DE BREVET EUROPEEN. Inventeur: Duhault, Jacques 14 bis, rue Paul Démange F Croissy S Seine(FR)

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JJ E u r o p à i s c h e s

Patenta mt

European Patent Office © Numéro de publication: 0 0 3 9 2 6 5

Office européen des brevets A 1

DEMANDE DE BREVET EUROPEEN

04.11.81 Bulletin 81/44

AT BE CH DE GB IT Ll NL SE

F-92150Suresnes(FR)

"Les Tilleuls" Vattetot sous Beaumont F-76110Goderville(FR)

SCIENCE UNION ET Cie SOCIETE FRANÇAISE DE RECHERCHE MEDICALE Service Brevets 22 rue Garnier F-92200 Neuilly/SeinetFR)

@ Nouveau médicament à base de biflavanone.

L'invention concerne un médicament contenant une biflavanone de formule :

utilisable notamment dans le traitement des maladies résul- tant des troubles de la perméabilité et de la fragilité des parois vasculaires et des atteintes artérielles, veineuses ou capillai- res, ainsi que dans la prévention des complications du dia- bète.

Elle concerne aussi les compositions pharmaceutiques le renfermant.

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La p r é s e n t e i n v e n t i o n a pour o b j e t un n o u v e a u m é d i c a m e n t p o u r le t r a i t e m e n t d e s d y s f o n c t i o n n e m e n t s c a p i l l a i r e s et v e i n e u x , et pour la p r é v e n t i o n des c o m p l i c a t i o n s du d i a b è t e , c o n t e n a n t comme p r i n c i p e a c t i f une b i f l a v a n o n e de f o r m u l e :

ou m a n n i f l a v o n e .

Ce composé (I) e s t un p r o d u i t c o n n u [ p h y t o c h e m i s t r y , 1 8 , p . 1 5 5 3 à 1557, ( 1 9 7 9 ) J , que l ' o n p e u t o b t e n i r par e x t r a c t i o n

d ' é c o r c e s deGARCINIA MANII qui est une e s p è c e p a r t i c u l i è r e - ment a b o n d a n t e dans l e s f o r ê t s t r o p i c a l e s a f r i c a i n e s . Un p r o c é d é d ' e x t r a c t i o n de ce p r o d u i t e s t d é c r i t dans l ' a r t i c l e p r é c i t é de P h y t o c h e m i s t r y .

P a r m i l e s n o m b r e u x c o m p o s é s e x t r a i t s à p a r t i r de p l a n t e s d e ce g e n r e G A R C I N I A MANII, s e u l s les c o m p o s é s m o n o - f l a v o n o i d e s ont f a i t l ' o b j e t de n o m b r e u s e s é t u d e s qui r é v è l e n t une g r a n d e d i v e r s i t é dans l e u r s p r o p r i é t é s t h é r a p e u t i q u e s .

Au c o u r s d ' e s s a i s p h a r m a c o l o g i q u e s , nous avons d é c o u v e r t q u e , de f a ç o n s u r p r e n a n t e , la b i f l a v a n o n e de f o r m u l e (I) p o s s é d a i t une a c t i v i t é n o t a b l e sur la r é s i s t a n c e et la p e r m é a b i l i t é d e s p a r o i s des v a i s s e a u x s a n g u i n s et la p r o p r i é t é d ' i n h i b i t i o n d ' u n enzyme, l ' a l d o s e r é d u c t a s e , p r o p r i é t é u t i l e en

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p a r t i c u l i e r d a n s la p r é v e n t i o n des c o m p l i c a t i o n s de la m a l a - d i e d i a b é t i q u e .

Le g e n r e GARCINIA ( G u t t i f e r a e ) d o n t e s t i s s u le composé ( I ) , e s t une s o u r c e c o n n u e et a b o n d a n t e de b i f l a v o n o i d e s

( c f . F o r t s c h r . Chem. Org. N a t u r s t . (1973) 30, p. 207) e t c o m p r e n d p l u s de 200 e s p è c e s a f r i c a i n e s et a s i a t i q u e s , d o n t la p a r t i c u l a r i t é e s t de p o s s é d e r deux r e s t e s f l a v o n o i d i q u e s l i é s p a r l e u r s c a r b o n e s 3 et 8 .

La b i f l a v a n o n e de l ' i n v e n t i o n p e u t ê t r e p l u s p a r t i c u l i è r e m e n t i s o l é e à p a r t i r des é c o r c e s de t i g e s de G a r c i n i a M a n n i i a v e c des r e n d e m e n t s s u p é r i e u r s à 10 % p a r r a p p o r t au p o i d s s e c des é c o r c e s .

Les m é t h o d e s d ' i s o l e m e n t d é c r i t e s j u s q u ' à p r é s e n t ne s o n t c e p e n d a n t pas t r è s c l a i r e s et ne c o n d u i s e n t pas à des c o m p o - sés d ' u n e g r a n d e p u r e t é . Or, nous a v o n s t r o u v é que l e s

e x t r a i t s s e c s de composé b i f l a v o n i q u e de f o r m u l e I, i s o l é s d e f a ç o n c l a s s i q u e à p a r t i r des é c o r c e s de t i g e s de G a r c i n i a M a n n i i p o u v a i e n t ê t r e f a c i l e m e n t p u r i f i é s p a r e x t r a c t i o n a v e c une s o l u t i o n s a t u r é e de b i c a r b o n a t e de s o d i u m , r e p r i s e du c o m p o s é p a r l ' é t h e r en m i l i e u a c i d e et p r é c i p i t a t i o n d a n s l ' h e x a n e .

Les c a r a c t é r i s t i q u e s p h y s i q u e s du c o m p o s é I s o n t l e s s u i v a n - t e s :

- P o i n t de f u s i o n : 2 4 0 - 2 4 3 ° C

- P o u v o i r r o t a t o i r e :

- U l t r a - v i o l e t :

À m a x . = 292 nm ( é p a u l e m e n t à 3 3 5 ) ( d a n s l ' é t h a n o l )

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- I n f r a - R o u g e :

(OH) = 3600 à 3000 cm-1 (C = O) = 1630 cm-1

- R.M.N. à 6 0 MHz ( s o l v a n t a c é t o n e d e u t é r i é ) :

δ = 5 , 7 5 et 4,8 ppm (2 H-AB-J = 12 Hz)

a t t r i b u a b l e aux p r o t o n s 2 et 3 du 1er m o n o m è r e

= 5 , 1 et 4,4 ppm (2H-AB-J = 12 Hz)

a t t r i b u a b l e aux p r o t o n s 2 et 3 du 2ème m o n o m è r e

δ = 7 , 2 et 6,8 ppm (6 H a r o m a t i q u e s des c y c l e s B ) .

δ = 6 , 1 ppm (3H a r o m a t i q u e s des c y c l e s A ) .

- P u r e t é : Rf c a r a c t é r i s t i q u e en CCM : t â c h e u n i q u e à e n v i r o n 0,35 dans un s y s t è m e S i O 2 - t o l u è n e - m é - t h y l é t h y l c é t o n e - f o r m i a t e d ' é t h y l e - a c i d e f o r m i q u e

( 4 - 1 - 4 - 1 ) .

- A n a l y s e : m a l g r é la p r é s e n c e de t r a c e s d ' e a u :

Nous a v o n s pu é t u d i e r les p r o p r i é t é s du composé b i f l a v o n i q u e (I) a i n s i p u r i f i é , et m e t t r e en é v i d e n c e ses i n t é r e s s a n t e s p r o p r i é t é s p h a r m a c o l o g i q u e s j u s q u ' a l o r s i n s o u p ç o n n é e s p o u r ce t y p e de c o m p o s é .

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P r o p r i é t é s p h a r m a c o l o g i q u e s :

A) t o x i c i t é à h a u t e d o s e :

E l l e a été d é t e r m i n é e s u r des g r o u p e s h o m o g è n e s de s o u r i s S w i s s et NMRI m â l e s , de r a c e p u r e , p e s a n t de 19 à 22 g et sur des g r o u p e s h o m o g è n e s de r a t s S p r a g u e D a w l e y m à l e s a d u l t e s d ' u n p o i d s moyen de 300 g..

En a d m i n i s t r a t i o n o r a l e , la d o s e m a x i m a l e t o u j o u r s t o l é r é e chez la s o u r i s . S w i s s comme c h e z l a s o u r i s N M R I s ' e s t m o n - t r é e s u p é r i e u r e à 1 0 . 0 0 0 m g / k g .

E n a d m i n i s t r a t i o n i n t r a p é r i t o n é a l e , a u s s i b i e n chez l e r a t que chez la s o u r i s , la dose m a x i m a l e t o u j o u r s t o l é r é e e s t s u p é r i e u r e à 3 et 4 . 0 0 0 m g / k g .

Nous p o u v o n s donc d i r e que la b i f l a v a n o n e (I) e s t un c o m - p o s é a b s o l u m e n t a t o x i q u e .

B) a c t i v i t é p a r i é t o t r o p e :

E l l e a é t é r e c h e r c h é e sur d e u x e s p è c e s a n i m a l e s , le l a p i n et le r a t .

1) m é t h o d e de AMBROSE et DE E D S :

Nous a v o n s u t i l i s é une m é t h o d e d é r i v é e de c e l l e d é c r i t e p a r AMBROSE et DE EDS [ J . P h a r m . Exp. T h e r . 90, 3 5 9

( 1 9 4 7 ) ] . Un l a p i n mâle f a u v e , d ' u n p o i d s c o m p r i s e n t r e 2 , 0 et 2,5 kg, e s t é p i l é s u r t o u t e la r é g i o n v e n t r a l e à l ' a i d e d ' u n e p â t e au s u l f u r e de b a r y u m . Le l e n d e m a i n l ' a n i m a l r e ç o i t , en i n j e c t i o n i n t r a v e i n e u s e 2 5 m g / k g d ' u n e ' s o l u t i o n a q u e u s e de Bleu T r y p a n à 1 p. 1 0 0 .

T r e n t e m i n u t e s a p r è s c e t t e i n j e c t i o n , o n a p p l i q u e p e n d a n t 30 s e c o n d e s un tampon de c o t o n de 1,2 cm de c ô t é , i m b i b é de c h l o r o f o r m e , en deux ou t r o i s p o i n t s de l a z o n e ê p i - l é e , et on n o t e le temps d ' a p p a r i t i o n de la c o u l e u r b l e u e .

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Ce t e m p s d o i t ê t r e s e n s i b l e m e n t c o n s t a n t q u e l que s o i t le p o i n t d ' a p p l i c a t i o n du tampon et t r a d u i t la p l u s ou m o i n s g r a n d e r a p i d i t é avec l a q u e l l e le c o l o r a n t q u i t t e le c o u r a n t s a n g u i n pour i m p r é g n e r l e s t i s s u s

s o u s - c u t a n é s .

Le p r o d u i t à t e s t e r e s t a l o r s a u s s i t ô t a d m i n i s t r é s o i t p a r v o i e i n t r a - p é r i t o n é a l e , s o i t p a r v o i e o r a l e . L ' a g e n t

i r r i t a n t e s t a p p l i q u é de n o u v e a u , à des i n t e r v a l l e s d e q u i n z e m i n u t e s , en d ' a u t r e s p o i n t s de la zone é p i l é e : on n o t e à c h a q u e f o i s le temps d ' a p p a r i t i o n de la c o l o r a t i o n b l e u e .

On o p è r e en p r i n c i p e sur des l o t s de s e p t l a p i n s par d o s e et p a r p r o d u i t . Il est à n o t e r q u e :

- la r é p o n s e à l ' a g e n t i r r i t a n t n ' é t a n t pas f o r c é m e n t i d e n t i q u e s e l o n le p o i n t d ' a p p l i c a t i o n sur l ' a b d o m e n , i l f a u t f a i r e v a r i e r s y s t é m a t i q u e m e n t " l e s p o i n t s

t é m o i n s " et l e s " p o i n t s t r a i t é s " d ' u n l a p i n à l ' a u t r e ; - i l f a u t t o u j o u r s c o n s i d é r e r le temps d ' a p p a r i t i o n de

la c o l o r a t i o n b l e u e et n o n l e temps de son d é v e l o p p e - ment c o m p l e t ;

- au b o u t d ' u n e h e u r e d ' e x p é r i e n c e , et à c h a q u e h e u r e e n s u i t e , i l f a u t r e f a i r e une i n j e c t i o n i n t r a v e i n e u s e de B l e u T r y p a n de 1ml de s o l u t i o n a q u e u s e à 1 p . 1 0 0 ; - c h a q u e l a p i n e s t son p r o p r e t é m o i n .

R é s u l t a t s :

Le p r o t o c o l e o p é r a t o i r e p r é c é d e n t a été u t i l i s é et l e s d o s e s s u i v a n t e s ont été a d m i n i s t r é e s : 500 mg e t

1 . 0 0 0 m g / k g . La b i f l a v a n o n e (I) a é t é i n g é r é e sous f o r m e de s o l u t i o n a q u e u s e a d d i t i o n n é e de 5 % de gomme a d r a g a n t e . Les r é s u l t a t s s o n t é v a l u é s en p o u r c e n t a g e d ' a u g m e n t a t i o n du temps d ' a p p a r i t i o n de la c o u l e u r b l e u e au n i v e a u du p o i n t d ' a p p l i c a t i o n par r a p p o r t au temps de base m e s u r é a v a n t t r a i t e m e n t , et c o m p a r é s à des s u b s t a n c e s de r é f é - r e n c e a d m i n i s t r é e s dans l e s mêmes c o n d i t i o n s c a t é c h i n e h y d r a t e , h e s p é r i d i n e , q u e r c é t i n e , r u t i n e . Les r é s u l t a t s s o n t c o n s i g n é s dans le t a b l e a u c i - d e s s o u s , le maximum

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d ' a c t i v i t é é t a n t o b t e n u 6 à 7 h e u r e s e n v i r o n a p r è s l ' a d - m i n i s t r a t i o n du p r o d u i t .

2) M é t h o d e de BEACH et STEINETZ

La t e c h n i q u e d'AMBROSE et DE EDS a é t é m o d i f i é e a f i n d e m e s u r e r la c o l o r a t i o n de la t a c h e s e l o n l a t e c h n i q u e d e BEACH et STEINETZ [ ( J . P h a r m . E x p l . T h e r a p . (1961) 1 3 1 , n° 1, p. 400 à 4 0 6 ) ] . D e s l a p i n s N e w - Z e a l a n d m â l e s d e 2,5 kg r e ç o i v e n t une i n j e c t i o n IP de p r o d u i t à t e s t e r , ou d ' e a u gommée pour les t é m o i n s .

T r e n t e m i n u t e s a p r è s , sur la peau a b d o m i n a l e . p r é a l a b l e - ment é p i l é e , un tampon de c h l o r o f o r m e e s t a p p l i q u é t r e n t e s e c o n d e s , a f i n de c r é e r une i r r i t a t i o n l o c a l e qui f a v o r i s e la d i f f u s i o n du c o l o r a n t h o r s des c a p i l l a i r e s v e r s l e s l i q u i d e s i n t e r s t i t i e l s .

I m m é d i a t e m e n t a p r è s , u n e s o l u t i o n de Bleu T r y p a n à 2 5 m g / k g e s t i n j e c t é e d a n s la v e i n e m a r g i n a l e d e l ' o r e i l l e .

Une t a c h e b l e u e a p p a r a i t à l ' e n d r o i t i r r i t é . L e l a p i n e s t tué par E i n j e c t i o n i n t r a c a r d i a q u e de p e n t o b a r b i t a l , 30 m i - n u t e s a p r è s l ' i n j e c t i o n du Bleu T r y p a n .

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Les f r a g m e n t s de peau s o n t p r é l e v é s , p o s é s et l a i s s é s à d i g é r e r 24 h e u r e s dans HCI p u r . Le Bleu Trypan e s t d o s é

s e l o n la t e c h n i q u e de BEACH et STEINETZ.

Après la d i s s o l u t i o n c o m p l è t e , l ' a d d i t i o n de 3 m l d e c h l o r u r e de B e n z a l k o n i u m en s o l u t i o n a q u e u s e à 12,80 % c o m p l e x e le c o l o r a n t qui e s t e n s u i t e r e p r i s p a r 5 ml d e c h l o r o f o r m e . Après c e n t r i f u g a t i o n , la p h a s e c h l o r o f o r m i q u e b l e u e e s t r a p i d e m e n t s o u t i r é e e t f i l t r é e , la l e c t u r e

s p e c t r o p h o t o m é t r i q u e e s t f a i t e i m m é d i a t e m e n t a f i n d ' é v i t e r une c o n c e n t r a t i o n du c o l o r a n t par é v a p o r a t i o n du c h l o r o - f o r m e . Les d e n s i t é s o p t i q u e s à 620 mn s o n t t r a d u i t e s e n µg de b l e u / 1 0 0 mg de t i s s u .

R é s u l t a t s :

Le p r o t o c o l e o p é r a t o i r e p r é c é d e n t a été u t i l i s é et l e s d o s e s 200 et 400 mg ont été a d m i n i s t r é e s . Les r é s u l t a t s , e x p r i m é s e n n g de c o l o r a n t par 100 g de peau f r a i c h e s o n t d o n n é s dans le t a b l e a u s u i v a n t :

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3) A u t r e s m é t h o d e s : ,

D ' a u t r e s t e s t s , u t i l i s é s c h e z le r a t , ont c o n f i r m é l e s p o s s i b i l i t é s de la b i f l a v a n o n e d a n s la d i m i n u t i o n de l a p e r m é a b i l i t é c a p i l l a i r e p a r r a p p o r t aux p r o d u i t s d e r é f é r e n c e c l a s s i q u e s , et n o t a m m e n t l e s t e s t s r é a l i s é s

s e l o n la t e c h n i q u e de LEFEBVRE C(C.R. Soc. B i o l . 1, 183 ( 1 9 6 2 ) ] q u i c o n s i s t e à o b s e r v e r l ' a p p a r i t i o n d ' u n c o l o r a n t au n i v e a u d ' u n e i n j e c t i o n i n t r a d e r m i q u e

d ' h i s t a m i n e . I l a été c o n s t a t é que l ' i n f e c t i o n i n t r a p é - r i t o n é a l e de 100 mg/kg de b i f l a v a n o n e (I) r e t a r d e l ' a p - p a r i t i o n de la c o l o r a t i o n de 7 0 % . L a r u t i n e a l a même d o s e ne p r o v o q u e q u ' u n r e t a r d de 12 %

P o u r m e t t r e en é v i d e n c e l ' a c t i o n s u r l a r é s i s t a n c e c a p i l l a i r e , nous a v o n s u t i l i s é la m é t h o d e d é c r i t e p a r J . L . PARROT et c o l l . [ C . R . Soc. B i o l . 140 7 5 0 ( 1 9 4 6 ) ] . E l l e c o n s i s t e à é t u d i e r l e s v a r i a t i o n s de la r é s i s t a n c e c a p i l l a i r e chez le c o b a y e soumis à u n r é g i m e s p é c i a l c a r e n c é en f a c t e u r v i t a m i n i q u e P ( C 2 ) , m a i s é q u i l i b r é en v i t a m i n e C. La r é s i s t a n c e c a p i l l a i r e

e s t m e s u r é e au n i v e a u de la r é g i o n l o m b a i r e en a p p l i - q u a n t s u r la p e a u , p r é a l a b l e m e n t é p i l é e , une v e n t o u s e de v e r r e de 5 mm de d i a m è t r e . On d é t e r m i n e la v a l e u r de la d é p r e s s i o n , e x p r i m é e en cm de m e r c u r e ; q u ' i l f a u t r é a l i s e r p o u r f a i r e a p p a r a î t r e , au b o u t de 5 0 s e c o n d e s e n v i r o n , 3 p é t é c h i e s sur la s u r f a c e e n t o u r é e . C e t t e d é p r e s s i o n e s t g é n é r a l e m e n t c o m p r i s e e n t r e 25 et 35 cm de m e r c u r e , mais e l l e c h u t e à 10 cm de Hg c h e z l e s a n i m a u x s o u m i s au r é g i m e c a r e n c é p e n d a n t 1 0 j o u r s .

On m e s u r e e n s u i t e la r é s i s t a n c e c a p i l l a i r e chez l e s mêmes a n i m a u x , 3, 6, 8, 24 et 48 h e u r e s a p r è s a d m i n i s -

t r a t i o n des p r o d u i t s à t e s t e r . L ' é l é v a t i o n de la r é s i s - t a n c e c a p i l l a i r e et sa d u r é e s o n t e x p r i m é e s p l a n i m é t r i - q u e m e n t par la v a l e u r de la s u r f a c e o b t e n u e en p o r t a n t s u r un s y s t è m e de c o o r d o n n é e s l e s v a l e u r s de la r e s i s - t a n c e c a p i l l a i r e en o r d o n n é e s et le temps en h e u r e s e n a b c i s s e s .

(10)

On a c o n s t a t é q u ' e n p r e n a n t la moyenne de 10 a n i m a u x , c e t t e s u r f a c e e s t de 2 0 , 8 cm 2 a p r è s i n j e c t i o n de 50 m g / k g de b i f l a v a n o n e ( I ) , t a n d i s que la même dose de r u t i n e ne donne que 6,42 c m 2 .

Les e f f e t s p h a r m a c o l o g i q u e s c i - d e s s u s r e l a t é s p e r m e t t e n t l ' u t i l i s a t i o n de ce c o m p o s é , s e u l ou en a s s o c i a t i o n a v e c d ' a u t r e s s u b s t a n c e s à a c t i v i t é v i t a m i n i q u e P, dans l e t r a i t e m e n t de n o m b r e u s e s m a l a d i e s et s y n d r o m e s , p r o v o q u é s p a r une f r a g i l i t é v a s c u l a i r e a u g m e n t é e . A i n s i : o n p e u t c i t e r par e x e m p l e les d i v e r s p u r p u r a s et d i a t h è s e s

h é m o r r a g i q u e s , l e s u l c è r e s g a s t r o d u o d é n a u x , l e s c o l i t e s u l c é r e u s e s , l e s r é t i n o p a t h i e s et l e s a r t é r i o l i t e s d a n s l ' h y p e r t e n s i o n et le d i a b è t e , l e s m é t r o r r a g i e s , l e s u l - c è r e s v a r i q u e u x , et e n t r e a u t r e , la p a t h o l o g i e h é p a t i q u e d é c o u l a n t d ' u n e a l t é r a t i o n f o n c t i o n n e l l e des c a p i l l a i r e s s i n u s o i d e s .

C) I n h i b i t i o n de l ' a l d o s e r e d u c t a s e :

Le d é r i v é de f o r m u l e g é n é r a l e I p o s s è d e des p r o p r i é t é s p h a r m a c o l o g i q u e s i n t é r e s s a n t e s n o t a m m e n t des p r o p r i é t é s

i n h i b i t r i c e s de l ' e n z y m e a l d o s e - r é d u c t a s e .

L ' a l d o s e - r é d u c t a s e e s t l ' e n z y m e p r i n c i p a l qui c o n t r ô l e la r é g u l a t i o n du m é t a b o l i s m e des a l d o s e s et n o t a m m e n t des a l d o h e x o s e s comme le g a l a c t o s e et le g l u c o s e en l e s t r a n s f o r m a n t en p o l y o l c o r r e s p o n d a n t ( s o r b i t o l ou

g a l a c t i t o l par e x e m p l e ) dans l ' o r g a n i s m e h u m a i n .

En p r é s e n c e d ' u n e x c è s de g l u c o s e s a n g u i n , l ' a c t i v i t é d ' u n t e l enzyme e n t r a i n e une c o n c e n t r a t i o n a n o r m a l e en g a l a c - t i t o l ou en s o r b i t o l chez les s u j e t s g a l a c t o s é m i q u e s ou h y p e r g l y c é m i q u e s . Des c o n c e n t r a t i o n s a n o r m a l e s en p o l y o l s

e n t r a î n e n t l ' a c c u m u l a t i o n de ces s u b s t a n c e s dans le c r i s - t a l l i n , dans le s y s t è m e n e r v e u x p é r i p h é r i q u e et dans l e s r e i n s des s u j e t s d i a b é t i q u e s . En e f f e t , l ' i n t e r v e n t i o n de l ' a l d o s e - r é d u c t a s e p r é s e n t e dans le c r i s t a l l i n est p e u s e n s i b l e chez un s u j e t d o n t la g l y c é m i e e s t n o r m a l e .

(11)

Son r ô l e d e v i e n t b e a u c o u p p l u s i m p o r t a n t chez l e s s u j e t s d i a b é t i q u e s d o n t la g l y c é m i e e s t b e a u c o u p p l u s é l e v é e .

On e x p l i q u e a i n s i une m o d i f i c a t i o n des f o n c t i o n s c a p i l l a i - r é s e t r é n a l e s , des t r o u b l e s de la c o n d ú c t i o n n e r v e u s e et l ' a p p a r i t i o n d ' u n e c a t a r a c t e d i a b é t i q u e avec p e r t e d e la t r a n s p a r e n c e du c r i s t a l l i n . On v i s e donc à r e t a r d e r à r é d u i r e ou é v i t e r t o t a l e m e n t l ' a p p a r i t i o n de ces c o m - p l i c a t i o n s g r a v e s du d i a b è t e par l ' e m p l o i d ' u n i n h i b i t e u r d ' a l d o s e - r é d u c t a s e .

L ' a c t i v i t é i n h i b i t r i c e d ' a l d o s e - r é d u c t a s e des c o m p o s é s de la p r é s e n t e i n v e n t i o n a été mise en é v i d e n c e par d e s e s s a i s in v i t r o sur l ' a l d o s e - r é d u c t a s e e x t r a i t e de c r i s - t a l l i n s de r a t s s e l o n la t e c h n i q u e d é c r i t e par S. HAYMAN et J . H . KINOSHITA, J. B i o l . Chem. 240 (1965) 877, m o d i f i é e p a r S.D. WARNA et J . H . K I N O S H I T A , B i o c h e m i c a l P h a r m a c o l o - gy 5 ( 1 9 7 6 ) 2 5 0 5 - 2 6 1 3 . :

La b i f l a v a n o n e ( I ) , mise en s u s p e n s i o n dans du t a m p o n pH 7, e s t p l a c é e en i n c u b a t i o n à 25°C d a n s un r é c i p i e n t b o u c h é c o n t e n a n t l ' a l d o s e - r é d u c t a s e e x t r a i t de c r i s t a l l i n s de r a t s CD R i v e r . Après 10 mn de c o n t a c t , le s u b s t r a t

( a l d é h y d e d - g l y c é r i q u e ) e s t i n t r o d u i t d a n s la cuve d e r é - a c t i o n . La c i n é t i q u e e n z y m a t i q u e e s t a p p r é c i é e par la d i s - p a r i t i o n , du m i l i e u , du c o - f a c t e u r Ac. N i c o t i n a m i d e - a d é n i - ne d i p h o s p h o r i q u e r é d u i t e (NADPH) s e l o n la r é a c t i o n :

On c a l c u l e l ' a c t i v i t é e n z y m a t i q u e par d é t e r m i n a t i o n de la q u a n t i t é de NADPH d i s p a r u e . Les r é s u l t a t s s o n t e x p r i m é s en p o u r c e n t a g e de l ' a c t i v i t é e n z y m a t i q u e de l a p r é p a r a t i o n en l ' a b s e n c e de t o u t i n h i b i t e u r . Dans c e s c o n d i t i o n s on p e u t d é t e r m i n e r , par e x e m p l e , la d o s e m i n i m a l e qui i n h i b e à 50 % l ' a c t i v i t é e n z y m a t i q u e .

(12)

L ' i n h i b i t i o n à 50 % de la p r é p a r a t i o n e n z y m a t i q u e e s t o b t e n u e avec des c o n c e n t r a t i o n s s ' é c h e l o n n a n t e n t r e

1 0 M et 2,5 10-7 M, et ce r é s u l t a t se r é v è l e ê t r e t r è s s u p é r i e u r à ceux o b t e n u s non s e u l e m e n t avec l e s m o n o - f l a v o n o i d e s u s u e l s ( e . a d i o s m i n e ) , mais a u s s i l e s i n h i - b i t e u r s d ' a l d o s e - r é d u c t a s e l e s p l u s r é c e n t s

( e . a . a l r e s t a t i n e ) :

A c t i v i t é i n h i b i t r i c e de l ' a l d o s e - r é d u c t a s e in v i t r o :

Les p r o p r i é t é s c i - d e s s u s d é c r i t e s dans le p a r a g r a p h e C, j o i n t e s à la f a i b l e t o x i c i t é des c o m p o s é s de la p r é s e n t e i n v e n t i o n , p e r m e t t e n t l e u r u t i l i s a t i o n en t h é r a p e u t i q u e , n o t a m m e n t dans le t r a i t e m e n t p r é v e n t i f et c u r a t i f des c o m - p l i c a t i o n s d é g é n é r a t i v e s du d i a b è t e , dont en p a r t i c u l i e r la c a t a r a c t e , les a n g i o p a t h i e s , les a l t é r a t i o n s d e s

f o n c t i o n s c a p i l l a i r e s et r é n a l e s , et l e s t r o u b l e s de l a c o n d u c t i o n n e r v e u s e .

(13)

L ' i n v e n t i o n s ' é t e n d é g a l e m e n t aux c o m p o s i t i o n s p h a r m a - c e u t i q u e s r e n f e r m a n t à t i t r e de p r i n c i p e a c t i f le c o m p o s é de f o r m u l e g é n é r a l e (I) en m é l a n g e ou en a d d i t i o n a v e c un e x c i p i e n t i n e r t e n o n - t o x i q u e p h a r m a c e u t i q u e m e n t a c c e p - t a b l e , comme par e x e m p l e l ' e a u d i s t i l l é e , le g l u c o s e , l e l a c t o s e , l ' a m i d o n , le t a l c , l ' é t h y l c é l l u l o s e , le s t é a r a t e de m a g n é s i u m ou le b e u r r e de c a c a o .

D ' u n e m a n i è r e p r é f é r é e les c o m p o s é s de l ' i n v e n t i o n s o n t a d m i n i s t r é s par v o i e b u c c a l e , p a r e n t é r a l e , r e c t a l e , l o c a l e ou s u b l i n g u a l e . Les f o r m e s p h a r m a c e u t i q u e s qui c o n v i e n n e n t p l u s p a r t i c u l i è r e m e n t pour de t e l l e s a d m i n i s t r a t i o n s s o n t

l e s s o l u t i o n s ou s u s p e n s i o n s i n j e c t a b l e s c o n d i t i o n n é e s en a m p o u l e s , en f l a c o n s m u l t i d o s e s ou en s e r i n g u e s a u t o - i n j e c t a b l e s , l e s c o l l y r e s , l e s c o m p r i m é s nus ou e n r o b é s , l e s d r a g é e s , l e s g é l u l e s , les p i l u l e s , l e s s i r o p s ou l e s é m u l s i o n s b u v a b l e s , l e s c o m p r i m é s s u b l i n g u a u x et l e s s u p p o s i t o i r e s .

La p o s o l o g i e u n i t a i r e e s t v a r i a b l e s e l o n la v o i e d ' a d m i - n i s t r a t i o n , l ' â g e du p a t i e n t et la s é v é r i t é de l ' i n d i c a - t i o n t h é r a p e u t i q u e . E l l e p e u t s ' é c h e l o n n e r e n t r e e n v i r o n 50 et e n v i r o n 500 mg par p r i s e u n i t a i r e . La p o s o l o g i e j o u r n a l i è r e p e u t s ' é c h e l o n n e r e n t r e e n v i r o n 100 et e n v i - ron 2 . 0 0 0 mg chez l ' a d u l t e .

A t i t r e d ' e x e m p l e s non l i m i t a t i f s nous d o n n o n s c i - a p r è s des e x e m p l e s de q u e l q u e s c o m p o s i t i o n s p h a r m a c e u t i q u e s à b a s e de b i f l a v a n o n e :

E x e m p l e 1 :

On t a m i s e l e s p o u d r e s , les m é l a n g e et r é p a r t i t e n s u i t e e n g é l u l e s .

(14)

E x e m p l e 2

Le p r i n c i p e a c t i f e s t m é l a n g é avec l ' a m i d o n de m a i s ,

m o u i l l é avec une s o l u t i o n a q u e u s e de p o l y v i d o n e , s é c h é e t c a l i b r é , p u i s l u b r i f i é avec le s t é a r a t e . Le c o m p r i m é

p e u t ê t r e é v e n t u e l l e m e n t e n r o b é .

E x e m p l e 3

On m é l a n g e l e s p o u d r e s a p r è s t a m i s a g e et l e s m o u i l l e a v e c de l ' e a u d i s t i l l é e . Le g r a n u l é e s t e n s u i t e s é c h é , c a l i b r é et r é p a r t i en s a c h e t s é t a n c h e s .

E x e m p l e 4

P r é p a r a t i o n d ' u n e s o l u t i o n b u v a b l e

(15)

On p r é p a r e par d i s p e r s i o n et h o m o g é n é i s a t i o n un g e l

f l u i d e d ' h y d r o x y é t h y l c e l l u l o s e c o n t e n a n t l e s c o n s e r v a t e u r s ( p a r a o x y b e n z o a t e s ) . On a j o u t e le c y c l o h e x y l s u l f a m a t e ,

la g l y c é r i n e , l ' a r ô m e et la b i f l a v a n o n e qui s o n t e n s u i t e d i s p e r s é s .

La p r é p a r a t i o n d o i t ê t r e a g i t é e a v a n t l ' e m p l o i . Une c u i l l è r e c o r r e s p o n d a i n s i à 0 , 2 5 0 g de p r i n c i p e a c t i f .

E x e m p l e 5

P r é p a r a t i o n de s u p p o s i t o i r e s

La p r é p a r a t i o n p e u t é g a l e m e n t c o n t e n i r des a g e n t s a n t i - i n f l a m m a t o i r e s , a n e s t h é s i q u e s , a n t i s e p t i q u e s .

(16)

1°) m é d i c a m e n t c o n t e n a n t u n e b i f l a v a n o n e de f o r m u l e :

u t i l i s a b l e n o t a m m e n t dans le t r a i t e m e n t des m a l a d i e s , r é s u l t a n t des t r o u b l e s de la p e r m é a b i l i t é e t d e l a f r a - g i l i t é des p a r o i s v a s c u l a i r e s et des a t t e i n t e s a r t é - r i e l l e s , v e i n e u s e s ou c a p i l l a i r e s , a i n s i que dans l a p r é v e n t i o n de c o m p l i c a t i o n s du d i a b è t e .

2°) Les c o m p o s i t i o n s p h a r m a c e u t i q u e s c o n t e n a n t comme

p r i n c i p e a c t i f la b i f l a v a n o n e ( I ) , s e u l ou en a s s o c i a t i o n avec d ' a u t r e s s u b s t a n c e s à a c t i v i t é v i t a m i n i q u e P e t

des s u p p o r t s p h a r m a c e u t i q u e s a p p r o p r i é s .

3°) Les c o m p o s i t i o n s p h a r m a c e u t i q u e s , s e l o n la r e y e n d i c a - t i o n 2, p r é s e n t é e s sous une forme c o n v e n a n t pour l ' a d m i - n i s t r a t i o n o r a l e , r e c t a l e , p a r e n t é r a l e ou p e r c u t a n é e , n o t a m m e n t dans le t r a i t e m e n t de d i v e r s e s m a n i f e s t a t i o n s de la f r a g i l i t é des p a r o i s v a s c u l a i r e s et des c o m p l i - c a t i o n s du d i a b è t e , s e u l ou a s s o c i é à d ' a u t r e s s u b s t a n c e s à a c t i v i t é c o m p l é m e n t a i r e ,

(17)