Effets antibactérien et antifongique des huiles essentieles d'Inula viscosa de la région de Taher, Jijel

"Jlr

i:1,.1 r1

i-+Jl

ry''Ji

llf

de

Ia

r6gion

de

Taher,

Jijel.

Soutenu

Le

0610712019

devant

le

jury:

M'Boudjerda

A.

M-"N4OHDEB

R.

M*:BOUNAR

H.

M'SEBTI

M.

a-'i,?,ta'

'''-r

1rY;,

.

,al.l

t

tJ')

,"{

tJ4

fri\ffiit6

Mohammed

Seddik Ben

Yahia

-

Jijel

Facult6

des Sciences

Exactes

et

Informatique

D6partement

de

Chimie

M6moire

Pr6sent6

pour obtenir le dipl6me

de

Master

en

Chimie

Option

Chimie pharmaceutique

R6alis6

par

Kehili

Zineb

&

Zadi Yasmina

Thdme du

m6moire:

Effets antibact6rien

et

antifo

des

huiles

essentielles

d'Inula

wscosa

a

Pr6sident

Encadrant

Examinatrice

Invit6

Professeur

MCB

MCB

MCB

*ffiXi

4

/aa;se1't

1

j:10

--"*o'l,fj

fr:*-

";

RE,I

ERCIE,I

ENT

Avont

tout

nous remercions Dieu <<ALLAH>Ie

tout

puissont de nous ovoir occordd, lo

f

orce,le

courage

et

fo potience pourterminer ce trovqif .

Je

tiens d

remercier toutes

les personnes qui ont porticip€, de

prls

ou de loin d lo

rdolisotion de ce mdmoire, en espdront n'ovoir oublid personne;

Tout d'obord, ce

trovcil

ne

sereit

pos aussi riehe

et

n'qurcit pos pu ovoir le

jour

sons

l'oide prdcieuse de

filme IIOHDEB

Rimo,

Moitre de

Confdrences, nous lo remercions pour lo guolitd de son encadrement exceptionnel, pour so potience, so rigueur

et

so

disponibilitd duront

notre

prdporotion de ce mdmoire.

A

iime

BOUNAR

H.,l4aitre

de Confdrencesd

qui

nous exprimons

toute notre

grofitude

pour ovoir rdpondu fovoroblement d

notre

invitotion de

f

oire

portie

du

jury,

de soutenonce en guolitd, d'examinotrice.

A

ltlr

BOUDJERDA

A.,

Professeur dEnsergnenenf

Supdrieur,dqui

nous exprimons

lgolement

toute

notre

grotitude

pour

ovoir

occept6, d'|valuer ce mdmoire

at

d'en

prdsider la

jury

de soutenonce.

A

lrlr

SEBTI

li.,

tl4aifre de Confdrences d gui nous exprimons

toute notre

grotitude

pour

cvoir

acceptd

notre

invitotion. Merci, Monsieur, pour tous vos consails, rdponses

et

documentotion

trds

utiles.

Une

portie

de

l'extroction

des HE a 6ard rdalisde ou

sein

du Loborotoire de lo

focultd

des Sciences de lo Vie

et

de lo Noture. Nous remercions la responsable

principald{tme

BOUHAIJ

5.

pour so gdndrositd

et

tous les

outres

ingdnieurs des laboratoires

pddogogiques.

Notre

pfus grond merci s'odresse

d

Monsieur BOUKROUCHE

O.,

Direcfeur

et

Propridfaire

du Ldboratoire des Analyses

l4ddicales,

oi

lo plus importonte

portie

de ce

trqvoif

a

6td

rdalis6e:

l'$s1.^ent,

lq purif icofion

et

la

culture

des souches clinigues des

ge?m?-s utilisds, l'ontibiogromme

et

l'oromotogromme.

Merci Monsieur,

poun

votre

modestie, gdndrositi,, pour vos conseils

et

surtout

pour

votre

potience

inditerminde

pour ton accueil ou sein du

Loborotoire

en nous

mettont

dons

d'excellentes conditions de

trovoil.

Sons oublier

li"ll"Bourooui F.C.,

ingdnieur d lo conservation des

fordts,

Nous vous

remercions €normdment pour l'aide gue vous nous ovez opportde,

surtout

pour le choix

des espi,ces v 6gdt ales.

Enfin

on

tient

d remercier

toutes

les personnes

guiont

porticipd de prds ou de loin d

D64teaoe

J'ai

l'honneur

de

dedie

ce

modeste

travail

d

mes chers

parents

Moarad

et

Zolikha

A

mes chdres

s&urs

Wafa,

Soumia,

Selma

et

ma

nidce Nada

A

mes

chers

frdres

Oussama

et

Mohamed Islem

A mon fiancd

Mohamed, qui

a

su de

loin m'encourAger

et me

soutenir.

A

toute

ma

famille,

mes

ancles, tantes,

cousins et cousines,

petit

et

grand,

sans exception.

A

ma

chdre

binime

Yasmina

avec

qui

j'ai

partage

se

modeste

travail

A

toutes

mes

copines

A

tous

mes

colldgues,

A

toute

Ia

promotion Master

II

chimie

pharmaceutique

2019.

A

tous

ceux

qui

me

sont

chdrcs

A

tous ceux

qui

m'aiment

A

tous ceux

que

j'aime.

Ie

d6die

ce

travail.

tu€dGc&ne

J'ai

L'honneur de

dddier

ce

modeste

travail

d

:

L'homme

de

ma

vie,

mon

exemple 6ternel,

mon

soutien

moral

et

source

de

joie

et

de

bonheur, celui

qui

s'est toujours

sacrffid

pour

me

voir rdussir,

que

dieu

te

garde dans

son vaste

paradis, d

toi

papa.

A Ia lumidre de

mes

jours,la

source

de

mes

efforts,

Ia

flamme

de

mon

c@Lr,

ma

vie

et

mon

bonheur

;

meman

que

j'adore.

Aux

personnes

dont

j'ai

bien aimd

Ia

prdsence dans

ce

jour,

d toutes

mes

seurs Souhila, AmeI,

tairouz

et d

ma

nidce

Ryam,

je

dddie

ce

travail

dont

le

grand

plaisir

leurs

revient

en

premier lieu

pour

leurs conseils, aides,

et

encouragements.

A toutes

mes cousines

:

Lynda,

Soniao

Loumia

et toute

la famille Zadi.

A

mon

bindme

Zineb

et toute

Ia

famille kehili.

Auxpersonnes qui m'ont toujours aidd

et

encourag{, qui 1taient toujours

d

mes

c6tds,

et

qui m'ont

accompagn1

durant

mon chemin

d'6tudes,

mes

aimables

amies,

collDgues

d'itude,

et

seurs

de

ceur

:

Lamia, Aida,

Lylia,

Meriem,Imen,

-Nesserin,

Rofaida,

Achwak et

W

assila,

A

tous

les

membres

de ma

promotion Master

II

Chimie Pharmaceutique

2019.

A

tous

mes

enseignants depuis

mes

premi,ires

anndes

d'dtudes.

Atous ceuxquime

sontchers

et

quej'ai

omis

de

citer.

Glossaire

Antibact6rien

I Oui s'oppose au d6veloppement des bact6ries.

Antibiotique

: _{Qui s'oppose} au d6veloppement de certains micro-organismes, ou les d6truit.

Antifongique:

Se

dit

d'un

m6dicament

qui agit

contre

les

infections provoqu6

par

les

champignons ou les levures parasites.

Anti-infectieuse: une substance permettant de lutter contre

f

infection.

Antiseptique:

sont des substances ayant pour d6truire les germes pathogdnes.

Antiparasitaire:

on dit parasiticide un produit chimique capable de d6truire les parasites.

Anti

virale:

une mol6cule destin6e d agir contre la multiplication d'un virus.

Anti-inflammatoire:

qui fait d6gonfler et diminuer

I'irritation.

Anti

spasmodique : un produit permettant de lutter contre les spasmes musculaires. Alcaloiide : mol6cule cyclique comportant un atome d'azote ce qui la rend basique.

Aromath6rapie

:

l'utilisation

des

huiles

essentielles obtenues grOce

d

divers

proc6d6s

d'exhaction.

Ast6rac6es : Famille de plantes dicotylddones faisant partre de I'ordre des Ast6rales.

Bronchites : Inflammation des bronches.

Coumarine : mol6cule aromatique h6t6rocyclique oxyg6n6e de formule 1-benzopyran-2-one,

isomdre

de

la

cbromons.

C'est

le

squelette

de

base

des

mol6cules

de

la

farnille

des

coumarines.

Flavonoides

:

mol6cules appartenant d

la

famille

des polyph6nols (constitu6s de plusieurs

groupes ph6nols).

Infusion

: action de faire mac6rer une plante aromatique dans un liquide bouillon.

Liste

des

abr6viations

Liste

des

abr6viations

o/o _{: pourcentage.}

AFNOR

: Association Frangaise de Normalisation.

ATB

: Antibiotique.

ATBs

: Antibiotiques.

C : Concentration.

CPG : Chromatographie en Phase Gazeuse.

CPG-MS:

Chromatographie

en

Phase

Gazeuse

coupl6e

d la

Spectromdtrie

de

Masse.

Fig. : figure.

g:

gramme.

Ho/o : T aux d'humidit6 exprim6 en pourcentage.

HE

: Huile essentielle.

HEs : Huiles Essentielles.

I.

Viscosa: Inula viscosa.

M:

molaire.

MH

: Muller Hinton

Min

: minute.

mI

:

millilitre.

mm

:

millimdte.

lVfs: Matidre v6g6tale sdche

R(%)

: Rendement (7o).

Rm

: Rendement en huiles essentielles.

pm:

micromdfre.

Liste

des

figares

Liste

des

Figures

tr'igure 1. Fleur(A), Fruit(B) et feuilles (C)

d'Iunla

Viscosa

...

.03

Figure 2. Etapes de l'obtention

d'une HE

...

... 07

Figure 3. Sites d'action d'HEs

sur

les

bactdries

... 08

Figure 4. Mode d'action des HEs sur les champignons

....

...09

Figure 5. Situation g6ographique du site de collecte

d'Inula

viscosa

..

...

.

10

Figure 6. Sdchage (A) et conservation (B) de

1'6chanti11on...

....

11

Figure 7. Etapes de preparation de I'infus6 (A: pesde; B: m6lange eau chaude/poudre; C: filtration de m6lange;

D:filtrat

obtenu).

...L2

Figure 8. Principe de l'extraction des HEs par hydrodistillation

...

...14

Figure

9.

Clevenger / ballon utilis6s pour

I'hydrodistillation

...

14

Figure 10. Principe de fonctionnement de la

CPG.

...

16

Figure 11. Etapes de r6alisation

d'aromatograflrme.

18 Figure 12. Taux d'humidit6 des feuilles

d'Inula

viscosa.

19 Figure 13. Chromatogramme de

I'HE d'Inula

viscosa.

25 Figure 14. Composition chimiques de I'huile essentille de

I'Inulaviscasa.

...26

Figure 15. Antibiogramme sur les souches cliniques

isol6es.

...

28

Figure 16. Effet de

I'HE

sur

E

coli (A),

K.

terrigena (B),

P.

mirabilis (C.),S. Aureus

(D)

et C.

Nbicans(E)....

...28

Liste

des

tableaux

Liste

des

Tableaux

Tableau l.Caractdristiques du milieu de

r6colte...

...

..10

Tableau2,Testsphyto-chimiquer6alis6ssurl'infusld'Inulaviscosa....

...

13

Tableau 3. Caract6ristiques des souches utilis6s et des patients porteurs correspondants.... 17

Tableau 4. Principaux groupes chimiques composant les feuilles

d'Inula

viscosa

11+++):

trds abondant; (+): pr6sent;

_O:

absent)

... .20

Tableau 5. Composition chimique de

l'huile

essentielle

d'Inula

viscosa...

...24

Tableau 6. Diamdtre et pourcentage d'inhibition de la croissance, des souches test6es, par

Sommaire

Sommaire

REMNRCIEMENT

GLOSSAIRE

ABREVIA,TIONS

LISTE

DES FIGURES

LISTE

DES

TABLEAUX

Sommaire

Introduction

I.

G6n6ra1it6...

3

I.l.Caract6ristiques

d'Inula

viscosa...

3

I.1.1.Nomenc1ature.

3

I.l.2.Description botanique. . ..

...

3

I.1.3.Syst6matique..

4

I.1.4. Rdpartition gdographique et

6cologie

₄

I.1.5.

L'utilisationtraditionnelle...

4

I. 1 .6. Activit6s biologi ques d' Inula

viscosa.

4

I.1.7. Composition chimique

d'Inula

viscosa...

5

I.2. Le.s huile.s

essentielles

5

l.2.l.Localisation

dans la

plante.

5

1.2.2. Composition

chimique...

5

I.2.3. Propri6t6s

physico-chimiques

6

I.2.4. Rdle des

FIEs...

6

I.2.5.Conservation des huiles

essentielles

6

I.2.6.Methodes d'extraction des

F{Es..

6

Sommaire

I.3.

l.Activit6

antibact6rienne....

I.3. 1 .1 .D6finition de la bact6rie. . . . .

1.3.1.2. Types de bact6ries

L3.1.3.Mode d'action des huiles essentielles sur les bact6ries

I.3.2.Activit6 antifongique ..

lI.

Mat6riel

et M6thodes

...

II.l.

Echantillonnage.

II.2.

D6termination du taux

d'humidit6

...

II.3.

Etude phyto-chimique (screening phytochimique).

II.3.1. Prdparation de I'infusd

II.3.2. Screening chimique. . .

II.4. Extraction

de

l'huile

essentielle.

II.5.

Analyse des huiles essentielles

par

chromatographie en phase gazeuse

1 8 8 9 10 10 11 11

t2

t2

t4

15

couplde

i

la spectrom6trie de masse CPG-MS..

[.5.1-Principe de la

m6thode.

15

tr.6.

Activit6

antibact6rienne et

antifongique...

17

tr.6.1. Choix des

espdces

17

11.6.2. Technique

d'aromatogramme..

t7

Il.6.3.Principe...

17

III.

Rdsultats et

discussion...

19

III.1.

Taux

d'humidit6

t9

III.2.

Screening

phyto-chimique.

..

19

III.3.

Les huiles

essentielles

₂₃

III.3.1. Le

rendement....

₂₃

Ill.3.2.Caract6ristiques

organoleptiques.

₂₃

Sommuire

III.4.

Aromatogramme

...

_2j

Conclusion...,.,...

...

30

R6fdrences

bibliographique...

..

₃₂

Introduction

Introduction

Les plantes aromatiques et m6dicinales repr6sentent une source in6puisable de remddes

traditionnels

et

efficaces

grdce

aux

principes

actifs qu'elles

contiennent: alcaloides, flavonoides, h6t6rosides, Saponosides, quinones, vitamines et huiles essentielles.

En effet, les huiles essentielles (HEs), principes actifs issus du m6tabolisme secondaire des

plantes m6dicinales, ont 6t6 utilis6es depuis I'antiquit6 et sont largement employ6es de nos

jours, pour

leurs propri6t6s biologiques (antimicrobienne, antioxydant, analgdsique,

anti-inflammatoire, anti-canc6rigdne, antiparasitaire, insecticide, etc.) et leur application dans de

multiples

et

diverses industries; alimentaire, cosmdtique, parfumerie

et

pharmacie (Sall6,

199L;

Lafon,1988;

f,l

abed

et

Kambouche,2003;

Brut,

2004;

Bakkali,2008).

Inula

viscosa est une plante m6dicinale de la famille des Asteraceae, largement utilis6e en

m6decine haditionnelle du bassin m6ditenan6en (Reebo 2010). De nombreuses 6tudes ont mis en 6vidence la pr6sence de m6tabolites secondaires telles que les polyph6nols et les terpdnes

dou6s de plusieurs activit6s biologiques; antioxydant, antimicrobienne, anti-inflammatoires, antidiab6tiques, antihypertenssurs, etc. (Susplugas et a1.01980;

Barbetti

et al.r 1985;

Lauro

et

Rolih,

1990; Al-Dissi et aL,2001; Cafarchia et a1.,20A2; Zeggwtgh et a1.,2406l Manez

et

a[.r2007; Franco

et

a1.,,2008; Bssaibis et

a1.,2009;Remli

8.,2013.;

Seca et a1.,2014;

Chahmi

et

a1.,2015).

L'activit6

antibactdrienne

d'Inula

viscosa a b6n6fici6 de plusieurs 6tudes en M6diterran6e

(Hatim

et

al., 2017). Particulidrement, en

Alg6rie, elle

a

6td 6tudi6e

par

Kheyar

(2009), Boumaza (2011), Boukemaya et Messaoudi (2016)o Chaou (2017), Benomari (2018).

C'est dans ce contexte que s'inscrit le prdsent travail, dont le but principal est d'6tudier la phytochimie et

l'effet

antibactdrien et antifongique des

IIEs

d'LViscosa de la r6gion de Jijel,

sur de diff6rentes souches bact6rierures et fongiques.

Le

premier

volet

de ce travail

comporte une recherche bibliographique, abordant une

description botanique de l'espdce

Inula

viscosa,

et quelque notions de base sur les huiles

essentielles et les activit6s antibact6rienne et fongique.

Deuxidment, nous avons envisag6 la partie exp6rimentale qui se d6roule en quatre 6tapes; d

Introduction

technique d'aromatogramme et enfin I'analyse de 1'6chantil1on par chromatographie d phase gazeuse (CPG).

Lapartie cruciale de cette 6tude concernant les r6sultats et la discussion. Les r6sultats sont

pr6sent6s, interpr6t6s et discut6s.

Finalement, nous concluons ce document par une conclusion qui valorise et r6sume tout le travail.

tt

(,

G6ndralitds

I.

G6n6ralit6s

I.l.Caract6ristiques

d'

Inula

viscosa

I.l.l.Nomenclature

Le nom

Inula

est trds ancien.

L'inule

visqueuse est

l'un

des rares repr6sentants du genre

Inula

(Ciccarelli,

2007)

Inula:

viendrait

du

grec:

<[n6o>

qui

signifie

(e

purge>.

(Allusion

d

une

propri6t6 th6rapeutique de la plante). (Fauron et al.o 1983)

Viscosa: veut dire visqueuse : Inule visqueuse.

(Fournier,

1947). Les appellations de

f

inule visqueuse diffdrent d'une r6gion d une autre:

/

EnAngleterre: Rock Flea-bane.

(Halimi

rl997 ; Wang

et

al.r2004),

,/

En France: Inule visqueuse, Aun6e visqueuse (Baba Aissao 2000).

{

AaMaroc: Trehla. (Zeggwagh et a1.,2006).

{

En Espagne: Jolivarda, joliverda, xolivarda, olivarda.

/

Noms Arabes: El tibek, El tayon, El rassen, El dabik.

,/

_{En Alg6rie:}

_{Megremen, Safsak,}

_Mersit

_et

_Hfina.

Particulidrement,

au

centre de

1'A1g6rie, cette espdce est appell6e Afided,Niret, Tlirine (Baba Aissar 2000).

I. L.2.Description botanique

L'inule

visqueuse est une plante sauvage vivace d racine pivotante, d'assez grande taille

fiusqu'il,

50 m de hauteur). Ses tiges sont assez ramifi6es et pourvues

d'un

feuillage dense.

Les

feuilles

sont

allong6es, ins6r6es directement

sur

Ia

tige,

sans

p6tioles.

Avec l'0ge,

elles deviennent ligneuses et fonc6es

d la

base. Les fleurs sont regroup6es en

capitules,

soit d

p6tales

soud6s,

formant

des

fubes

en

jaune

orang6.

Toute

la

plante

est

couverte

de

poils

qui

libdrent

une

r6sine

odorif6rante

et collante (Lecomte,2015) (Fig. 1).

Figure

l.Fleur

(A), Fruit (B) et feuilles (C)

d'Inula

viscosa.

tr

G6ndralitds

I.l.3.Syst6matique

La classification botanique

d'Inula

viscosa L. est la suivante:

Rigne:V6g6tal

Embranchement : Spermaphyte

Sous embranchement : Angiospermes

Classe: Dicotyl6dones

Sous classe: Ast6rides

Ordre

: Ast6rales

Famille

: Ast6rac6es, compos6es

Genre z Inula

Espice : Inula viscosa L.

Guignard,

(2001).

I.1.4.

R6partition

g6ographique et 6cologie

Dans

le

bassin m6diterran6en,

le

genre

Inula

est largement distribu6 (Quezel

et

santa, 1962). En Alg6rie, elle est largement r6pandue dans le Nord (Quezel et

Santa,l962),

dans les

rocailles et autant sur les terrains argileux que sableux (Benayache

et

al.,l99l;

Anonyme,

20L0; Ciccarellir2007). Elle pousse dans les champs sauvages et dans les alentours du bassin,

m6diterran6en

(Brullo

2000;

Parolin

et

aI., 2013).

Elle

se retrouve dans les collines, les

zones humides et les bords des routes, et appr6cie les sols secs et calcaires @aytop, 1984;

Wenqiao

et

a1.2004).

I.1.5.

L'utilisation

traditionnelle

En Algdrie, les feuilles sont utilis6es s6ch6es en tisanes et les huiles essentielles en sont

extraites

pour

le

traitement

de

diverses maladies

telles que

la

bronchite,

le

diabdte, le

rhumatisme, les blessures et les maladies du systdme urinaire et digestif (Reebo 2010;

Ilaoui

et aI.,20ll;

Talib et

aL,20l2).

I.1.6. Activit6s biologiques

d'L

viscosa

L'inule

visqueuse est consid6r6e comme

la

reine des plantes m6dicinales (Seca

et

aL,

2014;

Chahmi

et a1.,2015).

Elle

est utilis6e pour toaiter divers maux grdce d ses activitds

anti-inflammatoire

_@arbetti

et

flL.,

1985;

Al-Dissi

et

aL,

2001; Manez

et

flLo

2007),anttdiab6tique (Zeggwagh et a1.,2006), antipyr6tique et antiseptique

(Lauro

et

Rolih,

l990),antifonglque

(Cafarchia

et aL,

2002;

Franco

et

aL,2008;

Bssaibis

et

aI.,

2009),

antimicrobienne (Adam et al.r1989, Bssaibiss et al.r 2009),

ft

l,t

G6ndralitds

anti-ulc6rog6nique

,

antioxydant (Remli, 2013), antivirale, anti tumoral , activit6 curative de

blessures (Susplugas et al.o l9E0), activit6 hypolipidemiante (Zeggwagh et a1,02006) .

I.1.7. Composition chimique

dolnula

viscosa

Cette plante est compos6e

de

flavonoides

et

polyphdnols.

Elle

est trds

riche

en huiles essentielles,

dont

la

concentration

varie

selon

les

diff6rentes parties

(feuilles,

racines et

fleurs).Ses composants majoritaires sont

le

camphre, I'eucalyptol et

le thymol

(Benchohra

et al.o 2011).

I.2. Les huiles essentielles

Les

huiles

essentielles

sont

des substances huileuses,

volatiles

et

odorantes

qui

sont

secr6t6es

par

les plantes aromatiques que nous extrairons par divers proc6d6s

(Iserin

et a[.

2007).

Parmi les

I

500 000 espdces v6g6tales, 107o seulement sont dites <<aromatiques>>,

c'est-d-dire

qu'elles

synth6tisent

et

s6crdtent

des infimes

quantit6s

d'essences aromatiques

@runeton, 1999; Degryse et al,r 2008).

I.2.1. Localisation dans la plante

Les huiles essentielles n'existent quasiment que chez les v6g6taux sup6rieurs (Lawrence, 1995). Elles peuvent 6tre stock6es dans tous les organes v6g6taux: fleurs, feuilles, 6corces,

rhizomes,

bois,

racines,

fruits

et

graines.

La

composition

de

l'HE

peut varier

selon sa

localisation (Svoboda, 2003).

1.2.2. Camposition chimique

Les huiles essentielles sont des compos6s de groupes Terp6noides d'une part, et de groupe des compos6s aromatiques d6riv6s

du

ph6nylpropane beaucoup moins fr6quent de I'autre

(Paris et

Hurabielle,

1981; Regnault-Roger

et

a[.r2002).

Selon

Bachelot

et

al.,

(2000,

les HEs

contiennent

un

gtand nombre

d'6l6ments biochimiques. Les plus fr6quemment rencontr6s sont les alcools, les c6tones, les ald6hydes terp6niques, les esters, les 6thers et les terpdnes.

GdndralitEs

I.2.3. Propri6t6s physico-chimiques

D'une manidre g6n6rale, les propri6t6s et les caract6ristiques d'une HE sont: les differents

indices,

pouvoir

rotatoire, viscosit6, densit6,

solubilit6

dans

l'alcool,

point

d'6bullition

et

cong6lation

(Kanko

et a1.,2003).

Toutes les HEs sont liquides volatiles, odorantes et inflammables. Leur densit6 est le plus souvent infbrieure

d

i

sauf

l'HE

de cannelle, de

Giroflier et de

Sassafras.

Elles

sont peu solubles dans l'eau, solubles dans les alcools et dans la plupart des solvants organiques. Elles sont alt6rables et trds sensibles d I'oxydation

(Boughendjiouna,

2015).

I.2.4. Rdle des HEs

Le

r61e des

huiles

essentielles

n'a

pas

pu

€tre

clairement d6montr6.

En effet,

nous

consid6rons

qu'il

s'agit de produits de ddchets _{du m6tabolisme @elaiche, L979).}

Toutefois certains auteurs pensent que la plante utilise son HE pour repousser les insectes,

ou au contraire pour les attirer et favoriser la pollinisation. D'autres, la considdrent cofilme

une

ressource 6nerg6tique,

facilitant

certaines r6actions chimiques.

D'autre part,

elles

conservent 1'humidit6 n6cessaire d la vie des plantes expos6es

i

des climats d6sertiques.

I.2.S.Conservation des huiles essentielles

Les

huiles essentielles sont trds

volatiles et

trds fragiles,

pour

cela, elles

doivent

Otre

consery6es dans des flacons propres secs en aluminium, en acier inoxydable

ou

en veffe teint6, femr6s d bouchon scell6 et stock6es d

I'abri

de la lumidre et de la chaleur (A.F.N.O.R.,

2000).

I.2.6.M6thodes

d'exfraction

des

ffi

s

La

quantit6 d'huile essentielle contenue dans les plantes est toujours faible, parfois trds

faible,

voire infime.

Il

faut,

quelquefois, plusieurs tonnes de plantes

pour

obtenir

un

litre

d'huile essentielle

_@enjilali,

2004).

Difftrentes

m6thodes sont mises en Guvre pour

l'extraction

des essences v6g6tales. En

gln5ral,

le

choix

de

la

m6thode d'extraction d6pendra de

la

nature

du

mat6riel v6g6tal d

traiter, de la nature des compos6s, le rendement en huile et la fragilit6 de certains constituants

des huiles aux temp6ratures 6lev6es (Khelfane et Yousfi, 1987). Les principales m6thodes d'extraction sont:

{

Hydrodistillation

{

Entrainement d la vapeur d'eau

r'

Hydrodiffusion

,/

Extraction par du CO2 supercritique

t

u

I

\

GdnEralitEs

,/

_Extraction assist6e par micro-onde

,/

_L'expression d froid

'/

L'extraction par solvants volatils

Cependant, I'hydrodistillation reste la technique la plus ancienne et la plus convenable

pour l'extraction

des

HEs

(Benjilali,

2004).

Il

est n6cessaire dans

un

premier temps d'extraire de la matidre v6g6tale des mol6cules aromatiques constituant

I'huile

essentielle,

puis dans un second temps de s6parer ces mol6cules du milieu par distillation

(tucchesi,

200s)

(Fig.2).

l-Chaufrhge de

lr

uatrice:

di$truction dt.s parois

2-$6paratioa des molGcsl€s

rt

de ta matrise

Lib€*elira des aolecoles arourtiques

&

Figure 2. Etapes d'obtention d'une HE (Lucchesi' 2005).

I.3.Activit6 antibactdrienne

et antifongique

I.3.

l.Activit6

antibact6rienne

I1 existe deux types d'activit6 antibact6rienne: une activit6 l6tale ou bact6ricide et une

inhibition de la croissance ou activit6 bact6riostatique. Le plus souvent, l'action des huiles

essentielles est assimil6e d un effet bact6riostatique.

Nonobstant, certains

de

leurs constituants chimiques semblent bact6ricides (Carson et Riley, 1995; Cox

et

a1.r2000; Brut,2004 _).

des propri6t6s

I3.1.1.D6finition

de la bact6rie

Une

bactdrie

est

un

microbe

form6 d'une

seule cellule,

visible au

microscope, appartenant d une zone de transition entre le r6gne animal et le r6gne v6g6tal. Comme toute cellule, les bact6ries sont constifu6es d'un noyau, isol6 ou diffirs, un protoplasme contenant

des granulations et des vacuoles, une paroi parfois d'une capsule(Leclerc et aI.,1995 ).

avou

t

7

Gdndralit6s

I.3.1.2. Types de bact6ries

Selon leur mode de nutrition et leur comportement vis-d-vis de 1'oxyg6ne, les bact6ries sont class6es en a6robies et en ana6robies.

Cependant,

toutes

les

bact6ries

n'ont pas

la

m6me

paroi,

la

paroi

des

bact6ries

d

Gram

positif

contient

un

trds grand nombre de saccules formant une paroi 6paisse, tandis que

la paroi

des bact6ries

d

Gram n6gatif contient deux

d trois

saccules

recouvertes

d'une couche lipidique de structure proche de celle de la membrane cytoplasmique (Peber

,

200i; Baudry

et Brezellec, 2006).

Ainsi ,

les bact6ries color6es en

bleu'violet

seront dites d Gram positif et celles en rose d Gram n6gatif

(Ileart

et Shears, 2006).

I.3.1.3.Mode

d'action

des huiles essentielles sur les bact6ries

Lss huiles essentielles possddent plusieurs modes d'action sur les diff6rentes souches de

bact6ries (FiS.3). Leur action antibact6rienne est due principalement d leur grande affinit6

aux lipides membranaires gr0ce d leur nature hydrophobe (Dormans et Deanso 2000).

Proton

motlvt

lotea

l.f'

Cytoplgrmle

mornbrrno

Figure 3. Sites d'action des HEs sur les bact6ries

(Burt,

2004).

Lorkego of

oy{opLErml€ GOna$ruan|l:

rnctabolltct

c,ytodaam

srlg lon!

J-l

-- v

L,

GEn6ralitds

I.3.2.Activit6

antifongique

L'action

antifongique

des

huiles

essentielles

est due

d

une

augmentation

de

la perm6abilit6 de la membrane plasmique suivie d'une rupture de celle-ci entrainant une fuite du contenu cytoplasmique et donc la mort de la

lewre (Makhloufi,

2010).

Les compos6s terp6niques des

HE

et plus pr6cis6ment leurs groupements fonctionnels ph6noliques et les ald6hydes modifient la permdabilit6 cellulaire fongique en interagissant

avec les prot6ines de la membrane. Cela provoque la d6formation de la skucture cellulaire, et perturbe la fonctionnalit6 aboutissant alors d la perte des macromol6cules conduisant d

une inhibition de la croissance fongique

donc

la d6gradation de la membrane plasmatique

des levures (Makhloufi,20101'

Pramila

et a1.,2012)

(Fig'4)'

Altdration du contenu du cytopl Alt6ration de la paroi (T permeabilite) Alt6ration de I'enveloppe et du contenu de la vacuole Alt6ration de la membrane plasmique

(f

permeabilit6 membranaire) D6polarisation de la membrane mitochondriale

Figure 4. Mode d'action des HEs sur les champignons @ramila

et

a1.,2012)'

D€pletion de la force proton motrice et du oool d'ATP

tl

--r

-\,

Matdriel

et

Mfithodes

II.

Mat6riel

et M6thodes

II.1.

Echantillonnage

Au total, 3509 de feuilles

d'Inula

viscosa ont 6t6 r6colt6s d'une manidre al6atoire durant

les mois

d'avril

et mai 2019, d la r6gion de Taher, Jijel, en Est de 1'Alg6rie (Fig.s). Les caract6ristiques du lieu de r6colte sont mentionn6es dans le tableau 1.

fi$rres.Sit*ation

g6ographique du site de collecte

d'Inula

viscosa.

(Google Maps _; modific ations petsonnelles)

Tableau

l.

Caractlistiques du milieu de recolte (Google Maps, 2014)

R6gion

Taher

Wilaya Situation g6ographique Altitude Climat SuPerficie

[,es coordonn6es g6ographiques en

DMS _{@egr6s, minutes,} secondes)

Jijel

Est alg6rien (Nord-constantinois)

48m

Climat mdditerran6en a 6tb chaud 64,86]f|r(2

36" 46'19" Nord,

5o

53'54"

Est

'/

S6ehage

Le s6chage a 6t6 effectu6 d

l'air

libre, d

l'abri

de la lumidre et de l'humiditd pendant quelquesjours, dans une pidce bien a6r6e (Fig. 6).

Le but de cette 6tape est d'abaisser la teneur en eau, des feuilles r6colt6es, d

fin

d'6viter

toute r6action d'alt6ration et la proliferation des microorganismes.

t - t

L-t

Mathriel

et

Mfithodes

/

Conservation

Afin

d,6viter tout type de contamination, les feuilles s6ch6es ont 6t6 ensuite conserv6es

d

l'abri

de la lumidre, dans des flacons en velre, herm6tiquement ferm6s et couverts du papier opaque

(Fig.6).

Figure6.S6chage(A)etconservation(B)de1'6chantillon.

(Photos _{Prises Par} nous-mdmes).

II.2. D6termination

du taux

d'humidit6

Une quantit6 de 3509 de feuilles fraiches

d'L

viscosa a 6t6 pes6e avant et aprds s6chage

i

I'air

libre pendant 15 jours. Le calcul de la teneur des feuilles en eau (taux d'humidit6 en

pourcent) a 6t6 fait en se basant sur la formule suivante :

@ernardet'

1983)

H,o=ry*

1oo;

otr:

H"z: taux d'humiditd exprim6 en pourcentage M1: poids de 1'6chanti11on frais en grarnme

M2: poids de 1'6chantillon sec en gramme.

II.3.

Etude phyto-chimique (screening phytochimique)

Cette 6tude a le but de d6terrniner les principes actifs contenus dans la partie foliaire

d,Inula

viscosa. pour identifier

la

composition en m6tabolites secondaires pr6sents dans

cette plante,

un

screening

phyo-chimique

a

6t6 effectu6 sur

les

feuilles pr6alablement

prepar6es. pr6cis6ment,

il

est recommand6 d'utiliser, soit la poudre du broyat des feuilles

Matdriel

et

M6thodes

II.3.1. Pr6paration de

l'infus6

L'infus6

a

6tE prfiparf en utilisant la poudre foliaire, comme suit (Bellakhdar, 2003):

-

Broyer 5 g de feuilles sdches

d'Inula

viscosa,

i

l'aide d'un mixeur 6lectrique,

-

Dans un b6cher, verser 100 ml d'eau distil16e chaude sur 5 g de poudre de feuilles pr6cddemment prePar6e,

-

Laisser refroidir, puis

filtrer

en utilisant du papier filtre Whatman,

-

Compl6ter le filtrat par I'eau distill6e, jusqu'd 100

ml

(Fig. 7)

Figure 7. Etapes de pr6paration de I'infus6 (A: pes6e; B:m6lange eau chaude/poudre;

C:filtration de m6lange;

D:filtrat

obtenu). (Photos effectudes par nous-mfimes)

II.3.2. Screening chimique

La m6thode utilis6e dans cette 6tude est celle propos6e et confirm6e par (Trease et Evans, 1989;

Harborne,

1998).

Le tableau resume et monhe les mol6cules recherch6es, leurs r6actifs de caract6risation

et les r6sultats attendus.

rt

t -t

Mathriel

et Mfithodes

Tableau 2. Tests phytochimiques r6alis6s sur

f

infus6

d'L

vrscosa (Trease et Evans' 1989;

Harborne,1998)

M"l6."t.a

iadmi.r

M6lange r6alis6 Rdsultat obtenus Glucosides Tanins totaux Tanins galliques Quinones libres Anthocyanes Mucilages Irridoides Coumarines Amidon Flavonoides Saponosides LeucocYanes Prot6ines ProanthocYanidols

Z g

p*Ot.

v6g6tale 1- quelques gouttes de Coloration rouge

brique.

Coloration

bleu

noir

intense

Coloration

en bleu fonc6

Coloration

rouge

Coloration

rouge Pr6cipit6 floconneux Coloration bleu

Vue

trouble

Coloration bleu violette

Coloration

rouge oran96e Un pr6ciPit6 blanc Coloration rouge Coloration violette

Coloration

rouge HzSO+

5 mlinfus6 + quelques gouttes de FeClr

(d5%)

5m1infusd

+2

gacltate de sodium+ quelques gouttes de FeCl:'

29 de poudre v6g6tale

+ zrf|.HCl

+ 20ml "f,lototo.rn". Aprds 3h,

filtrer

le m6lange puis agiter avec 5ml d'ammoniaque' 5m1infus6 + quelques gouttes HCI'

lml

infus6 + 5m16thanol absolu.

Agiter pendantl0min.

2ml de I'infus6

*

quelques gouttes de

HCl'

Puis chauffe le m6lange

29 poudre v6g6tale + 20 ml alcool 6thylique' nouittlrpendant I 5mins puis fr1tr6'

5ml du

itlttut

*

5gouttes de KOH e 10% +

quelques gouttes de

HCl

dL0%'

29 poudre

*

quelques gouttes 12'

5ml infus6 + 5m1HC1*

lmlalcool

iso-amylique + un coupon du

Mg

2ml de I'infus6 *quelques

gouttes d'acdtate de _Plomb

2 g poudre + 20ml m61ange (Propanol+HCl

d

bhauffer

1 5mins dans un bain marie'

1ml infus6

+

lml

NaOH {2M) +quelques

gouttes de sulfate du cuiwe'

iml

infus6

+ZmlHCl.

Chauffer 5mins au bain Marie

Mathriel

et

M6thodes

II.4. Exfraction

de

I'huile

essentielle

L'extraction

des huiles

essentielles

(HE)

s'effectue

par

plusieurs

m6thodes:

Hydrodistillation, Exkaction

par

solvant, Hydrodiffusion,

etc

(Belaiche,

1979;

Chiej'

1982 _; Henrio 1993 _; Bruneton, 1999

_;Benjilali'

2004).

Cependant, I'hydrodistillation reste la plus convenable

(Benjilali'

2004).

,/

L'hydrodistillation

Le

principe de cette m6thode est simple: dans

un

ballon,

on

porte

d

1'6bullition un

m6lange d'eau

et

de

la

plante dont

on

souhaite extraire

thuile

essentielle. Les cellules vdg6tales 6clatent et libdrent les mo16cu1es odorantes, lesquelles sont alors entrain6es par la vapeur d'eau cr66e _@runeton, 1999)

(Fig.8).

Thcr-:r.noptErte

R€frigfrant

illlsau

ftrrouu'ette grtdu€E

I{uile

cssentielXE Fhnse:aqur:use

Figure 8. Principe de I'extraction des FIEs par hydrodistillation (Lucchesi, 2005).

Figure 9. Clevenger / ballon utilis6s pour l'hydrodistillation (Photo prise par nous-m€mes)

Matdriel

et

Mdthodes

Les dtapes suivies sont:

.

_i0

g

de feuilles sdches a 6t6 introduit, d chaque fois, dans un ballon de

2

litres,

impr6gn6 d'eau distill6e

'

L'ensemble est port6

i

1'6bullition pendant deux heures

.

_La

_{vapeur condens6e obtenue} conduit d une phase organique (huile essentielle)

qui est s6par6e de

l'hydrolatpar

diffbrence de densit6

.

_{Aprds la r6cup6ration} de I'huile, nous avons ajout6 du sulfate de sodium (Na2SO4) pour 6liminer les traces d'eau

.

L'huile

essentielle a 6t6 plac6e par la suite dans un flacon en verre opaque, elle est

conservde d temp6rature voisinant 6"C. Le flacon est ferm6 herm6tiquement pour le pr6server de

l'air,

de la lumidre et de la tempErature, dvitant ainsi son alt6ration par ces principaux agents de d6gradation (Fig. 9).

./

Calcul du rendement

Le rendement en

IIE

est le rapport entre le poids de

l'huile

extraite et le poids de la plante d traiter :

Rnn

=

_W.100;

oi:

RrD: rendement de I'extrait en pourcentage M1g: euantit6 d'essence obtenue exprimEe en g

Mr: quantit$ de matidre v6g6tale sdche utilis€e pour I'extraction, exprim6e en g.

II.5.

Analyse des huiles essentielles

par

chromatographie en phase gazeuse

couplde

i

la spectrom6trie de masse CPG-MS

II.5.1. Principe de

la

m6thode

La

chromatogaphie

en

phase gazeuse

et

la

spechom6trie

de

masse possddent des

limites de sensibilitd voisines. L,eur association permet de disposer

d'un

outil

analyique

trds performant.

Le couplage de la chromatographie en phase gazeuse d la spechomdtrie de masse

CPG-MS

est une technique d'analyse

qui

possdde plusieurs atouts

:

le

chromatogramme en phase gazeuse permet de s6parer les constituants d'un m6lange. Le spectromdtre de masse associ6 permet d'obtenir le spectre de masse de chacun des constituants et bien souvent de

les identifier.

a

_____________ ,t E

Matdriel

et

Mfithodes

Le

couplage CPG-MS en mode impact 6lectronique

(SM-IE)

est

la

technique

la

plus utilisde dans le domaine des HEs,

i

savoir

l'HE

d'L

viscosa dans notre cas.

(Tranchant,

1996 ; Cavalli, 2002XFig.10).

D6bitmitre

Il€tecteur I

I

I

Gtz

vecteur

L.!

f

I I l Earegistreuert et

traiteaalt des doas6s

Fonr

Figure 10. Principe de fonctionnement de la CPG

(Tranchantrl996).

{

Mode op6ratoire

L'analyse

est

faite sur

un

appareil

Shimadzu CGMS-OP2010

qui

a

comme caract6ristique une colonne capillaire apolaire SE-30de 30 m de longueur et d'un diamdtre

int6rieur de 0,25mm. Cette phase stationnaire possdde une 6paisseur de 0,25

pm

et

sa

temp6rature maximale est de 26A'C.

La

colonne est chauff6e de 55oC (maintenue pendant

2

minutes) iL 250 oC avec une vitesse de 4oCl min.

L'injecteur

et

le

d6tecteur

sont

respectivement programm6s

d

250

et

260'C.

Les

6chantillons de

I

pl sont inject6s en mode Split avec une fraction de I/20.La fragmentation

est effectude par impact 6lectronique

i

70 eV'

L'appareil est

reli6

d

un

systdme informatique g6rant une bibliothdque de spectre de

masse.

#ysteme d'iniectioa de I'echrstillon

€ffi

Mat6riel

et

M6thodes

II.

6.

Activit6

antibact6rienne et antifongique

Les activit6s antibact6rienne et antifongique de

l'HE

d'1. viscosa ont 6t6 d6termin6es

par

la

m6thode

de diffusion en

milieu

g6los6

sur

des bact6ries

et

champignons non r6sistants, pr61ev6s de diff6rentes personnes. Les caract6ristiques des germes utilis6s et des

patients h6tes correspondants sont r6sum6es dans le tableau 3.

II.6.1.

Choix des esPCces

Les bact6ries choisies sont des bact6ries de forme differente

(Bacille ou

Cocci) et d gram 6galement different (Gr- et G-). Les caractdres < pathogdne D et < trds r6pandu >>, aux

cas d'infections, sont les caract6ristiques communes de toutes les espdces bact6riennes et le champignon s6lectionn6s.

Tableau 3.Caructlnstiques des souches utilis6s et des patients porteurs correspondants (M:

m61e, F: femel4e, SPC: spermoculture, ECBU: itude cfiobactdriologique des utineso FCBP: 6tude

1I.6.2. Technique d' aromato gramme

C'est une technique de mesure

in

vitto

du pouvoir antibact6rien des HEs. Cet examen

est 6quivalent d un antibiogramme

of

les disques d'antibiotiques sont remplac6s par des

disques des HEs, pr6alablement s6lectionn6es et reconnues.

(Girault

et Bourgeon' 197L)

II.6.3.Principe

Cette m6thode consiste d

utiliser

des disques du papier impr6gn6s

d'huile

essentielle,

puis dispos6s d

la

surface d'une g6lose uniform6ment ensemencde avec une suspension

bact6rienne ou fongique. Aprds incubation de 18 h, les colonies se d6veloppent d la surface de la g6lose laissant des zones vierges autour des disques appel6es zones

d'inhibition'

On peut exprimer I'activit6 antimicrobienne en indiquant directement lazone d'inhibition

"n*;,"_

d,

ffi

cytob actdriolo gique du _Pus).

Espdce

Souche Patient porteur

Type Famille Gram Forme Sexe Age Provenance

Escherichia coli Bact6rie Enterobacteriaceae Bacille M 68 ans ECBU

Proteus mirabilis Bact6rie Enterobacteriaceae Bacille M 14 mois ECBU

Kebsiella terigena Bact6rie Enterobacteriaceae Bacille M 03 mois ECBU Staphylococcus

aufeus Bact6rie Micrococcaceae + Cocci M 33 ans

SPC

Candida albicans Champi_-gnon Saccharomycetaceae F 36 ans FCBP

17

Mat$riel

et

M6thodes

millimdtre. La sensibilit6 des souches test6es est positivement proportionnelle au diamdtre

d'inhibition (Belaicheo

lg7giZaikt

ef aLo 1988)'

/

Mode op6ratoire

Les 6tapes suivies pour 1a r6alisation de I'aromatografirme sont r6sum6es dans

I'illustration suivante

(Fig.l

1).

knpr6gner des disques steriles d'environ

lcm

de diamdtre dans

I'HE

__jyry?

d{t1s_er au centre de la boite de P6hi ----1{-- -- -_ Etape 01:V6rifier la sensibilit6 des souches

Realiser un antibiogramme pour s'assurer de la sensibilit6 des souches choisies via quelques

AB:

AMX, CAA KF, GEN' AKo SXT' CT, CIP' FOS'

Etape 02: Preparation de la suspension bact6rienne

1 colonie de bact6rie / champignon

+

10 ml eau physiologique sterile

)Homog6n6isation Par Vortex

Etape 03:R6alisation de 1' aromatogramme

verser la suspension bact6rienne dans une boite de P6tri contenant

lemilieudeculture<<lvluellerHintoru>llaisserpendant2min

Incuber dans 1'6tuve d 3

Etape O4:Lecture des r6sultats

t

18

R6

sultats

et

cliscussion

III.

R6sultats et discussion

III.1.

Taux

d'humidit6

Le s6chage de 3509 de matidre v6g6tale foliaire fraiche, pour I'estimation du taux

d'humidit6, a donnd seulement 65n1g du poids sec, ce qui corrospond d un taux 6lev6

d'humidit6, de I'ordre de 81,47o (Frg.12).

Figure 12,Taux d'humidit6 des feuilles d'Inulaviscosa.

Le test d'humidit6 est r6alis6 dans le but d'estimer la teneur en eau de

la

plante 6tudi6e. Les analyses des feuilles d'.{. viscosa ont r6v616 un taux d'humidit6 important (8114 o/o), ce

qui

signifie

que

plus

de

la

moiti6

du poids des feuilles fraiches d7.

Viscosa sont constifu6es par l'eau, le reste repr6sente la matidre sdche.

Selon

Paris

et Moyse (1965), les plantes fraiches renferment une teneur en eau

allant de 600/o e

80%.

D'auhe part, la richesse en eau peut 6tre attribu6 au facteur

vai6tal,

d

1'6poque

de

maturation

et

de

r6colte

et

aux

caract6ristiques p6doclimatiques.

La valeur obtenue dans cette 6tude (8114 o/a) est trds proche d celles estim6es par

Remli (2013) d Oran (85

%)

et Benayache (1991) et

Al-Dissi

(2001) d I'Est alg6rien.

IU.2.

Screening phyto-chimique

L'analyse phyto-chimique a permis d'identifier les diffdrents groupes chimiques

pr6sents dans I'extrait des feuilles de l'espdce

I.

viscosa (Tab.4).

rr

--=

RE

sultats

et

discussion

Tableau4. Principaux groupes chimiques composant 1es feuilles d'1. viscosa ((+++):

trds abondant; (+): pr6sent; (-): absent).

Observation Prot6ines Infus6 Saponosides Irridoides Infus6 Mucilages Infus6 Coloration violette Pr6cipit6 blanc Coloration bleu Pr6cipit6 floconneux + -r

rr

t,

Rdsaltats

et

discussion

Coloration rouge

Tanins

galliques

Infus6

Proanthocvanidols Flavonoides Infus6 Coumarines Bleu fonc6

+#

Coloration rouge + Rouge orang6e

#

Vue trouble

rr

+21

_1--

_t

Rdsultats

et

discussion

Amidon

Leucocyanes Poudre

Glucosides Poudre

Quinones libres Poudre

Coloration bleu violette

Coloration rouge

Rouge brique

#

Coloration rouge

Les

feuilles

d'inule

visqueuse sont trds riches

en

flavonoides, tanins galliques,

.inins

totaux et glucosides. Cependant, elles renferment des diff6rentes proportions de

coumarines, saponosides, mucilages et proanthocyanidols.

En

revanche, I'absence totale,

a

6t6 marqu6e,

d'amidon,

de

leucocyanes, des

quinones libres, des prot6ines, des alcaloides, des irridoides et d'anthocyanes.

A

tire

comparatif avec des dtudes antdrieures, men6es sur

la

m€me espdce, les

resultats obtenus

sont en

accord avec

ceux

de Djedioui

(2010)

obtenus

en

Est algdrien ori une pr€seace des flavsnoides, saponosides et tanins a 6t6 marqude, contre une absence d'alcaloides dans la partie foliaire

d'L

viscosa. Boumaza (2011) d Oran

a

aussi apergue une abondance importante des flavonoides

et

saponosides

et

une

absence des quinones et leucocyanes.

Remli

(2013), d Oran, a marqu6 une existence

R6sultats

et discussion

importante en flavonoides et une pr6sence

faible

des certains m6tabolites

tels

que

coumarines

les

tanins

dans

la

partie

a6rienne

d'1.

viscosa.

Nohe

r6sultat

a

6t6

6galement confirm6

par Cafarchia

et aI.,

(2002)

en

ltalie, qui

ont

marqu6s une richesse des feuilles de l'espdce 6tudi6e en flavonoides, tanins

et

glucosides et un manque totai de l'amidon.

Ces similarit6s en composition peuvent 6tre justifi6es par le climat identique des

zones de r6solte de I'espdee v6g6tale en question.

III.3.

Les huiles essentielles

III.3.1.

Le rendement

L'extraction

des

huiles

essentielles

de 350

g

des

feuilles

sdches

de

l'inule

visqueuse a dorur6 0r7 mI de

I'huile

essentielle, ce qui correspond d un rendement de

0120 o/o.

L'extraction

de

I'huile

essentielle d

partir

d'I.Viscosa

a

abouti

d un

rendement proche de celui

obtenu

par Boumaza (2011)

i

oran,

qui

a indiqud un rendement

compris

entre 0124

Vo

et

0,31

Vo

de

la

plante fraiche

et

sdche ordonn6ment.

Benhammou (201a)

a

obtenu

un

rendement

de

0rlg o

_,

chez

la

m6me plante, r6colt6e et s6ch6e en mois

d'avril

A Annaba. Des valeurs variant de 0,22 d 0,34oh ont 6t6 6galement enregistr6es chez

la

plante poussant d diff6rents endroits en Alg6rie

(Kheyar et al,r2014;

Madani

et

al.o20l4).

Les variations l6gdres marqu6es dans les valeurs

du

rendement en

HE

chez la

m€me espdce, peuvent 6tre justifi6es par la nature de l'6cosystdme d'ori provierurent

les

dchantillons:

plus

l'6cosystdme est

ferm6 (forot

dense

par

exemple),

plus

la

comp6tition en 6l6ment

nutritif

et en lumidre est importante et donc plus la s6cr6tion

des IIEs est consid6rable.

trI.3.2

.Caract6ristiques organoleptiques

L'huile

extraite

a

de diff6rentes caract6ristiques organoleptiques.

Il

s'agit

d'une huile trds dense, d aspect limpide, de couleur jaundtre et ayant une odeur attirante et

d6sagrdable.

Les paramdtres organoleptiques remarqu6s sont identiques dL ceux r6pertori6s dans

les normes (AFNOR, 2000).

R6sultats

et discussion

III.3.3.

Composition chimique

Le

temps de rdferrtiorr,

la

coue.enjration traduite par

la

surfape du

pic

st le

nom chimique de chaque compos6, obtenus par laCPG, sont rassembl6s dans le tableau 5.

Tableau 5. Composition chimique de

I'HE

d,Inula viscosa.

Pic Temps de r6tention (min) Concentration (%') Compos6s I 3,410 0,84 acide 2-m6thylpropanoique (Acide iso-butyrique)

2 6,493 7,79 _{l -m6thy1-2- (1 -m6thy16thyle)- Benzdne}

a J 6,956 _0,70 1,4-cyclohexadidne, 1 -m6thy1-4- (1m6thyl6thyle) -4 23,296

tt.72

_Carvacrol 5 36,750 1,22 _{(Z) a--bergamotEnol} 6 37,526 0,72 _{1, 3,6-Heptatriene, 2, 5,5}

-tnmethyl-7 40,386 8,20 Ph6nol, 4,4'

-(I

-methylethylidene) bis

[2,6-

dimethvl-8 40,396 3,26 _{Acide hexadOcano'ique, ester mdthylique}

9 41,92r 2,00 2,7 -dim9thyloct-7-en-5 -yn-4-yl isobutyl

ester de l'acide phtalique

10 42,628 2,21 _{2, 8,8-t6tram6thyl, m6thyl} 2H,&H-Benzo [1,2-b: acide

5-

mfithoxy-2,

ester de I'acide 5-dipoxy-10 propanoique

l1 44,588 20.r7 Acide 8-Octad6c6noique, ester de m6thyl (E)

I2

44,666 26.34

9,12-

acide octad6cadienoique (2,

Z)-,

ester

m6thylique

13 44,906 3,08 Acide hetptad6canoique, 16-m6thy1- ester

de m6thvl

t4

44,969 5,65 Acide 9, 12,5-Octaddcatri6noique, ester

6thylique,

(Z,Z,Z)-15 45,272 0,61 Acide

I

-adarnantanecarboxylique, ester de

2-trid6cvle

l6

48,421

771

_{Acide eicosanoique,}

ester m6thylique

I7

51,103 '7

1)

2H- Cyclohepta [b]furann e-2-one, 3,3 a, 4, 7, 8, 8a- hexahydro-7-m6thyl -3

-m6thylene-6-(3-oxobutyl)-, _{[3aR-(3a .alpha,} 7 .be

t

24

R6sultats

et discussion

la CA .F ril lT1

-

c) o d

-l-{ bo rl (Y) €) L bo 25

R6sultats

et discussion

L'analyse chromatographique de

I'HE

d'LViscosa

a permis

d'identifier

dix-sept

composds differents, qui ont donn6, aprds identification, des pics de chromatogranrme correspondant d des indices de r6tentions allant de 3,410 d 51,103

min

(Fig.13).

D'aprds les r6sultats obtenus, nous constatons que la plante

I.

viscosa de la r6gion de Taher (Jtjel) est caract6ris6e par une forte teneur en monoterpdnes oxyg6n6s dans son huile essentielle. Les compos6s majoritaires sont respectivement (Fig.13

_etl4):

{

9,72-

acideocta 6cadienoique

(Z,Z)-,ester

m6thylique (2G,34%)

/

Acide 8-Octad6c6noique, ester de m6thyl (E) (20,17%)

{

Carvacrol

(It,72%).

{4

autres

compos6s

42alo

Figure 14. Composition chimiques de

l'huile

essentille

del'Inula

viscosa.

Les compos6s identifi6s sont diffdrents de ceux d6crits par

Kheyar

(2009), qui

rapporte

la

composition

l'HE

d'I.Viscosa comme

suit:

le

thymol

(6,93%)

I'iso-Dihydrocarveol (5,04%) et le carvac rol (2,27 Yo).

Berhail Q0l4)

a marqu6 que les compos6s majoritaires de

l'HE

de cette plante d

la

r6gion

de

Constantine

est

principalement caractlris6e

par l'acide

isocostique

(25,lyo),I'acide

cosique (15,2%)

_,

le nerolidol (9,6yo),I'acide linol6ique (9,IYo),le

n6o-intermedeol (7,5%o) et le fokienol (7,2%) .

Acide

8-Octad6c6noi

que,

egter

R6sultats

et discussion

Le m6me travail a 6t6 r6alis6 d la r6gion de

Jijel

aftvlIl

de diff6rents r6sultats par rapport aux notre, et que les compos6s majoritaires de leur HE extraite sont:

o

2-ph6nanthr6nol,

4b,

5,

6,7,8,8a,

9,10-

octahydro-4b, 8,8-trim6thyl-1-(1-m6thy6thyl)-, 4bS-trans)- (3 5,7 2%)

o

Benzdne,

l-m6thyl

-2- (l-m6thyl6thyl) (24,83%)

.

2,6-Diisopropylanisole (10,13%) (Anonyme, 2010).

Ces variations en composition chimique de

I'HE

peuvent €tre attribu6es au facteur spatio-temporel, aux caractdristiques m6t6orologiques, p6dologiques, climatiques, au stade de croissance de la plante, pakimoine g6n6tique, et

dla

nature de l'6cosystdme

d'origine:

plus

l'6cosystdme est ferm6

(for6t

dense

par

exemple),

plus la

plante herbac6e est stress6e et en comp6tition aux 6l6ments nutritifs et d la lumidre, et plus le taux et la composition des HEs est diff6rente par rapport aux 6cosystdmes ouverts

et ensoleill6s.

III.4.

Aromatogramme

La

v6rification

de

la

sensibilit6

des

souches bact6riennes

utilis6es

pour

la r6alisation de l'aromatogramme a confirmE

la

sensibilitd des bactdries choisies, via

les antibiotiques pr6cit6s (Fig. 15).

Cette 6tape est n6cessaire,

vue

qu'il

s'agisse

de

souches cliniques.

Le

r6sultat

obtenu confirme que

les

gennes test6s

n'ont

d6velopp6 aucune

forme

r6sistance

contre les

AB,

et le r6sultat de I'aromatogramme ne risquera pas, ainsi, d'6tre faux.

La

lecture de l'aromatogramme

a rfv6l6

de diff6rents r6sultats, du

point

de vue

qualitatif, que quantitatif

(Fig.

16). Les espdces bact6riennes

E. coli,

P.

mirabilis

et

K. terrigena n'ont montr6 aucune sensibilit6 vers

I'HE

6tudi6e. Cependant, la bact6rie

S.

aureus

et

le

champignon

C.

albicans

ont

marqu6

une

croissance inhib6e, correspondant

aux

diamdfres

de

l3r66mm

et

17r15mm,

et

aux

pourcentages

d' inhibition 15,9 4oh et 20%orespectivement (Tab.6).

f __ I

tt

R6sultats

et discussion

Figure 15. Antibiogramme sur les souches cliniques isol6es.

Figure 16.Effet de

I'IIE

sur

E

coli(A),

K.

terrigena(B),

P.

mirabilis (C),

S. Aureus(D) et C. Albicans(E). (Photos effectu1es

par

nous-m1mes)

rr

Tableau 6. Diamdtre et poureentage d'inhibition de la croissanoe, des souches test6es,

Selon l'6chelle proposEe par

Mutai

et

al.

_Q009), ces r6sultats montrent que

l'HE

d'lnula

viscosa pure possdde une activit6 antimicrobienne fortement inhibitrice de la

croissance

de

Staphylococcus Aureus

(15,94

o

_),

et

une activit6

antifongique

mod6r6ment

inhibitrice de

la

croissance myc6lienne

de

Candida Albicans _Q0%).

Cependant, les bact6ries Escherichia

Coli,

Proteus

mirabilis

et Klebsiella tenigena

ont continud

i

_{croitre m€me en pr6sence de cette} huile, ce qui signifie que

I'effet

de

cette dernidre sur ces trois souches est minime, voire absent.

A

tire

comparatif _{avec des dtudes ant6rieures, men6es sur}

_la

_{m6me espdce, les}

r6sultats obtenus sont

en

semblables avec ceux

de

Bel

kacem

et

Djazair(2016)

obtenus d l'ouest alg6rien oti les rdsultats de

HE

de

I'inule

visqueuse pure possddent

une activit6 antimicrobienne

forte

sur

S.

Aureus

(27

rnrn;

30 %)

et mod6r6e

sur

C

.Nbicans (20

mm;

22,22

%).

Les m6mes auteurs

ont

enregistr6

la

r6sistance de

E

Coli, P" mirabilis et

K.

terrigena via

l'huile

en question.

Les

bact6ries ayant prdsent6 une rdsistance

vers

I'Itr

6tudi6e

font

partie

des

bact6ries d Gram _{n6gatif, tandis que la bact6rie ayant} pr6sent6 _{une sensibilit6 via} cette

dernidre, est caract6ris6e par son Gram positif.

Donc, si nous pouvons g6n6raliser les r6sultats obtenus,

I'HE

d'.L viscosaa un effet antibact6rien sur les bact6ries d Gram (+) et une activit6 antifongique.

par

l'HE,

et comparaison avec d'autres 6tudes.

Espice

Bel kacem et

Djazairi(20f6)

Etude pr6sente Q

d'inhibition

(mm) %o

d'inhibition

{

d'inhibition

_(mm) 7o doinhibition

E.

coli

0 0 0 0 P.

mirabilis

0 0

K.

terrigena 0 0 S. aureus 27 30 13,66 15,94 C. albicans 20

)) ,)

_{17,r5 20,00} i 29

,

Conclusion

Conclusion

Les

plantes m6dicinales constituent

un

groupe num6riquement

vaste des

plantes

6conomiquement importantes.

Elles

contiennent des composants actifs

utilis6s

dans le

traitement

de

diverses maladies. Outre

leur utilisation

comme remddes directs.

on

les

emploie aussi dans les industries pharmaceutique, alimentaire et cosm6tique.

Les huiles essentielles peuvent 0tre commercialis6es et employ6es pour leurs multiples activit6s biologiques.

Dans le but de rechercher de nouveaux agents naturels antibact6riens et antifongiques

aux int6r6ts th6rapeutiques des huiles essentielles

d'une

plante m6dicinale de

la

flore

Alg6rienne,

Inula

viscosa

L.,

a

fait

l'objet d'une vai6t6

d'6tudes dans

ce

travail:

phytochimie, extraction des huiles essentielles, analyse de l'essence l.Viscosapar la CPG

et

enfin

la

d6termination de leur pouvoir antibact6rien et antifongique

ir

vifro

sur des

souches pathogdnes:

il

s'agit

des bact6ries Staphylococcus aureus,

Klebsiella

terrigena,

Proteus mirabilis, Escherichia coli et de la levure candida albicans.

Le

screening phytochimique a r6v616 la richesse des feuilles

d'Inula

viscosa, de notre r6gion, en composants _{bioactifs suivant: flavonoides, tanins} et glucosides.

Les r6sultats obtenus indiquent que

l'/.

viscosapossdde une teneur importante en eau de

8l,4yo.

Cette richesse hydrique est accompagn6e

par

un

faible

rendement

en

HE,

de

0,200 . L'essence obtenue est caract6ris6e par les paramdtres organoleptiques suivants: trds dense,

i

aspect limpide, de couleurjaturdtre et ayant une odeur attirante et d6sagr6able.

Les

r6sultats

de

l'analyse chimique

de

la

composition

de

l'huile Inula

viscosa par chromatographie en phase gazeuse indiquent la richesse de cette dernidre en monoterpdnes oxygdnds, domind

pilr: (

9,12-

acide octad6cadienoique

(2,

z)-,

ester

m6thylique >

Q'6,34yo), l'acide 8-Octad6c6noique, ester de m6thyl (E) (20,17 Yo) et carvacrol (11,72%o).

L'6valuation des effets antibact6rien et antifonglque montre que la majoritd des souches

bact6riennes utilisdes

(3/4)

sont

sensibles

aux

antibiotiques

utilis6s

et

que

les

huiles essentielles sont actives sur seulement une seule souche de bact6rie (d Gram

positif)

et la levure. Des zones

d'inhibition

de diamdtres variables sont observ6es. Les bact6ries Gram

positif

sont plus sensibles d

I'action

des huiles que les bactdries Gram n6gatives, ce qui concorde avec beaucoup d'6tudes r6alis6es dans cette optique.

Cette 6tude peut 6tre consid6r6e comme une premidre source

d'information sur

les

propri6t6s phytochimiques, antibactdriennes et antifongiques des huiles essentielles

d'Inula

viscosa de

la

rdgion de Taher,

Wilaya

de

Jijel.

Cette

plante

locale

est

une source

t

-l

Jv

Conclusion

inestimable en divers compos6s dou6s des activit6s biologiques, ce qui t6moigne et

justifie

son utilisation en alimentation et en m6decine traditionnelle comme traitement d plusieurs

pathologies.

Cette 6tude m6rite d'6tre poursuivie et compl6t6e par des 6tudes ult6rieures, esp6rant

que

d'autres

volets soient

abord6s,

toutes

les

parties

_de

la

plante

soient

prises

en

considdration, non seulement les feuilles, et que l'6chantillolmage soit mensuel. Ce sujet trds important d 1'6che11e _{mondial, ouwe les portes dans le domaine m6dical, surtout pour}

r6soudre

le

probldme

de

r6sistance

acquise

des

bact6ries

vers

les

antibiotiques

commercialis6s. Les HEs, d'.[. viscosa et beaucoup d'autres plantes m6dicinales, semblent

Otre les moldcules qui remplacent les antibiotiques dans les cas de r6sistance.

ar