Ann. Biol. anim. Bioch. Biophys. 1 (i) 1 9 6 1
UTILISATION D E LA COLCHICINE DANS L'ÉTUDE DES DIVISIONS GONIALES D E L'OVAIRE D'EMBRYONS
DE BREBIS E T A N A L Y S E DE QUELQUES RÉSULTATS
P . M A U L É O N
Avec la collaboration technique a"OLGA VOLKOFF Station de Recherches de Physiologie animale, Centre national de Recherches zoolechniques. Jouy-en-Josas.
S O M M A I R E
L a colchicine a été utilisée pour bloquer les divisions goniales de l'ovaire de Brebis entre le 3 5e
et le 7 0e jour de la vie f œ t a l e . Leur n o m b r e total a u g m e n t e e x p o n e n t i e l l e m e n t p e n d a n t c e t t e période c o m m e cela e s t propre à t o u t e multiplication cellulaire. Cette a u g m e n t a t i o n d u nombre d e m i t o s e s goniales se produit m ê m e après l'apparition d e s premières figures l e p t o t è n e s de la prophase méïo- tique.
Ce fait implique qu'à partir d u 5 0e jour les m i t o s e s goniales bloquées p r o v i e n n e n t à la fois de la poussée de division des gonies-souches qui se poursuit et de la poussée de division des gonies de renouvellement qui c o m m e n c e .
On sait que l'ovogénèse débute p e n d a n t l a v i e embryonnaire chez les M a m m i - fères ; des divisions goniales puis des prophases méiotiques sont visibles dans l'ovaire de très jeunes embryons. Cette ovogénèse est bientôt suivie de l a dégénérescence des o v o c y t e s en prophase méiotique.
L a signification et l'importance de ces d e u x phénomènes, en eux-mêmes, et p a r rapport à l a structure e t a u fonctionnement de l'ovaire adulte nous échappent à peu près complètement.
Telle est l a raison des recherches que nous poursuivons sur l'ovogénèse chez les Mammifères domestiques.
L a colchicine, e n b l o q u a n t les mitoses e n métaphase, permet de m i e u x analyser les multiplications cellulaires
( E I G S T Iet
D U S T I N ,1955) et d'amplifier des variations d'activité dans des ovaires d'âges différents (technique utilisée p a r
C L E R M O N Te t
L E B L O N D(1953) pour l'étude de l a spermatogénèse chez le R a t ) .
I . — M A T É R I E L E T M É T H O D E S
N o u s a v o n s injecté d e 0 , 1 7 5 à. 0 , 2 2 5 mg de colchicine par 1 0 0 g de poids v i f à 5 0 e m b r y o n s de brebis de race Ile-de-France âgées de 3 5 à 7 0 jours.
L'injection e s t faite d a n s les m a s s e s musculaires postérieures de l'embryon. L a grande place t e n u e par le foie fœtal d a n s l a c a v i t é générale rend impossible u n e injection intrapéritonéale.
Article publié par EDP Sciences et disponible sur le site http://rnd.edpsciences.org ou
http://dx.doi.org/10.1051/rnd/19611070
COLCHICINE ET MITOSES GONIALES 71
L'ouverture de l'utérus m a t e r n e l , aussi près que possible de la p o c h e a m n i o t i q u e repérée au toucher ou par transparence, permet une injection précise ; t o u t t r a u m a t i s m e et perte a m n i o t i q u e est évitée au m a x i m u m par l'utilisation d'aiguilles très fines ( 4 0 - 4 / 1 0 ) . L a colchicine pure ( M E R C K , D a r m s t a d t ) est injectée en solution dans le sérum p h y s i o l o g i q u e et sous faible v o l u m e : de 0 , 0 5 c m3 à 0 , 2 c m3 s u i v a n t la taille du f œ t u s . Ces solutions qui s ' o x y d e n t facilement s o n t préparées e x t e m - p o r a n é m e n t .
N o u s a v o n s t o u j o u r s opéré a u m ê m e m o m e n t de la journée, 1 0 h à 1 2 h, pour éviter que le r y t h m e journalier des m i t o s e s ( B U L L O U G H , 1 9 4 8 ) , ne soit u n facteur supplémentaire de variation.
Les ovaires o n t é t é fixés au B o u i n - H o l l a n d e , 4 h après l'injection. L e s coupes sériées de 7,5 u.
d'épaisseur s o n t colorées par la réaction de F e u l g e n , le conjonctif é t a n t m i s en é v i d e n c e par l'Alcian blue.
I I . — R É S U L T A T S
Les figures I e t 2 sont les diagrammes de distribution du nombre t o t a l de m é t a - phases goniales bloquées dans les ovaires des embryons traités, diagrammes établis en fonction de l'âge (1) et du poids des embryons (2).
A p p a r i t i o n des p r e m i e r s L e p l o l e n e s
A g e de l ' e m b r y o n ( i c u r s>
FlG. 1 . — Diagramme de distribution du nombre de métaphases goniales bloquées par la colchicine établi en fonction de l'âge des embryons de'Brebis (en coordonnées semi-logarithmiques). , (Graphique théorique des variations du nombre de mitoses goniales en fonction de 1 âge, trace en sup- posant que la « première » poussée goniale n'est pas terminée quand la « deuxième » commence.
72
P. MAULÉONIls montrent l'existence d'une relation linéaire entre le logarithme du nombre de métaphases goniales et l'âge et, surtout, le poids de l ' e m b r y o n . L a droite de distribu- t i o n présente u n brusque c h a n g e m e n t de pente au 5 0
ejour de la gestation (pour u n poids de 18 g de l'embryon).
Histologiquement, on constate l'apparition pour la première fois dans des ovaires de c e t âge des stades leptotènes de la prophase méïotique.
A p p a r i t i o n des
[ p r e m i e r s L e p t o ù n e s
10 000
1000
P
87 103 119
de l e m n r y o n ( g )
FIG. 2 . — Diagramme de distribution du nombre de métaphases goniales bloquées par la colchicine, établi en jonction du poids des embryons de Brebis (en coordonnées serni- logarithmiques).
(Graphique théorique des variations du nombre de mitoses goniales en fonction du poids, tracé en sup- posant que la « première » poussée goniale n'est pas terminée quand la « deuxième » commence).
L'interprétation de ces résultats est délicate. Plusieurs hypothèses p e u v e n t être envisagées ; nous les développerons dans u n mémoire ultérieur.
L ' u n e seule d'entre elles p e r m e t d'obtenir une bonne concordance entre courbe
théorique e t le diagramme de distribution des mitoses goniales (fig. 1 e t 2). E l l e c o n -
siste à admettre l'existence de d e u x poussées de divisions goniales entre le 3 5
eet
le 7 0
ejour de la gestation. Ces d e u x poussées se superposent dans le t e m p s . E n effet
lorsqu'apparaissent les premiers stades leptotènes dans les o v o c y t e s issus de la pre-
C O L C H I C I N E E T M I T O S E S G O N I A L E S
73 mière poussée, t o u t e s les gonies-souches ne sont pas encore divisées, alors que des gonies de renouvellement mises en réserve à partir des premières gonies-souches en- trées en a c t i v i t é d'une manière identique à ce qui se passe a u cours de la spermato- génèse ( O R T A V A N T , 1959) commencent, elles, à se multiplier.
Reçu en mars 1960.
S U M M A R Y
COLCHICINE T R E A T M E N T FOR T H E S T U D Y OF G O N I A L MITOSES I N E M B R Y O N I C OVARY O F T H E E W E . A N A L Y S I S OF SOME R E S U L T A T
Colchicine w a s used t o atrest gonial division in the o v a r y of the ewe b e t w e e n t h e 3 5 t h and t h e 7 0 t h d a y of f œ t a l life. Their t o t a l nuraber increases exponentially during this period as is normal of ail cell-multiplication. T h i s increase in the n u m b e r of gonial mitosis occurs e v e n after t h e appea- rance of t h e first l e p t o t e n e figures of the meiotic prophase.
This implies t h a t from t h e s o t h d a y t h e blocked gonial mitosis arise b o t h from t h e cycle of division of t h e s t e m cells w h i c h follows and from t h e cycle of division of t h e renewal cells which is beginning.
R É F É R E N C E S B I B L I O G R A P H I Q U E S
BULLOUGII W . S., 1 9 4 8 . Mitotic activity in adult maie mouse, Mus Musculus L . : the diurnal cycles and their relation to waking and sleeping. Proc. Roy. soc. London B, 1 3 5 , 2 1 2 - 2 3 3 .
CLERMONT Y. LEBLOND C. P., 1 9 5 3 . Renewal of spermatogonia in the rat. Amer. J. Anal., 9 3 , 4 7 5 - 5 0 1 . ElGSTI O . J., DUSTIN Jr P . , 1 9 5 5 . Colchicine in agriculture, medicine, biology and chemistry. The. lowa
State Collège Press, Ames, lowa, U. S. A.
ORTAVANT R., 1 9 5 9 . Le cycle spermatogénétique chez le Bélier. Ann. Zoolech-, 8 , 1 8 5 - 2 4 4 .
