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MINISTERE DE L’ENSEIGNEMENT SUPERIEUR ET DE LA RECHERCHE SCIENTIFIQUE
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UNIVERSITE D’ABOMEY-CALAVI (UAC) -0-0-0-0-0-0-0-0-
ECOLE POLYTECHNIQUE D’ABOMEY-CALAVI (EPAC)
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DEPARTEMENT DE GENIE DE BIOLOGIE HUMAINE (GBH)
Option : Analyses biomédicales (ABM)
RAPPORT DE STAGE DE FIN DE FORMATION POUR L’OBTENTION DU DIPLOME DE LICENCE PROFESSIONNELLE
THEME :
PRESENTE PAR : HONVOU Stéphane Membres du Jury
Membre 1 : Pr LOKO Frederick Membre 2 : Dr Casimir D. AKPOVI Membre 3 : Dr ANAGO Eugénie
Tuteur de stage
MOUNIROU-DEEN Halylath Ingénieur des travaux de Laboratoire
Année académique 2015-2016 9ème Promotion
« Influence du délai d’incubation sur la qualité des résultats de glycémie et calcémie, hôpital EL -
FATEH de Porto-Novo»
Superviseur de stage Dr Casimir D. AKPOVI Maitre de Conférences des Universités (CAMES)
Réalisé et présenté par HONVOU Stéphane
Page iiREPUBLIQUE DU BENIN -0-0-0-0-0-0-0-0-
MINISTERE DE L’ENSEIGNEMENT SUPERIEUR ET DE LA RECHERCHE SCIENTIFIQUE
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UNIVERSITE D’ABOMEY CALAVI (UAC) -0-0-0-0-0-0-0-0-
ECOLE POLYTECHNIQUE D’ABOMEY-CALAVI (EPAC) -0-0-0-0-0-0-0-0-
DEPARTEMENT DE GENIE DE BIOLOGIE HUMAINE (GBH) -0-0-0-0-0-0-0-0-
DIRECTEUR : Professeur Mohamed M. SOUMANOU
DIRECTEUR ADJOINT : Professeur clément AHOUANNOU
CHEF DU DEPARTEMENT : Dr Pascal ATCHADE
Réalisé et présenté par HONVOU Stéphane
Page iiiLISTE DES ENSEIGNANTS DU DEPARTEMENT DE GENIE DE BIOLOGIE HUMAINE (GBH)
1 ABLEY Sylvestre Déontologie Médicale
2 ADOMOU Alain Physique
3 AGBANGLA Clément Génétique Moléculaire
4 AGOUA Jean Informatique
5 AHOYO Angèle Microbiologie Générale et Médicale 6 AKAKPO Huguette Education Physique et sportive
7 AKOGBETO Martin Entomologie Médicale
8 AKPOVI Casimir Biochimie, Biologie générale et Physiologie des Régulations 10 ALITONOU Guy Chimie Générale et Organique
11 ANAGO Eugénie Biochimie et Biologie Moléculaire 12 ANAGONOU Sylvère Education Physique et Sportive 13 ATCHADE Pascal Parasitologie Générale et Appliquée 14 AVLESSI Félicien Chimie Générale/Chimie Organique 15 BANKOLE Honoré Bactériologie Appliquée
16 DARBOUX Raphael Histologie Appliquée
17 DESSOUASSI Noël Biophysiques des solutions 18 DOSSEVI Lordson Techniques Instrumentales
19 DOSSOU Cyriaque Techniques d'Expression et Méthodes de Communication 20 DOUGNON Victorien Microbiologie/Méthodologie de la Recherche
21 HOUNNON Hyppolite Mathématiques
22 HOUNSOSSOU Hubert Biostatistique et Epidémiologie 22 LALLY Armel Législation et Droit du Travail
23 LOKO Frédéric Biochimie Clinique
24 LOKOSSOU Gatien Immunologie/Immuno-Pathologie
25 LOZES Evelyne
Immunologie Générale, Immuno-Pathologie et Equipements Biomédicaux
26 MASLOKONON Vincent Histologie Générale et Cellulaire
LISTE DES ENSEIGNANTS
Réalisé et présenté par HONVOU Stéphane
Page iv 28 SECLONDE Hospice Transfusion Sanguine29 SEGBO Julien Biologie Moléculaire et Biochimie
30 SENOU Maximin Histologie Appliquée
31 SOEDE Casimir Anglais
32 TOHOYESSOU Zoé Soins infirmiers
33 TOPANOU Adolphe Hématologie/Hémostase et Pharmacologie 34 YOVO Paulin Pharmacologie et Toxicologie
Réalisé et présenté par HONVOU Stéphane
Page vDEDICACE
Je dédie ce rapport de stage
A mes parents pour n’avoir cessé de me combler affectivement, financièrement, spirituellement.DEDICACE
Réalisé et présenté par HONVOU Stéphane
Page viREMERCIEMENTS
A mon père HONVOU EmmanuelPour tous les efforts fournis en ma faveur, les sacrifices faits et surtout pour m’avoir encouragé tout au long de mes études, reçois ce travail comme signe de ma reconnaissance.
A tous mes oncles en particulier mon oncle HOUESSOU Pacôme et HONVOU Parfait pour leur soutien matériel, moral et financier ayant permis de m’assurer de bonnes conditions d’étude.
A toutes mes tantes en particulier ma tante HONVOU Julie épse ODOULARO pour son soutien matériel, moral et financier ayant permis de m’assurer de bonnes conditions d’étude.
Mon superviseur de stage docteur AKPOVI D. Casimir qui, tel un père pour ses enfants, m’a toujours accordé des moments précieux de son programme chargé.
A tous les enseignants qui n’ont cessé de m’inculquer de meilleures formations et de me transmettre leur savoir-faire.0
A monsieur DANSOU Houssou, Chef du service du laboratoire d’analyse biomédicale de l’hôpital EL-FATEH de Porto-Novo, pour m’avoir accueilli et transmis sans retenu le fruit de son expérience et pour son soutien matériel et moral.
A Madame MOUNIROU-DEEN Halylath, plus qu’une tutrice, elle a été toujours disponible pour mes nombreuses sollicitations malgré son programme chargé ;
Au personnel du laboratoire d’analyses biomédicales de l’hôpital EL-FATEH pour l’accueil, les conseils et l’accompagnement au quotidien.
A madame ALIMI Waliyath, Responsable de la section de biochimie, pour m’avoir aidé dans les manipulations.
A tous mes camarades de promotion et mes amis qui n’ont cessé de m’encourager et de me soutenir.
Réalisé et présenté par HONVOU Stéphane
Page vii
HOMMAGES
Au Président du jury, je suis très honoré que vous acceptiez de présider le jury chargé de juger la qualité de ce rapport de stage malgré vos programmes très chargés. Vos remarques et suggestions seront prises en compte pour améliorer la qualité scientifique de ce rapport de stage.
Aux membres du jury, c’est un insigne honneur que vous nous faites en acceptant de juger ce travail. Vos remarques et suggestions seront prises en compte pour améliorer la qualité scientifique de ce rapport de stage.
HOMMAGES
Réalisé et présenté par HONVOU Stéphane
Page viiiLISTE DES ABBREVIATIONS
EPAC : Ecole Polytechnique d’Abomey-Calavi
GBH : Génie de Biologie Humaine ATP : Adénosine Triphosphate HK: Hexokinase
G-6-P: Glucose-6-Phosphate
G-6-PD : Le glucose -6-phosphate déshydrogénase ADP : Adénosine Diphosphate
G-6-PDH : Glucose -6-Phosphate Déshydrogénase CPU : Collège Polytechnique Universitaire GOD : Glucose Oxydase
POD : Peroxydase
4-AAP : 4-aminoantipyrine
OCC : Orthocrésolphtaléine Complexon
AMAI :Association Mondiale de l’Appel Islamique
LISTE DES ABREVIATIONS
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Page ixLISTE DES TABLEAUX
Tableau I : : Mode opératoire du dosage colorimétrique de la glycémie par méthode enzymatique en point final
Tableau II : Mode opératoire de dosage du calcium total par méthode colorimétrique Tableau III : Taux de décomposition de la quinoneimine par minute d’incubation
Tableau IV: Taux de décomposition du complexe OCC-Calcium par minute d’incubation
LISTE DES FIGURES
Figure 1: Variation de la concentration de glycémie en fonction du temps d’incubation Figure 2 : Variation de la concentration de la calcémie en fonction du temps
LISTE DES TABLEAUX ET FIGURES
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Page xRESUME
Les questions de concordance, de fiabilité et de justesse des résultats générés des paramètres biochimiques dépendent du respect de l’étape pré-analytique mais aussi du protocole du paramètre à doser. L’objectif fixé pour cette étude est d’évaluer l’influence du délai d’incubation sur la qualité des résultats de glycémie et de calcémie. En effet, la glycémie et la calcémie sont déterminées respectivement par une méthode enzymatique et une méthode colorimétrique. Chaque procédure de dosage est décrite dans le protocole prévu pour le dosage. A la fin de la démarche procédurale, il est souvent indiqué les conditions et le délai d’incubation à respecter. La question qu’on peut se poser est de savoir si le non-respect du délai d’incubation fausse le résultat du dosage. Pour examiner cette question, nous avons choisi le dosage du glucose et du calcium sanguin. La méthode de Trinder, une méthode enzymatique en point finale, est utilisée pour le glucose et la méthode colorimétrique à l’orthocrésolphtaléine pour le calcium. Vingt prélèvements différents ont été utilisés pour chaque paramètre. Les résultats ont montré une diminution significative de la concentration de la glycémie après quatre (4) heures d’incubation comparée au temps d’incubation renseigné par le protocole qui est de 10 min. Le dosage de la calcémie a montré une baisse significative après 30 min d’incubation et comparée aux 2 min recommandées. Nos résultats suggèrent qu’il est important de respecter le temps d’incubation prévu par le protocole et de ne pas trop s’écarter du délai d’incubation recommandé dans les manuels de procédure.
Mots clés : fiabilité ; Pré-analytique ; Incubation ;
RESUME
Réalisé et présenté par HONVOU Stéphane
Page xiABSTRACT
The concordance, reliability and accuracy of the results generated by the biochemical parameters depend on respecting the pre-analytical step but also on the protocol of the parameter to be assayed. The objective of this study is to assess the influence of the incubation time on the quality of glycaemia and calcemia results. Indeed, glycaemia are determined by an enzymatic method and calcemia by colorimetric method . Each assay procedure is described in the protocol provided for assay.Where the conditions and the incubation time to be observed are often indicated. The question that can be asked is whether the failure to observe the incubation period modify the result of the assay. To address this issue, we chose the blood glucose and calcium assays. The Trinder method, an end point enzymatic method, is used for the glucose and the orthocresolphthalein colorimetric method for the calcemia. Twenty different samples were used for each parameter. The results showed a significant decrease in blood glucose concentration after four (4) hours incubation compared to the incubation time indicated by the protocol which is 10 min. The calcemia showed a significant decrease after 30 min of incubation and compared to 2 min incubation. Our results showed the importance to respect the incubation time recommended in the procedural handbooks.
Keywords: fiability; pre-analytical; incubation
ABSTRACT
Réalisé et présenté par HONVOU Stéphane
Page xii SOMMAIREIntroduction
1-Première Partie : Synthèse Bibliographique 1.1 Dosage de la glycémie
1.2 Dosage de la calcémie
2-Deuxième partie Cadre, Matériel et Méthodes d’étude 2.1 Cadre d’étude
2.2 Matériel d’étude 2.3 Méthodes d’étude
3-Troisième Partie Résultats et Commentaires 3.1 Résultats
3.2 Commentaires
Conclusion et Suggestions Références
Table des matières
SOMMAIRE
Réalisé et présenté par HONVOU Stéphane
Page 1INTRODUCTION
Réalisé et présenté par HONVOU Stéphane
Page 2 ne dépend pas uniquement d’une préparation dans les règles de l’art de la paillasse de manipulation mais aussi du respect du protocole correspondant au paramètre à doser (Togni et al, 2002). Pour cela, il est important avant toute manipulation de faire une lecture attentive du protocole : schématisation des étapes opératoires, organisation dans le temps (DRZEVIECKI- RENARD et GENSSE, 2006). Le respect des conditions d’incubation et la lecture au spectrophotomètre à la longueur d’onde indiquée par le protocole. Le respect du délai d’incubation s’avère indispensable pour la validation des résultats. C’est ce que vise la présente étude intitulée : « Influence du délai d’incubation sur la qualité des résultats de glycémie et calcémie, hôpital EL -FATEH de Porto-Novo». L’hypothèse formulée pour cette étude est que le nom respect du temps d’incubation fausse le résultat du dosage. Le défi est de réduire autant que possible le niveau d’inexactitude, en tenant compte des limites de nos systèmes d’analyses.L’objectif général de la présente étude est d’évaluer l’impact du temps d’incubation sur les résultats de la glycémie et de calcémie.
Plus spécifiquement, il s’agit de :
Doser la glycémie et la calcémie suivant le temps d’incubation prévu par leur protocole
Doser la glycémie et la calcémie suivant des temps d’incubations élevés.
Comparer les résultats de l’élévation des temps d’incubation aux résultats normaux.
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Page 3PREMIERE PARTIE:SYNTHESE
BIBLIOGAPHIQUE
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Page 4 1. Synthèse Bibliographique1.1 DOSAGE DE LA GLYCEMIE 1.1.1. Le Glucose
Le glucose est le principal sucre de l’organisme (Sidi Siby, 2008). C’est lui qui apporte l’énergie à la plupart des cellules. Il obéit à une régulation très précise qui fait que sa concentration reste constante alors même que les apports alimentaires sont discontinus et sa consommation variable dépendant pour une bonne part des efforts du patient. Cette régulation très précise peut être altérée au cours de certaines maladies (Sidi Siby, 2008). La glycémie à jeun permet le dépistage du diabète. Chez l’adulte les valeurs normales sont entre 0,6 et 1,10 g/l soit. On parle de diabète quand deux glycémies à jeûn sont retrouvées supérieures à 1,26g/l. Le déficit de fonction de l’insuline conduit généralement au diabète. Les hyperglycémies (glycémie > 1,26 g/l) sont dues, au diabète insulinodépendant ou non insulinodépendant, les maladies pancréatiques (pancréatite aiguë ou chronique), les maladies endocriniennes (le phéochromocytome, l’hypercorticisme, la corticothérapie, et l’hypothyroïdie). Les hypoglycémies (glycémie< 0.6g/l) sont dues à un surdosage de médicaments hypoglycémiants chez le diabétique, la malnutrition ou un jeûne prolongé, une sécrétion par l’organisme d’un excès d’insuline (insulinome, polyadénomatose), l’insuffisance endocrinienne (surrénale, hypophysaire), et à un trouble hépatique (hépatite aiguë, intoxication alcoolique aiguë).
1.1.2. METHODES DE DOSAGE DU GLUCOSE
Les premières mesures de concentration de glucose ont été effectuées à l’aide de méthode de réduction du cuivre (telles que Folin-wu et Somogyi-Nelson) .Le manque de spécificité des techniques de réduction du cuivre a conduit au développement de procédures quantitatives qui utilisent les enzymes telles que : l’hexokinase et la glucose oxydase. Le test au glucose incorporé au disque de réactif au Méthyle 8 est une version modifiée de la méthode à l’hexokinase qui a été proposée comme base pour la méthode de référence en glucose (Sidi Siby 2008) .La réaction de glucose avec l’adénosine triphosphate (ATP), catalysée par l’hexokinase (HK), produit du glucose-6-phosphate (G-6-P) et de l’adénosine diphosphate (ADP). Le glucose -6-phosphate déshydrogénase (G-6-PDH).
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Page 51.2 Dosage de la Calcémie 1.2.1 Le calcium
Le calcium est présent pour 99% dans le squelette (os et dents) sous forme de cristaux d'hydroxyaptite (journal des femmes santé octobre 2016). Le 1% restant a un rôle de cofacteur comme activateur de la coagulation sanguine, de l'excitabilité neuromusculaire et des phénomènes de sécrétion. Le calcium entre dans l'organisme au niveau de l'intestin et va vers les organes qui ont en besoin grâce au sang. Il est indispensable à l'organisme et est impliqué notamment dans les phénomènes de coagulation sanguine et de physiologie musculaire (journal des femmes santé octobre 2016). Il entre également dans la composition des os et des dents. Les valeurs normales de la calcémie varient en général entre 81 et 104 mg/l. L'hypocalcémie, baisse de la concentration sanguine en calcium, est souvent en rapport avec une carence en vitamine D, et génère des crampes ou de la tétanie. Dans le cas contraire, c'est l'hypercalcémie qui peut se manifester par une fatigue, perte d'appétit, une pâleur, de vomissements, une soif et des pertes urinaires augmentées.
Le dosage du calcium dans le sang, la calcémie, permet de détecter des dysfonctionnements de la fonction rénale, mais aussi des syndromes de malabsorption. Ce dosage est aussi souvent prescrit pour suivre l'évolution de métastases dans un cancer connu (journal des femmes santé octobre 2016).
1.2.2 METHODES DE DOSAGE DE LA CALCEMIE
La calcémie est principalement dosé par des techniques colorimétriques à l’ortho- crésolphtaléine, au bleu de méthyle thymol ou à l’arsenazo III.la spectrophotométrie d’émission ou d’absorption atomique sont devenues des techniques anecdotiques bien que cette dernière soit la méthode de référence (Annales de biochimie clinique, vol 61, numéro 4, juillet 2003).
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Page 6DEUXIEME PARTIE : MATERIEL ET
METHODE D’ETUDE
Réalisé et présenté par HONVOU Stéphane
Page 7 2. Cadre, Matériel et Méthodes2.1. Cadre d’étude
Le cadre d’étude a regroupé le cadre institutionnel où la formation nous est donnée jusqu’en licence professionnelle et le cadre technique où les stages sont effectués.
2.1.1. Cadre institutionnel
Actuellement appelé Ecole Polytechnique d’Abomey-Calavi (EPAC), le Collège Polytechnique Universitaire (CPU) a été créé en février 1977 pour répondre à un besoin de formation technique au niveau de l’enseignement supérieur. Les évolutions de l’environnement, notamment les progrès en matière technologique, ont amené les autorités à engager des réformes en vue de prendre en compte ces avancées et faciliter l’actualisation des enseignements dispensés. C’est dans ce cadre que la dénomination CPU a été modifiée en EPAC. L’EPAC est composée de 02 secteurs : le secteur industriel et le secteur biologique. Le secteur industriel comprend les départements de: Génie Civil, Génie Informatique et Télécommunication, Génie Mécanique et Energétique, Génie Electrique et Génie Bio Médicale. Le secteur biologique comprend les départements de Génie d’Imagerie Médicale et Radiobiologie, Génie de l’Environnement, Production et Santé Animale, Génie de Technologie Alimentaire et Génie de Biologie Humaine (GBH) où la formation nous est donnée. Ce département de GBH délivre actuellement le diplôme de Licence Professionnelle, Technicien Supérieur Biologiste. L’actuel Chef Département est Docteur AKPOVI D.
Casimir, Maître-Conférence des universités/CAMES, enseignant de Biochimie, de Biologie et de Physiologie des Régulations au département de GBH/EPAC.
2.1.2. Cadre technique
Seront abordés respectivement à ce niveau la situation géographique et historique de l’hôpital EL-FATEH de Porto-Novo, la situation et la présentation ainsi que les équipements du service de laboratoire d’analyses biomédicales respectivement.
2.1.3. Situation géographique et historique de l’hôpital EL-FATEH de Porto-Novo
L’hôpital El-FATEH est un centre hospitalier privé construit par l’Association Mondiale de l’Appel Islamique (AMAI) au BENIN en 1969 .Inauguré par le général Mathieu KEREKOU,
Réalisé et présenté par HONVOU Stéphane
Page 8 de l’Ecole Primaire Publique d’Akonabouè.Le centre de santé El-Fateh est composé de deux bâtiments. Le premier bâtiment est une clinique dans laquelle il y a une salle de prélèvement, la chirurgie, cardiologie, pédiatrie, stomatologie etc. Le second bâtiment, beaucoup plus grand que le premier comporte différents service que sont : l’administration, les urgences, la pédiatrie, la médecine, la maternité, la chirurgie, le bloc opératoire, la néonatalogie, la radiologie, la pharmacie, la gynécologie obstétricienne, le laboratoire d’analyse, une mosquée une blanchisserie etc.
2.1.4. Situation et présentation du service de laboratoire
Le laboratoire de l’hôpital El-FATEH est situé derrière l’administration à côté du bloc opératoire à gauche de la néonatologie .C’est une salle non compartimentée à l’intérieur de laquelle on trouve
Une pièce de prélèvement
Quatre (4) paillasses (Hémato-parasitologie, Sérologie, Biochimie et Bactériologie)
Le secrétariat
Un bureau pour le tirage des résultats
Une salle de garde
Une toilette
Au laboratoire est rattachée une salle, la salle 40 qui est une salle individuelle où les hommes vont prélever leur sperme.
2.1.5 Equipements du laboratoire d’ABM de l’hôpital EL-FATEH de Porto-Novo
Le laboratoire d’analyses biomédicales de l’hôpital EL-FATEH dispose de nombreux équipements tels que: un spectrophotomètre, une centrifugeuse, un vortex, un réfrigérateur, une Centrifugeuse à hématocrite un automate deux microscopes optiques, bouteille à gaz , une étuve ,un distillateur.
Réalisé et présenté par HONVOU Stéphane
Page 92.2. Matériel d’étude
2.2.1. Matériel biologique
Le matériel biologique utilisé est constitué de 20 échantillons de sang par paramètre prélevés sur tube fluoré et sur tube sec chez les patients à jeun reçus au laboratoire d’analyses biomédicales de l’hôpital EL-FATEH de Porto-Novo pour la détermination de la glycémie et de la calcémie sur la période du 10 aout 2016 au 20 septembre 2016 sans distinction de sexe, d’âge, de région.
2.2.2. Matériel léger et consommables
Le matériel léger a regroupé : cônes stériles, aiguilles de prélèvement, coton hydrophile, tubes secs stériles à usage unique, portoirs, garrots, micropipettes réglables de 10μl à 100μl et de 100μl à 1000μl, gants stériles à usage unique, de semi micro-cuves (pour spectrophotomètre : trajet optique 1 cm), de poubelles de sécurité, de l’eau de javel à 240 dilué au 1/10, de savon liquide antiseptique, de cahiers de paillasse, blouse etc.
2.2.3. Réactifs utilisés
Il s’agit du réactif Cromatest R (LINEAR CHEMICALS SSL Barcelona Spain) utilisé pour le dosage de la glycémie par méthode enzymatique et la calcémie par la méthode
colorimétrique directe, d’un sérum de contrôle commercialisé.
2.2.4. Matériel lourd
Le matériel lourd utilisé est constitué d’une centrifugeuse Rotina® 35,d’un spectrophotomètre d’absorption moléculaire, d’un réfrigérateur et d’un congélateur Lierbberr®. Cette étude a été effectuée suivant la méthodologie décrite dans le sous chapitre suivant.
2. 2.5Méthode analytique 2.3.1 Phase pré-analytique
Après l’accueil des patients les prélèvements sanguins ont été réalisés dans des tubes fluorés et secs stériles par ponction veineuse au pli du coude. Ces échantillons ont été identifiés et centrifugés à 3000 tours/minutes pendant 5 minutes. La procédure suivie pour les manipulations est la suivante : porter la blouse, se laver les mains avec du savon liquide antiseptique, porter les gants, désinfecter l’aire de travail avec de l’eau de javel 24o diluée au 1/10, sortir le réactif du dosage du réfrigérateur et les ramener à température de laboratoire, mettre en marche le spectrophotomètre.
Réalisé et présenté par HONVOU Stéphane
Page 10 Il s’agit d’une enquête transversale et comparative. Au cours de l’étude transversale se fera le dosage de la glycémie et de la calcémie chez les patients à jeun et un accent sera mis sur leur temps d’incubation pour la comparaison des différents résultats.2.3.4Méthode analytique 2.3.5 Phase analytique
Dosage de la Glycémie : Dosage enzymatique en point final Principe
Dans la réaction de Trinder, le glucose est oxydé en D-gluconate par la glucose oxydase (GOD) avec formation du peroxyde d’hydrogène .En présence de la peroxydase (POD), un mélange de phénol et de 4-aminoantipyrine (4-AAP) est oxydé par le peroxyde d’hydrogène, pour former la quinoneimine de couleur rouge proportionnelle à la concentration de glucose dans l’échantillon.
Dans trois (3) tubes numérotés, on prélève :
Tableau I : Mode opératoire du dosage colorimétrique du glucose
TUBES Blanc Standard Contrôle Dosage
Mono réactif R1.
Standard Contrôle Echantillon
1000 µl _ _
1000 µl 10µl _
1000 µl _ 10 µl
1000 µl _ _ 10 µl
Mélanger et laisser les tubes 10 minutes à la température de laboratoire ou 5 minutes à 37°C.Puis lire l’absorbance (A) des échantillons et du standard à 500 nm contre le blanc réactif.
Valeurs normales : 0,70 à 1,10g/l
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Page 11Dosage de la calcémie
: Méthode colorimétrique Principe :La méthode est basée sur la variation d’absorption à la longueur d’onde du complexe formé par la liaison spécifique de l’orthocrésolphtaléine complexon (OCC), un indicateur métallochromique avec le calcium en milieu alcalin. L’intensité du chromophore formé est proportionnelle à la concentration du calcium total de l’échantillon.
PREPARATION DU REACTIF DE TRAVAIL
Réactif de travail : Mélanger 1 volume de réactif R1 à 1 volume de réactif R2.le réactif est stable 5 jours à 2-8 °C. Refermer immédiatement le réactif après dosage.
Procédure :
Pipeter dans 3 cuves
Tableau II : Mode opératoire de dosage du calcium total par méthode colorimétrique en point final
TUBES Blanc Standard Contrôle Dosage
Réactif de travail Standard
Contrôle Echantillon
1000 µl _ _
1000 µl 10µl _
1000 µl _ 10µl
1000 µl _ 10µl
Mélanger et laisser reposer les tubes 2 minutes à température ambiante, puis lire l’absorbance (A) des standards et échantillons à 570 nm contre le blanc réactifValeurs de référence : 81 à 104 mg/l
Phase post-analytique :
Rangement du matériel et désinfection de la paillasse.
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Page 12TROISIEME PARTIE : RESULTATS
ET COMMENTAIRES
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Page 13 3-Résultats et Commentaires3.1. RESULTATS
3.1.1. Résultats de la variation du dosage de la glycémie et de la calcémie en fonction du temps
0,8 0,82 0,84 0,86 0,88 0,9 0,92 0,94 0,96 0,98 1 1,02
t1:10 min t2:240 min t3:480 min t4:720 min
Figure 1 : Variation moyenne de la glycémie en fonction du temps d’incubation
t1 :10 min d’incubation ; t2 : 240 min (4h) d’incubation ; t3 480 min (8h) d’incubation ; t4 :720 min (12h) d’incubation
La courbe traduit l’évolution moyenne de la concentration de glycémie en fonction du temps.
Au temps t1 =10 min (temps d’incubation normal prévu par le protocole) on a une glycémie de 1g/l a t2=240 min cette même glycémie est à 0.98g/l et cette glycémie se retrouve à 0.92 g/l après 480 min (t3) d’incubation et 0.87g/l après 720 min (t4) d’incubation.
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Page 140 20 40 60 80
t1:2 min t2:30 min t3:60min t4:120min
Figure 2 : variation moyenne de la calcémie en fonction du temps d’incubation
t1 :2 min d’incubation ; t2 :30min d’incubation ; t3 :60 min d’incubation ; t4 :120 min d’incubation
Cette courbe traduit l’évolution moyenne de la calcémie en fonction du temps. D’après cette courbe on constate que pour une calcémie de 95g/l après 2 min d’incubation se retrouve à 90 g/l après 30 min d’incubation et 87 g/l après 60 min (1h) d’incubation. Après 120 min (2h) d’incubation cette même calcémie se retrouve à53g/l.
3.1.2 : Taux de décomposition du chromophore par minute
Tableau III : Taux de décomposition de la Quinoneimine par minute
Quinoneimine ∆t/min (E-05) p value
t1-t2 6,95 ± 3,27 -
t2-t3 18,54 ± 5,81 2,31E-09<0.05
t3-t4 26,25 ± 4,70 4,42E-05<0.05
t1 :10 min d’incubation ; t2 :240 min (4h) d’incubation ; t3 480 min (8h) d’incubation ; t4 :720 min (12h) d’incubation
Entre t1 et t2 le taux de décomposition par minute de la quinoneimine est moins considérable comparativement au taux de décomposition entre t2 et t3 qui plus considérable et plus significatif car p value=2,31E-09. De même entre t3-et t4 ce taux de décomposition est moins considérable et significatif avec p value=4,42E-05
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Page 15 Tableau IV : Tableau montrant le taux de décomposition du complexe OCC-Calcium par minuteOCC-Calcium ∆t/min p value
t1-t2 0,1121 ± 0,034 -
t2-t3 0,1778 ± 0,5035 2,41E-05<0.05 t3-t4 0,5340 ± 0,0277 8,19E-27<0.05
t1 :2 min d’incubation ; t2 :30min d’incubation ; t3 :60 min d’incubation ; t4 :120 min d’incubation
Entre t1 et t2 le taux de décomposition par minute du complexe occ-calcuim n’est pas considérable comparativement au taux de décomposition entre t2 et t3 où le taux de décomposition est significatif car p value= 2,41E-05. Mais ce taux de décomposition par minute est plus considérable et plus significatif entre t3 et t4 car p value=8,19E-27.
3.2. COMMENTAIRES
Le but de la présente étude est d’évaluer l’influence du délai d’incubation sur la qualité des résultats de glycémie et de calcémie à l’hôpital EL -FATEH de Porto-Novo. Cette étude a été réalisée sur 40 échantillons dont 20 échantillons par paramètre. Les résultats ont montré une diminution significative des concentrations de la glycémie après quatre (4) heures d’incubation comparée au temps d’incubation renseigné par le protocole qui est de 10 min (fig.1). Les résultats du dosage de la calcémie ont montré une baisse significative après 30 min d’incubation et comparée au temps normal prévu par le protocole qui est de (2 min) (fig.
2). Ces observations révèlent que le dosage du taux de glucose sanguin résiste, mieux que le dosage du calcium, à un prolongement du délai d’incubation. Le dosage du glucose est stable pendant les 2 premières heures suivant le développement de la réaction. Le délai de stabilité est moins important pour le dosage de la calcémie. La quinoneimine est le chromophore dosé dans le cas de la glycémie tandis que pour la calcémie c’est le complexe OCC-calcium. Les résultats suggèrent que la quinoneimine est beaucoup plus stable que le complexe OCC- calcium.
Réalisé et présenté par HONVOU Stéphane
Page 16CONCLUSION ET SUGGESTIONS
Réalisé et présenté par HONVOU Stéphane
Page 17CONCLUSION
En somme, cette étude a montré que les résultats ne sont plus fiables après quatre (4) heures d’incubation pour la glycémie et 30 min pour calcémie. Il est important de respecter le temps d’incubation prévu par le protocole et de ne pas trop s’écarter du délai d’incubation recommandé dans les manuels de procédure.
SUGGESTIONS
A l’endroit des autorités de l’EPAC d’améliorer les conditions d’étude que ce soit la théorie ou la pratique.
Nous encourageons les :
- Autorités du ministère de la santé publique à mettre en place un contrôle national de qualité visant à établir un protocole de validation des techniques d’analyses biomédicales au Bénin;
- Biotechnologistes des laboratoires d’analyses biomédicales à divers niveaux de respecter les protocoles de dosage.
Réalisé et présenté par HONVOU Stéphane
Page 181
: Système de Gestion de la qualité au Laboratoire Manuel complet - Version préliminaire©Organisation mondiale de la Santé, 2009
2 : G. Togni, C. Volken, G. Sabo, Préanalytique, Forum Med Suisse No 6, 6 février 2002.
3 : S. Drzeviecki-renard et M. Gensse, La qualité en biochimie-précision, 2006.
4 : Mr Sidi Siby, Etude de la variation des paramètres biochimiques et hématologiques Année Universitaire 2007-2008
5 : Journal des femmes santé octobre 2016 disponible sur www.journaldesfemmes.com 6 : Annales de biochimie clinique, vol 61,numéro 4, juillet 2003 disponible sur www.jle.com
Réalisé et présenté par HONVOU Stéphane
Page 19 TABLE DES MATIERESLISTE DES ENSEIGNANTS DU DEPARTEMENT DE GENIE DE BIOLOGIE HUMAINE
(GBH………iii
DEDICACES………...v
REMERIEMENTS………...vi
LISTE DES ABREVIATIONS, SIGLES ET SYMBOLES……….………vii
LISTE DES TABLEAUX ET FIGURES………viii
RESUME………..ix
ABSTRACT………..………...x
SOMMAIRE...….xi
Introduction ………...1
Première Partie : Synthèse Bibliographique………..………...3
1.1 Dosage de la glycémie………..………...4
1.2 Dosage de la calcémie………...………5
Deuxième Partie : Cadres, Matériel et Méthodes d’étude………..….6
2.1 Cadre d’étude ……….……….7
2.2 Matériel d’étude……….……...9
2.3 Méthodes d’étude………...10
Troisième Partie : Résultats et Commentaires………...…12
3.1 Résultats………...13
3.2 Commentaires……….17
Conclusion et Suggestions………...18
Références ………..19
Table des matières………...20
