REVUE DE LA LITTÉRATURE

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REVUE DE LA LITTÉRATURE

Corrélation des altérations génétiques à l’agressivité anatomo-pathologique des carcinomes urothéliaux de la vessie : performance du test BCA-1

Correlation of genetic and cytogenetic alterations in pathological

aggressiveness urothelial carcinoma of the bladder: Performance of BCA-1, a mini-array comparative genomic hybridisation-based test

P. Léon

^a^,^b^,∗

, G. Cancel Tassin

^a^,^c

, K. Sighar

^g

, E. Compérat

^a^,^c^,^d

, C. Gaffory

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, V. Ondet

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, S. Hugonin

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, M. Audouin

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, S. Doizi

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, O. Traxer

^f

, C. Ciofu

^f

, M. Rouprêt

^a^,^c^,^e

, R. Lacave

^h

, O. Cussenot

^a^,^c^,^f

aGRCn^o5,ONCOTYPE-URO,institutuniversitairedecancérologie,UPMCuniversitéParis06, 75020Paris,France

bDépartementdechirurgieurologique,CHUdeReims,rueCognacq-Jay,51000Reims,France

cCeRePP,75020Paris,France

dDépartementd’anatomopathologie,hôpitaldelaPitié-Salpétrière,UPMCuniversitéParis 06,AP—HP,75013Paris,France

eDépartementdechirurgieurologique,hôpitaldelaPitié-Salpétrière,UPMCuniversitéParis 06,AP—HP,75013Paris,France

fDépartementdechirurgieurologique,hôpitalTenon,UPMCuniversitéParis06,AP—HP, 75020Paris,France

gArraygenomics,78960Voisins-le-Bretonneux,France

hDépartementdebiologietumorale,hôpitalTenon,UPMCuniversitéParis06,AP—HP,75020 Paris,France

Rec¸ule17mars2017 ;acceptéle5mai2017 DisponiblesurInternetle31mai2017

MOTSCLÉS Altérations cytogénétiques;

Résumé

Introduction.—Lescarcinomesurothéliauxreprésententla quatrièmecausedecancerchez l’homme. Leur incidence est en augmentation de plus de 50 % depuis 25 ans. Les formes

∗Auteurcorrespondant.

Adressee-mail:pleon@chu-reims.fr(P.Léon).

http://dx.doi.org/10.1016/j.purol.2017.05.002

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Biomarqueurs; Cancerdevessie; Pucegénétique; Hybridation génomique comparative

superficielles(70% cas)nécessitentune surveillanceactive rapprochéeafind’identifier les récidivesfréquentesetl’évolution versun stadeinvasif.Notreétudevisait àidentifier des marqueursmoléculaires pronostiquespourlecancerde lavessiepouvantêtreutilisés seuls ouencombinaison dansla pratique cliniquede routine.Dansce but,nousavonsévalué la capacitédelapuceCGHdutestBCA-oligoàclassercorrectementengrade/stadecestumeurs superficielles.

Méthode.—L’ADNde81échantillonsurinairesdepatientsatteintsd’uncancerdevessiesuper- ﬁcielaétéextraitethybridésurlapuceBCA-oligo.Lesrésultatsdel’analysemoléculaireont étécorrélésaugradeetstadetumoraux.

Résultats.—Plusieurs altérationschromosomiquesétaient significativement plus fréquentes danslestumeurs de hautgrade oude stadeplusavancé. Une associationtrès significative aétéobservéeentre unhautgradetumoralet la présenced’au moinsune desaltérations suivantes:perteen6p, gainen8qou13q,perteougainen9qou11q,avecunoddsratio de6,91(IC=2,20—21,64;p=0,0009).Deplus,unecorrélationtrèssignificativeaététrouvée entrelestadeplusinvasifpT1etlaprésenced’aumoinsunedesaltérationssuivantes:perte en6p,gainen8q,perteougainen5p,avecunoddsratiode15,2(IC=3,71—62,58;p=0,0002).

Conclusion.—Nosrésultatsmontrentquel’analysemoléculairedestumeurssuperﬁciellesde vessiebaséesur l’ADNurinaireetletestBCA-oligopourraitêtreutiliséecommefacteur de pronosticpourl’évolutiondestumeurs,permettantainsiunepriseenchargecliniquemieux adaptée.

KEYWORDS Cytogenetic alterations;

Biomarkers;

Bladdercancer;

Geneticchip;

Comparativegenomic hybridization

Summary

Introduction.—Urothelialcarcinomasarethefourthleadingcauseofcancerinhumans.Their incidenceisincreasingbymorethan50%in25years.Thesuperﬁcialforms(70%cases)requirea closeactivesurveillancetoidentifyfrequentrecurrencesandprogressiontoinvasivestage.Our maingoalwastoidentifyprognosticmolecularmarkersforbladdercancerthatcouldbeused aloneorincombinationinroutineclinicalpractice.Inthisaim,weevaluatedthecapabilityof theBCA-oligotestbasedonaCGHarraytocorrectlyclassifytumoralgrade/stage.

Method.—UrinaryDNAwasextractedfrom81patientswithsuperﬁcialbladdercancerandhas beenhybridizedontheBCA-oligoarray.Theresultsfromthemolecularanalysiswerecorrelated withthetumoralgradeandstage.

Results.—Severalchromosomalalterationsweresignificantlymorefrequentintumorsofhigher gradeandmoreadvancedstage.Asignificantassociationwasobservedbetweenahighgradeand thepresenceofoneofthesealterations:losson6p,gainon8qor13q,lossorgainon9qor11q, withanoddsratioof6.91(95%CI=2.20—21.64;P=0.0009).Moreover,asignificantassociation wasfoundbetweenamoreadvancedstage(pT1)andthepresenceofoneofthesealterations:

losson6p, gainon 8q,lossorgainon5p, withanodds ratioof15.2(95%CI=3.71—62.58;

P=0.0002).

Conclusion.—Ourresultsshowedthatmolecularanalysesofsuperﬁcialbladdercancersbased onurinaryDNAandtheBCA-oligotestcouldbeusedasprognosticfactorforthetumorevolution, allowingthenamoreadaptedclinicalmanagement.

Introduction

Àl’heureactuelle,prèsde10000nouveauxcasdecancerde lavessiesontdiagnostiquésparanenFranceet350000dans lemonde.Lestumeursdevessiereprésentent3%desdécès parcancerenFrance[1],majoritairementdeshommesqui totalisent 75 % des décès [2], du fait d’un tabagisme et d’une expositionplus élevée aux carcinogènes environne- mentaux (tabac, les amines aromatiques et leshydrocar- bures aromatiquespolycycliques [3,4]). La consommation

d’alcool, lesfacteurs alimentaires etl’utilisation detein- turescapillairesontégalementétésuggéréscommefacteurs derisquedecancerdelavessie[5,6].Aumomentdudiag- nostic,environ70 %des tumeursdevessie(TV)sont àun stade non infiltrant le muscle vésical (TVNIM), contraire- ment aux 30 % restantes qui sont invasives. Les lésions superficielles de stade pTa sont de bon pronostic, mais onttendanceàrécidiversurlemêmemode(tauxderéci- dive prochede70 %[1]).Ainsi, cestumeurs superficielles de vessie nécessitent une surveillance particulièrement

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rapprochée. Cette surveillance, essentiellement fondée sur le couple cystoscopie—cytologie, est le plus souvent négative, imposant une morbidité inutile au patient. La cystoscopie est dépendantedu chirurgien qui la pratique etpossèdequelqueslimitestechniquesetd’interprétation (mauvaisevisionliéeàunehypertrophiebénignedeprostate ou à un saignement, carcinome in situ difﬁcile à visuali- ser).Cetexamen,performantmaisinvasif,estparfoismal toléré,peutdoncêtresourcedecomplications(sténosesde l’urètre,infections urinaires),etpossèdeun coûtpropre.

Le cytodiagnostic urinaire est un complément utile à la cystoscopie maissasensibilité pour les tumeursde faible gradeestmédiocreetdépendantedel’anatomopathologiste effectuantl’examen[2].Eneffet,mêmesilacytologiedes urinesestunexamentrèsspéciﬁqueetpeuonéreux(niveau depreuveIII-2)[3],sasensibilitéesttrèsvariable,de35à 45 %,etson interprétationest clairement dépendantede l’expérience du cytologiste pour en déjouer les pièges : atypiesréactionnelles,viroses,atypiespost-thérapeutiques [4].Sasensibilitépourlestumeursdebasgrade,oùelleest leplussouventnégative,estfaible,del’ordrede4—29%.

Danslestumeursdehautgrade,lacytologieaunesensibi- litéplusacceptablede69—92%,maisn’enfaitpasunbon testdesurveillance[5].

Dansl’absolu,untesturinairetrèsspéciﬁque,trèssen- sibleetpeu onéreuxpourraitidéalement sesubstituerau couple cystoscopie et cytologie des urines. Des tests urinaires ont précédemment été développés, basés sur les anomaliesdécouvertesauniveaudestumeursmaiscestests commercialisés(BTATrak,NMP22,Accu-Dx,uCyt+,Urovy- sion)ne sont pasutilisésen pratiqueclinique deroutine.

Unecaractéristiquecommuneàdenombreusestumeursest deprésenterdesanomalieschromosomiques(déséquilibres alléliques)qui peuventêtre révélées parl’étude demar- queursdel’ADN.Cette particularitédugénometumoral a d’abordété miseà profit dans lescancersde vessiepour détecter des cellulestumorales en étudiantl’ADN extrait des urines de patients à l’aide de marqueursmicrosatel- lites[7].Depuis,plusieurséquipesontrapportédesrésultats utilisant cettetechnique pour le diagnosticoule suivi de ces tumeurs [8]. Ces études montrent que l’examen de l’ADNurinaireprésenteunintérêtmajeurpourlesuivides patientsaudécoursd’unerésectiontrans-urétraled’uncar- cinomesuperficieldelavessie.Lasensibilitéetlaspécificité dece testapparaissent meilleuresque cellesdelacysto- scopie urinaireet duBTA TRAK test [9].L’objectif est de dépister une lésion urothéliale asymptomatique dans une populationcible,d’unepart,etdesimplifierlesmodalités de surveillance des patients porteursde tumeurs de ves- siedéjàconnuesettraitéesenréduisantlesindicationsde l’endoscopie, d’autre part [2,6,10]. Il serait doncsouhai- tabledepouvoirdétecteruncancerurothélialàpartirdes urinesd’unpatientavecunegrandesensibilité,puiséven- tuellement, d’apporterdes informations complémentaires surla naturedu canceretsonagressivité. L’identification delésionscytogénétiquesauseind’unurothéliumoptique- mentnormal,aprèsexérèsedelatumeurprimitivepourrait être un critère intéressant de sélection des patients qui pourraientbénéficierd’instillationsvésicales.

Danscetteoptique,notreéquipeadéveloppéunepuce à ADNd’hybridation génomiquecomparative (CGH),nom- mée BCA-1, et comprenant 341 clones (BAC) répartis sur

desrégionschromosomiquesd’intérêts[11].L’ADNextrait d’urine de 22 patients atteints de cancer de vessie et de 22 témoins a montré que cette puce CGH avait une excellente performance diagnostique avec une sensibilité de 95 % et une spécificité de 86 % [11]. Ce test uri- naireaégalementpermisd’identifierunpaneld’aberrations génomiquespermettantd’identifierlegradedelatumeur avec une sensibilité et une spécificité de 86 et 88 %, respectivement[12]. Depuis une nouvelle puce BCA-oligo couvrantles mêmes régions chromosomiques maisconsti- tuées d’oligonucléotides a été créée (60 000 sondes de 50—60pairesdebase).Nousavonsmontréquel’utilisation decettepuceavecl’ADNextraitd’urinenemontraitaucun fauxpositifdansunepopulationdepatientsavecunecyto- scopienormale,unecytologienormaleetsansantécédent decancerdevessie,etavaitune sensibilitéde95 %pour détecterlescystoscopiespositiveschezlespatients suivis pouruncancerdevessie[13].

Nousavonsmaintenant étendu notreétude àl’analyse prospective de patients atteints de cancer superficiel de vessieafind’identifierdesmarqueurspronostiquesquiont la capacité de classer correctement en grade/stade les tumeurs.Lesprofilsd’altérationschromosomiquespronos- tiquesainsiidentifiéesdevraientpermettredemodulerla surveillanceetlestraitementsdestumeursdevessie.

Méthodes

Population étudiée

Une cohorte prospective depatients avec une tumeurde vessieaétéconstituée.Lescritèresd’inclusionétaientune indicationderésectionendoscopiquedevessiedanslecadre d’unesurveillancedetumeurvésicaleouderécidive.Tous lespatientsontsignéunconsentementéclairé.

Le recueil des données cliniques comprenait : l’âge, le sexe, l’âge au diagnostic, les antécédents de tumeur devessie, le statutfumeur (actif, sevréou non-fumeur), et le risque d’exposition professionnelle à des toxiques.

Lesdonnéesanatomo-pathologiquessuivantesconcernantla tumeurdevessieontégalementétérecueillies:lestadeet legrade ; ainsique le statutmutationnel du gèneFGFR3 (S249C;Y375C;G372C).

Recueil des échantillons urinaires

Les urines étaient recueillies avant chaque intervention (50mL),lematinentre6het9h.Ils’agissaitd’urinefraîche- mentémise,enévitantlapremièremictionmatinale,sipos- sibleaprèsunlégerexercicephysique(montéedequelques marchesd’escaliersilepatientétaitcapablephysiquement de l’effectuer) propice à un mini barbotage intravésical.

Aprèscentrifugationdel’urine,l’ADNurinaireétaitextrait duculotobtenuà l’aidedukit QIAmp DNABloodMinikit (Qiagen)ensuivantlesrecommandationsdufournisseur.

Hybridation de la puce CGH

Aprèsvériﬁcationdesquantitéetqualité,l’ADNétaitmar- quépuis hybridé sur la puceBCA-oligoselon le protocole décrit dans Larré et al. [12]. Brièvement, un marquage

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del’ADNtesté (àla Cyanine5) etde l’ADNderéférence (à la Cyanine 3) était réalisé à l’aide du kit BioPrime (Lifetechnologies Invitrogen), selon lesrecommandations dufournisseur.Après unedoublepuriﬁcation, lapremière avec le kit Nucleospin Extract II (Macherey-Nagel), et la deuxièmeaveclekitPurelink^® (Lifetechnologies),lesdeux ADNsétaientmélangésenégalequantité.Cemélangeétait ensuite incubé 3minutes à 95^◦C, puis 30minutes à 37^◦C en présence d’ADN répété Cot-1 (1mg/mL), du tampon d’hybridationAgilent 2XHybridation Buffer (Agilent Tech- nologies)etdel’agentbloquantAgilent10XBlockingAgent (Agilent Technologies). Le mélange était ensuite déposé surlapuceBCA-oligopourune hybridationde16heuresà 65^◦C.AprèslavageaveclasolutiondelavageWashBuffer (Agilent Technologies), la puce était scannée en utilisant l’appareil Hi-scanner Agilent (Agilent Technologies). Les résultats étaient analysés à l’aide du logiciel WorkBench (AgilentTechnologies).

Pour l’interprétation du résultat du test BCA-oligo, la médianelog2 valeurnormaliséedefluorescence étaitcal- culéepourchaqueoligonucléotide.Unoligonucléotideétait considéré comme délété ou amplifié si son ratio moyen Log2 normalisé était inférieur ou supérieur à −0,2 ou 0,2, respectivement. Une région chromosomique était considéréecommeamplifiéeoudélétéesi au moins6oli- gonucléotidessuccessifsdecetterégionétaientinterprétés commegagnésouperdus.Siau moinsunerégionchromo- somiqueétaitamplifiéeoudélétée,letestétaitconsidéré positifpourlepatient.

Statistiques

LetestexactdeFischeraétéutilisépourcomparerlesfré- quencesdesaltérationschromosomiquesselonlestadeetle gradetumoraux.Pourcetteanalyse,deuxgroupesontété considéréspourlestadetumoral:pTa(noninvasive)etpT1 (envahissantlechorion).Deuxclassesontété considérées pourlegradetumoral:basgradeethautgrade.Lesasso- ciationsentrelestadeoulegradetumoraletlesaltérations chromosomiquesou lesparamètrescliniques ont étééva- luéesàl’aidedesoddsratio(OR),entantque mesuredu risque,etlesintervallesdeconﬁanceà95%(IC95%)esti- mésàpartirdemodèlesderégression logistique.Tous les testsstatistiquesontétéréalisésavecStatViewversion5.0 (SASInstitutInc,Cary,NC).Lesvaleursdep<0,05ontété considéréescommestatistiquementsigniﬁcatives.

Résultats

Notreétudea portésur81 patients ayant unetumeurde vessie superﬁcielle (Tableau 1), avec un âge médian au diagnostic de 70,0 ans. Au moment de l’analyse molécu- laire, 57% des patientsavaient unetumeurde basgrade etpour 75 %,leur tumeurétait non invasive(stade pTa).

DesmutationsdugèneFGFR3(S249C,Y375CouG372C)ont étéretrouvéespour24%destumeurs:31%(14/45)desbas gradeset15%(5/33)deshautsgrades(p=0,17).

LesrésultatsglobauxdelapuceCGHBCA-oligosontpré- sentéssurlaFig.1.Aucunealtérationn’aétéretrouvéesur lesbraschromosomiques:13p,14pet21p.Seulsdesgains ontété observés en1q, 6q, 8q, 12q,15p, 18pet 20p.À

Tableau1 Caractéristiquesdelapopulationétudiée.

Nombre(%)

Homme 66(81,5%)

Femme 15(19,5%)

Total 81(100%)

Âgeaudiagnosticmédian 70,0[33,0—90,3]

Non-fumeur 17(21,0%)

Tabacsevré 45(55,6%)

Tabacactif 14(17,3%)

Nonrenseigné 5(6,2%)

Toxiquesprofessionnels^a 15(19,5%)

pTa 57(70,4%)

pT1 24(29,6%)

Basgrade 46(56,8%)

Hautgrade 35(43,2%)

MutationFGFR3(S249C, Y375C,ouG372C)

19(24%)

a Activitésprofessionnellesdanslessecteurssuivants:produc- tiondecolorants,depigments,decaoutchouc,deplastiques, decâbles,d’encres,d’explosifs,d’aluminium,demédicaments, d’engraisoudepesticides ;laboratoiresd’analysemédicales, desidérurgie,cokerie,fonderie,industrietextileouduverre; travaux de ramonage, manipulation d’huiles usagées ou de solvants.

l’inverse,seulesdesdélétionsontétéidentiﬁéesen22p.Les altérationslesplusfréquentesdansl’ensembledeséchan- tillonstumorauxétaient:lesgainsen16p(31%),15q(25%), 17q(24%)etXp(21%),ainsiquelespertesen14q(36%)et 15q(30%).

La répartition des fréquences d’altérations de chaque braschromosomiqueaensuiteétéanalyséeenfonctiondu stade etdu grade. Les bras chromosomiques dont la fré- quence des altérations était significativement différente entrebasethautgrades,etstadespTaetpT1sontprésentés danslesTableaux2et3,respectivement.Lespertesen6p etlesgainsen8qet13qétaientsignificativementplusfré- quentsdanslestumeursdehautgrade(p=0,03,p=0,02,et p=0,03,respectivement)(Tableau2).Lenombredesaltéra- tionstotales(perte+gain)en9qet11q(p=0,04etp=0,02, respectivement)estégalementsignificativementplusélevé danslestumeursdehautgrade(Tableau2).Parailleurs,en combinantces 5altérations,uneassociationtrèssignifica- tiveentrelaprésenced’aumoinsunedescesaltérationset unhautgradetumoralaétéretrouvéeavecunoddsratio de6,91(IC=2,20—21,64;p=0,0009).

Pourlacomparaisondesstades,lafréquencedespertes en6pet8p,ainsiquelesgainsen3p,5q,8q,10p,11qet21q étaitsigniﬁcativementplusélevéedanslestumeursdestade pT1(p=0,006,p=0,05,p=0,02,p=0,02,p=0,007,p=0,02, p=0,05etp=0,02,respectivement)(Tableau3).Lenombre desaltérationstotalesen5p,5q,et9q(p=0,04,p=0,03,et p=0,02,respectivement)étaitégalementsigniﬁcativement plusélevédanslestumeursdestadeplusavancé(Tableau3).

De plus, une corrélation très signiﬁcative a été observée entrele stadeplusinvasivepT1etlaprésenced’aumoins unedesaltérationssuivantes:perteen6p,gainen8q,perte

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1p 1q 2p 2q 3p 3q 4p 4q 5p 5q 6p 6q 7p 7q 8p 8q 9p 9q 10p 10q 11p 11q 12p 12q 13p 13q 14p 14q 15p 15q 16p 16q 17p 17q 18p 18q 19p 19q 20p 20q 21p 21q 22p 22q Xp Xq Gain 7,4 11,1 4,9 4,9 3,7 2,5 2,5 3,7 4,9 3,7 9,9 4,9 4,9 19,7 8,6 9,9 6,2 7,4 3,7 7,4 4,9 9,9 2,5 9,9 0,0 4,9 0,0 18,5 2,5 24,7 30,9 2,5 7,4 23,5 1,2 1,2 3,7 4,9 6,2 3,7 0,0 3,7 0,0 8,6 21,0 18,5 Délétion 4,9 0,0 8,6 3,7 3,7 1,2 1,2 1,2 1,2 4,9 4,9 0,0 1,2 4,9 9,9 0,0 19,8 9,9 1,2 4,9 6,2 4,9 1,2 0,0 0,0 3,7 0,0 35,8 0,0 29,6 16,0 2,5 4,9 6,2 0,0 1,2 6,2 3,7 0,0 1,2 0,0 1,2 1,2 3,7 2,5 1,2 Altération totale 12,3 11,1 22,2 8,6 7,4 3,7 3,7 4,9 6,2 6,2 12,3 4,9 6,2 22,2 14,8 9,9 24,7 17,3 4,9 12,3 11,1 12,3 3,7 9,9 0,0 8,6 0,0 45,7 2,5 51,9 45,7 4,9 11,1 29,6 1,2 2,5 9,9 8,6 6,2 4,9 0,0 4,9 1,2 11,1 23,5 19,8

Figure1. RésultatsglobauxdelapuceCGHBCA-oligo.

Tableau2 Altérationschromosomiquesavecunefréquencesigniﬁcativementdifférenteentrebasethautgrades.

Braschromosomique Typealtération Basgrade(%) Hautgrade(%) p

6p Perte 0,0 11,4 0,032

8q Gain 2,2 20,0 0,019

9q Alttot 8,7 28,6 0,035

11q Alttot 4,3 22,9 0,017

13q Gain 0,0 11,4 0,032

Alttot:gain+perte.

Tableau3 Altérations chromosomiques avec une fré- quence signiﬁcativementdifférenteentrestades tumo- rauxpTaetpT1.

Braschromo- somique

Type altération

pTa(%) pT1(%) p

3p Gain 0,0 12,5 0,024

5p Alttot 1,8 16,7 0,041

5q Gain 0,0 12,5 0,024

5q Alttot 1,8 16,7 0,025

6p Perte 0,0 16,7 0,006

8p Perte 5,3 20,8 0,046

8q Gain 3,5 25,0 0,007

9q Alttot 10,5 33,3 0,022

10p Gain 0,0 12,5 0,024

11q Gain 5,3 20,8 0,046

21q Gain 0,0 12,5 0,024

Alttot:gain+perte.

ougainen5p,avecunoddsratiode15,2(IC=3,71—62,58; p=0,0002).

Aucunecorrélationentrelestade,legradetumoraloule statutmutationnelFGFR3etl’expositionprofessionnelleou lestatutfumeurn’aétéobservée.

Discussion

L’unedesproblématiquesducancerdelavessieestd’être capable d’identifier un ou des marqueur(s) capable(s) de prédirel’évolutiondes lésionstumorales (récidiveoupro- gression)afin deproposerune chirurgiedefaçon précoce encasdelésionpotentiellementagressive.Danscecadre, l’identificationd’altérationsgénétiquesassociéesàunhaut gradeouàunstadeinvasifestuneétapeessentielle.Notre étude,réaliséeàpartirdel’ADNextraitd’urinedepatients, nousapermisd’identifierdetellesaltérationschromosomi- quesspécifiquesd’unhautgradeoud’unstadeplusavancé danslestumeurssuperficielles.

Deuxaltérations chromosomiques, perte en6p etgain en13q,n’ontétéretrouvéesquedanslestumeurssuperfi- ciellesdehaut grade.Deplus,unefréquence plusélevée degainen8qetdunombred’altérationstotalesen9qet 11qdanscestumeursaégalementétéobservée.Defaçon intéressante,l’associationentregainen8qethautgrade, quiestlaplussignificativedansnotreétudeaétérappor- téedansuneétude,précédentepourtantsurunelargesérie de958échantillonstumorauxdevessie.Eneffet,Zaharieva etal.[14]ontmontréquelafréquencedesgains dugène cMYC situé en 8q24 augmentait significativement avec le grade(p<0,0001),avecunefréquencede5,7%pourlegrade G1,11,9%pourG2et19,7%pourG3.

Pourl’analyse parstade, cinq altérations chromosomiques ont été spécifiquement observées chez les patients avecune tumeur urothéliale de stade pT1 : les gains en 3p,5q,10p,21qetlespertesen6p.Deplus,lafréquence desgainsen8q,10p,11q,des pertesen8petdunombre d’altérationstotalesen5pet9qétaitplusélevéepour le stadeinvasivepT1quepourlestadepTa.Demêmequepour legrade,certainesdesassociationsquenousavonsidenti- fiéesdansl’ADNextraitd’urineavaientétéprécédemment décritesdansdesétudesportantsurletissutumoral.Ainsi, dansuneétudeportantsur28tumeurspTaet28pT1,Rich- teretal.[15]ontmontréquelafréquencedespertesen8p etdes gainsen3p, 8q,et10pétaitsignificativementplus élevéedanslestumeurspT1.Dansuneautreétudeportant sur64tumeurs devessie depatientschinois,les gainsen 8qet11q,etlespertesen8pétaientplusfréquentesdans lestumeurspT1quecellespTa[16].Commepourlegrade, Zaharievaetal.[14]ontobservéquelafréquencedesgains dugènecMYCsituéen8q24augmentaitaveclestadetumo- ral,passant de10,5 %pour le pTaà 15,8% pour le stade pT1.Enfin,uneétudeportantsur46tumeurssuperficielles amontréquelespertesen8petlesamplificationsen8q,5q, 10pétaientplusfréquentesaustadepT1[17].Nosrésultats montrent doncque des associationsentre des altérations chromosomiquesetlegradeoulestadetumoralobservées danslestissustumorauxsontretrouvéesdanslesurinesde patientsatteints decancer devessie.Notreétude, basée surunepucecontenantdesrégionschromosomiquesciblées

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etnonpangénomique,n’estpasexhaustivequantauxalté- rationschromosomiquesassociéesau stadeetau gradeet peutexpliquerquenous n’ayonspasretrouvéel’ensemble des régions précédemment décrites pour avoir de telles associationsdanslestissustumoraux[15—17].Malgrécette non-exhaustivité,nos résultats ontpermis d’identiﬁerdes altérationschromosomiques spéciﬁques destadeetgrade plusavancésdecettemaladie.Deplus,l’utilisationd’une tellepucecibléepermetdediminuerlecoûtdutestmolécu- laireenréalisantl’analysedel’ADNdeplusieurspatientssur unemêmepuceetdefaciliterl’interprétationdesrésultats.

Unefréquenceplusélevéedetroisdesaltérationschro- mosomiquesidentiﬁées:perteen6p,gainen8qetnombre d’altérationstotalesen9qestcommuneàunhautgradeet àunstadepT1.Parmicesaltérations,legainen8qaprécé- demmentétéassociéeaustadeT3oùlatumeurenvahiela graissepérivésicale[18]etétaitprésentdansplusde40% destumeursdepatientsmétastatiques[19],suggérantque cettealtérationestbienassociéel’agressivitétumorale.

Deplus,notreétudeapermisdemontrerquel’utilisation del’ADNextraitd’urinepourhybriderlapuceBCA-oligoper- metdemettreenévidencedescombinaisonsd’altérations chromosomiquesquisontfortementassociésaurisqued’un haut grade tumoral ou d’un stade plus avancé. Ainsi, en combinant les cinq altérations, perte en 6p, gain en 8q et13q,nombredes altérations totalesen 9qet11q,une association très signiﬁcative à un haut grade tumoral a été retrouvée avec un odds ratio de 6,91 (p=0,0009).

D’autre part, une corrélation très significative aété éga- lement observée entre le stade plus invasive pT1 et la présenced’aumoinsune desaltérationssuivantes: perte en6p,gainen8q,perteougainen5p,avecunoddsratio de15,2(p=0,0002).Ces résultatspermettent d’envisager l’utilisationdecombinaisonsd’altérationsgénétiquespour prédirelerisqued’agressivitéoud’évolutiondestumeursde vessiesuperficielleà partird’ADN extrait deprélèvement urinaire,mais nécessitentauparavantd’être confirmésur unepluslargecohortedepatients.

Conclusions

Encomplémentdel’examenanatomo-pathologique,lamise enévidencedemarqueursd’agressivitéoudeprogression chez un patient peut aider le clinicien à décider plus facilement d’un traitement adjuvant après la résection de la tumeur ou à élaborer une stratégie thérapeutique personnalisée. L’établissement de proﬁls génétiques dis- tinctschez ces patientsatteints decancers urothéliauxà cellulestransitionnelles pourraitpermettred’améliorerla priseenchargetantentermesdediagnosticdelamaladie elle-même ou pour la prévision du pronostic de celle-ci.

La recherche d’altérations génétiques, dès le diagnostic, à partir de simples prélèvements d’urines avec un test moléculairerelativementpeucoûteuxetnoninvasifdevrait permettre d’orienter le traitement du patient vers une attitudechirurgicale conservatriceetmoins agressiveque celle préconisée actuellement, et un suivi plus adéquat.

L’utilisationdetelstestsmoléculairesnoninvasifspouréta- blirlesproﬁlsgénétiquesdestumeursetleurscorrélations aux phénotypes des patients devrait ouvrir une nouvelle

èreversunepriseenchargepersonnaliséedecestumeurs enfonctiondeleuragressivitéetpotentielleévolutivité.

Déclaration de liens d’intérêts

KarimSigharestunemployédelasociétéArraygenomicsqui aparticipéaudéveloppementetàlacommercialisationdu testBCA-oligo(BCA-1).Lesautresauteursdéclarentnepas avoirdeliensd’intérêts.

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