Module transfusion cours IFSI
Dr SLIMANE Mohamed IH/distri
EFS Dijon
Plan des cours
1 Collecte( à titre informatif) 2 groupe ABO, technique
3 Les différents PSL,alternative à la transfusion
4 Contrôle ultime,ED
5 Accident transfusionnel
1 Collecte et 2 groupe ABO, technique
A Le don du sang
B Le groupage sanguin
C Les différentes techniques de groupages( à
titre informatif)
A Le don du sang
( à titre informatif)Anonyme Volontaire Gratuit
Avec entretien médicale avant don
Suivi post don
L’entretien médicale
( à titre informatif)Une sécurité pour le donneur et le receveur
Sélection du don
Réalisation systématique de bilan et sérologie à chaque don
Vérification d’absence de pathologie CI au don (ATCD, voyage, infection,
médication …..)
Les différents dons de sang
( à titre informatif)
« Matières Premières ou P.S.L.
produits sanguins labils » : Au nombre de 3
Le SANG TOTAL (ST)
Les CONCENTRES de PLAQUETTES d’APHERESE (CPA)
Le PLASMA d’APHERESE
Du Donneur aux Patients
( ( ààtitre informatif)titre informatif)
Prélèvement +
QBD PT PREPARATION
Patients
Distribution PSL
L’EFS Bourgogne / Franche- Comté (EFS B/FC)
( à titre informatif)
9 sites de prélèvements 9 sites de distribution
1 Plateau Technique de Qualification Biologique du Don ( à Metz Tessy)
1 Biothèque (à Dijon)
1 Plateau Technique de Préparation (à
Besançon)
L’ORGANISATION de l‘ EFS B/FC
( ( àà titre informatif)titre informatif)
Besançon Belfort Auxerre
Sens Dijon
Chalon Macon Nevers
Plateau Technique QBD Metz Tessy
Plateau Technique Préparation Besançon
Tubes de qualification
Prélèvements
Matière première Produits finis
Plateau Technique de Préparation
( à titre informatif)BESANÇON
traite les PSL prélevés sur les sites de prélèvement de la région Bourgogne Franche Comté soit plus de 150 000 prélèvements / an
Supervise la logistique du transport
des PSL
Le plateau de qualification
( à titre informatif)
Metz-Tessy
Groupage sanguins ABO
Dépistage des maladies transmissibles Sérologie virale + Paludisme
Sérothèque (Biothèque)
Distribution
( à titre informatif)
Des PSL par des personnes qualifiés (techniciens ou infirmières)
Vérification de la conformité de la prescription
Sélection des produits adaptés
Délivrance selon le degré d’urgence
B Les groupes sanguins
Les groupes sanguins se répartissent en systèmes :
ABO, Rh…
Chaque système est défini par:
Un ensemble d’antigènes de la membrane du globule rouge génétiquement induits par une unité génétique.
Leur étude doit donc envisager les antigènes et les anticorps qui leur correspondent
Les antigènes de groupes sanguins
Les antigènes de groupes sanguins sont portés par des glycolipides ou des glycoprotéines et sont exposés à l’extérieur de la membrane.
Les antigènes de groupes sanguins
Leur classification se fait selon deux niveaux :
Premier niveau
Premier niveau : les antigènes de groupes sanguins. plus de 650 actuellement
(exemples : Ag A, B, D, Fya, M, Lea…) Deuxi
Deuxièème niveaume niveau : ces antigènes sont regroupés en 23 systèmes de groupes sanguins.
On appelle système de groupes sanguins l'ensemble des antigènes élaborés par les allèles d'une même unité génétique.
Les différents systèmes de groupes sanguins
( à titre informatif)SYSTEME SYMBOLE
ABO ABO
MNSs MNS
P P1
Rh RH
Lutheran LU
Kell KEL
Lewis LE
Duffy FY
Kidd JK
Diego DI
Cartwright YT
Xg XG
Scianna SC
Dombrock DO
Colton CO
LW LW
Chido-Rodgers CH /RG
H H
ABO et associés Rh et collègues
• Tissulaires
• Pas propres à l'homme
• Possèdent des
anticorps naturels
• Problèmes en
transfusion et en transplantation
• Propres aux GR
• Propres à l'homme
• Ne possèdent pas d’anticorps naturels
• Problèmes en cours de grossesse et lors des transfusions
ABO
Hh et Sese Lewis
Ii P
Luthéran MN
Rh Kell Duffy Kidd Ss
Deux familles de groupe sanguin
(Très important)
Le plus important des groupes sanguins
système majeur de l'immunologie transfusionnelle rôle fondamental dans l'immunologie de greffe (peau,
rein.)
Le système ABO
( à titre informatif)
Découvert en 1900 par Karl Landsteiner La structure biochimique: des sucres
A Gal Nac transférase N acétylgalactosamine AgA
B Gal transférase Galactose Ag B
O enzyme inactive substrat non converti Ag H
4 groupes sanguins définis :
Par les antigènes des globules rouges
Par convention, les groupes ABO sont définis par les antigènes présents sur les GR.
A lorsque seul l'antigène A est présent B lorsque seul l'antigène B est présent AB si les antigènes A et B sont présents O si ni l'Ag A ni l'Ag B ne sont présents
Le système ABO
A1
Ax Am
A3 A2
Phénotypes Nombre de sites A
A1 A2 A3 Ax Aend
Am Ay Ael
800 000 à 1 000 000 200 000 à 300 000 30 000
4 000 0
1. à 1 900
< 200
< 200
Les antigènes ABH
( à titre informatif)Enzyme H Enzyme B
Enzyme A
Substance de
base Ag H Ag B Ag A
Gène H
Gène A Gène B
ABO et associés
Les phénotypes ABO
Phénotypes ABO et leur fréquence dans la population française Groupes
sanguins
antigènes globulaires
anticorps sériques
Fréquence en France A
B AB
O
A B AB Aucun
Anti-B Anti-A Aucun anti-A anti-B
45%
9%
3%
43%
Génétique du système ABO
( à titre informatif)
Couples Enfants possibles O x O
O x A O x B O x AB A x A A x B A x AB B x B B x AB AB x AB
O O, A O, B A, B O, A
O, A, B, AB A, B, AB O, B
B, A, AB A, B, AB
Génétique du système ABO
( à( à titre informatif)titre informatif)
Génétique du système ABO
( à( à titre informatif)titre informatif)
Génétique du système ABO
( à( à titre informatif)titre informatif)
Génétique du système ABO
( à( à titre informatif)titre informatif)
Génétique du système ABO
( à( à titre informatif)titre informatif)
Les anticorps de groupes sanguins
Ce sont des immunoglobulines : soit de nature IgM,
soit de nature IgG.
Ils sont synthétisés en réponse à
l'introduction d'antigènes dont l'organisme est dépourvu, selon les règles de la réponse
immunitaire humorale
La réponse immunitaire humorale
IgG
IgM IgG
Taux d’Ig
temps
Période de latence Réintroduction de 7 à 21 jours de l’antigène Introduction
de l’antigène
Réponse Primaire Réponse Secondaire
Les anticorps de groupes sanguins
(Très important)
La classification des anticorps en transfusion se fait selon deux critères :
• naturel ou immun
• régulier ou irrégulier.
Ils sont dits naturels lorsqu'ils apparaissent de façon apparemment spontanée
Ils sont dits immuns lorsqu'ils apparaissent après grossesse ou transfusion préalable
Constants –Thermolabiles - IgM Spontanément agglutinants
Les anticorps naturels ABO
réguliers :
Correspondent à une réponse primaire constante.
Sont toujours présents
Apparaissent entre 2 et 6 mois
augmentent jusqu'à 10 ans, puis diminuent.
irréguliers :
inconstants
dangereux si actifs à 37°C.
Les anticorps de groupes sanguins
Les anticorps naturels sont réguliers, et parfois irréguliers
• Ce sont habituellement des IgM..
• Ils doivent toujours être pris en compte sous peine de provoquer un accident transfusionnel gravissime.
Les anticorps immuns sont irréguliers,
• l'anti-RH1 (D) du système Rh.
• Ce sont habituellement des Ig G.
Les anticorps de groupes sanguins
Anti-A
Anticorps naturel régulier IgM
Anti-D
Anticorps immun irrégulier IgG
Les problèmes transfusionnels
(Très important)
Il faut éviter la rencontre d’un antigène avec son anticorps.
En transfusion, 2 situations peuvent se rencontrer :
• introduction d’antigènes (GR) chez un
patient possédant l’anticorps correspondant
• introduction d’anticorps (plasma) chez un patient possédant l’antigène correspondant
Les problèmes transfusionnels
(Très important)
Transfusion de globules rouges
A A
O O AB AB
B B
Les problèmes transfusionnels
(Très important)
Transfusion de plasma
A A
AB AB O O
B B
Les circonstances de l’immunisation
(Très important)La cause des immunisations est double :
• grossesse ou transfusion.
Les conséquences sont aussi doubles :
• maladie hémolytique du nouveau-né et
• accident transfusionnel.
Les anticorps naturels sont une exception à cette règle, et une exception apparente aux lois de l'immunologie.
Rh et collègues
(Très important)
Propres aux globules rouges Propres à l’homme
Pas d’anticorps naturels
Bien développés à la naissance Acs = immuns = IgG
Responsables :
D’accidents transfusionnels De MHNN
Le plus immunogène des systèmes de groupes sanguins : transfusions, grossesses.
Le système Rh (RH)
( à titre informatif)
Histoire du système Rh
•Découverte de Levine en 1939 : allo anticorps
•Landsteiner et Wiener en 194O : hétéroanticorps
Le nouvel antigène découvert est appelé D ou Rhésus.
Actuellement le système Rhésus s'appelle Rh uniquement.
Le système Rh (RH)
(Très important)
Les antigènes Rh (RH) Les sujets qui :
ont l'Ag D sont dits D+ ou Rh+ ou RH:1 n’ont pas l'Ag D sont dits D- ou Rh– ou
RH:-1 L'Ag D (RH1)
- en Europe : présent chez 85%
absent chez 15 % - au Japon : présent chez 99,9%
absent chez 0,1 %
Le système Rh (RH)
( à titre informatif)
Les antigènes Rh (RH)
Puis découverte de 4 autres Ags : C, c, E, e.
C et E souvent associés à D c et e souvent associés à d L'Ag C présent chez 70 %
E 30 %
c 80 %
e 98 %
Les antigènes C et c, E et e sont antithétiques
Le système Rh (RH)
( à titre informatif)
Le Phénotype Rh
Les Ags D, C, E, c et e définissent le phénotype Rh d'un individu.
5 antigènes définissent 18 phénotypes différents :
fréquents : 34,5% D+ C+ E- c+ e+
rares : < 0,001% D- C+ E+ c- e-
Ecriture du phénotype
( à titre informatif)D-C- E- c+ e+ RH:-1,-2,-3,4,5 dce/dce rr
D- C+ E- c+ e+ RH:-1,2-,3,4,5 dCe/dce r'r
D- C- E+ c+ e+ RH:-1,-2,3,4,5 dcE/dce r"r D- C+E- c- e+ RH:-1,2,-3,-4,5 dCe/dCe r’r’
D- C- E+ c+ e- RH:-1,-2,3,4,-5 dcE/dcE r"r"
D+ C+ E- c- e+ RH:1,2,-3,-4,5 DCe/DCe R1 R1 D+ C- E+ c+ e- RH:1,-2,3-,4,5 DcE/DcE R2R2 D+ C+ E- c+ e+ RH:1,2,-3,4,5 DCe/dce R1 r D+ C- E+ c+ e+ RH:1,-2,3,4,5 DcE/dce R2r
D+ C+ E+ c- e- RH:1,2,3,-4,-5 DCE /DCE RZRZ
Le système Rh (RH)
( à titre informatif)
Phénotypes Nombre de sites RH1
Dccee DCcee DccEe DCCee DCcEe DccEE
D+C-E-c+e+
D+C+E-c+e+
D+C-E+c+e+
D+C+E-c-e+
D+C+E+c+e+
D+C-E+c+e-
RH:1,-2,-3,4,5 RH:1,2,-3,4,5 RH:1,-2,3,3,5 RH:1,2,-3,-4,5 RH:1,2,3,4,5 RH:1,-2,3,4,-5
10 000 à 14 000 12 000 à 20 000 14 000 à 16 000 14 000 à 19 000 23 000 à 31 000 15 000 à 30 000
La densité antigénique est fonction du phénotype
Le système Rh (RH)
Comment reconnaître un antigène : D faible ?
D Partiel ?
Le système Rh (RH)
Antigène D faible
Tous les épitopes sont présents
Déficit quantitatif en sites antigéniques (<10000)
L’agglutination des hématies « D faibles » est variable (- à 3+) en fonction des anticorps anti-D et des techniques utilisés
Les sujets porteurs d’un antigène RH1 faible ne s’immunisent pas contre l’antigène RH1
Le système Rh (RH)
Les sujets possédant un Antigène D partiel peuvent s'immuniser par transfusions ou grossesses contre le morceau qui leur manque.
1 2 3
4 5 6
7 8 9
1 2 3
4 5 6
7 8 9
1 2 3
4 5 6
7 8 9
Antigène D Partiel
Ag D normal Ag D faible Ag D Partiel
Le système Rh (RH)
Les anticorps anti – Rh
Résultent tous d'une allo immunisation:
anticorps immuns par transfusion par grossesse
Il existe des auto anticorps : auto anti-e
Le système Rh (RH)
Les anticorps anti – Rh
Les Acs anti-Rh sont des IgG qui traversent le placenta
Ils sont responsables:
d'accident hémolytique post transfusionnel de MHNN sévères
Le système Rh (RH)
(Très important)Immunogénicité des Ags Rh : RH1 D +++
RH4 c +++
RH3 E + RH5 e + RH2 C + Les spécificités :
anti-D le plus fréquent:
anti-c et anti-E moins fréquents
anti-e et anti-C rares isolés, fréquents en association
Le système Kell (KEL)
(Très important)Pouvoir immunogène de l'antigène K(KEL1)
Fréquence ++ des allo immunisations par transfusions ou par grossesse.
Les antigènes du système Kell 2 Ags principaux antithétiques
K (K1 ou Kell)
k (K2 ou cellano)
Le système Kell (KEL)
( à titre informatif)
Nombre de sites KEL1 (K) par GR:
2 à 5 000 sites pour les hétérozygotes KEL:1,2 (Kk)
4 à 7 000 sites pour les homozygotes KEL:1,-2 (KK)
Le système Kell (KEL)
( à titre informatif)
Génotype
Phénotype Fréquence en France Allèle 1 Allèle 2
k (KEL2) k (KEL2) K- k+ KEL:-1,2 91 % K (KEL1) k (KEL2) K+ k+ KEL:1,2 8,8 % K (KEL1) K (KEL1) K+ k- KEL:1,-2 0,2 %
Génétique du système Kell (KEL)
• 2 allèles principaux : K (KEL1) et k (KEL2)
Le système Kell (KEL)
( à titre informatif)
Les anticorps du système Kell (KEL)
anticorps immuns,
le plus souvent de nature IgG, fixent le complément,
dépistés par le test indirect à
l’antiglobuline
.Immunogénicité des antigènes
(Très important)L'immunogénicité d'un antigène est la
probabilité avec laquelle il induit la synthèse de l'anticorps correspondant lorsqu'il est introduit dans un organisme qui en est dépourvu.
Certains antigènes sont fortement immunogènes, d'autres moins.
D > [c-K] > [C-E-e] > aux autres
Mais ce n'est pas parce qu'un antigène est faiblement immunogène qu'il n'est pas
dangereux
C Examens biologiques
Généralité ( à titre informatif) Groupage sanguins
TDA
RAI (Très important)
L’agglutination
L’agglutination est un phénomène qui conduit à la réunion en amas de cellules
telles que des globules rouges, des
bactéries et des virus.
Agglutination immunologique
+
Agglutination immunologique
En fonction des conditions
Hématies Agglutinées Hématies
« sensibilisées » (mais non agglutinées)
Les différentes techniques Les différentes techniques de
groupage ABO
( à titre informatif)
Acs
Ags
groupe
La détermination d’un groupe sanguin ABO comporte obligatoirement :
La détermination des Ags globulaires
= épreuve globulaire ou de Beth Vincent la détermination des Acs sériques
= épreuve sérique ou de Simonin.
Le goupage ABO
Le groupage ABO
Prélèvement sur anticoagulant centrifugé
Le plasma contient les anticorps
Les hématies portent les antigènes
Les techniques de groupage
Microplaque Plaque jetable Tube
Microfiltation
Les réactifs de groupage
Les hématies - tests :
A1 et B pour l’épreuve plasmatique
A2 en cas de difficultés à l’épreuve plasmatique O des panels de dépistage et d’identification
Les sérums tests : monoclonaux végétaux
humains polyclonaux
Groupage ABO en microplaque
Sérums tests + hématies à grouper
Hématies tests + plasma à grouper
Groupage ABO en microplaque
A AB B O
A B AB A1 B
Groupage ABO sur
microplaque précoatée
Hématies à grouper
Plasma à grouper + hématies tests A1 et B
A B AB A1 B
Groupage ABO sur plaque
(Très important)
anti-A anti-B anti-AB GR A1 GRB
Hématies à grouper Plasma à grouper
+++ +++ +++ - -
Groupage ABO sur plaque
Très important)
anti-A anti-B anti-AB GR A1 GR B
Hématies à grouper Plasma à grouper
+++ - +++ - ++
Groupage ABO en tube
antti-A anti-B anti-AB GR A1 GR B
Hématies à grouper Plasma à grouper
Groupage ABO en tube
Après centrifugation
anti-A anti-B anti-AB GR A1 GR B
αααα-A αααα-B αααα-AB A1 B +++ - +++ - +++
Groupage ABO en tube
Intensités d’agglutination
++++ +++ ++ + -
Groupage en microfiltration
Groupage ABO par microfiltration
Hématies à grouper
Plasma à grouper + hématies tests
A1 B
3+ - 3+ - - -
A1 B
- 3+
Sensibilité des différentes techniques
Épreuves
Techniques globulaire plasmatique
Plaque jetable + +
Tube +++ ++++
Microplaque ++ ++
Microfiltration ++++ +
Les tests à l’antiglobuline ou tests de Coombs direct TDA
( à retenir)Le test direct à l’AGH (TDA) = test globulaire
met en évidence les Acs fixés sur les GR “in vivo”
• sensibilisation des GR du nné dans les MHNN MHNN ABO et MHNN de type RH
• sensibilisation des GR par des auto acs dans les AHA
• sensibilisation des GR par des acs anti médicament dans les AHIA
• sensibilisation des GR du donneur par les Acs du receveur dans les accidents transfusionnels
Passage trans placentaire des anticorps maternels
IgM anti-A IgG anti-A
Enfant A Mère O
Répartition des antigènes A et B à la surface des GR selon l’âge
naissance
3 - 6 mois 2 ans
GR fœtaux A
IgG anti-A maternelles
Incompatibilité ABO : naissance
Incompatibilité ABO : 2-3 mois
Diagnostic d’une MHNN
TDA
Elution
+ =
GR sensibilisés lavés
Éluat + Acs
GR détruits
Identification de l’anticorps élué
Principe de l’élution
Les tests à l’antiglobuline ou tests de Coombs
Le test indirect à l’AGH (TIA) = test sérique
met en évidence la présence d’anticorps dans un sérum en mettant celui ci en contact “in vitro”
avec des GR
• RAI
• épreuves directes de compatibilités
• la détermination de certains antigènes
LA RECHERCHE D’ANTICORPS ANTI-ERYTHROCYTAIRES RAI
(à retenir)
LA RECHERCHE D’ANTICORPS ANTI-ERYTHROCYTAIRES
Analyse essentielle pour assurer la sécurité
immuno hématologique des transfusions et des grossesses
Doit être réalisée conformément à la législation
• Dans le cadre de la prévention des accidents hémolytiques transfusionnels
• En contexte de greffe ou de transplantation
• En contexte pré ou périnatal
LA RECHERCHE D’ANTICORPS ANTI-ERYTHROCYTAIRES
Doit être réalisée
• avec des hématies –tests d’origine humaine
• sur du sérum ou du plasma
Comporte 2 étapes
• Une étape de dépistage
• Une étape d’identification en cas de dépistage positif
Permet d‘identifier des anticorps dirigés contre les antigènes érythrocytaires autres que A et B
La RAI : permet la mise en évidence
d’Acs naturels irréguliers :
préexistants à toute transfusion dangereux si actifs à 37°C
anti- Lea, Leb, M, N, P1, Lua...
d’Acs naturels réguliers :
anti- H des sujets Bombay anti - P, P1, Pk des sujets pp
La RAI : permet la mise en évidence
d’Acs d'allo - immunisation anti - D, C, E, c, e, Kell
anti- Fya, Fyb, Jka, Jkb, S, s anti- Lan, Vel
qui apparaissent après transfusions ou grossesses
Une RAI négative ne signifie pas
"absence d'allo immunisation"
Les anticorps apparaissent et disparaissent : leur
concentration varie avec le temps selon le rythme des stimulations
Il faut toujours tenir compte d'un allo-Ac, même si on ne retrouve plus l’Ac
« UN ANTICORPS UN JOUR UN ANTICORPS
TOUJOURS »
Une RAI négative ne signifie pas
"absence d'allo immunisation"
Importance +++ de la RAI entre le 5ème et 15ème jour après la transfusion
Taux d’Hb Titre d’Ac
Transfusion 5 10 jours
L'épreuve directe de compatibilité au laboratoire : EDC
ANSM : indications : SI RAI + Obligatoire chez tout
patient ayant une RAI +du jour ou dans ses
antécédants
Obligatoire chez le Nné en présence d’Acs d’origine maternel
-Faite au laboratoire :
Test in vitro =
sérum patient +
échantillon de la
poche à transfuser
L'épreuve directe de compatibilité au laboratoire : EDC
- Durée de validité : 3 jours
- les poches de sang compatibilisées pour un patient sont étiquetées :
Nom, prénom, date de naissance du patient date de l'examen
date et heure de fin de validité.
