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Mécanismes moléculaires impliqués dans la régulation post-traductionnelle du système de sécrétion du type VI chez Pseudomonas aeruginosa

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Academic year: 2021

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(1)

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Submitted on 19 Feb 2014

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post-traductionnelle du système de sécrétion du type VI

chez Pseudomonas aeruginosa

Maria Guillermina Casabona

To cite this version:

Maria Guillermina Casabona. Mécanismes moléculaires impliqués dans la régulation post-traductionnelle du système de sécrétion du type VI chez Pseudomonas aeruginosa. Sciences agricoles. Université de Grenoble, 2013. Français. �NNT : 2013GRENV009�. �tel-00949206�

(2)

Université Joseph Fourier / Université Pierre Mendès France / Université Stendhal / Université de Savoie / Grenoble INP

THÈSE

Pour obtenir le grade de

DOCTEUR DE L’UNIVERSITÉ DE GRENOBLE

Spécialité : Virologie Microbiologie Immunologie Arrêté ministériel : 7 août 2006

Présentée par

Maria Guillermina CASABONA

Thèse dirigée par Mme Ina ATTREE

préparée au sein du Laboratoire de Biologie du Cancer et de

l’Infection

dans l'École Doctorale de Chimie et Sciences du Vivant

Mécanismes moléculaires

impliqués dans la régulation

post-traductionnelle du système de

sécrétion du type VI chez

Pseudomonas aeruginosa

Monsieur Bertrand TOUSSAINT

Professeur, Grenoble

Madame Sarah COULTHURST

Chargé de Recherche, Dundee

Monsieur Romé VOULHOUX

Chargé de Recherche, Marseille

Madame Ina ATTREE

(3)
(4)

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(12)

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(13)

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(14)

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(29)

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(30)

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(31)

 ͲϮϴͲ ůŝŬĞ ƐƚƌƵĐƚƵƌĞƐ ŽďƐĞƌǀĞĚ ďLJ ůĂƐĞƌ ƐĐĂŶŶŝŶŐ ĐŽŶĨŽĐĂů ŵŝĐƌŽƐĐŽƉLJ ;&ŝŐƵƌĞ ϮͿ͘  ŵŽĚĞů ĨŽƌ W͘ ĂĞƌƵŐŝŶŽƐĂ WKϭ ƐƚƌĂŝŶ ďŝŽĨŝůŵ ĨŽƌŵĂƚŝŽŶ ŚĂƐ ďĞĞŶ ƐƵŐŐĞƐƚĞĚ ďLJ DŽůŝŶ ĂŶĚ ĐŽǁŽƌŬĞƌƐ ;&ŝŐƵƌĞϮ͕zĂŶŐĞƚĂů͕͘ϮϬϭϭďͿ͘dŚĞĚŝĨĨĞƌĞŶƚƐƚĞƉƐ;ϭƚŽϰͿŝŶĐůƵĚĞ͗ ϭʹ/ŶĚŝǀŝĚƵĂůƉůĂŶŬƚŽŶŝĐĐĞůůƐĂƚƚĂĐŚƚŽƚŚĞƐƵƌĨĂĐĞ͕ĂůƐŽĐĂůůĞĚƐƵďƐƚƌĂƚƵŵ͕ďLJŵĞĂŶƐ ŽĨƚŚĞƉŝůƵƐ͕ƚŚĞĨůĂŐĞůůƵŵĂŶĚƚŚĞĞdžƚƌĂĐĞůůƵůĂƌE;ĞEŝŶ&ŝŐƵƌĞϮͿ Ϯʹ/ƌƌĞǀĞƌƐŝďůĞĂƚƚĂĐŚŵĞŶƚ͗ďĂĐƚĞƌŝĂĨŽƌŵŵŝĐƌŽĐŽůŽŶŝĞƐ͘WĞůĂŶĚWƐůƉŽůLJƐĂĐĐŚĂƌŝĚĞƐ ĂƌĞƌĞƋƵŝƌĞĚĨŽƌƚŚŝƐƐƚĞƉ͕ĂƐǁĞůůĂƐƌŚĂŵŶŽůŝƉŝĚƐ͘ ϯʹ^ƵďƉŽƉƵůĂƚŝŽŶƐŝŶƚĞƌĂĐƚǁŝƚŚĞĂĐŚŽƚŚĞƌ͕ĞĂƌůLJƐƚĂŐĞŽĨďŝŽĨŝůŵĂƌĐŚŝƚĞĐƚƵƌĞ͘dŚŝƐ ƐƚĞƉŝƐĂůƐŽĐĂůůĞĚŵĂƚƵƌĂƚŝŽŶ;^ƚŽŽĚůĞLJĞƚĂů͕͘ϮϬϬϮͿ͘ ϰ ʹ DĂƚƵƌĞ ďŝŽĨŝůŵƐ ĨŽƌŵĞĚ ďLJ ŵĂĐƌŽĐŽůŽŶŝĞƐ͘ dŚĞ ŵƵƐŚƌŽŽŵͲůŝŬĞ ƐŚĂƉĞ ŝƐ ĐŚĂƌĂĐƚĞƌŝƐƚŝĐŽĨW͘ĂĞƌƵŐŝŶŽƐĂŵĂƚƵƌĞďŝŽĨŝůŵƐ͘ dŚĞ ůĂƐƚ ƐƚĞƉ ŝƐ ďŝŽĨŝůŵ ĚŝƐƉĞƌƐŝŽŶ͕ ǁŚĞƌĞ ŵŽƚŝůĞ ďĂĐƚĞƌŝĂ ͞ĞƐĐĂƉĞ͟ ĨƌŽŵ ŝŶƐŝĚĞ ƚŚĞ ŵƵƐŚƌŽŽŵ ǁŚĞŶ ƚŚŝƐ ŽƉĞŶƐ ĂŶĚ ĐĂŶ ĐŽůŽŶŝnjĞ ĂŶŽƚŚĞƌ ƐŝƚĞ͘ dǁŽ ƌĞƉŽƌƚƐ ĞǀŝĚĞŶĐĞĚ ƚŚŝƐ ͞ƌĞŐƵůĂƚĞĚ͟ůŝĨĞͲĐLJĐůĞďLJƐŚŽǁŝŶŐĚŝĨĨĞƌĞŶƚƉŚĞŶŽƚLJƉĞƐĚƵƌŝŶŐďŝŽĨŝůŵĚĞǀĞůŽƉŵĞŶƚ;ĂǀŝĞƐ Θ'ĞĞƐĞLJ͕ϭϵϵϱ͕^ĂƵĞƌĞƚĂů͕͘ϮϬϬϮͿ͘

(32)

 ͲϮϵͲ  &ŝŐƵƌĞϮͿŝŽĨŝůŵĚĞǀĞůŽƉŵĞŶƚďLJW͘ĂĞƌƵŐŝŶŽƐĂWKϭ͘ZĞĚƐƉŚĞƌĞƐƌĞƉƌĞƐĞŶƚĞE͕ďůƵĞĂŶĚLJĞůůŽǁĐLJĐůĞƐ ƌĞƉƌĞƐĞŶƚ ŶŽŶͲŵŽƚŝůĞ ĂŶĚ ŵŽƚŝůĞ ĐĞůůƐ ƌĞƐƉĞĐƚŝǀĞůLJ͘ WƐů ĂŶĚ WĞů ĞdžŽƉŽůLJƐĂĐĐŚĂƌŝĚĞƐ ĂƌĞ ƌĞƉƌĞƐĞŶƚĞĚ ŝŶ ůŝŐŚƚ ďůƵĞ͘&ŽƌĞĂĐŚƐƚĞƉ;ϭͲϰͿ͕ƚŚĞƉƌŝŶĐŝƉĂůĂĐƚŽƌƐĂƌĞůŝƐƚĞĚ͘ͿWKϭďŝŽĨŝůŵĨŽƌŵĂƚŝŽŶ͘ĂĐƚĞƌŝĂǁĞƌĞŐƌŽǁŶŽŶĂ ĨůŽǁͲĐĞůůĐŚĂŵďĞƌĂŶĚŝŵĂŐĞƐǁĞƌĞƚĂŬĞŶǁŝƚŚĂĐŽŶĨŽĐĂůŵŝĐƌŽƐĐŽƉĞĞǀĞƌLJϮϰŚ͘dŚĞďĂƌƌĞƉƌĞƐĞŶƚƐϮϬђŵ͘ DŽĚŝĨŝĞĚĨƌŽŵzĂŶŐĞƚĂů͘;ϮϬϭϭďͿ͘ 

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(33)

 ͲϯϬͲ ǀŝƌƵůĞŶĐĞ ĨĂĐƚŽƌƐ ƚŚĂƚ ĂůůŽǁ ƚŚĞ ŝŶũƵƌLJ ŽĨ ƚŚĞ ŚŽƐƚ ;ƚŚĞƌĞ ŝƐ ŝŶĚƵĐƚŝŽŶ ŽĨ ƚĂƌŐĞƚ ĐĞůů ĚĞĂƚŚͿ͘ &ŽůůŽǁŝŶŐ ŝŶĨĞĐƚŝŽŶ͕W͘ ĂĞƌƵŐŝŶŽƐĂ ŝƐ ĂďůĞ ƚŽ ĐŽůŽŶŝnjĞ ƚŚĞ ůƵŶŐƐ͕ƚŚĞ ŬŝĚŶĞLJ ĂŶĚ ƚŚĞƵƌŝŶĂƌLJ ƚƌĂĐƚ͘/ĨƚŚŝƐŚĂƉƉĞŶƐ͕ƚŚĞƌĞƐƵůƚƐŵŝŐŚƚďĞĨĂƚĂů͘ ŚƌŽŶŝĐŝŶĨĞĐƚŝŽŶƐĂƌĞƌĞůĂƚĞĚƚŽďŝŽĨŝůŵͲĨŽƌŵŝŶŐW͘ĂĞƌƵŐŝŶŽƐĂ͘ŝŽĨŝůŵƐĂƌĞŵŽƌĞƌĞƐŝƐƚĂŶƚ ƚŽĂŶƚŝďŝŽƚŝĐƐĂŶĚƉŚĂŐŽĐLJƚŽƐŝƐ͕ĂŶĚŚĂǀĞŶŽŶͲŵŽƚŝůĞďĂĐƚĞƌŝĂƚŚĂƚůŽƐĞƚŚĞĂďŝůŝƚLJƚŽƉƌŽĚƵĐĞ ƐŽŵĞ ŽĨ ƚŚĞ ǀŝƌƵůĞŶĐĞ ĨĂĐƚŽƌƐ ŶĞĞĚĞĚ ĨŽƌ ĂŶ ĂĐƵƚĞ ŝŶĨĞĐƚŝŽŶ͘ Ɛ Ă ĐŽŶƐĞƋƵĞŶĐĞ͕ W͘ ĂĞƌƵŐŝŶŽƐĂ ŝƐ ůĞƐƐ ƚŽdžŝĐ ĂŶĚ ƉĞƌƐŝƐƚƐ ŝŶ ƚŚĞ ŚŽƐƚ͘ ƵƌŝŶŐ ĐŚƌŽŶŝĐ ŝŶĨĞĐƚŝŽŶƐ͕ Ă ƐůŽǁ ďƵƚ ƉƌŽŐƌĞƐƐŝǀĞĚĞƐƚƌƵĐƚŝŽŶŽĨƚŚĞƚŝƐƐƵĞĐĂŶďĞŽďƐĞƌǀĞĚ͘ ŚƌŽŶŝĐŝŶĨĞĐƚŝŽŶƐďLJW͘ĂĞƌƵŐŝŶŽƐĂĂƌĞƌĞƐƉŽŶƐŝďůĞĨŽƌĨĂƚĂůŝƚLJŝŶŵĂŶLJ&ƉĂƚŝĞŶƚƐ͘&ŝƐĂŶ ĂƵƚŽƐŽŵĂů ƌĞĐĞƐƐŝǀĞ ŐĞŶĞƚŝĐ ĚŝƐŽƌĚĞƌ ĐĂƵƐĞĚ ďLJ ŵƵƚĂƚŝŽŶƐ ŝŶ ƚŚĞ & ƚƌĂŶƐŵĞŵďƌĂŶĞ ĐŽŶĚƵĐƚĂŶĐĞƌĞŐƵůĂƚŽƌ;&dZͿ͕ĂĐŚĂŶŶĞůƚŚĂƚƌĞŐƵůĂƚĞƐŝŽŶƉĂƐƐĂŐĞƚŚƌŽƵŐŚƚŚĞĞƉŝƚŚĞůŝƵŵ ;YƵŝŶƚŽŶ͕ϭϵϴϯͿĂŶĚƚŚĂƚĂĨĨĞĐƚƐŵŽƐƚůLJƚŚĞůƵŶŐƐ͘dŚĞƵŶďĂůĂŶĐĞĚŝŽŶĐŽŵƉŽƐŝƚŝŽŶƌĞƐƵůƚƐŝŶ ĂŶĂůƚĞƌĞĚŵƵĐƵƐůĂLJĞƌŝŶƚŚĞƌĞƐƉŝƌĂƚŽƌLJŽƌŐĂŶ͕ǁŚŝĐŚǁŝůůďĞĚĞŚLJĚƌĂƚĞĚĂŶĚƚŚŝĐŬĞƌƚŚĂŶĂ ǁŝůĚͲƚLJƉĞ ŵƵĐƵƐ ;>LJĐnjĂŬ Ğƚ Ăů͕͘ ϮϬϬϮ͕ ,ĂƵƐĞƌ Ğƚ Ăů͕͘ ϮϬϭϭͿ͘ /Ŷ ĐŽŶƐĞƋƵĞŶĐĞ͕ ƚŚĞƌĞ ŝƐ ŶŽ ŶŽƌŵĂůĐůĞĂƌĂŶĐĞŽĨƚŚĞƌĞƐƉŝƌĂƚŽƌLJƚƌĂĐƚ͕ŐĞŶĞƌĂƚŝŶŐĂĨĂǀŽƵƌĂďůĞĞŶǀŝƌŽŶŵĞŶƚĨŽƌĐŚƌŽŶŝĐ ŵŝĐƌŽďŝĂů ĐŽůŽŶŝnjĂƚŝŽŶ ĂŶĚ ƐƵƌǀŝǀĂů͘ ǀĞŶƚŚŽƵŐŚ ŶƵŵĞƌŽƵƐ ƐƉĞĐŝĞƐ ĐĂŶ ďĞ ĨŽƵŶĚ ŝŶƚŚĞ & ĂŝƌǁĂLJƐ͕ W͘ ĂĞƌƵŐŝŶŽƐĂ ŝƐ ƵƐƵĂůůLJ ƚŚĞ ƉƌĞĚŽŵŝŶĂŶƚ ƉĂƚŚŽŐĞŶ ƉƌĞƐĞŶƚ ŝŶĂďŽƵƚϴϬй ŽĨ ĂĚƵůƚ ƉĂƚŝĞŶƚƐ;&ŝŐƵƌĞϯͿ͘ W͘ĂĞƌƵŐŝŶŽƐĂŚĂƐĂŶĞŶŽƌŵŽƵƐŐĞŶĞƚŝĐĂŶĚŵĞƚĂďŽůŝĐĨůĞdžŝďŝůŝƚLJƚŚĂƚĂůůŽǁƐŝƚƚŽĂĚĂƉƚƚŽƚŚĞ ŵŝůŝĞƵ ĂŶĚ ƉĞƌƐŝƐƚ ǁŝƚŚŝŶ ƚŚĞ ĂŝƌǁĂLJƐ ŽĨ & ƉĂƚŝĞŶƚƐ͘ DŽƌĞŽǀĞƌ͕ ƚŚĞ ŐĞŶŽƚLJƉĞƐ ĂŶĚ ƉŚĞŶŽƚLJƉĞƐŽĨƚŚĞƐƚƌĂŝŶƐƉƌĞƐĞŶƚŝŶůĂƚĞƐƚĂŐĞƐŽĨƚŚĞĚŝƐĞĂƐĞĚŝĨĨĞƌƐƵďƐƚĂŶƚŝĂůůLJĨƌŽŵƚŚŽƐĞ ƚŚĂƚ ŝŶŝƚŝĂůůLJ ĐŽůŽŶŝnjĞ ƚŚĞ ůƵŶŐƐ͘ /ƚ ŚĂƐ ďĞĞŶ ƐƵŐŐĞƐƚĞĚ ƚŚĂƚ ƚŚĞ ŵƵƚĂƚŝŽŶƐ ƚŚĂƚ ĂƉƉĞĂƌ ŝŶ ƚŚĞƐĞ ƐƚƌĂŝŶƐ ĂƌĞ ĚƵĞ ƚŽ ƐĞůĞĐƚŝŽŶ͕ ƐŝŶĐĞ ƚŚĞLJ ǁĞƌĞ ĂĚǀĂŶƚĂŐĞŽƵƐ ĨŽƌ ůŝĨĞ ǁŝƚŚŝŶ ƚŚĞ ŚŽƐƚ ;^ŵŝƚŚĞƚĂů͕͘ϮϬϬϲ͕ZĂƵĞƚĂů͕͘ϮϬϭϬͿ͘ůŵŽƐƚĂůůƚŚĞƐƚƌĂŝŶƐƚŚĂƚǁĞƌĞƐƚƵĚŝĞĚďLJ^ŵŝƚŚĞƚĂů ;^ŵŝƚŚ Ğƚ Ăů͕͘ ϮϬϬϲͿ ŚĂĚ ůŽƐƐͲŽĨͲĨƵŶĐƚŝŽŶ ŵƵƚĂƚŝŽŶƐ ŝŶ ŐĞŶĞƐ ƚŚĞ ĐŽĚĞ ĨŽƌ ĨĂĐƚŽƌƐ ƵƐĞĚ ďLJ ďĂĐƚĞƌŝĂƚŽŝŶǀĂĚĞĂŶĚŝŶũƵƌĞƚŚĞŚŽƐƚ͕ƐƵĐŚĂƐĞdžƐ͕ƚŚĞdϯ^^ŵĂƐƚĞƌƌĞŐƵůĂƚŽƌĂŶĚůĂƐZĂY^ ƚƌĂŶƐĐƌŝƉƚŝŽŶĂůƌĞŐƵůĂƚŽƌ;&ŝŐƵƌĞϯͿ͘ 

(34)

 ͲϯϭͲ  &ŝŐƵƌĞ ϯ W͘ ĂĞƌƵŐŝŶŽƐĂ ĂŶĚ &͘ Ϳ ĂĐƚĞƌŝĂů ĐŽůŽŶŝnjĂƚŝŽŶ ƉĞƌĐĞŶƚĂŐĞ ǀĞƌƐƵƐ ƉĂƚŝĞŶƚ ĂŐĞ ŐƌŽƵƉ ŽĨ ƚŚĞ ĨŝǀĞ ďĂĐƚĞƌŝĂů ƐƉĞĐŝĞƐ ĐŽŶƐŝĚĞƌĞĚ ŝŵƉŽƌƚĂŶƚ ĨƌŽŵ Ă ĐůŝŶŝĐĂů ƉŽŝŶƚ ŽĨ ǀŝĞǁ͘ ^ŽƵƌĐĞ͗ KďƐĞƌǀĂƚŽŝƌĞ EĂƚŝŽŶĂůĞ ĚĞ ůĂ DƵĐŽǀŝƐŝĚŽƐĞ͕&ƌĂŶĐĞ͘ͿW͘ĂĞƌƵŐŝŶŽƐĂĨĂĐƚŽƌƐŶĞĞĚĞĚĨŽƌĂĐƵƚĞͬĐŚƌŽŶŝĐŝŶĨĞĐƚŝŽŶĂŶĚƚŚĞĞǀŽůƵƚŝŽŶŽĨƚŚĞ ŝŶƉƵƚƐƚƌĂŝŶ͘dĂŬĞŶĨƌŽŵEŐƵLJĞŶΘ^ŝŶŐŚ;ϮϬϬϲͿ͘ 

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(35)

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