TPL3PARBAC

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Les Travaux Pratiques à l’Université Oran1-Ahmed Ben Bella

Faculté des Sciences de la Nature et de la Vie

Département de Biologie

Licence L3 Parasitologie Microbio Semestre

S1

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T.P. N°01

 Matière: Bactériologie

 Intitulé : Isolement des bactéries à partir d’un échantillon (eau, sol, air, cheveux….)

 Protocole :

 Principe: Rechercher les bactéries présente dans l'échantillon à analyser

 Méthodologie (succincte) : A partir un échantillon de sol on prépare une suspension, on prélève 1g du sol et on le met dans 9ml d'eau physiologique stérile. ensuite on

ensemence par des stries à l'aide d'une anse de platine sur gélose nutritif (non sélectif) et une gélose sélectif ( hectoen; mac conkey ou bien chapman) la gélose sélectif est choisie en fonction du germes qu'on veux rechercher et on incube à 37°C pendant 24 heures dans l'étuve.

Produits chimiques Consommable/Verrerie Petits Matériels

 Ethanol  Tube à essai

 Boite de pétrie stérile  Pipette pasteur  Gélose nutritive  Gélose Macconkey  Gélose chapman  Anse de platine  Etuve

 Bac benzen Agitateur (vortex)

 Balance de précision

T.P. N°02

 Intitulé : Purification des bactéries par des ré-isolement sur milieux sélectifs.

 Protocole :

 Principe: A partir de la boite plurimicrobienne on doit obtenir une culture pure monomicrobienne pour pouvoir identifier les bactéries présentes dans l'échantillon.  Méthodologie (succincte) : A l'aide d'une pipette pasteur, on prélève une colonie pour

l'ensemencer sur un milieu de culture. On incube à 37°C pendant 24 heures dans l'étuve.

 Ethanol  Boite de pétrie stérile

 Milieux de culture : gélose nutritive, Macconkey et chapman

 Pipette pasteur

 Etuve

 Anse de paltine  Bec bunzen

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T.P. N°03

 Intitulé : Identification des bactéries par coloration de Gram et système Api.

 Protocole :

 Principe: A partir d'une culture pure on va identifier les espèces bactériennes présentes dans l'échantillon

 Méthodologie (succincte) : Apres avoir purifié les cultures bactériennes, on fait la coloration de Gram pour différencier les Gram positifs et négatifs ce qui va nous permettre de bien choisir la galerie Api.

 Ethanol  Violet de gentiane  Lugole  Fuschine  Tube à essai  Seringue  Pipette pasteur  Boite de pétrie

 Galeries Api 20 E, Api 20NE, Api staph  Les réactifs des galeries API ( Vp1 et

VP2; TDA; JAMES, NIT1 et NIT2)

 Etuves  Vortex  Bac benzen

T.P. N°04

 Intitulé : Etude de la résistance des bactéries aux antibiotiques par antibiogramme

 Protocole :

 Principe: Etudier la sensibilité des bactéries identifié par la méthode de l'antibiogramme selon les recommandations de CLSI.

 Méthodologie (succincte) :

- A partir des échantillons identifier on prépare des suspections bactérienne

- On prélève deux ou trois bactéries pour les mettre dans 9ml d'eau physiologique pour avoir 0.5 Macfarlant.

- On ensemence par écouvillonnage des 4 cardant de la boite de pétrie contenant la gélose Mueller hinton.

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- On dépose les disques d'antibiotiques sur la surface ensemencer et on incube à 37°C pendant 24 heures dans l'étuve.

- Apres l'incubation, on calcule la zone d'inhibition à l'aide d'une règle

 Tube a essai stérile  Boite de pétrie  Eau physiologique  Gélose Mueller Hinton  Pince métallique  Disque d'antibiotique

 Etuves  Vortex