroulant indiqué par la flèche noire : le nom de la méthode choisie apparait sur l’écran comme indiqué par le cadre vert.
Vérifier que les différents paramètres au niveau des 3 modules soient bien appliqués.
IMPORTANT : avant de lancer une nouvelle analyse, vérifiez que le système soit stable. Pour cela, vérifier que la pressions dans le système soit constante à partir du « Online Plot ».
création d’une séquence
Cliquer sur « Sequence » puis sur « Sequence parameters ».
Choisir un sous répertoire pour enregistrer vos résultats en cliquant dans la case « Subdirectory » entourée en rouge.
Préciser « Counter » 1 pour la 1ere injection, les suivantes s’incrémenteront automatiquement ou cliquer sur « Auto » pour garder le « Sample name » puis cliquer sur OK.
1 2
3
Cliquer ensuite sur « Sequence » puis sur « Sequence table ».
Insérer le nombre de lignes correspondants aux échantillons en cliquant sur « Insert » entouré en noir.
Pour supprimer une ligne, cliquer sur celle-ci : la ligne apparait en noir ; cliquer ensuite sur « Cut » entouré en vert.
Indiquer le nombre d’échantillons, leurs noms, leurs posi tions (Vial X) et la méthode chromatographique utilisée grâce au menu déroulant.
Cliquer sur OK et enregistrer la séquence à partir de « Sequence » puis « Save Sequence Template As ».
Injection et lancement d’une séquence
Pour démarrer la séquence et les différentes analyses, cliquer sur « Run Control » puis sur « Run sequence ».
Le passeur d’échantillons se met en marche et l’acquisition démarre. Vous pouvez visualiser en temps réel les différentes injections à partir du « Online Plot ».
Retraitement des chromatogrammes
Pour faire le retraitement des analyses à la fin du Run, cliquer sur l’icône « Data Analysis » entouré en rouge.
Si toute la séquence n’est pas passée et que vous voulez commencer le retraitement de vos
chromatogrammes, ouvrez le logiciel « Open Lab DAD offline ».
Les résultats sont enregistrés dans le répertoire crées lors des analyses et sont inscrits dans les sous répertoires situés à gauche de l’écran comme indiqué par la flèche noire.
Cliquer sur le nom du sous répertoire souhaité : les différents chromatogrammes enregistrés apparaissent dans le menu. Sélectionner le chromatogramme à interpréter en effectuant un double clic dessus.
Modifier l’intégration automatique en intégrant manuellement
Il est également possible d’intégrer certains pics manuellement.
Cliquer sur l’icône entouré en bleu et designer une ligne de base sous votre pic d’intérêt.
Impression du rapport
Imprimer le rapport en allant dans « File/Print/Specify report print ».
Vérifier que le « Report style » choisi est « Performance », choisir en sortie Printer et cliquer sur OK.
Le nombre de plateaux théoriques, la résolution et l’asymétrie sont stipulés dans le rapport.
