Ann. Sci. forest., 1968, 25 (3), 189-192.
N O T E T E C H N I Q U E
P R E M I E R S ESSAIS D ' É L E V A G E D E S L A R V E S D'HYLOBIUS ABIETIS S U R M I L I E U S Y N T H É T I Q U E
C.-B. M A L P H E T T E S
avec la c o l l a b o r a t i o n technique de A . S E R P I L L O N et J . M U L L E R Laboratoire d'Entomologie,
Centre national de Recherches forestières, 54-Nancy Institut national de la Recherche agronomique
S O M M A I R E
L ' a u t e u r d é v e l o p p e l a technique q u i l u i a permis d ' é l e v e r des larves de Hylobius abietis L . (Coleoptera, Curculionidae) sur un milieu r e c o n s t i t u é à partir d ' é c o r c e de P i n sylvestre et de substances chimiques définies.
I N T R O D U C T I O N
D a n s le cadre de nos recherches entreprises pour l ' é t u d e du d é v e l o p p e m e n t de Hylobius abietis L . , nous avons é t é a m e n é s à élever des larves pour d é t e r m i n e r le nombre de stades larvaires et leur d u r é e . J u s q u ' à p r é s e n t nous avons utilisé une technique d é r i v é e de celle mise au point par W A R R E N pour un hylobe n o r d - a m é r i c a i n (Hylobius warreni), et q u i nous a d o n n é satisfaction. Cependant cette m é t h o d e a le gros i n c o n v é n i e n t de demander é n o r m é m e n t de manipulations, la d u r é e d u d é v e l o p p e - ment exigeant e n v i r o n 3 mois à 20 °C de l ' œ u f à l a f o r m a t i o n de l'adulte. Ces manipulations ont e n t r a î n é une grande h é t é r o g é n é i t é dans l a d u r é e du d é v e l o p p e m e n t et aussi une m o r t a l i t é quelque- fois importante. M a i s finalement le plus gros reproche que l ' o n puisse faire à cette technique est qu'elle demande trop de temps ce q u i e m p ê c h e l ' é l e v a g e s i m u l t a n é de nombreuses larves.
D e p u i s plusieurs a n n é e s l'élevage en milieu artificiel s y n t h é t i q u e o u s e m i - s y n t h é t i q u e se d é v e - loppe dans de nombreuses recherches portant surtout sur des L é p i d o p t è r e s ou des D i p t è r e s . G U E N - N E L O N (1967) dans une s y n t h è s e des travaux en cours cite les principaux insectes sur lesquels des
Article disponible sur le site http://www.afs-journal.org ou http://dx.doi.org/10.1051/forest/19680304
190 C . - B . M A L P H E T T E S
essais ont é t é t e n t é s . Cet auteur précise les principaux avantages que l ' o n peut attendre de l'alimen- tation artificielle des insectes ainsi que les différentes formes sous lesquelles les milieux sont p r é s e n t é s aux insectes. HOTJSE (1967) pour sa part, r é s u m e les c a r a c t é r i s t i q u e s contenues dans près de 200 publications. C e sont surtout les A m é r i c a i n s et les Canadiens q u i , au cours des d e r n i è r e s a n n é e s , se sont a t t a q u é s au p r o b l è m e de l'élevage des xylophages (au sens large du terme : insectes vivants aux d é p e n s de l ' é c o r c e o u d u bois), sur des milieux r e c o n s t i t u é s .
C'est en nous inspirant de toutes ces m é t h o d e s que nous avons essayé de mettre au point un milieu semi-artificiel pour l'élevage des larves de l'hylobe. Cette technique dans notre esprit, devrait permettre une plus grande h o m o g é n é i t é des élevages et une demande de temps moins élevée que dans le cas de la m é t h o d e que nous avons utilisée j u s q u ' à p r é s e n t .
M É T H O D E S
Les travaux de S C H M I D T (1966) sur Dendroctonus pseudotsugae H o p k . et ceux de C L A R K (1965) sur Dendroctonus frontalis Z I M M . ont é t é le point de d é p a r t de nos essais.
1. — Technique de préparation du milieu
A u d é b u t nous avions essayé de composer un milieu h o l i d i q u e ( l ) au sens de D O U G H E R T Y (1959) en partant de cellulose pure, substance chimique facilement disponible puisque servant en c h r o m a - tographie. Cependant cet essai a été un échec, aucune larve n'ayant réussi n i à s'installer, n i a fortiori à se d é v e l o p p e r . Par ce moyen nous e s p é r i o n s p o u v o i r être i n d é p e n d a n t s du milieu végétal et surtout des exploitations de r é s i n e u x et en particulier de P i n sylvestre. Devant cet échec, nous avons d û nous retourner vers d u m a t é r i e l se rapprochant plus du « m a t é r i e l naturel » et constituer, comme le dit G U E N N E L O N (1967), un i n t e r m é d i a i r e entre un milieu oligidique et un milieu m é r i d i q u e .
T A B L E A U 1
Ecorce de p i n b r o y é e 5? ' n n 8
Levure de brasserie sèche J,00 8 G l u c o s e 3,00 g L é v u l o s e " "
Saccharose 8 A m i d o n soluble ^,00 g
C a s é i n e hydrolyses ^,00 g
Sels de Wesson 8 A g a r - A g a r 6,00 g
G e r m e de blé 5,00 g
Eau distillée -0 (' -(» «
A n t i m i c r o b i e n
L a c o m p o s i t i o n de ce milieu est celle d o n n é e sur le tableau I. Les larves dans la nature se d é v e l o p - pent dans l ' é c o r c e des racines des souches de P i n o u d ' E p i c é a , f r a î c h e m e n t abattus. Il était difficile de s'approvisionner avec cette é c o r c e . Depuis le d é b u t de nos é t u d e s nous l'avons toujours r e m p l a c é e par de l ' é c o r c e de branches et le d é v e l o p p e m e n t a paru n o r m a l . P o u r la p r é p a r a t i o n de l ' é c o r c e destinée à l a confection du milieu, sur les chantiers d'abattage, nous p r é l e v o n s des rondins frais de cimes, choisis de façon à ce que l ' é c o r c e comporte le moins possible de zone liégeuse. Ces rondins font en moyenne 20 à 30 c m de d i a m è t r e et proviennent de Pins sylvestres de 100 à 150 ans ; ils
(1) U n milieu qui ne renferme que des matériaux bruts alimentaires est dit oligidique, un milieu holidique par contre, ne contient que des substances chimiques bien définies ; enfin le milieu qui se compose à la fois des matériaux bruts et des substances chimiques est qualifié de méridique.
ÉLEVAGE D E L-H Y L O D E SUR MILIEU ARTIFICIEL 191 ont une « é c o r c e » utilisable de 2 à 3 m m d ' é p a i s s e u r . L e terme d ' é c o r c e est d'ailleurs pris au sens forestier p u i s q u ' i l s'agit en fait aussi bien du liber que de l ' é c o r c e proprement dite. A u laboratoire, l ' é c o r c e de ces rondins est prélevée, d é c o u p é e en languettes de quelques c e n t i m è t r e s a p r è s a v o i r été d é b a r r a s s é e de toutes les zones liégeuses. Ces languettes sont ensuite placées dans le b o l d ' u n m o u l i n à café é l e c t r i q u e et b r o y é e s pendant 2 mn environ à grande vitesse. O n obtient ainsi de petites particules de 1/2 m m de large sur 2 à 3 m m de longueur. C e b r o y â t est ensuite s t o c k é dans des réci- pients h e r m é t i q u e m e n t clos au r é f r i g é r a t e u r j u s q u ' a u moment de l'utilisation. C e broyage s'effectue correctement si on prend soin de d é c o u p e r l'écorce en languettes. L ' é c o r c e ainsi prélevée contient en moyenne 65 % d'eau et a un p H voisin de 5.
P o u r p r é p a r e r le milieu proprement dit, on porte à é b u l l i t i o n la q u a n t i t é d'eau nécessaire a p r è s y avoir a j o u t é les différents sucres et l'agar-agar. L ' é b u l l i t i o n est maintenue pendant 5 m n . Ensuite on laisse refroidir au bain-marie j u s q u ' à 50 ° C avant d'ajouter les sels de Wesson, la levure de brasserie, la c a s é i n e , le germe de blé et l ' a n t i - m i c r o b i e n . C e dernier est a p p o r t é sous la forme d'une solution de 5 g de Para-Hydroxybenzoate de M é t h y l e dans de l'alcool é t h y l i q u e à 95 ° G L p o u r faire 100 m l . U n m é l a n g e h o m o g è n e est obtenu a p r è s brassage à l'aide d ' u n mixer plongeant. L ' é c o r c e de p i n b r o y é e est ensuite a j o u t é e et le m é l a n g e obtenu par agitation avec une spatule. Q u a n d le milieu est t e r m i n é , il est d i s p o s é à la spatule dans les r é c i p i e n t s en plastique et on laisse solidifier pendant 1 h à l'air libre. Les r é c i p i e n t s sont ensuite fermés et s t o c k é s au r é f r i g é r a t e u r j u s q u ' à leur utilisation.
2. — Mise en place de l'élevage
C e sont les jeunes larves n o u v e a u - n é e s qui sont introduites dans le milieu. Les adultes pondent dans des morceaux de branches de P i n . Ces branches sont é c o r c é e s pour recueillir les œufs. Ces derniers sont ensuite d i s p o s é s sur des feuilles de cellulose humide à raison d ' u n par b o î t e ; ceci évite aux jeunes Iaives de se mordre mutuellement quand elles se rencontrent. Les é c l o s i o n s q u i ont lieu au bout d'une semaine à 20 ° C sont ensuite suivies j o u r par j o u r et les jeunes larves q u i viennent d ' é c l o r e sont introduites dans le milieu.
Ces larves é t a n t apodes, il faut les introduire directement au sein du milieu pour qu'elles puissent creuser leurs galeries. Dans ce but, un trou conique de I mm de d i a m è t r e environ est fait dans le milieu solidifié. L a larve m a n i p u l é e au pinceau, est introduite et le trou est r e b o u c h é d e r r i è r e elle.
Dans une b o î t e de 4,5 m m de d i a m è t r e , o n n ' i n t r o d u i t que 2 larves. E n effet sans parler à proprement dit de cannibalisme, il semble que les larves qui se rencontrent se mutilent, ce qui e n t r a î n e une forte m o r t a l i t é . D e u x larves pour un récipient de la taille ci-dessus est un m a x i m u m quant a u rendement.
Les larves s'installent bien dans le milieu et forent une galerie. L e plus souvent une des parois de cette galerie est c o n s t i t u é e par les parois du récipient. Il arrive souvent aussi que les larves en creusant la galerie, gagnent la surface du milieu. Dans ce cas, le plus f r é q u e m m e n t la larve creuse une galerie non couverte à la surface mais finalement le sillon devient trop important et la larve n ' a r r i v e plus à creuser le milieu, faute de point d ' a p p u i : elle tourne en rond à la surface et cela e n t r a î n e un retard ou un a r r ê t dans le d é v e l o p p e m e n t .
C o m p t e tenu de ces remarques nous avons modifié le protocole d ' é l e v a g e . N o u s utilisons maintenant des récipients beaucoup plus plats (6 m m de hauteur totale) et rectangulaires ; cette é p a i s s e u r permet à l a larve, à partir de la m o i t i é de son d é v e l o p p e m e n t , de prendre directement appui sur le couvercle pour s'alimenter. D e plus les larves sont c h a n g é e s d è s qu'elles semblent avoir c o n s o m m é au m a x i m u m le milieu mis à leur disposition, la dimension du récipient augmentant à chaque changement. E n outre, au bout de 15 jours à 3 semaines de d é v e l o p p e m e n t , les larves sont élevées individuellement.
Dans ces conditions, nous avons obtenu des adultes bien c o n f o r m é s , par c o m p a r a i s o n avec ceux c a p t u r é s dans la nature, en deux mois et demi. Ces adultes ont m ê m e c o m m e n c é à pondre.
C O N C L U S I O N S
Cette courte note n ' a pour but que de signaler le point de d é p a r t de nos recherches actuellement entreprises pour élever Hylobius abietis sur milieu r e c o n s t i t u é . Il reste bien p r é s e n t à notre esprit que tout est encore très perfectible. M a i s à notre connaissance, c'est la p r e m i è r e fois q u ' u n tel essai est t e n t é sur cet insecte.
Actuellement nos efforts portent sur deux points techniques : le récipient et les colonies b a c t é - riennes. Dans le choix du récipient, i l faut tenir compte de deux faits : les larves demandent des
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points d ' a p p u i pour consommer l'aliment et ensuite le d é v e l o p p e m e n t de l a larve est long. O n peut fournir u n point d ' a p p u i aux larves en les é l e v a n t dans des b o î t e s peu épaisses o ù le fond et le c o u - vercle peuvent permettre à l'insecte de creuser une galerie. L e d é v e l o p p e m e n t de longue d u r é e demande l u i , que l ' o n change plusieurs fois l a larve de milieu s i n o n des fermentations s'installent.
D ' a u t r e part, nous nous efforçons d ' é l i m i n e r les p r o l i f é r a t i o n s b a c t é r i e n n e s q u i se trouvent très souvent à l a surface d u milieu, qu'elles occupent t r è s rapidement. Q u a n d les larves se d é p l a c e n t sur ces colonies, elles meurent. I l n'est pas encore établi si l a mort est due à une quelque action p a t h o g è n e des bactéries o u si elle est due à une asphyxie p r o v o q u é e par le c a r a c t è r e huileux de l a colonie, qui peut alors obturer les stigmates.
Il a p p a r a î t donc que l'élevage de Hylobius abietis sur milieu r e c o n s t i t u é est possible. I l faut maintenant a m é l i o r e r c o n s i d é r a b l e m e n t l a technique. Ensuite p e u t - ê t r e sera-t-il possible d'utiliser ce p r o c é d é pour l'élevage d'autres C o l é o p t è r e s forestiers ; nous pensons essentiellement a u genre Pissodes mais aussi aux Scolylidae, comme cela a déjà é t é fait en A m é r i q u e d u N o r d . S i un tel élevage devenait « rentable » , cela pourrait intéresser tous ceux q u i actuellement, s'occupent plus particu- l i è r e m e n t de lutte biologique. L a m u l t i p l i c a t i o n des parasites o u des maladies des insectes de ce groupe pourrait être alors facilitée.
Reçu pour publication en juin 1968
S U M M A R Y
F I R S T E X P É R I M E N T A L R E A R I N G S O F Hylobius abietis L A R V A E O N A S Y N T H E T I C A L M É D I U M The rearing o f the insects in the bark Iiving raises numerous technical difficulties, some o f them are tentatively soived. T h e larvae o f the Large Pine Weevil Hylobius abietis L . (Coleoptera, Curculionidae) were reared o n a synthetical m é d i u m .
The writer explains i n détails the c o m p o s i t i o n and the m a k i n g o f this m é d i u m . H e points out the difficulties he has encountered : bacterial development, requirement o f a purchase for the larva, long duration o f the growth.
Z U S A M M E N F A S S U N G
E R S T E A U F Z U C H T V E R S U C H E M I T D E N L A R V E N V O N Hylobius abietis I N S Y N T H E T I S C H E M M É D I U M D i e Z u c h t u n g der L a r v e n , der in der R i n d e lebenden Insekten, verursacht zahlreiche technische Schwierigkeiten. D e r Verfasser versuchte einige davon z u beschliessen ; dazu z o g er L a r v e n des R ù s s e n l k à f e r s Hylobius abietis L . (Coleoptera, Curculionidae) in einem synthetischen N à h r m i t t e l auf.
E r beschreibt die Zusammensetzung dièses M é d i u m in allen Einzelheiten und auch wie es herstellen k a n n . D a r a u f hebt er die Schwierigkeiten auf die er stoss, hervor : B a c t é r i e n A u s b i l d u n g , Erfordernis eines fur die L a r v a Sttitzpunkt, lange Dauer der E n t w i c k l u n g der Insektenbrut.
R É F É R E N C E S B I B L I O G R A P H I Q U E S
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