Influence des facteurs environnementaux sur les charges des bactéries fécales dans le littoral méditerranéen du Maroc  

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Influence des Facteurs Environnementaux Sur les Charges des Bactéries Fécales Dans le Littoral Méditerranéen du Maroc

Mohamed Bennani

Laboratoire de Microbiologie et d’Hygiène des Aliments et de l’Environnement Institut Pasteur du Maroc

E-mail: bennani220@yahoo.fr

Hamid Amarouch

Laboratoire de Microbiologie, Département de Biologie Faculté des Sciences Ain Chok, Université HassanII Casablanca

Abdelkhalek Boukanjer

Laboratoire de Microbiologie et d'hygiène des Aliments et de l'Environnement Institut Pasteur du Maroc

Hassan Nadre

Laboratoire de Chimie et Toxicologie, Institut Pasteur du Maroc, Casablanca

Mekki Lalaoui

Laboratoire de Chimie et Toxicologie, Institut Pasteur du Maroc, Casablanca

Mohamed Allali

Laboratoire de Chimie et Toxicologie, Institut Pasteur du Maroc, Casablanca

Nozha Cohen

Laboratoire de Microbiologie et d’Hygiène des Aliments et de l’Environnement Institut Pasteur du Maroc

Résumé

La présente étude a été effectuée en vue d’évaluer l’effet des fluctuations des paramètres environnementaux sur la charge des différentes populations bactériennes d’origine fécale dans la baie de Tamouda (littoral Méditerranéen du Maroc). Le suivi a été établi pendant deux ans (janvier 2007 - décembre 2008) au niveau des trois sites. Le dénombrement bactérien des coliformes totaux, des coliformes fécaux et des streptocoques fécaux a été effectué pour l’eau de surface, planctons, bivalves ainsi que pour les sédiments. Ces charges bactériennes ont été corrélées entre eux et avec les paramètres environnementaux (précipitations, température de l'eau; salinité, pH, turbidité et la chlorophylle ‘a’) mesurés périodiquement en tout point du site. Le suivi des paramètres bactériologiques a révélé des charges bactériennes assez élèves surtout durant les saisons froides, notamment dans les bivalves et les sédiments, avec une distribution saisonnière.

Les analyses statistiques ont révélé une corrélation positive entre (les charges en coliformes totaux avec les précipitations et les charges en streptocoque fécaux avec le pH et une

corrélation négative entre ces bactéries fécale avec la salinité). Ainsi, cette étude a démontré que les principaux facteurs contribuant aux fluctuations saisonnières de bactéries fécales ont été principalement les précipitations et la température de l'eau. Ces résultats révèlent également l’effet anthropique bactérien au niveau du site 2 surtout pendant l’hiver et dans les autres sites en périodes estivales ce qui a une influence considérable sur la salubrité de la baie de tamouda.

Mots-clés: Bactéries fécales, paramètres environnementaux, la baie de tamouda, le littoral Méditerranéen du Maroc.

1. Introduction

Le potentiel de transmission de maladies d'origine hydrique sur les plages de loisirs est lié à l'abondance des bactéries fécales dans la colonne d'eau. Lorsque les charges des bactéries indicatrices de contamination fécale (FIB) sont élevées, la contamination fécale peut être présente, conduisant à une augmentation du risque de rencontrer des agents pathogènes (Bonilla et al., 2007). Ainsi (Chigbu et al., 2005), a montré que la dynamique de ces FIB dans les eaux côtières est en fonction de la charge bactérienne dans les ruisseaux et les rivières, et que leurs taux de disparition en surface de l’eau dépend de nombreux facteurs tels que la disponibilité des nutriments, la température, la salinité, la turbidité, le degré de mélange de l'eau, le rayonnement solaire, la prédation, la compétition le transport et les pertes bactérienne due à la mort ou la sédimentation; (Hood & Ness 1982, Auer & Niehaus 1993). Plusieurs études ont utilisées les statistiques multivariées pour examiner les relations entre ces facteurs et les charges en bactéries fécaux (Rosenfeld et al., 2006; Bonilla et al., 2007). Toutefois, les informations sur l'influence des variations inter-saisonnières et inter-annuelles et les facteurs associés à l'environnement comme la température, la salinité et les précipitations avec les charges des FIB dans les eaux côtières sont rares (Rose et al. 2001, Lipp et al. 2001a). Cette étude vise à caractériser la variabilité saisonnière des FIB long de la côte méditerranéenne du Maroc et examine les relations entre les charges des FIB et les facteurs environnementaux. Elle a pour objectifs : (i) Evaluer la prévalence des FIB dans le littoral méditerranéen, (ii) Mesurer les effets des variations saisonnières sur l'abondance des FIB (iii) Connaître l'influence des paramètres environnementaux sur l'abondance des FIB. Ce travail a été réalisé dans trois zones cotiéres au niveau de la baie de tamouda (côte méditerranéenne du Maroc) dans quatre types d’échantillons (eau de mer, planctons, bivalves et sédiments). Trois indicateurs bactériens (Coliforme Totaux ‘CT’, Coliforme fécaux ‘CF’ et Streptocoque Fécaux ‘SF’) ont été choisis parce qu'ils offrent une meilleure adéquation entre la contamination fécale et les problèmes de santé à court terme dans les eaux côtiers.

2. Matériel et Méthodes 2.1. Description de la Zone d'étude

Cette étude a été réalisée au niveau de la baie de Tamouda, situé sur la côte méditerranéenne du Maroc, entre Sebta au nord (35 ° 54'N, 5 ° 17'10 "W) et le Cap-Négron au sud (35 ° 40'N, 5 ° 16'40 "W). Le climat est typiquement méditerranéen. La température moyenne annuelle est d'environ 18 ° C, tandis que la pluviométrie annuelle moyenne varie entre 800 et 1000 mm. Trois sites de prélèvement ont été sélectionnés, Site1: Marina Kabila est situé sur le déversement des eaux usées de la ville de M’Diq;

Site2: Marina Smir est situé près de l’embouchure de la rivière Smir et Site3: Marina Beach est une zone de baignade, surf et de loisirs. Chaque site est différent dans la géographie, la population et l'écologie. Les emplacements des sites (figure 1) ont été déterminés par le système de positionnement global.

Figure 1: Carte montrant l'emplacement géographique des trois sites d'échantillonnage.

2.2. Collecte des Échantillons

A partir de Janvier 2007 jusqu’au Décembre 2008, tous les échantillons ont été prélevés deux fois par mois dans les trois sites. Pour chaque campagne de prélèvement, quatre types d’échantillon ont été recueillis : l'eau de mer, les planctons, les bivalves et les sédiments. A l’aide d'un bateau, un litre d’eau de mer a été prélevé à une profondeur de 1m de la surface. Les planctons ont été recueillies en faisant glisser l'eau à l'horizontale, à une profondeur d'environ 1m avec un filet à plancton de maille 200µm.

Les échantillons de bivalves ont été soit prélevés directement ou achetés auprès des pêcheurs locaux, y compris les moules (Mytilus edulis et Mytilus galloprovincialis) et les coques (Cerastoderma edule), tandis que les sédiments ont été recueillis à la surface de la côte en utilisant des pots en plastique stérile. Après la collecte, les échantillons ont été transportés immédiatement au laboratoire dans une glacière isolée avec des accumulateurs de froid pour maintenir la température autour de 4 ° C. Un total de 619 échantillons, composés (n = 219) d'eau de mer, (n = 203) planctons, (n = 82) bivalves et (n = 115) des sédiments.

2.3. Les Paramètres Environnementaux

La température (T°C), le pH, la turbidité (NTU) et la salinité (g/L) de l'eau de mer de chaque site d'étude ont été mesuré à l'aide d'instruments portatifs. Les concentrations en chlorophylle ‘a’ (µg/L) ont été déterminées selon la méthode monochromatique de Lorenzen (1967) in : Aminot et

Chaussepied (1983). La vitesse du vent et les données pluviométriques ont été obtenus à partir du site Web du Service météorologique national, http://www.tutiempo.net

2.4. Dénombrement des Bactéries Fécales

La méthodologie utilisée est celle de la colimétrie en milieu liquide qui permet la caractérisation et le dénombrement des coliformes totaux et des coliformes fécaux (normes V 08-020 (1994)/ISO 7251 et V 08-021 (1993)/ISO 7402). Il s’agit d’un test présemptif qui demande un test de confirmation. Le test présemptif nécessite l’emploi d’un bouillon lactosé bilié au vert brillant (BLBVB) car l’association bile - vert brillant inhibe la plupart des germes non entérobactéries, l’incubation se fait à 37°C pendant 24 à 48 heures. A partir des tubes positifs (trouble microbien accompagné d’un virage du milieu au jaune fermentation du lactose) trouvés lors du dénombrement des coliformes totaux, un repiquage à l’aide d’une öse bouclée dans à la fois : des tubes de (BLBVB) muni d’une cloche et des tubes d’eau peptonée exempte d’indole (EPEI), l’incubation se fait cette fois-ci à 44°C pendant 24, le dégagement gazeux dans les tubes de BLBVB et l’un anneau rouge en surface après adjonction de 2 à 3 gouttes du réactif de Kovacs dans l’EPEI’ témoin la présence des coliformes fécaux et d’Escherichia coli. La lecture finale s’effectue selon les prescriptions de la table de Mac Grady et les intervalles de confiance à 95% pour chaque valeur du nombre le plus probable NPP ont aussi été obtenus. Brièvement, 25 grammes d'échantillons des bivalves et ou de sédiments ont été ajoutés à 250 ml d'eau peptonée Bouillon (EPT) et mélangés avec un stomacher pendant 30 secondes (Cohen et al., 2008), tandis que 1litre d'eau de mer a été filtré en utilisant un filtre à membrane 0.45μm et les échantillons de planctons été utilisée directement.

2.5. L'analyse Statistique

L’exploitation des données en vue d’apprécier le degré d’affinité entre les bactéries fécaux et les paramètres environnementaux ont été réalisées en utilisant le coefficient de corrélations Pearson (rp).

Pour comparer les charges moyennes des FIB une analyse de la variance a été appliquée avec un niveau de signification alpha = 0,05. Et enfin pour déterminer le degré de contribution des paramètres environnementaux sur l'abondance des FIB l’analyse en composantes principales (A.C.P) a été appliquée en utilisant le logiciel de traitement statistique XL STAT V. 7.1.

3. Résultats

3.1. Les Paramètres Environnementaux

Durant cette étude, la plus haute température d'eau de mer a été enregistrée en Juin 2008 (21,6 °C) et la plus basse en Décembre 2008 (13 °C), des différences significatives ont été trouvés (P <0,01) entre la saison chaude (Juin à Septembre) et la saison froide (Octobre à Mai). Bien qu’une grande variabilité du pH a été observée, des différences hautement significatives (P <0,0001) ont été trouvées dans les valeurs de pH entre les deux saisons. La plus faible valeur de pluviométrie a été enregistrée en Juillet (0 mm) et la plus haute en Novembre 2007 (127mm), des fluctuations similaires de pluviométrie ont été trouvées pour la salinité dans le site 1 et le site 3 au cours des deux années, mais le degré de la salinité au site 2 a été constamment inférieure, ceci peut être expliqué par la proximité de ce site à la rivière Smir, ainsi, une différence hautement significative de salinité (P <0,0001) a été trouvé entre les deux saisons. Une grande variabilité a également été observée dans les concentrations en chlorophylle

‘a’ et en turbidité au niveau des trois sites d'échantillonnage avec une différence hautement significative entre les saisons chaudes et froides (p <0,0001) pour les deux paramètres. Les plus hautes valeurs de la turbidité étaient toujours enregistrées dans le site 2 en raison de l'écoulement de l'eau de la rivière Smir, surtout après les pluies de la saison froide (figure 2).

Figure 2: Fluctuations spatio-temporelles des paramètres environnementaux: (A) Les précipitations, (B) la température de l'eau de mer, (C) chlorophylle ‘a’, (D) la salinité, (E) la turbidité et (F) le pH.

Figure 2: Fluctuations spatio-temporelles des paramètres environnementaux: (A) Les précipitations, (B) la température de l'eau de mer, (C) chlorophylle ‘a’, (D) la salinité, (E) la turbidité et (F) le pH. - continued

3.2. Les Variations Spatio-Temporelles des FIB

Les charges moyennes des FIB était de (2.07-2,36 et 1,20)log10NPP/g dans les sites (1, 2 et 3 respectivement), les abondances maximales ont été observées pendant les saisons froides (4.17- 2.07 et 2.66)log10NPP/g respectivement et les minimums à été enregistrées durant les saisons chaudes (Fig.

3A). Dans tous les sites, les charges des FIB ont montré des tendances semblables (figure 3B) mais les charges au site 2 ont été systématiquement plus élevées (Fig. 3A). On signale aussi que les charges en sédiments et en bivalves ont été constamment plus élevées par rapport à l'eau de mer et les planctons (figure 3 C, D, E). D'autre part, l’analyse statistique a montre une corrélation positive entre l'abondance des coliformes et les précipitations avec (rp = 0,49 P <0,05) et entre l'abondance en streptocoque fécaux et le pH avec (rp = 0,54 P <0,01), alors que la corrélation était négative entre l'abondance en coliforme fécaux et la salinité avec (rp = 0,42 P <0,05 et rp = 0,49 P <0,05 respectivement). Par ailleurs, une corrélation linéaire positive a été enregistrée entre toutes les bactéries fécales (rp = 0,77 p

<0,0001 et rp = 0,61 P <0,001 respectivement) dans les échantillons analysées (tableau 1).

Figure 3 A: Fluctuations spatio-temporelles des charges moyennes de bactéries fécales, (B) fluctuations spatio- temporelles des charges moyennes de chaque groupe, (C) fluctuations spatio-temporelles des coliformes totaux, (D) des coliformes fécaux et (E) des streptocoques fécaux.

Figure 3 A: Fluctuations spatio-temporelles des charges moyennes de bactéries fécales, (B) fluctuations spatio- temporelles des charges moyennes de chaque groupe, (C) fluctuations spatio-temporelles des coliformes totaux, (D) des coliformes fécaux et (E) des streptocoques fécaux. - continued

Table 1: Les coefficients de corrélation de Pearson’s (rp) entre les charges en bactérie fécaux (FIB) et les paramètres environnementaux.

Parameters

environnementaux/ FIB

Coefficient de corrélation de Pearson’s

Streptocoque fécaux Coliformes totaux Coliformes fécaux

Pluviométrie 0,492*

pH 0,542**

Salinité -0,495* -0,426*

Streptocoque fécaux 1 0,535** 0,610**

Coliformes totaux 1 0,778**

Coliformes fécaux 1

* p-Values sont différents de 0 avec un niveau de signification alpha=0,05

** p- Values sont différents de 0 avec un niveau de signification alpha=0,01

3.3. Influence des Paramètres Environnementaux Sur L'abondance FIB

Les résultats obtenus à partir de l'analyse en composante principale (PCA) montre au ‘seuil de signification alpha = 0,05’ une forte corrélation entre les variables (échantillons analysées et/ou paramètres mesurée). Seuls les deux premiers axes factoriels ont été retenus, car ils expliquent jusqu'à (99,68%) de l'information contenue dans la matrice de données (figure 4). En effet, les résultats de cette analyse montrent que les variations de l’abondance en coliformes totaux, coliformes fécaux et streptocoques fécaux sont principalement influencés respectivement par le degré des précipitations (PCA-F1 99,93%), la température de l'eau de mer (PCA-F2 84,2%), la turbidité (PCA-F2 8,26%) et la salinité (PCA-F2 5,35%).

Figure 4: Complot en composantes principales des paramètres environnementaux (pluviométrie, température de l'eau, pH, salinité, la turbidité et la concentration de chlorophylle a) avec l'abondance microbiennes des (coliformes totaux, coliformes fécaux et streptocoques fécaux).

4. Discussion

La présente étude a examiné l'influence des paramètres physicochimiques sur l'abondance des FIB, telle information est très utile pour prédire les effets des changements climatiques sur les densités des FIB et, par conséquent, sur la qualité de l'eau de mer et les bivalves.

Les résultats des mesures physico-chimiques ont montré des variations significatives entre les saisons (froide et chaude) avec un p-valeurs allant de: p <0,01 à p <0,0001, elles sont significatives élèves pour (les précipitations, la salinité, le pH, la turbidité, la chlorophylle et la température de l'eau de mer respectivement), ces résultats étaient cohérentes avec celles obtenues par (Uncles et al. 2000).

L'évolution spatio-temporelle des densités moyennes des FIB ont montré également une variabilité saisonnière. Cette variabilité était plus élevée dans le site 2, car le flux important des visiteurs pendant la période estivale et pendant la saison froide, car la pluie, associée aux ouragans, a ruissellement d'eau considérable de la rivière Smir. Cela a été expliqué par (Chigbu et al. 2005) et plusieurs chercheurs ont indiqué que les charges des coliformes varient avec les changements saisonniers dans les précipitations et le débit des rivières (Lipp et al. 2001). Les résultats de l'évolution temporelle de chaque indicateur (coliformes totaux, coliformes fécaux et streptocoques fécaux) ont montré des variations spécifiques pour chaque indicateur bactérien, ceci a été expliqué par (Rosenfeld et al. 2006) qui a constaté que les charges en FIB ne sont pas seulement dues à la variabilité temporelle ou spatiale dans leurs sources mais au fait que les bactéries se comportent d'une manière conservatrice, et chaque genre de bactéries meurent à un rythme différent, et ce taux de disparition bactérien en océan varient en fonction de facteurs environnementaux comme la température, la salinité, la concentration en nutriments, la prédation, la présence ou l'absence de toxines bactériennes, le rayonnement solaire, la coagulation, la floculation, l’adsorption des particules ont tous des répercussions sur la mort ultime de la bactérie. Les résultats de l'analyse statistique entre les densités des FIB et les conditions environnementales ont montré que, premièrement les coliformes totaux étaient positivement corrélées avec les précipitations et contribue jusqu’au (F1= 99%) dans leurs variations (R2 = 24%, p <0,05), tandis qu’elles sont inversement corrélée avec la salinité (R2 = 18%, p <0,05) avec un degré de contribution de (F1=84%), des résultats similaires ont été trouves par (Bonilla et al. 2007) en plus l’étude menée à Hollywood Beach a indiqué que les précipitations pourraient prédire une proportion significative de la variance observée en coliforme totaux (R2 = 36%, p <0,01). Deuxièmement, cette analyse à montre que les variations d’abondance des streptocoques fécaux était significativement corrélé avec le pH et inversement avec la salinité (R2 = 54%, p <0,01) et (R2 = 49%, p <0,05) indiquant que seulement 0,1% et 5% de la densité des streptocoques fécaux a été attribuée à la différence de pH et la salinité d'eau de mer, respectivement ce qui concorde avec les résultats de (Chigbu et al., 2005 ; Garrido-Perez et al., 2008). Cependant, bien qu'une forte corrélation positive a été trouvée entre les variations en coliforme totaux et en coliforme fécaux (R2 = 60%, p <0,0001) et entre les streptocoques fécaux et les coliforme fécaux (R2 = 37%, p <0,01). Cette étude à montrer également que les densités des FIB étaient toujours plus concentrées dans les échantillons (des bivalves et des sédiments) comparativement aux échantillons d'eau de mer et de planctons, ce qui est en conformité absolu avec les études de (Bordalo et al 2005) qui ont démontré que (les crustacés et les sédiments) sont des hôtes d'une importante population bactériennes (Hua et al. 2003, Hijnen et al. 2004), en plus d’autres études ont montres que les sédiments jouent le rôle d’un filtre naturel qui retient les particules de l'environnement, la matière organique et les microorganismes déverser par les humains et les animaux (Craig et al., 2004; Anderson et al., 2005; Elmir et al., 2007).

Conclusion

Cette étude a démontré que les bactéries fécales étaient plus concentrées dans les sédiments et les bivalves. Les plus fortes densités ont été enregistrées pendant les saisons froides, juste après les tempêtes d'hiver. Les principaux facteurs contribuant aux fluctuations saisonnières des bactéries fécales

ont été respectivement les précipitations, la température de l'eau et le pH. En effet, ces résultats préliminaires suggèrent que les sédiments et les bivalves sont d'importants réservoirs d’agents pathogènes, surtout pendant les saisons froides.

Remerciements

Nous remercions tous les membres de la brigade de la gendarmerie royale de la ville de M 'diq pour leur aide dans la réalisation des prélèvements ainsi que le personnel du laboratoire de chimie et de toxicologie à l’institut pasteur du Maroc pour leur assistance technique.

References

[1] Anderson, M.L., Whitlock, J.E., & Harwood, V.J., 2005. Persistence and differential survival of fecal indicator bacteria in subtropical waters and sediments. Applied and Environmental Microbiology 71: 3041–3048.

[2] Auer, M.T., & Niehaus, S.L., 1993. Modeling faecal coliform bacteriae 1 Field and laboratory determination of loss kinetics. Water Research 27: 693-701.

[3] Bonilla, T.D., Nowosielski, K., Cuvelier, M., Hartz, A., Green, M., Esiobu, N., McCorquodale, D.S., Nwadiuto-Esiobu-Donald, S., McCorquodale-Jay, M., & Fleisher Rogerson, A., 2007.

Prevalence and distribution of fecal indicator organisms in South Florida beach sand and preliminary assessment of health effects associated with beach sand exposure. Marine Pollution Bulletin 54: 1472-1482.

[4] Bordalo, A.A., & Vieira, M.E.C., 2005. Spatial variability of phytoplankton, bacteria and viruses in the mesotidal salt wedge Douro Estuary (Portugal) Estuarine. Coastal and Shelf Science 63: 143-154.

[5] Chigbu, P., Gordon, S., & Strange, T.R., 2005. Fecal coliform bacteria disappearance rates in a north-central Gulf of Mexico estuary Estuarine. Coastal and Shelf Science 65 (1-2): 309-318.

[6] Cohen, N., Filliol, I., Karaouane, B., Badri, S., Carle, I., Ennaji, H., Bouchrif, B., Hassar, M., and Karib, H., 2008. Microbial Quality Control of Raw Ground Beef and Fresh Sausage in Casablanca (Morocco). Journal of Environmental Health 71: 51-55.

[7] Craig, D.L., Fallowfield, H.J., & Cromar, N.J., 2004. Use of macrocosms to determine persistence of Escherichia coli in recreational coastal water and sediment and validation with in situ measurements. Journal of Applied Microbiology 96: 922–930.

[8] Elmir, S.M., Wright, M.E., Abdelzaher, A., Solo-Gabriele, H.M., Fleming, L.E., Miller, G., Rybolowik. M., Peter Shih, M.T., Pillai, S.P., Cooper, J.A., & Quaye, E.A., 2007. Quantitative evaluation of bacteria released by bathers in a marine water. Water Research 41: 3–10.

[9] Hijnen, W.A., Schijven, J.F., Bonne, P., Visser, A., & Medema, G.J., 2004. Elimination of viruses, bacteria and protozoan oocysts by slow sand filtration. Water Science and Technology 50: 147–154.

[10] Hood, M.A., & Ness, G.E., 1982. Survival of Vibrio cholerae and Escherichia coli in estuarine waters and sediments. Applied Environmental Microbiology 43: 578-584.

[11] Hua, J.M., An, P.L., Winter, J., & Gallert, C., 2003. Elimination of COD, microorganisms and pharmaceuticals from sewage by trickling through sandy soil below leaking sewers. Water Research 37: 4395–4404.

[12] Lipp, E.K., Farrah, S.A., & Rose, J.B., 2001. Assessment and impact of microbial fecal pollution and human enteric pathogens in a coastal community. Marine Pollution Bulletin 42 (4) : 286–293.

[13] Lipp, E.K., Schmidt, N., Luther, M.E., & Rose, J.B., 2001a. Determining the effects of El Nin˜

o-Southern Oscillation events on coastal water quality. Estuaries 24: 491–497.

[14] Garrido-Perez, M.C., Anfuso, E., Acevedo, A., & Perales-Vargas-Machuca, J.A., 2008.

Microbial indicators of fecal contamination in waters and sediments of beach bathing zones, International Journal of Hygiene and Environmental Health 211 (5-6): 510-517.

[15] Rose, J.B., Epstein, P.R., Lipp, E.K., Sherman, B.H., Bernard, S.M., & Patz, J.A., 2001.

Climate variability and change in the United States: potential impacts on water-and foodborne diseases caused by microbiologic agents. Environ Health Perspectives 109: 1–28.

[16] Rosenfeld, L.K., McGee, C.D., Robertson, G.L., Noble, M.A. & Jones, B.H., 2006. Temporal and spatial variability of fecal indicator bacteria in the surf zone off Huntington Beach. CA Marine Environmental Research 61 (5): 471-493.

[17] Uncles, R.J., Bloomer, N.J., Frickers, P.E., Griffiths, M.L., Harris, C., Howland, R.J.M., Morris, A.W., Plummer, D. H. & Tappin, A.D., 2000. Seasonal variability of salinity, temperature, turbidity and suspended chlorophyll in the Tweed. Estuary Science of the Total Environment, 251-252: 115-124.