RAPPORT DE STAGE DE FIN DE FORMATION POUR L’OBTENTION DU DIPLOME DE LICENCE PROFESSIONNELLE
OPTION : ANALYSES BIOMEDICALES
THEME :
Présenté par
LOUMEDJINON Frank
Sous la direction de:
AHOYO Théodora Angèle
Maître de Conférences Enseignant Chercheur à l’EPAC/UAC
Microbiologiste/Hygiéniste
LEUCOCYTURIE ET INFECTION URINAIRE BACTERIENNE CHEZ LES FEMMES ENCEINTES AU CENTRE DE SANTE DE TORI-BOSSITO
TUTEUR
REPUBLIQUE DU BENIN
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MINISTERE DE L’ENSEIGNEMENT SUPERIEUR ET DE LA RECHERCHE SCIENTIFIQUE
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UNIVERSITE D’ABOMEY-CALAVI
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ECOLE POLYTECHNIQUE D’ABOMEY-CALAVI
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CENTRE AUTONOME DE PERFECTIONNEMENT
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KOUTCHIKA Eric Technicien biologiste
SUPERVISEUR
REPUBLIQUE DU BENIN
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UNIVERSITE D’ABOMEY-CALAVI
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ECOLE POLYTECHNIQUE D’ABOMEY-CALAVI
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CENTRE AUTONOME DE PERFECTIONNEMENT
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OPTION : ANALYSES BIOMEDICALES
DIRECTEUR/ EPAC : Professeur SOUMANOU Mohamed M.
DIRECTEUR ADJOINT : Professeur AHOUANOU Clément
CHEF CAP : Professeur Christophe AWANTO
CHEF DE DEPARTEMENT : Professeur ANAGO Eugénie
LISTE DES ENSEIGNANTS
CENTRE AUTONOME DE PERFECTIONNEMENT
N° NOM et Prénoms Matières enseignées
01 AGBANGNAN Pascal Méthodologie de la recherche 02 AHOYO Angèle Théodora Microbiologie médicale et TP de
Microbiologie médicale, Santé Publique, Hygiène hospitalière
03 AKOWANOU Christian D Physique
04 AKPOVI Casimir Biologie cellulaire, Physiologie cellulaire, Biochimie métabolique des lipides et enzymologie
05 ALAMOU Eric Biostatistique
06 ALITONOU Guy Chimie organique
07 ANAGO Eugénie Biochimie clinique
08 ATCHADE Pascal Parasitologie médicale et appliquée- mycologie
09 BANKOLE Honoré Sourou
Bactériologie médicale
10 DOUGNON Victorien Déontologie médicale et méthodologie de la recherche
11 FAH Lauris Biochimie métabolique des glucides 12 FANOU Brice Armand Assurance Qualité en biologie médicale 13 HOUNSOSSOU Hubert Anatomie général
14 KLOTOE Jean Robert Santé et sécurité au laboratoire, Equipement Biomédicaux 15 LOKO Frédéric Biochimie analytique
16 LOZES Evelyne Immunologie générale et Immunopathologie
17 SEGBO Julien Biochimie structurale, Biologie
18 SENOU Maxime Histologie Spéciale et Hémopathies 19 TCHOBO Fidèle Paul Chimie générale
20 YADOULETON Anges Entomologie médicale 21 YEHOUENOU Boniface Microbiologie générale
22 AGBANNON Tiburce Gestion des entreprises et gestion hospitalière
23 AGOSSOU Gilles Droit de travail
24 DESSOUASSI Noel Biophysique des solutions
25 HOUNNON Hypolite Mathématique
26 KOUNASSO Gabriel Informatique médicale
27 YOVO Kokou Paulin Toxicologie et Pharmacologie
DEDICACE
A
Ma petite famille :
Madame LOUMEDJINON Gisèle née GUEDEGBE ; mes filles Falone, Chancelle, Pamela et Belle-Grâce.
REMERCIEMENTS
Au Professeur Théodora Angèle AHOYO, notre Superviseur de mémoire
Malgré vos lourdes occupations professionnelles, vous nous apprenez le savoir, le savoir-faire et le savoir être, vous avez tout mis en œuvre pour nous guider dans la réalisation de ce travail qui est le fruit de votre esprit de clarté, de simplicité et de gentillesse ; longue vie de gloire à vous. Que Dieu vous bénisse !
A mon Tuteur Monsieur KOUTCHIKA Eric
Vous avez accepté sans conditions malgré votre emploi du temps chargé de nous encadrer. Votre accueil était chaleureux. De votre qualité d’homme, amour pour le prochain, vous êtes un exemple à suivre. Que Dieu vous comble de ses bienfaits au- delà de vos attentes.
A mon Papa Romain LOUMEDJINON,
Merci beaucoup pour l’encouragement, le soutien moral et financier. Que Dieu vous accorde une longévité afin que d’autres enfants en profitent.
Aux Messieurs GOUNANDON Cossi Pius, AHOUSSINOU Clément et GOUDJO Winnoc Précieux,
sincère reconnaissance pour le soutien.
Au personnel du laboratoire et du Centre de Santé de Tori-Bossito,
Notamment: Monsieur DAOUDOU Messanh, votre contribution a été déterminante dans l’élaboration de ce document en particulier dans l’échantillonnage et le recueille des données. Puisse le Tout Puissant vous comble au-delà de vos attentes. Reconnaissance infinie.
Aux camarades de promotion, tous ceux et toutes celles qui de près ou de loin ont contribué à la réalisation de ce travail, soyez-en remerciés et que le Seigneur vous bénisse !
HOMMAGE AUX MEMBRES DE JURY
• Au Président du Jury
C’est un honneur que vous nous faites en acceptant de présider notre jury de soutenance. Vos contributions amélioreront, sans nul doute, notre travail. Veuillez recevoir, l’expression de nos profondes considérations.
• Aux Honorables Membres du Jury
Nous sommes reconnaissants de l’honneur que vous nous faites en acceptant de siéger dans notre jury et de juger notre travail. Espérant que vous apprécierez ce travail tout en apportant vos critiques, nous vous prions de recevoir l’expression de nos sincères considérations.
LISTE DES SIGLES ET ABREVIATIONS CHD : Centre Hospitalier Départemental CS : Centre de Santé
ECBU : Examen Cytobactériologique des Urines IAU : Infection de l'Appareil Urinaire
ITU : Infection du Tractus Urinaire IU : Infection Urinaire
PTME : Prévention de la Transmission du Virus HIV de la Mère à Enfant
LISTE DES FIGURES
Figure 1 : Les étapes de réalisation d’état frais………13
Figure 2 : Les étapes de la coloration de Gram………14
Figure 3 : à gauche cocci gram – et à droite cocci gram +………...15
Figure 4: répartition des femmes enceintes en fonction de l’âge……….17
Figure 5: Répartition des femmes enceintes en fonction des activités professionnelles exercées..………...18
LISTE DES TABLEAUX
Tableau I : Nombre de femmes enceintes en fonction des centres de santé…………17 Tableau II: Fréquence des femmes enceintes en fonction de l’âge de la grossesse………18 Tableau III: aspect macroscopique des urines des femmes
enceintes………19 Tableau IV: Répartition des échantillons d’urines en fonction de la leucocyturie…..19 TableauV: Résultats de la coloration de Gram………20 Tableau VI: Comparaison des résultats de leucocyturie et de la coloration de Gram………..20 TableauVII: Les bactéries identifiée………20
SOMMAIRE
INTRODUCTION ... 1
I- SYNTHESE BIBLIOGRAPHIQUE ... 4
1. Infection urinaire ... 4
2. Physiopathologie ... 4
4. Leucocyturie ... 6
5. Diagnostic biologique ... 7
II- CADRE D’ETUDE, MATERIEL ET METHODE ... 9
1. Cadre ... 9
2. Matériel ... 9
3. Méthodes ... 10
TROISIEME PARTIE : ... 15
Résultats, Discussion et la Conclusion. ... 15
III- RESULTATS ... 16
1. Caractéristiques de la population étudiée ... 16
2. Examen direct des échantillons d’urines ... 18
3. Identification des bactéries révélées par la coloration de Gram ... 19
IV. DISCUSSION ... 20
CONCLUSION ... 22
REFERENCES BIBLIOGRAPHIES ... 24
ANNEXES ... 27
TABLE DES MATIERES ... 28
RESUME
Introduction : Les infections des voies urinaires chez la femme enceinte peuvent avoir des conséquences néfastes pour la mère et pour le fœtus.
Objectif général : Améliorer le diagnostic des infections urinaires chez les femmes enceintes dans le centre de santé de Tori-Bossito.
Matériel et méthode : Le microscope optique, la leucocyturie et la coloration de gram ont servi à l’obtention des résultats suivants
Résultats : Pour ce faire, 152 échantillons d’urines de patientes enceintes reçues au centre de santé de Tori-Bossito ont été analysés. La leucocyturie a été d’abord déterminée lors de l’examen microscopique à l’état frais et tous les échantillons d’urines ont ensuite fait l’objet d’analyse bactériologique; coloration de Gram. Au terme des manipulations 13% des échantillons d’urines à leucocyturie non significative ont présenté un résultat positif à la coloration de Gram. A l’inverse, 3% des échantillons d’urines à leucocyturie significative ont montré un résultat négatif à la coloration de Gram.
Conclusion Une relation peut être établie entre leucocyturie significative et coloration de Gram, il n’en demeure pas moins qu’une leucocyturie non significative puisse caractériser un échantillon d’urine pathologique.
Mots clés : bactérie, femme enceinte, leucocyturie, coloration de Gram.
SUMMARY
Introduction: Urinary tract infections in pregnant women can have harmful consequences for the mother and the fetus.
General Objective: To improve the diagnosis of urinary tract infections in pregnant women in the health center of Tori-Bossito.
Material and method: The optical microscope, leukocyte and gram stain were used to obtain the following results
Results: To do this, 152 urine samples of pregnant patients received at the health center of Tori-Bossito were analyzed. Leukocyturia was first determined in fresh microscopic examination and all urine samples were then bacteriologically analyzed;
Gram stain. After manipulation, 13% of non-significant leukocyte urine samples showed a positive Gram stain. Conversely, 3% of significant leukocyte urine samples showed a negative Gram stain result.
Conclusion A relationship can be established between significant leukocyturia and Gram stain, but non-significant leukocyturia may characterize a pathological urine sample.
Key words: bacterium, pregnant woman, leukocyturia, Gram stain.
INTRODUCTION
Les infections urinaires bactériennes sont fréquentes pendant la grossesse, favorisées par les modifications anatomiques et les variations endocriniennes qui se produisent durant cette période. Elles touchent 5 % à 10 % des femmes enceintes et représentent, de par leur fréquence, un problème de santé publique important [1].
Au Bénin, d’après l’étude de Dougnon et al, (2015) au CHD Ouémé/Plateau, sur 115 femmes enceintes ayant participé à l’étude, 74,78% ont présenté une infection bactérienne urinaire [2].
Souvent considérées comme banales et bénignes, les infections urinaires bactériennes peuvent avoir des conséquences pathologiques sévères d’ordre général pouvant aboutir à la stérilité et à l’insuffisance rénale chez la femme. [3, 4, 5]. Il convient alors de prendre en charge correctement ces infections. Cette prise en charge passe par un bon diagnostic de laboratoire.
Le diagnostic biologique repose sur l’examen cytobactériologique des urines qui impose des conditions rigoureuses de prélèvement, de conservation et de réalisation [6]. L’examen cytobactériologique des urines comporte plusieurs étapes, dont chacune présente une importance capitale. Au nombre de ces étapes, on note la cytologie ; elle consiste à étudier les différents types de cellules retrouvées dans les urines (hématies, leucocytes, cellules épithéliales, la présence éventuelle des cristaux, de bactéries et de parasites) [7].
En effet un échantillon d’urine est qualifié de pathologique quand il contient au moins 104 leucocytes par millilitre d’urines [8].
Considérant cette condition, est-ce qu’il n’y aura pas des cas avérés d’infections urinaires bactériennes mais écartés.
C’est la problématique que pose le présent travail car dans le centre de santé de Tori-Bossito, on se base sur la leucocyturie pour suspecter une infection bactérienne urinaire chez la femme enceinte.
Objectif général : Améliorer le diagnostic des infections urinaires chez la femme enceinte.
Objectifs spécifiques :
1) Evaluer la leucocyturie des échantillons d’urines de patientes enceintes à Tori- Bossito,
2) Identifier les bactéries responsables des infections urinaires à Tori-Bossito, 3) Etablir une relation entre leucocyturie et présence de bactéries
L’hypothèse de travail : l’examen bactériologique permet de confirmer une infection urinaire bactérienne.
Le présent rapport est structuré de la manière suivante :
- La première partie est consacrée à la synthèse bibliographique ; - La deuxième partie décrit le matériel et la méthode;
- La troisième partie qui prend en compte les résultats, la discussion ; - La conclusion.
PREMIERE PARTIE :
Revue de littérature
I- SYNTHESE BIBLIOGRAPHIQUE
Dans ce paragraphe, nous avons décrit les différents concepts et paramètres utilisés dans le présent rapport.
1. Infection urinaire
Définition
L'infection urinaire est une infection à la fois du contenant (appareil urinaire) et du contenu (urines) [9]. Plusieurs termes sont utilisés pour désigner l'infection urinaire (IU). On parle: d'infection urinaire, d'infection du tractus urinaire (ITU) ou de l'appareil urinaire (IAU), de bactériurie, de pyurie [10, 11].
La bactériurie est la colonisation des urines par des bactéries pathogènes.
L'infection de l'appareil urinaire pendant la grossesse va de la bactériurie asymptomatique (B A) aux infections cliniques: cystites ou pyélonéphrites aiguës [12, 13]
2. Physiopathologie
L’infection urinaire pendant la grossesse peut s'expliquer par les facteurs suivants:
Les modifications mécaniques: l'utérus gravide exerce une compression sur la vessie et sur les deux uretères. Cette compression vésicale favorise l'apparition d'un résidu post mictionnel cause d'infection urinaire (antécédent de bactériurie asymptomatique) [13, 16] ;
Des modifications hormonales : la progestérone aurait une action myorelaxante, favorisant une stase urétérale;
Des modifications des propriétés physico-chimiques des urines. L’activité bactéricide des urines pourrait être diminuée par la dilution des urines et l’augmentation de leur pH;
Une immunodépression physiologique favorisant la présence de bactéries dans l’appareil urinaire [17, 18, 19, 20]
Le diabète: La bactériurie asymptomatique est présente dans 5,9% des grossesses normales et 12,5% chez des diabétiques. Lors d’antécédents d’infection urinaire elle est présente dans 18,5% des cas [21, 22, 23].
3. Les microorganismes responsables des infections urinaires
3.1 Les bactéries responsables des lU observées en pratique de ville.
Les Entérobactéries.
De la famille des Enterobacteriaceae, les Entérobactéries constituent l’une des plus importantes familles de bactéries, autant du point de vue quantitatif (plus d’une quarantaine de genres) que du point de vue qualitatif. Elle regroupe ainsi de nombreux genres, très ubiquitaires, et ceux-ci sont fréquemment rencontres en pathologie infectieuse ainsi que dans les bio-industries (fermentation de fromages et produits laitiers, alcools, traitements médicaux supplétifs, production de toxines à usage cosmétique, industrie pharmaceutique pour la fabrication d’agents antiviraux, analyse biologique de prélèvements médicaux humains ou vétérinaires pour isoler en culture les agents pathogènes, un grand nombre d’industries pour effectuer des mesures de niveau de toxicité biologique…)
La famille des Enterobacteriaceae comprend de nombreux genres bactériens répondant à la définition suivante :
1-Bacilles à Gram négatif, 2- aéro-anaérobies facultatives, 3- mobiles ou immobiles, 4-facilement cultivables, 5- fermentant le glucose, 6- réduisent les nitrates en nitrites, 7-depourvus d’oxydase et possède l’antigène de Kunin.
Cette famille comprend 130 espèces actuellement répertoriées .Les principaux genres rencontrés sont: Citrobacter, Enterobacter, Escherichia Hafnia, Klebsiella, Morganella, Proteus, Providencia, Salmonella, Serratia, Shigella, Yersinia
Les entérocoques (Streptocoques du groupe D).
Ce sont des cocci à Gram positif souvent d'allure assez ovoïde, disposés en chaînettes. Les entérocoques sont des saprophytes de l'intestin humain, de la peau et de l'urètre. Ce sont des contaminants fréquents des prélèvements d'urine surtout chez la femme. Ils ne doivent être pris en compte que si 2 examens successifs retrouvent une
bactériurie ≥ 105/ml, associée à une leucocyturie. Ils sont naturellement résistants aux aminosides; généralement sensibles aux pénicillines.
Les Staphylocoques
Ce sont des cocci à Gram positif regroupés en amas ou en grappe de raisin, et la présence d'une catalase. On distingue deux groupes de staphylocoques: Staphylococcus aureus et les staphylocoques à coagulase négative(SCN). Staphylococcus aureus est retrouvé dans les urines essentiellement lors des prostatites, des abcès de rein et des infections post opératoires. Les SCN regroupent 13 espèces dont les plus souvent isolées chez l'homme sont: Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus saprophyticus.
Chez la femme jeune (activité sexuelle, grossesse), sans contexte favorisant apparent, les SCN causent des IU avec une grande fréquence, au deuxième rang après Escherichia coli. Les SCN (à l'exception de S. saprophyticus) sont plus résistants aux antibiotiques que S. aureus [12]
3.2 Les bactéries agents d'lU hospitalières(IUH).
Globalement à l'hôpital, la fréquence d'isolement d'E. coli diminue en faveur des autres bacilles à Gram négatif.
4. Leucocyturie
Encore appelée pyurie, la leucocyturie est la présence de leucocytes dans les urines. La présence de globules blancs est considérée comme normale jusqu’à 104 leucocytes par millilitre d’urines. Une valeur supérieure sera considérée comme un signe d’infection urinaire. Elle peut être détectée par une bandelette ou un examen cytobactériologique des urines [12].
Leucocyturie aseptique
On parle de leucocyturie aseptique lorsque la valeur de leucocytes dépasse 104 leucocytes par millilitre d’urines sans souche bactérienne observable après mise en culture. La cause la plus fréquente est une infection en voie de guérison, soit une infection par mycobactéries peut être à l’élévation de leucocytes sans être révélée par
Leucocyturie isolée
La leucocyturie est dite isolée si elle ne s’accompagne d’aucun signe d’infection urinaire, ni d’aucun autre au sein de l’urine notamment le nombre d’hématies, le niveau de nitrites, etc. Si elle est isolée, elle peut être témoin d’une infection urinaire dite «décapitée» par une antibiothérapie [12].
5. Diagnostic biologique
L’ECBU (examen cytobactériologique urinaire) est un examen biologique qui permet de faire la cytologie (la numération des leucocytes, des hématies, des cellules épithéliales, la présence de cristaux ou non) et l’identification des bactéries. Il est fréquemment demandé par le clinicien lors d’une suspicion d’infection urinaire ou pour contrôler l’efficacité d’un traitement antibiotique.
DEUXIEME PARTIE :
Cadre, Matériel et Méthodes
II- CADRE D’ETUDE, MATERIEL ET METHODE
Cette partie décrit le cadre institutionnel et technique de nos travaux, le matériel et les méthodes utilisées.
1. Cadre
1.1 Cadre institutionnel
Le Centre autonome de perfectionnement (CAP) constitue notre cadre institutionnel. Il est situé à l’Université d’Abomey-Calavi. Il s’est chargé de notre formation professionnelle en Analyses Biomédicales (ABM) pendant trois ans.
1.2 Cadre technique
Notre stage s’est déroulé au laboratoire du Centre de Santé de Tori-Bossito.
Différentes sections : la parasitologie, l’hématologie, la biochimie, la sérologie et la bactériologie qui est limitée au Gram.
2. Matériel
2.1 Matériel biologique
Il a été composé de 152 échantillons d’urines de femmes enceintes fréquentant les centres médicaux suivants : Maternité du Centre de Santé de Tori-Bossito, Maternité du Centre de Santé de Tori-Gare, Maternité du Centre de Santé de Tori- Acadjamè et la Maternité du Centre de Santé de Tori-Cada.
Notons que les Centres de Santé suivants : de Tori-Gare, de Tori-Acadjamè et de Tori-Cada sont périphériques au Centre de Santé de Tori-Bossito. Les échantillons d’urines des dits centres de santé sont traités au laboratoire du Centre de Santé de Tori- Bossito.
2.2 Milieux de culture
- Gélose Chapman pour l’isolement des staphylocoques, - Gélose EMB pour l’identifier les entérobactéries, - Gélose CLED pour la numération des bactéries,
- Galerie rapide de Leminor pour l’identification des bactéries.
2.3 Réactifs et colorants
- Solution d’acide chlorhydrique dilué au 1/10è - Violet de Gentiane,
- Alcool à 90°
- Lugol,
- Fuchsine de Ziehl diluée au 1/10è 2.4 Equipements et consommables
- Etuve bactériologique, - Microscope optique, - Réfrigérateurs à 4°C, - Autoclave,
- Balance de précision, - Bec de bunsen et gaz,
- Flacon d’urines stériles de 50ml, - Anse de platine calibrée,
- Tubes secs stériles, - Pipettes Pasteur, - Lames et lamelles,
- Coton cardé et hydrophile, - Eprouvette graduée.
3. Méthodes
3.1 Type et période d’étude
Il s’agit d’une étude transversale prospective à visée analytique réalisée de Février à Juin 2018.
3.2 Population d’étude
Notre population d’étude est constituée de femmes enceintes venues en consultation prénatale dans les maternités des centres de Tori-Gare, de Tori-Acadjamè, de Tori-Cada et de Tori-Bossito.
L’échantillonnage a concerné toutes les patientes enceintes âgées de 18 à 45ans dont 152 femmes enceintes retenues après les tests de VIH1, 2 et du test de glycosurie.
Le test de VIH 1, 2 a été réalisé parce que le VIH affaiblit l’organisme donc les maladies opportunistes peuvent modifier les résultats de cette étude. Le test de VIH est réalisé également parce que cela fait partie du bilan prénatal du programme PTME (Prévention de la Transmission du Virus HIV de la Mère à l’Enfant) Au cours de la pathologie diabétique, l’élévation du taux de sucre est beaucoup favorable aux infections bactériennes. C’est pour cette raison que la glycosurie a été faite.
Les femmes enceintes sont venus à l'hôpital pour plusieurs raisons. Quelques- unes sont venues honorer le rendez-vous de la sage-femme traitant, d’autres pour les consultations prénatales. Elles ont été enrôlés dans la présente étude après avoir été informées de l'objectif de l'étude et donner leur consentement verbal.
Dans le but de recueillir des informations chez les patientes, nous avons élaboré un questionnaire à leur intention. Le modèle de la dite fiche est en annexe 1.
Le prélèvement d’urine a été effectué par la patiente à qui un pot pour l’examen cytobactériologique des urines a été remis 24h à l’avance pour recueillir les premières urines du matin. Notons que la patiente se présente avec le prélèvement d’urine avant que le prélèvement sanguin ne s’effectue.
Le consentement libre et éclairé de chaque participante est obtenu avant tout prélèvement suite à son accord verbal. L’objectif de l’étude lui est clairement expliqué.
Les résultats étaient confidentiels et remis à la sage-femme traitant. Les participantes à l’étude ont bénéficié gratuitement de la prise en charge des frais de réalisation des différents examens.
3.3 Critères d’inclusion
Seules les patientes enceintes sont acceptées à participer à cette étude.
3.4 Critères de non inclusion
Sont exclues de cette étude, les femmes qui ne sont pas enceintes, séropositives et diabétiques.
3.5 Traitement des prélèvements
L’échantillon est manipulé au laboratoire du Centre de Santé de Tori-Bossito en évitant les risques de contamination. Sur les prélèvements sanguins, a été effectué le Test de VIH 1,2 ; et sur les urines sont effectués le test de glycosurie et de l’examen cytobactériologique des urines.
a. Etape de manipulation des urines
Etat frais
L’état frais a pour but d’observer la bactérie et permet d’avoir des renseignements sur sa mobilité. Il est pratiqué sur le culot urinaire obtenu après la centrifugation de l’urine pendant dix minutes entre trois mille et cinq mille tours par minute.
Figure 1 : Les étapes de réalisation d’état frais [10]
Procédure de réalisation d’un frottis
Nettoyer la lame à l’éthanol puis inscrire le nom de l’échantillon sur la lame.
Délimiter la zone du frottis sur l’envers de la lame. Flamber l'anse de platine et laisser l’anse refroidir. Ouvrir le tube contenant l’échantillon, homogénéiser le culot. Déposer sur la lame, une goutte du culot urinaire à l’aide de l’anse. Réaliser le frottis à partir du
Coloration de GRAM
Après la réalisation du frottis, verser quelques gouttes de violet de gentiane sur le frottis, attendre 1 minute, rejeter le violet. Recouvrir l'étalement de Lugol, laisser 15 à 20 secondes. Rejeter et remplacer par la même solution (deux fois et pendant 20 secondes à chaque fois). Laver à l'eau distillée ou de robinet. Décolorer par l'alcool (5 à 10 secondes). Laver immédiatement à l'eau. Recolorer par une solution de safranine ou de fuchsine. Laisser agir 30 secondes puis laver à l'eau. Sécher la préparation entre deux feuilles de papier filtre.
Figure 2 : Les étapes de la coloration de Gram[10]
Figure 3 : à gauche cocci Gram – et à droite cocci Gram + [10]
b. Identification de la bactérie
L’identification des bactéries a été faite en utilisant la galerie de LEMINOR pour les bacilles gram négatif et la recherche des caractères biochimiques pour les cocci gram positif.
3.6 Analyses statistiques
L’analyse statistique est réalisée avec le logiciel Excel 2010 ; la détermination des valeurs prédictives positives et des valeurs prédictives négatives ; la sensibilité et la spécificité. Fisher’s Exact Test est réalisé avec le logiciel GRAPHPAD In Stat.
TROISIEME PARTIE :
Résultats, Discussion et la Conclusion.
III- RESULTATS
Cette partie du rapport de stage présente les détails des résultats des différents paramètres enregistrés chez les femmes enceintes dans le centre de santé de Tori- Bossito.
1. Caractéristiques de la population étudiée
Nombre d’échantillons en fonction des centres de santé
Tableau I : Nombre de femmes enceintes en fonction des centres de santé
Centres de Santé Nombre de femmes
enceintes
Fréquence en %
Tori-Acadjamè 55 36
Tori-Bossito 62 41
Tori-Cada 12 8
Tori-Gare 23 15
Total 152 100
Les femmes enceintes fréquentent plus le Centre de Santé de Tori-Bossito, 41%.
Répartition des femmes enceintes en fonction de l’âge
Figure 4: répartition des femmes enceintes en fonction de l’âge 18
27
30
17
7
1
0 5 10 15 20 25 30 35
[18-23[ [23-28[ [28-33[ [33-38[ [38-43[ [43-48]
Fréquence en % de femmes
enceintes
classe d'âge
La classe d’âge de 28 à 33ans est la classe modale avec 30% de femmes enceintes.
L’âge moyen de cette population d’étude est de 32ans.
Répartition des femmes enceintes en fonction du statut socio-professionnel
Figure 5: Répartition des femmes enceintes en fonction des activités professionnelles exercées.
L’activité la plus exercée est l’agriculture par les femmes de notre population d’étude soit 34% (52/152).
Répartition des femmes enceintes en fonction de l’âge de la grossesse
Tableau II: Fréquence des femmes enceintes en fonction de l’âge de la grossesse Age de la grossesse Fréquence en %
1er Trimestre 18
2ème Trimestre 46
3ème Trimestre Total
36 100
Les femmes au 2ème Trimestre de grossesse fréquentent plus les centres.
10 6
29
17 35 3
52 Revendeuses
Enseignante Ménagère Artisane Etudiante Activité de pêche Activité agricole
2. Examen direct des échantillons d’urines 2.1 Examen macroscopique des échantillons
Tableau III: aspect macroscopique des urines des femmes enceintes Aspect macroscopique des urines
urine claire urine légèrement trouble
urine trouble
Nombre d’échantillons
66 59 37
43% (66/152) des échantillons d’urine sont claires.
2.2 Analyse microscopique des urines : leucocyturie
Tableau IV: Répartition des échantillons d’urines en fonction de la leucocyturie
Leucocyturie Nombre
d’échantillons
Fréquence en
%
< 104 23 31
Absence de leucocytes 47 15
≥ 104 82 54
Total 152 100
L’analyse des échantillons d’urine révèle 54% de leucocyturie significative
2.3 Examen microscopique : coloration de Gram Tableau V: Résultats de la coloration de Gram
Coloration de Gram Nombre d’échantillons Total
Bactéries Gram + 74
Bactéries Gram - 12
Absence de bactéries visibles 66 66
Total 152 152
La coloration de Gram montrait 57% (86/152) d’échantillons contenant de bactéries
2.4 Comparaison des résultats de leucocyturie et de la coloration de Gram Tableau VI: Comparaison des résultats de leucocyturie et de la coloration de Gram
Leucocyturie Coloration de Gram
≥104 82 80
<104 23 6
Absence de leucocytes 47 00
Total 152 86
La comparaison des résultats montre qu’il y avait 6 échantillons dont la leucocyturie n’est pas significative mais contient des bactéries révélées par la coloration de Gram.
3. Identification des bactéries révélées par la coloration de Gram Tableau VII: Les bactéries identifiées
Coloration de Gram Bactéries identifiées Nombre d’échantillons
Gram ─ Escherichia coli 58
Klebsiella pneumoniae 16
Enterococcus faecalis 9
Gram + Staphylococcus aureus 3
L’identification des bactéries a montré 67% (58/86) d’Escherichia. coli.
86
IV. DISCUSSION
Le présent travail a pour objectif général d’améliorer le diagnostic des infections urinaires chez la femme enceinte.
Sur 152 femmes âgées de 18 à 45ans, enrôlées dans notre étude, 30% sont dans la tranche d’âge de 28 à 33ans.
Nos résultats sont proches de ceux obtenus par Bouarroudj Y et Boutebza Fatima Zohra et al, (2015) à l’Université des Frères Mentouri Constantine., où la femme enceinte s’est révélée plus exposée à l’infection urinaire entre 30 et 35 ans (55%).
Pour Diarra et al. (2008) au Mali la tranche d’âge la plus touchée est celle entre 20 – 34ans avec un pourcentage de 66 % .
Pour Sharma et Thapa, (2007) l’âge moyen des parturientes a été de 22 ans et 78,72% des patientes étaient âgées de 20 à 29 ans.
Les facteurs intervenant dans l'augmentation de l'incidence de l'infection urinaire sont multiples avec l'augmentation de l'âge, des troubles de la motricité vésicale (effet des médicaments), la déshydratation, le manque d'hygiène et la baisse des défenses immunitaires. Globalement, l'appareil urinaire est pauvre en cellules immunocompétentes ; le contrôle de l'infection est surtout assuré par des moyens physico-chimiques (Gonthier, 2000).
Notre étude a obtenu 46% de femmes enceintes au second trimestre. Ce que Dougnon et al, 2015 avait également obtenu.
Le nombre d’échantillons d’urine ayant révélé une leucocyturie significative est de 54% ; ce qui biologiquement signifie que 82 femmes enceintes de la population d’étude devraient avoir une infection urinaire et par conséquent présenter un résultat positif à la coloration de Gram. Cela n’a pas été le cas. En effet environ 3% (2/82) des patientes à leucocyturie significative avaient un résultat négatif à la coloration de Gram. Il pourrait s’agir d’échantillons d’urine provenant des patientes sous antibiothérapie ou sous anti-inflammatoires. Le même constat pourrait être également
mycobactéries. De plus, la même situation se produirait lorsque le recueil des urines est effectué pendant la phase d’incubation de l’infection. Cela pourrait être aussi dû à la présence de leucocytes génitaux dans les échantillons d’urines suite à une contamination lors du prélèvement.
Sur les 23 échantillons à leucocyturie non significative, 26% (6/23) sont positifs à la coloration de Gram. Il s’agirait d’un début d’infection.
Nous pouvons avoir à faire à des cas d’infection urinaires dont les causes d’une leucocyturie non significative restent inconnues.
En se basant sur la pratique qui consiste à ne prendre en compte pour la culture que les échantillons d’urines à leucocyturie significative, tous ces échantillons d’urines seraient déclarés négatifs. Toutefois, il pourrait s’agir des échantillons d’urines prélevés dans les conditions non aseptiques. Cette éventualité s’expliquerait par le fait que la population étudiée est constituée de femmes et les bactéries les plus isolées sont des entérobactéries 67% (58/86). Ces entérobactéries, hôtes normaux du tube digestif de l’homme sont isolées des échantillons d’urines. Du fait de la proximité des orifices anaux et urinaires chez la femme, ces bactéries peuvent remonter le long de l’urètre vers la vessie et proliférer dans l’urine.
CONCLUSION
Au terme, il ressort que la plupart des infections urinaires sont caractérisées par une leucocyturie significative. Cependant une leucocyturie significative ne signifie pas toujours la présence d’une infection urinaire. De même, une leucocyturie non significative n’est pas toujours synonyme d’absence d’infection urinaire. Pour ce fait, un deuxième examen doit être pratiqué dans les conditions techniques rigoureuses.
Cela a pour but de confirmer les résultats l’infection bactérienne urinaire. La coloration de Gram qui est une étape de l’examen cytobactériologique des urines peut être utilisée pour la confirmation de l’infection urinaire. Mais ceci, si le plateau technique n’est pas suffisant.
SUGGESTIONS :
à tous les techniciens de laboratoires d’analyses biomédicales, nous suggérons la réalisation d’examens bactériologiques pour la confirmation d’une infection urinaire bactérienne chez la femme enceinte ;
la coloration de Gram n’est pas la limite définitive pour la confirmation d’une infection bactérienne urinaire. Il s’avère donc nécessaire d’identifier la bactérie en cause et la réalisation d’un antibiogramme pour une bonne antibiothérapie,
aux autorités politico-administratives de penser à équiper davantage les centres de santé périphériques pour une meilleure prise en charge de la santé des patient(e)s.
REFERENCES BIBLIOGRAPHIES
1- OMS. Genève: OMS; 2008. Mortalité maternelle 2005. Estimations de l'OMS, l'UNICEF, l'UNFPA et la Banque Mondiale.
2- Saizonou J., Ouedraogo L., Moussiliou N., Ayelo P., Kpozehouen A., Darate R.: Epidémiologie et prise en charge des infections du per-partum à la maternité du centre hospitalier départemental de l’Ouémé-Plateau au Bénin.
Pan Afr Med J. 2014 ; 17 :89
3- Feuillebois G. Infection urinaire non tuberculeuse et grossesse.Objet Med 1989
; 63 : 42-45
4- Togo A. Etude de l’association infection urinaire et grossesse au service de gynéco obstétrique de l’hôpital national du Point « G » à propos de 61 cas.
Thèse, Med, Bamako, 1993, M20.
5- Fournier A, Lessourd-Pontonnier F. Infections urinaires au cours de la grossesse. Encycl. Med Chir. (Elsevier) Paris, Gynécologie/Obstétrique ; 1996 ; 5-047-A-10 ; 8p.
6- Aghayan M, Thoumsin H, Lambotter. Stratégies thérapeutiques de la bactériurie gravidique. Rev Med de Liège. 1990 p : 45, 9 : 433-9.
7- Sangare A. Association infection urinaire et grossesse dans le service de gynéco-obstétrique du Centre hospitalo-universitaire Gabriel Touré Aspects cliniques, bactériologiques et pronostiques. A propos de 106 cas. Thèse, Med, Bamako, 2009
8- Paillet L, Thoumsin H, Lambotte R. Recherche de l’infection urinaire asymptomatique chez la femme enceinte par la détection de la leucocyte estérase. Rev Med. de Liège 1990, Nov. 45 11: 545-9.
9- Gambarotto K, Denis F. Infections urinaires chez la femme enceinte. In : Denis F. Dir. Bactéries, champignons et parasites transmissibles de la mère à l'enfant. Paris : John Libbey Eurotext, 2002, p 432-44.
10- Gonthier R. Infection urinaire du sujet âgé.2000 La Revue de Gériatrie, Tome 25, N°2 pp 7.
11- Nikiema A. Aspects épidémiologiques et bactériologique des infections
Centre Médical Saint Camille de Ouagadougou. Thèse Med Pha, Burkina-Faso 2002.
12- Michel C. Infections urinaires gravidiques : analyse de leur prise en charge dans le service d'hospitalisation des grossesses du CHU Estaing à Clermont- Ferrand. Gynécologie et obstétrique. 2014.
13- A. Legrain, P. Thill, J.L. Schmit, P. Duhaut, J. Schmidt: Valeur du rapport neutrophiles/lymphocytes pour le diagnostic des infections bactériennes, La Revue de Médecine Interne, Volume 38, Supplement 1, June 2017, Page 58 14- Limper M, de Kruif MD, Duits AJ, Brandjes DP, van Gorp EC. The
diagnostic role of Procalcitonin and other biomarkers in discriminating infectious from non-infectious fever. J Infect. 2010 Jun;60(6):409-16.
15- Taytard A. la C-réactive protéine (CRP) peut-elle être un biomarqueur utile dans les BPCO ?, Respir, 2009 (21) : 191-194.
16- Gebre-selassie S. Asymptomatic bacteriura in pregnancy: epidemiological, clinical, and microbiological approach. Ethiop Méd J, 1998 ; 36: 185-92
17- Olusanya O, Ogunledun A, Fakoya TA. Asymptomatic significant bacteriuria among pregnant and non-pregnant women in Sagamu, Nigeria. West Afr J Med, 1993; 12: 27-33
18- Diadhiou F, Mboup S, Koly F, Boye CS, Moreau JC. Les infections urinaires en pratique gynéco-obstétricale au CHU de Dakar. Dakar Méd, 1990 ; 35 : 1-9 19- Akpovi J, Perrin RX, Alihonou E. Etude des facteurs de risque de prématurité
à Cotonou. Bénin méd., 1998; 8 : 96-100
20- Aminon Contribution à l’étude de l’association infection urinaire et grossesse à propos de 84 cas. Memoire Med ; Abidjan, 1989 ; 52p.
21- Koné H. Association infection urinaire et grossesse à la maternité de Hamdallaye (Centre de santé de référence de la commune IV) à propos de 35 cas.Thèse, Med, 2002, N°151, 101-135p
22- Aseri N., M. Kabiri, R. Razine, M. Mrabet, A. Barkat: CRP value in managing the bacterial maternofetal infection, Journal de Pédiatrie et de Puériculture, Volume 27, Issue 1, February 2014, Pages 9-15.
23- Limelette A, Nathalie C, Laurent R, Ayman T and François-Xavier M.
Augmentation de la protéine C-réactive chez une femme enceinte atteinte de sclérose en plaques : corticothérapie ou non ? Ann Biol Clin. 2010; 68 (2) 24- Zahorec R. Ratio of neutrophil to lymphocyte counts--rapid and simple
parameter of systemic inflammation and stress in critically ill. Bratisl Lek Listy.
2001;102 (1):5-14.
25- De Jäger CP, Wever PC, Gemen EF, Kusters R, van Gageldonk-Lafeber AB, van der Poll T et al. The Neutrophil-Lymphocyte Count Ratio in Patients with Community-Acquired Pneumonia. Plos One. 2012; 7(10):46561.
26- Thiebau G PH. Judlin Infections urinaires et grossesse La lettre du gynécologue – no271 – Avril 2002 ; 32-34. Revue du praticien
27- Olsen B E, Hinderaker SG, Lie RT et al. The diagnosis of urinary tract infectious among pregnant women in rural tanzania; prevalences and correspondence between different diagnostic methods. Acta Obstet Gynecol Scand, 2000; 79: 729-36
28- Chauveau D, Jungers P, Grunfeld JP. Infections urinaires au cours de la grossesse: diagnostic, évolution, pronostic et traitement. Rev Prat, 1997 ; 47:
1933-1936
29- Colau JC. La bactériurie de la femme enceinte: quand et comment la traiter?
Méd Mal Infect ,1991 ; 21 : 63-66
30- Saccoun E. Infection de la femme enceinte. Option Bio; 2010 Vol 21. Issue 434. P 12.
31- Saaidia A, Chinar A. Infections urinaires et grossesse en (Revue de littérature).Gynécologue de ville Batna médecine interne, faculté de médecine Batna. 2014 p1-33.
ANNEXES
FICHE DE COLLECTE DES DONNEES AU COURS DE CETTE ETUDE Date ……….N°……….
Nom et Prénoms……….
Age………....Taille……….Poids………IMC………
Age de la grossesse (SA ou Trimestre)………..
Provenance (situation par rapport au centre)………
Profession………Motif de la consultation………
Glucosurie ?...Etat sérologique :………..
RESULTATS ECBU (LEUCOCYTURIE et COLORATION GRAM)
TABLE DES MATIERES
LISTE DES ENSEIGNANTS... ii
DEDICACE ... iv
REMERCIEMENTS ... v
HOMMAGE AUX MEMBRES DE JURY ... vi
LISTE DES SIGLES ET ABREVIATIONS ... vii
LISTE DES FIGURES ... viii
LISTE DES TABLEAUX ... ix
SOMMAIRE ... x
RESUME ... xi
SUMMARY ... xii
INTRODUCTION ... 1
I- SYNTHESE BIBLIOGRAPHIQUE ... 4
1. Infection urinaire ... 4
2. Physiopathologie ... 4
3.1 Les bactéries responsables des lU observées en pratique de ville. ... 5
3.2 Les bactéries agents d'lU hospitalières(IUH). ... 6
4. Leucocyturie ... 6
5. Diagnostic biologique ... 7
II- CADRE D’ETUDE, MATERIEL ET METHODE ... 9
1. Cadre ... 9
1.1 Cadre institutionnel ... 9
1.2 Cadre technique ... 9
2. Matériel ... 9
2.2 Milieux de culture ... 9
2.3 Réactifs et colorants ... 10
2.4 Equipements et consommables ... 10
3. Méthodes ... 10
3.3 Critères d’inclusion ... 11
3.4 Critères de non inclusion ... 11
3.5 Traitement des prélèvements... 12
3.6 Analyses statistiques ... 14
TROISIEME PARTIE : ... 15
Résultats, Discussion et la Conclusion. ... 15
III- RESULTATS ... 16
1. Caractéristiques de la population étudiée ... 16
Les femmes au 2ème Trimestre de grossesse fréquentent plus les centres. ... 17
2. Examen direct des échantillons d’urines ... 18
2.1 Examen macroscopique des échantillons ... 18
2.2 Analyse microscopique des urines : leucocyturie ... 18
2.3 Examen microscopique : coloration de Gram ... 19
La coloration de Gram montrait 57% (86/152) d’échantillons contenant de bactéries ... 19
2.4 Comparaison des résultats de leucocyturie et de la coloration de Gram ... 19
3. Identification des bactéries révélées par la coloration de Gram ... 19
IV. DISCUSSION ... 20
CONCLUSION ... 22
REFERENCES BIBLIOGRAPHIES ... 24
ANNEXES ... 27
FICHE DE COLLECTE DES DONNEES AU COURS DE CETTE ETUDE ... 27
TABLE DES MATIERES ... 28
