LE BOUILLON NITRATÉ : Recherche de la Nitrate Réductase (NR)

LE BOUILLON NITRATÉ :

Recherche de la Nitrate Réductase (NR)

1. Intérêt

Ce milieu liquide permet de mettre en évidence la présence d’une enzyme du métabolisme énergétique : la NITRATE RÉDUCTASE.

2. Composition

Bouillon nutritif additionné de nitrate de sodium NaNO₃ (1% = 1 g / 100 mL)

3. Principe

Dans la respiration nitraté, les ions NITRATES NO₃^- sont réduits par la nitrate réductase :

- Soit en NITRITES NO₂^- : glucose produits oxydés + n e- NO₃^- + ……… + ……… NO₂^- + ………

nitrate réductase (stade nitrites)

- Soit en DIAZOTE N₂ : glucose produits oxydés + n e- NO₃^- + ……… + ……… N₂ + ………

nitrate réductase (stade diazote)

LE BOUILLON NITRATÉ :

Recherche de la Nitrate Réductase (NR)

-LE RÉACTIF DE GRIESS :

 Composition : Acide sulfanilique (nitrite 1) + -naphtylamine (nitrite 2)

 Rôle : mise en évidence des ions nitrites NO₂^- :

Réactif de Griess + ions nitrites NO₂^- COMPLEXE ROUGE -LE ZINC (Zn) :

 Composition : Zinc pur (en poudre)

 Rôle : mise en évidence des ions nitrates NO₃^- :

Le Zinc catalyse la réduction des ions nitrates NO₃^- (éventuellement présents) en ions nitrites NO₂^-. Ces ions nitrites NO₂^- peuvent alors réagir avec le réactif de Griess pour former un complexe rouge

4. Technique d’ensemencement (cf. Fiche Technique)

5. Lecture

LE BOUILLON NITRATÉ :

Recherche de la Nitrate Réductase (NR)

Réactif de Griess

(nit1 + nit2) Zinc

Observation : coloration rouge

Interprétation : présence de NO₂^- issus de la réduction des NO₃^- Conclusion : NITRATE REDUCTASE + (stade NO₂^-)

Observation : coloration rouge

Interprétation : le Zn a réduit les NO₃^- encore présents en NO₂^- qui sont révélés par le réactif de Griess.

=> Pas de réduction de NO₃^- en N₂

Conclusion : NITRATE REDUCTASE - Observation : pas de coloration rouge

Interprétation : pas de présence de NO₂^- issus des NO₃^-. Les NO₃^- été réduits en N₂ par la bactérie

Conclusion : NITRATE REDUCTASE + (stade N₂)

ITN 1

NIT 2