Hémogramme : avancées actuelles.

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(1)UNIVERSITE MOHAMMED V - SOUISSI FACULTE DE MEDECINE ET DE PHARMACIE -RABAT-. ANNEE: 2013. THESE N°:35. HEMOGRAMME: AVANCEES ACTUELLES THESE Présentée et soutenue publiquement le :………… PAR Mlle. Saloua ARDOUNI Né le 05-12-1987 à Casablanca. Pour l'Obtention du Doctorat en Pharmacie MOTS CLES : Hémogramme, automatisme, interprétation. MEMBRES DE JURY. Mr A. BELMEKKI Professeur d’hématologie Mr A. MASRAR Professeur d’hématologie biologique Mr A. DAMI Professeur agrégé de biochimie Mme M. NAZIH Professeur agrégé d’hématologie. PRESIDENT RAPPORTEUR. JUGES.

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(3) UNIVERSITE MOHAMMED V- SOUISSI FACULTE DE MEDECINE ET DE PHARMACIE - RABAT DOYENS HONORAIRES : 1962 – 1969 : Docteur Abdelmalek FARAJ 1969 – 1974 : Professeur Abdellatif BERBICH 1974 – 1981 : Professeur Bachir LAZRAK 1981 – 1989 : Professeur Taieb CHKILI 1989 – 1997 : Professeur Mohamed Tahar ALAOUI 1997 – 2003 : Professeur Abdelmajid BELMAHI ADMINISTRATION : Doyen : Professeur Najia HAJJAJ Vice Doyen chargé des Affaires Académiques et estudiantines Professeur Mohammed JIDDANE Vice Doyen chargé de la Recherche et de la Coopération Professeur Ali BENOMAR Vice Doyen chargé des Affaires Spécifiques à la Pharmacie Professeur Yahia CHERRAH Secrétaire Général : Mr. El Hassane AHALLAT Conservateur : Ahmed ZAHIDI PROFESSEURS : Février, Septembre, Décembre 1973 1. Pr. CHKILI Taieb. Neuropsychiatrie. Janvier et Décembre 1976 2. Pr. HASSAR Mohamed. Pharmacologie Clinique. Mars, Avril et Septembre 1980 3. Pr. EL KHAMLICHI Abdeslam 4. Pr. MESBAHI Redouane. Neurochirurgie Cardiologie. 5. Mai et Octobre 1981 6. Pr. BOUZOUBAA Abdelmajid 7. Pr. EL MANOUAR Mohamed 8. Pr. HAMANI Ahmed* 9. Pr. MAAZOUZI Ahmed Wajih 10. Pr. SBIHI Ahmed 11. Pr. TAOBANE Hamid*. Cardiologie Traumatologie-Orthopédie Cardiologie Chirurgie Cardio-Vasculaire Anesthésie –Réanimation Chirurgie Thoracique. 12. 13. 14. 15. 16. 17.. Oto-Rhino-Laryngologie Chirurgie-Cardio-Vasculaire Anatomie Chirurgie Thoracique Physiologie. Mai et Novembre 1982 Pr. ABROUQ Ali* Pr. BENOMAR M’hammed Pr. BENSOUDA Mohamed Pr. BENOSMAN Abdellatif Pr. LAHBABI ép. AMRANI Naïma. Novembre 1983 18. Pr. ALAOUI TAHIRI Kébir* 19. Pr. BALAFREJ Amina 20. Pr. BELLAKHDAR Fouad. Pneumo-phtisiologie Pédiatrie Neurochirurgie.

(4) 21. Pr. HAJJAJ ép. HASSOUNI Najia 22. Pr. SRAIRI Jamal-Eddine. Rhumatologie Cardiologie. Décembre 1984 23. Pr. BOUCETTA Mohamed* 24. Pr. EL GUEDDARI Brahim El Khalil 25. Pr. MAAOUNI Abdelaziz 26. Pr. MAAZOUZI Ahmed Wajdi 27. Pr. NAJI M’Barek * 28. Pr. SETTAF Abdellatif. Neurochirurgie Radiothérapie Médecine Interne Anesthésie -Réanimation Immuno-Hématologie Chirurgie. Novembre et Décembre 1985 29. Pr. BENJELLOUN Halima 30. Pr. BENSAID Younes 31. Pr. EL ALAOUI Faris Moulay El Mostafa 32. Pr. IHRAI Hssain * 33. Pr. IRAQI Ghali 34. Pr. KZADRI Mohamed. Cardiologie Pathologie Chirurgicale Neurologie Stomatologie et Chirurgie Maxillo-Faciale Pneumo-phtisiologie Oto-Rhino-laryngologie. Janvier, Février et Décembre 1987 35. Pr. AJANA Ali 36. Pr. AMMAR Fanid 37. Pr. CHAHED OUAZZANI Houria ép.TAOBANE 38. Pr. EL FASSY FIHRI Mohamed Taoufiq 39. Pr. EL HAITEM Naïma 40. Pr. EL MANSOURI Abdellah* 41. Pr. EL YAACOUBI Moradh 42. Pr. ESSAID EL FEYDI Abdellah 43. Pr. LACHKAR Hassan 44. Pr. OHAYON Victor* 45. Pr. YAHYAOUI Mohamed. Radiologie Pathologie Chirurgicale Gastro-Entérologie Pneumo-phtisiologie Cardiologie Chimie-Toxicologie Expertise Traumatologie Orthopédie Gastro-Entérologie Médecine Interne Médecine Interne Neurologie. Décembre 1988 46. Pr. BENHAMAMOUCH Mohamed Najib 47. Pr. DAFIRI Rachida 48. Pr. FAIK Mohamed 49. Pr. HERMAS Mohamed 50. Pr. TOLOUNE Farida*. Chirurgie Pédiatrique Radiologie Urologie Traumatologie Orthopédie Médecine Interne. Décembre 1989 Janvier et Novembre 1990 51. Pr. ADNAOUI Mohamed 52. Pr. AOUNI Mohamed 53. Pr. BENAMEUR Mohamed* 54. Pr. BOUKILI MAKHOUKHI Abdelali 55. Pr. CHAD Bouziane 56. Pr. CHKOFF Rachid 57. Pr. KHARBACH Aîcha 58. Pr. MANSOURI Fatima 59. Pr. OUAZZANI Taïbi Mohamed Réda 60. Pr. SEDRATI Omar* 61. Pr. TAZI Saoud Anas. Médecine Interne Médecine Interne Radiologie Cardiologie Pathologie Chirurgicale Urologie Gynécologie -Obstétrique Anatomie-Pathologique Neurologie Dermatologie Anesthésie Réanimation. Février Avril Juillet et Décembre 1991 62. Pr. AL HAMANY Zaîtounia. Anatomie-Pathologique.

(5) 63. 64. 65. 66. 67. 68. 69. 70. 71. 72. 73. 74. 75. 76. 77. 78. 79. 80. 81. 82.. Pr. ATMANI Mohamed* Pr. AZZOUZI Abderrahim Pr. BAYAHIA Rabéa ép. HASSAM Pr. BELKOUCHI Abdelkader Pr. BENABDELLAH Chahrazad Pr. BENCHEKROUN BELABBES Abdellatif Pr. BENSOUDA Yahia Pr. BERRAHO Amina Pr. BEZZAD Rachid Pr. CHABRAOUI Layachi Pr. CHANA El Houssaine* Pr. CHERRAH Yahia Pr. CHOKAIRI Omar Pr. FAJRI Ahmed* Pr. JANATI Idrissi Mohamed* Pr. KHATTAB Mohamed Pr. NEJMI Maati Pr. OUAALINE Mohammed* Pr. SOULAYMANI Rachida ép.BENCHEIKH Pr. TAOUFIK Jamal. Anesthésie Réanimation Anesthésie Réanimation Néphrologie Chirurgie Générale Hématologie Chirurgie Générale Pharmacie galénique Ophtalmologie Gynécologie Obstétrique Biochimie et Chimie Ophtalmologie Pharmacologie Histologie Embryologie Psychiatrie Chirurgie Générale Pédiatrie Anesthésie-Réanimation Médecine Préventive, Santé Publique et Hygiène Pharmacologie Chimie thérapeutique. Décembre 1992 83. Pr. AHALLAT Mohamed 84. Pr. BENOUDA Amina 85. Pr. BENSOUDA Adil 86. Pr. BOUJIDA Mohamed Najib 87. Pr. CHAHED OUAZZANI Laaziza 88. Pr. CHRAIBI Chafiq 89. Pr. DAOUDI Rajae 90. Pr. DEHAYNI Mohamed* 91. Pr. EL HADDOURY Mohamed 92. Pr. EL OUAHABI Abdessamad 93. Pr. FELLAT Rokaya 94. Pr. GHAFIR Driss* 95. Pr. JIDDANE Mohamed 96. Pr. OUAZZANI TAIBI Med Charaf Eddine 97. Pr. TAGHY Ahmed 98. Pr. ZOUHDI Mimoun. Chirurgie Générale Microbiologie Anesthésie Réanimation Radiologie Gastro-Entérologie Gynécologie Obstétrique Ophtalmologie Gynécologie Obstétrique Anesthésie Réanimation Neurochirurgie Cardiologie Médecine Interne Anatomie Gynécologie Obstétrique Chirurgie Générale Microbiologie. Mars 1994 99. Pr. AGNAOU Lahcen 100. Pr. AL BAROUDI Saad 101. Pr. BENCHERIFA Fatiha 102. Pr. BENJAAFAR Noureddine 103. Pr. BENJELLOUN Samir 104. Pr. BEN RAIS Nozha 105. Pr. CAOUI Malika 106. Pr. CHRAIBI Abdelmjid 107. Pr. EL AMRANI Sabah ép. AHALLAT 108. Pr. EL AOUAD Rajae 109. Pr. EL BARDOUNI Ahmed 110. Pr. EL HASSANI My Rachid 111. Pr. EL IDRISSI LAMGHARI Abdennaceur 112. Pr. EL KIRAT Abdelmajid*. Ophtalmologie Chirurgie Générale Ophtalmologie Radiothérapie Chirurgie Générale Biophysique Biophysique Endocrinologie et Maladies Métaboliques Gynécologie Obstétrique Immunologie Traumato-Orthopédie Radiologie Médecine Interne Chirurgie Cardio- Vasculaire.

(6) 113. 114. 115. 116. 117. 118. 119. 120. 121. 122. 123. 124. 125.. Pr. ERROUGANI Abdelkader Pr. ESSAKALI Malika Pr. ETTAYEBI Fouad Pr. HADRI Larbi* Pr. HASSAM Badredine Pr. IFRINE Lahssan Pr. JELTHI Ahmed Pr. MAHFOUD Mustapha Pr. MOUDENE Ahmed* Pr. OULBACHA Said Pr. RHRAB Brahim Pr. SENOUCI Karima ép. BELKHADIR Pr. SLAOUI Anas. Chirurgie Générale Immunologie Chirurgie Pédiatrique Médecine Interne Dermatologie Chirurgie Générale Anatomie Pathologique Traumatologie – Orthopédie Traumatologie- Orthopédie Chirurgie Générale Gynécologie –Obstétrique Dermatologie Chirurgie Cardio-Vasculaire. Mars 1994 126. Pr. ABBAR Mohamed* 127. Pr. ABDELHAK M’barek 128. Pr. BELAIDI Halima 129. Pr. BRAHMI Rida Slimane 130. Pr. BENTAHILA Abdelali 131. Pr. BENYAHIA Mohammed Ali 132. Pr. BERRADA Mohamed Saleh 133. Pr. CHAMI Ilham 134. Pr. CHERKAOUI Lalla Ouafae 135. Pr. EL ABBADI Najia 136. Pr. HANINE Ahmed* 137. Pr. JALIL Abdelouahed 138. Pr. LAKHDAR Amina 139. Pr. MOUANE Nezha. Urologie Chirurgie – Pédiatrique Neurologie Gynécologie Obstétrique Pédiatrie Gynécologie – Obstétrique Traumatologie – Orthopédie Radiologie Ophtalmologie Neurochirurgie Radiologie Chirurgie Générale Gynécologie Obstétrique Pédiatrie. Mars 1995 140. Pr. ABOUQUAL Redouane 141. Pr. AMRAOUI Mohamed 142. Pr. BAIDADA Abdelaziz 143. Pr. BARGACH Samir 144. Pr. BEDDOUCHE Amoqrane* 145. Pr. BENAZZOUZ Mustapha 146. Pr. CHAARI Jilali* 147. Pr. DIMOU M’barek* 148. Pr. DRISSI KAMILI Mohammed Nordine* 149. Pr. EL MESNAOUI Abbes 150. Pr. ESSAKALI HOUSSYNI Leila 151. Pr. FERHATI Driss 152. Pr. HASSOUNI Fadil 153. Pr. HDA Abdelhamid* 154. Pr. IBEN ATTYA ANDALOUSSI Ahmed 155. Pr. IBRAHIMY Wafaa 156. Pr. MANSOURI Aziz 157. Pr. OUAZZANI CHAHDI Bahia 158. Pr. RZIN Abdelkader* 159. Pr. SEFIANI Abdelaziz 160. Pr. ZEGGWAGH Amine Ali. Réanimation Médicale Chirurgie Générale Gynécologie Obstétrique Gynécologie Obstétrique Urologie Gastro-Entérologie Médecine Interne Anesthésie Réanimation Anesthésie Réanimation Chirurgie Générale Oto-Rhino-Laryngologie Gynécologie Obstétrique Médecine Préventive, Santé Publique et Hygiène Cardiologie Urologie Ophtalmologie Radiothérapie Ophtalmologie Stomatologie et Chirurgie Maxillo-faciale Génétique Réanimation Médicale.

(7) Décembre 1996 161. Pr. AMIL Touriya* 162. Pr. BELKACEM Rachid 163. Pr. BELMAHI Amin 164. Pr. BOULANOUAR Abdelkrim 165. Pr. EL ALAMI EL FARICHA EL Hassan 166. Pr. EL MELLOUKI Ouafae* 167. Pr. GAOUZI Ahmed 168. Pr. MAHFOUDI M’barek* 169. Pr. MOHAMMADINE EL Hamid 170. Pr. MOHAMMADI Mohamed 171. Pr. MOULINE Soumaya 172. Pr. OUADGHIRI Mohamed 173. Pr. OUZEDDOUN Naima 174. Pr. ZBIR EL Mehdi*. Radiologie Chirurgie Pédiatrie Chirurgie réparatrice et plastique Ophtalmologie Chirurgie Générale Parasitologie Pédiatrie Radiologie Chirurgie Générale Médecine Interne Pneumo-phtisiologie Traumatologie-Orthopédie Néphrologie Cardiologie. Novembre 1997 175. Pr. ALAMI Mohamed Hassan 176. Pr. BEN AMAR Abdesselem 177. Pr. BEN SLIMANE Lounis 178. Pr. BIROUK Nazha 179. Pr. BOULAICH Mohamed 180. Pr. CHAOUIR Souad* 181. Pr. DERRAZ Said 182. Pr. ERREIMI Naima 183. Pr. FELLAT Nadia 184. Pr. GUEDDARI Fatima Zohra 185. Pr. HAIMEUR Charki* 186. Pr. KANOUNI NAWAL 187. Pr. KOUTANI Abdellatif 188. Pr. LAHLOU Mohamed Khalid 189. Pr. MAHRAOUI CHAFIQ 190. Pr. NAZI M’barek* 191. Pr. OUAHABI Hamid* 192. Pr. SAFI Lahcen* 193. Pr. TAOUFIQ Jallal 194. Pr. YOUSFI MALKI Mounia. Gynécologie-Obstétrique Chirurgie Générale Urologie Neurologie O.RL. Radiologie Neurochirurgie Pédiatrie Cardiologie Radiologie Anesthésie Réanimation Physiologie Urologie Chirurgie Générale Pédiatrie Cardiologie Neurologie Anesthésie Réanimation Psychiatrie Gynécologie Obstétrique. Novembre 1998 195. Pr. AFIFI RAJAA 196. Pr. AIT BENASSER MOULAY Ali* 197. Pr. ALOUANE Mohammed* 198. Pr. BENOMAR ALI 199. Pr. BOUGTAB Abdesslam 200. Pr. ER RIHANI Hassan 201. Pr. EZZAITOUNI Fatima 202. Pr. KABBAJ Najat 203. Pr. LAZRAK Khalid ( M). Gastro-Entérologie Pneumo-phtisiologie Oto-Rhino-Laryngologie Neurologie Chirurgie Générale Oncologie Médicale Néphrologie Radiologie Traumatologie Orthopédie. Novembre 1998 204. Pr. BENKIRANE Majid* 205. Pr. KHATOURI ALI*. Hématologie Cardiologie.

(8) 206.. Pr. LABRAIMI Ahmed*. Anatomie Pathologique. Janvier 2000 207. Pr. ABID Ahmed* 208. Pr. AIT OUMAR Hassan 209. Pr. BENCHERIF My Zahid 210. Pr. BENJELLOUN DAKHAMA Badr.Sououd 211. Pr. BOURKADI Jamal-Eddine 212. Pr. CHAOUI Zineb 213. Pr. CHARIF CHEFCHAOUNI Al Montacer 214. Pr. ECHARRAB El Mahjoub 215. Pr. EL FTOUH Mustapha 216. Pr. EL MOSTARCHID Brahim* 217. Pr. EL OTMANYAzzedine 218. Pr. GHANNAM Rachid 219. Pr. HAMMANI Lahcen 220. Pr. ISMAILI Mohamed Hatim 221. Pr. ISMAILI Hassane* 222. Pr. KRAMI Hayat Ennoufouss 223. Pr. MAHMOUDI Abdelkrim* 224. Pr. TACHINANTE Rajae 225. Pr. TAZI MEZALEK Zoubida 226. Novembre 2000 227. Pr. AIDI Saadia 228. Pr. AIT OURHROUI Mohamed 229. Pr. AJANA Fatima Zohra 230. Pr. BENAMR Said 231. Pr. BENCHEKROUN Nabiha 232. Pr. CHERTI Mohammed 233. Pr. ECH-CHERIF EL KETTANI Selma 234. Pr. EL HASSANI Amine 235. Pr. EL IDGHIRI Hassan 236. Pr. EL KHADER Khalid 237. Pr. EL MAGHRAOUI Abdellah* 238. Pr. GHARBI Mohamed El Hassan 239. Pr. HSSAIDA Rachid* 240. Pr. LACHKAR Azzouz 241. Pr. LAHLOU Abdou 242. Pr. MAFTAH Mohamed* 243. Pr. MAHASSINI Najat 244. Pr. MDAGHRI ALAOUI Asmae 245. Pr. NASSIH Mohamed* 246. Pr. ROUIMI Abdelhadi. Neurologie Dermatologie Gastro-Entérologie Chirurgie Générale Ophtalmologie Cardiologie ²Anesthésie-Réanimation Pédiatrie Oto-Rhino-Laryngologie Urologie Rhumatologie Endocrinologie et Maladies Métaboliques Anesthésie-Réanimation Urologie Traumatologie Orthopédie Neurochirurgie Anatomie Pathologique Pédiatrie Stomatologie Et Chirurgie Maxillo-Faciale Neurologie. Décembre 2001 247. Pr. ABABOU Adil 248. Pr. AOUAD Aicha 249. Pr. BALKHI Hicham* 250. Pr. BELMEKKI Mohammed 251. Pr. BENABDELJLIL Maria 252. Pr. BENAMAR Loubna 253. Pr. BENAMOR Jouda 254. Pr. BENELBARHDADI Imane 255. Pr. BENNANI Rajae. Anesthésie-Réanimation Cardiologie Anesthésie-Réanimation Ophtalmologie Neurologie Néphrologie Pneumo-phtisiologie Gastro-Entérologie Cardiologie. Pneumophtisiologie Pédiatrie Ophtalmologie Pédiatrie Pneumo-phtisiologie Ophtalmologie Chirurgie Générale Chirurgie Générale Pneumo-phtisiologie Neurochirurgie Chirurgie Générale Cardiologie Radiologie Anesthésie-Réanimation Traumatologie Orthopédie Gastro-Entérologie Anesthésie-Réanimation Anesthésie-Réanimation Médecine Interne.

(9) 256. 257. 258. 259. 260. 261. 262. 263. 264. 265. 266. 267. 268. 269. 270. 271. 272. 273. 274. 275. 276. 277. 278. 279. 280. 281. 282. 283. 284. 285. 286. 287. 288. 289. 290. 291. 292.. Pr. BENOUACHANE Thami Pr. BENYOUSSEF Khalil Pr. BERRADA Rachid Pr. BEZZA Ahmed* Pr. BOUCHIKHI IDRISSI Med Larbi Pr. BOUHOUCH Rachida Pr. BOUMDIN El Hassane* Pr. CHAT Latifa Pr. CHELLAOUI Mounia Pr. DAALI Mustapha* Pr. DRISSI Sidi Mourad* Pr. EL HAJOUI Ghziel Samira Pr. EL HIJRI Ahmed Pr. EL MAAQILI Moulay Rachid Pr. EL MADHI Tarik Pr. EL MOUSSAIF Hamid Pr. EL OUNANI Mohamed Pr. EL QUESSAR Abdeljlil Pr. ETTAIR Said Pr. GAZZAZ Miloudi* Pr. GOURINDA Hassan Pr. HRORA Abdelmalek Pr. KABBAJ Saad Pr. KABIRI EL Hassane* Pr. LAMRANI Moulay Omar Pr. LEKEHAL Brahim Pr. MAHASSIN Fattouma* Pr. MEDARHRI Jalil Pr. MIKDAME Mohammed* Pr. MOHSINE Raouf Pr. NABIL Samira Pr. NOUINI Yassine Pr. OUALIM Zouhir* Pr. SABBAH Farid Pr. SEFIANI Yasser Pr. TAOUFIQ BENCHEKROUN Soumia Pr. TAZI MOUKHA Karim. Décembre 2002 293. Pr. AL BOUZIDI Abderrahmane* 294. Pr. AMEUR Ahmed * 295. Pr. AMRI Rachida 296. Pr. AOURARH Aziz* 297. Pr. BAMOU Youssef * 298. Pr. BELMEJDOUB Ghizlene* 299. Pr. BENBOUAZZA Karima 300. Pr. BENZEKRI Laila 301. Pr. BENZZOUBEIR Nadia* 302. Pr. BERNOUSSI Zakiya 303. Pr. BICHRA Mohamed Zakariya 304. Pr. CHOHO Abdelkrim * 305. Pr. CHKIRATE Bouchra 306. Pr. EL ALAMI EL FELLOUS Sidi Zouhair 307. Pr. EL ALJ Haj Ahmed. Pédiatrie Dermatologie Gynécologie Obstétrique Rhumatologie Anatomie Cardiologie Radiologie Radiologie Radiologie Chirurgie Générale Radiologie Gynécologie Obstétrique Anesthésie-Réanimation Neuro-Chirurgie Chirurgie-Pédiatrique Ophtalmologie Chirurgie Générale Radiologie Pédiatrie Neuro-Chirurgie Chirurgie-Pédiatrique Chirurgie Générale Anesthésie-Réanimation Chirurgie Thoracique Traumatologie Orthopédie Chirurgie Vasculaire Périphérique Médecine Interne Chirurgie Générale Hématologie Clinique Chirurgie Générale Gynécologie Obstétrique Urologie Néphrologie Chirurgie Générale Chirurgie Vasculaire Périphérique Pédiatrie Urologie. Anatomie Pathologique Urologie Cardiologie Gastro-Entérologie Biochimie-Chimie Endocrinologie et Maladies Métaboliques Rhumatologie Dermatologie Gastro-Entérologie Anatomie Pathologique Psychiatrie Chirurgie Générale Pédiatrie Chirurgie Pédiatrique Urologie.

(10) 308. 309. 310. 311. 312. 313. 314. 315. 316. 317. 318. 319. 320. 321. 322. 323. 324. 325. 326. 327. 328. 329. 330. 331. 332. 333.. Pr. EL BARNOUSSI Leila Pr. EL HAOURI Mohamed * Pr. EL MANSARI Omar* Pr. ES-SADEL Abdelhamid Pr. FILALI ADIB Abdelhai Pr. HADDOUR Leila Pr. HAJJI Zakia Pr. IKEN Ali Pr. ISMAEL Farid Pr. JAAFAR Abdeloihab* Pr. KRIOULE Yamina Pr. LAGHMARI Mina Pr. MABROUK Hfid* Pr. MOUSSAOUI RAHALI Driss* Pr. MOUSTAGHFIR Abdelhamid* Pr. MOUSTAINE My Rachid Pr. NAITLHO Abdelhamid* Pr. OUJILAL Abdelilah Pr. RACHID Khalid * Pr. RAISS Mohamed Pr. RGUIBI IDRISSI Sidi Mustapha* Pr. RHOU Hakima Pr. SIAH Samir * Pr. THIMOU Amal Pr. ZENTAR Aziz* Pr. ZRARA Ibtisam*. PROFESSEURS AGREGES : Janvier 2004 334. Pr. ABDELLAH El Hassan 335. Pr. AMRANI Mariam 336. Pr. BENBOUZID Mohammed Anas 337. Pr. BENKIRANE Ahmed* 338. Pr. BENRAMDANE Larbi* 339. Pr. BOUGHALEM Mohamed* 340. Pr. BOULAADAS Malik 341. Pr. BOURAZZA Ahmed* 342. Pr. CHAGAR Belkacem* 343. Pr. CHERRADI Nadia 344. Pr. EL FENNI Jamal* 345. Pr. EL HANCHI ZAKI 346. Pr. EL KHORASSANI Mohamed 347. Pr. EL YOUNASSI Badreddine* 348. Pr. HACHI Hafid 349. Pr. JABOUIRIK Fatima 350. Pr. KARMANE Abdelouahed 351. Pr. KHABOUZE Samira 352. Pr. KHARMAZ Mohamed 353. Pr. LEZREK Mohammed* 354. Pr. MOUGHIL Said 355. Pr. NAOUMI Asmae* 356. Pr. SAADI Nozha 357. Pr. SASSENOU ISMAIL* 358. Pr. TARIB Abdelilah*. Gynécologie Obstétrique Dermatologie Chirurgie Générale Chirurgie Générale Gynécologie Obstétrique Cardiologie Ophtalmologie Urologie Traumatologie Orthopédie Traumatologie Orthopédie Pédiatrie Ophtalmologie Traumatologie Orthopédie Gynécologie Obstétrique Cardiologie Traumatologie Orthopédie Médecine Interne Oto-Rhino-Laryngologie Traumatologie Orthopédie Chirurgie Générale Pneumophtisiologie Néphrologie Anesthésie Réanimation Pédiatrie Chirurgie Générale Anatomie Pathologique. Ophtalmologie Anatomie Pathologique Oto-Rhino-Laryngologie Gastro-Entérologie Chimie Analytique Anesthésie Réanimation Stomatologie et Chirurgie Maxillo-faciale Neurologie Traumatologie Orthopédie Anatomie Pathologique Radiologie Gynécologie Obstétrique Pédiatrie Cardiologie Chirurgie Générale Pédiatrie Ophtalmologie Gynécologie Obstétrique Traumatologie Orthopédie Urologie Chirurgie Cardio-Vasculaire Ophtalmologie Gynécologie Obstétrique Gastro-Entérologie Pharmacie Clinique.

(11) 359. 360.. Pr. TIJAMI Fouad Pr. ZARZUR Jamila. Janvier 2005 361. Pr. ABBASSI Abdellah 362. Pr. AL KANDRY Sif Eddine* 363. Pr. ALAOUI Ahmed Essaid 364. Pr. ALLALI Fadoua 365. Pr. AMAR Yamama 366. Pr. AMAZOUZI Abdellah 367. Pr. AZIZ Noureddine* 368. Pr. BAHIRI Rachid 369. Pr. BARKAT Amina 370. Pr. BENHALIMA Hanane 371. Pr. BENHARBIT Mohamed 372. Pr. BENYASS Aatif 373. Pr. BERNOUSSI Abdelghani 374. Pr. BOUKLATA Salwa 375. Pr. CHARIF CHEFCHAOUNI Mohamed 376. Pr. DOUDOUH Abderrahim* 377. Pr. EL HAMZAOUI Sakina 378. Pr. HAJJI Leila 379. Pr. HESSISSEN Leila 380. Pr. JIDAL Mohamed* 381. Pr. KARIM Abdelouahed 382. Pr. KENDOUSSI Mohamed* 383. Pr. LAAROUSSI Mohamed 384. Pr. LYAGOUBI Mohammed 385. Pr. NIAMANE Radouane* 386. Pr. RAGALA Abdelhak 387. Pr. SBIHI Souad 388. Pr. TNACHERI OUAZZANI Btissam 389. Pr. ZERAIDI Najia. Chirurgie Générale Cardiologie. Chirurgie Réparatrice et Plastique Chirurgie Générale Microbiologie Rhumatologie Néphrologie Ophtalmologie Radiologie Rhumatologie Pédiatrie Stomatologie et Chirurgie Maxillo Faciale Ophtalmologie Cardiologie Ophtalmologie Radiologie Ophtalmologie Biophysique Microbiologie Cardiologie Pédiatrie Radiologie Ophtalmologie Cardiologie Chirurgie Cardio-vasculaire Parasitologie Rhumatologie Gynécologie Obstétrique Histo-Embryologie Cytogénétique Ophtalmologie Gynécologie Obstétrique. AVRIL 2006 423. Pr. ACHEMLAL Lahsen* 424. Pr. AFIFI Yasser 425. Pr. AKJOUJ Said* 426. Pr. BELGNAOUI Fatima Zahra 427 Pr. BELMEKKI Abdelkader* 428. Pr. BENCHEIKH Razika 429 Pr. BIYI Abdelhamid* 430. Pr. BOUHAFS Mohamed El Amine 431. Pr. BOULAHYA Abdellatif* 432. Pr. CHEIKHAOUI Younes 433. Pr. CHENGUETI ANSARI Anas 434. Pr. DOGHMI Nawal 435. Pr. ESSAMRI Wafaa 436. Pr. FELLAT Ibtissam 437. Pr. FAROUDY Mamoun 438. Pr. GHADOUANE Mohammed* 439. Pr. HARMOUCHE Hicham 440. Pr. HANAFI Sidi Mohamed*. Rhumatologie Dermatologie Radiologie Dermatologie Hématologie O.R.L Biophysique Chirurgie - Pédiatrique Chirurgie Cardio – Vasculaire Chirurgie Cardio – Vasculaire Gynécologie Obstétrique Cardiologie Gastro-entérologie Cardiologie Anesthésie Réanimation Urologie Médecine Interne Anesthésie Réanimation.

(12) 441 Pr. IDRISS LAHLOU Amine 442. Pr. JROUNDI Laila 443. Pr. KARMOUNI Tariq 444. Pr. KILI Amina 445. Pr. KISRA Hassan 446. Pr. KISRA Mounir 447. Pr. KHARCHAFI Aziz* 448. Pr. LAATIRIS Abdelkader* 449. Pr. LMIMOUNI Badreddine* 450. Pr. MANSOURI Hamid* 451. Pr. NAZIH Naoual 452. Pr. OUANASS Abderrazzak 453. Pr. SAFI Soumaya* 454. Pr. SEKKAT Fatima Zahra 455. Pr. SEFIANI Sana 456. Pr. SOUALHI Mouna 457. Pr. TELLAL Saida* 458. Pr. ZAHRAOUI Rachida. Microbiologie Radiologie Urologie Pédiatrie Psychiatrie Chirurgie – Pédiatrique Médecine Interne Pharmacie Galénique Parasitologie Radiothérapie O.R.L Psychiatrie Endocrinologie Psychiatrie Anatomie Pathologique Pneumo – Phtisiologie Biochimie Pneumo – Phtisiologie. Octobre 2007 458. Pr. LARAQUI HOUSSEINI Leila 459. Pr. EL MOUSSAOUI Rachid 460. Pr. MOUSSAOUI Abdelmajid 461. Pr. LALAOUI SALIM Jaafar * 462. Pr. BAITE Abdelouahed * 463. Pr. TOUATI Zakia 464. Pr. OUZZIF Ez zohra * 465. Pr. BALOUCH Lhousaine * 466. Pr. SELKANE Chakir * 467. Pr. EL BEKKALI Youssef * 468. Pr. AIT HOUSSA Mahdi * 469. Pr. EL ABSI Mohamed 470. Pr. EHIRCHIOU Abdelkader * 471. Pr. ACHOUR Abdessamad * 472. Pr. TAJDINE Mohammed Tariq* 473. Pr. GHARIB Noureddine 474. Pr. TABERKANET Mustafa * 475. Pr. ISMAILI Nadia 476. Pr. MASRAR Azlarab 477. Pr. RABHI Monsef * 478. Pr. MRABET Mustapha * 479. Pr. SEKHSOKH Yessine * 480. Pr. SEFFAR Myriame 481. Pr. LOUZI Lhoussain * 482. Pr. MRANI Saad * 483. Pr. GANA Rachid 484. Pr. ICHOU Mohamed * 485. Pr. TACHFOUTI Samira 486. Pr. BOUTIMZINE Nourdine 487. Pr. MELLAL Zakaria 488. Pr. AMMAR Haddou * 489. Pr. AOUFI Sarra 490. Pr. TLIGUI Houssain 491. Pr. MOUTAJ Redouane *. Anatomie pathologique Anesthésie réanimation Anesthésier réanimation Anesthésie réanimation Anesthésie réanimation Cardiologie Biochimie Biochimie Chirurgie cardio vasculaire Chirurgie cardio vasculaire Chirurgie cardio vasculaire Chirurgie générale Chirurgie générale Chirurgie générale Chirurgie générale Chirurgie plastique Chirurgie vasculaire périphérique Dermatologie Hématologie biologique Médecine interne Médecine préventive santé publique et hygiène Microbiologie Microbiologie Microbiologie Virologie Neuro chirurgie Oncologie médicale Ophtalmologie Ophtalmologie Ophtalmologie ORL Parasitologie Parasitologie Parasitologie.

(13) 492. Pr. ACHACHI Leila 493. Pr. MARC Karima 494. Pr. BENZIANE Hamid * 495. Pr. CHERKAOUI Naoual * 496. Pr. EL OMARI Fatima 497. Pr. MAHI Mohamed * 498. Pr. RADOUANE Bouchaib* 499. Pr. KEBDANI Tayeb 500. Pr. SIFAT Hassan * 501. Pr. HADADI Khalid * 502. Pr. ABIDI Khalid 503. Pr. MADANI Naoufel 504. Pr. TANANE Mansour * 505. Pr. AMHAJJI Larbi *. Pneumo phtisiologie Pneumo phtisiologie Pharmacie clinique Pharmacie galénique Psychiatrie Radiologie Radiologie Radiothérapie Radiothérapie Radiothérapie Réanimation médicale Réanimation médicale Traumatologie orthopédie Traumatologie orthopédie. Mars 2009 Pr. BJIJOU Younes Pr. AZENDOUR Hicham * Pr. BELYAMANI Lahcen* Pr. BOUHSAIN Sanae * Pr. OUKERRAJ Latifa Pr. LAMSAOURI Jamal * Pr. MARMADE Lahcen Pr. AMAHZOUNE Brahim* Pr. AIT ALI Abdelmounaim * Pr. BOUNAIM Ahmed * Pr. EL MALKI Hadj Omar Pr. MSSROURI Rahal Pr. CHTATA Hassan Toufik * Pr. BOUI Mohammed * Pr. KABBAJ Nawal Pr. FATHI Khalid Pr. MESSAOUDI Nezha * Pr. CHAKOUR Mohammed * Pr. DOGHMI Kamal * Pr. ABOUZAHIR Ali * Pr. ENNIBI Khalid * Pr. EL OUENNASS Mostapha Pr. ZOUHAIR Said* Pr. L’kassimi Hachemi* Pr. AKHADDAR Ali * Pr. AIT BENHADDOU El hachmia Pr. AGADR Aomar * Pr. KARBOUBI Lamya Pr. MESKINI Toufik Pr. KABIRI Meryem Pr. RHORFI Ismail Abderrahmani * Pr. BASSOU Driss * Pr. ALLALI Nazik Pr. NASSAR Ittimade Pr. HASSIKOU Hasna * Pr. AMINE Bouchra Pr. BOUSSOUGA Mostapha * Pr. KADI Said *. Anatomie Anesthésie Réanimation Anesthésie Réanimation Biochimie Cardiologie Chimie Thérapeutique Chirurgie Cardio-vasculaire Chirurgie Cardio-vasculaire Chirurgie Générale Chirurgie Générale Chirurgie Générale Chirurgie Générale Chirurgie Vasculaire Périphérique Dermatologie Gastro-entérologie Gynécologie obstétrique Hématologie biologique Hématologie biologique Hématologie clinique Médecine interne Médecine interne Microbiologie Microbiologie Microbiologie Neuro-chirurgie Neurologie Pédiatrie Pédiatrie Pédiatrie Pédiatrie Pneumo-phtisiologie Radiologie Radiologie Radiologie Rhumatologie Rhumatologie Traumatologie orthopédique Traumatologie orthopédique.

(14) Octobre 2010 Pr. AMEZIANE Taoufiq* Pr. ERRABIH Ikram Pr. CHERRADI Ghizlan Pr. MOSADIK Ahlam Pr. ALILOU Mustapha Pr. KANOUNI Lamya Pr. EL KHARRAS Abdennasser* Pr. DARBI Abdellatif* Pr. EL HAFIDI Naima Pr. MALIH Mohamed* Pr. BOUSSIF Mohamed* Pr. EL MAZOUZ Samir Pr. DENDANE Mohammed Anouar Pr. EL SAYEGH Hachem Pr. MOUJAHID Mountassir* Pr. RAISSOUNI Zakaria* Pr. BOUAITY Brahim* Pr. LEZREK Mounir Pr. NAZIH Mouna* Pr. LAMALMI Najat Pr. ZOUAIDIA Fouad Pr. BELAGUID Abdelaziz Pr. DAMI Abdellah* Pr. CHADLI Mariama* ENSEIGNANTS SCIENTIFIQUES PROFESSEURS 1. Pr. ABOUDRAR Saadia 2. Pr. ALAMI OUHABI Naima 3. Pr. ALAOUI KATIM 4. Pr. ALAOUI SLIMANI Lalla Naïma 5. Pr. ANSAR M’hammed 6. Pr. BOUKLOUZE Abdelaziz 7. Pr. BOUHOUCHE Ahmed 8. Pr. BOURJOUANE Mohamed 9. Pr. CHAHED OUAZZANI Lalla Chadia 10. Pr. DAKKA Taoufiq 11. Pr. DRAOUI Mustapha 12. Pr. EL GUESSABI Lahcen 13. Pr. ETTAIB Abdelkader 14. Pr. FAOUZI Moulay El Abbes 15. Pr. HMAMOUCHI Mohamed 16. Pr. IBRAHIMI Azeddine 17. Pr. KABBAJ Ouafae 18. Pr. KHANFRI Jamal Eddine 19. Pr. REDHA Ahlam 20. Pr. OULAD BOUYAHYA IDRISSI Med 21. Pr. TOUATI Driss 22. Pr. ZAHIDI Ahmed 23. Pr. ZELLOU Amina * Enseignants Militaires. Médecine interne Gastro entérologie Cardiologie Anesthésie Réanimation Anesthésie réanimation Radiothérapie Radiologie Radiologie Pédiatrie Pédiatrie Médecine aérotique Chirurgie plastique et réparatrice Chirurgie pédiatrique Urologie Chirurgie générale Traumatologie orthopédie ORL Ophtalmologie Hématologie Anatomie pathologique Anatomie pathologique Physiologie Biochimie chimie Microbiologie. Physiologie Biochimie Pharmacologie Histologie-Embryologie Chimie Organique et Pharmacie Chimique Applications Pharmaceutiques Génétique Humaine Microbiologie Biochimie Physiologie Chimie Analytique Pharmacognosie Zootechnie Pharmacologie Chimie Organique Biochimie Biologie Biochimie Chimie Organique Pharmacognosie Pharmacologie Chimie Organique.

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(16) A TOUTE LA FAMILLE ARDOUNI A TOUTE LA FAMILLE BOUCHAKOUR.

(17) A MES MEILLEURS AMI(E)S SPECIALEMENT Nadia ELAIBOUD Sara FEKKAR ET Meriem BELHOUARI A TOUT LES AMIS PHARMACIENS DE LA PROMOTION DE 2008 / 2009 DE LA FACULTE DE MEDECINE ET DE PHARMACIE DE RABAT..

(18)

(19) A NOTRE MAITRE PRESIDENT DE THESE Monsieur le Professeur A. BELEMEKKI Professeur D’hématologie Vous nous avez accordé un immense honneur et un grand privilège en acceptant la présidence de notre jury de thèse. Nous vous remercions aussi pour la gentillesse et La spontanéité avec lesquelles vous avez bien voulu diriger Ce travail. Nous vous prions, cher Maître, D’accepter dans ce travail le témoignage de notre haute considération, de notre profonde reconnaissance Et de notre sincère respect..

(20) A NOTRE MAITRE ET RAPPORTEUR DE THESE Monsieur le Professeur A.MASRAR Professeur d’hématologie Nous vous remercions vivement de nous avoir fait L’honneur de diriger ce travail sans jamais épargner aucun effort pour nous guider dans le chemin sinueux de la recherche. Sans votre Clairvoyance, vos corrections méticuleuses, ce travail n’aurait pu être préparé et dirigé dans des conditions favorables. Nous n’oublierons jamais la gentillesse et la disponibilité Dont vous avez fait preuve en nous accueillant en toute Circonstances. Veuillez cher Maître, trouvez dans ce travail l’expression de notre grande estime et nos sentiments les plus sincères..

(21) A NOTRE MAITRE ET JUGE DE THESE Monsieur le professeur A. DAMI Professeur agrégé de biochimie. C’est pour nous un grand plaisir de vous compter parmi Le jury de cette thèse. Nous tenons à vous témoigner notre profonde Reconnaissance pour avoir aimablement accepté de Juger ce travail Veuillez croire à notre gratitude et à notre respectueuse considération..

(22) A NOTRE MAITRE ET JUGE DE THESE Madame le Professeur M. NAZIH Professeur agrégé d’hématologie Nous tenons à vous exprimer toute gratitude Pour l’honneur que vous nous faites en vous Intéressant à ce travail et acceptant de le juger. Nous vous exprimons nos plus vifs Remerciements et nous vous prions de trouver, ici Le témoignage de notre reconnaissance et notre Profond respect..

(23) SOMMAIRE Introduction………………………………………………………..…………….1 Chapitre 1 : HISTORIQUE I- HEMATIMETRIE MANUELLE .............................................................................. 2 I.1 - DEFINITION DE L’HEMOGRAMME ..................................................................... 2 I.1.1-Prélèvement…………………………………………………………….… 2 I.1.2 - Examen quantitatif.……………………………………………………….3 I.1.3- Examen qualitatif ……………………………………………………...…7 I.1.4- Le calcul des indices érythrocytaires ......................................................... 20 II - L’AUTOMATISATION..................................................................................... 21 II.1 - HISTORIQUE ET PROGRES DE L’AUTOMATISATION ........................................ 21 CHAPITRE 2 : PRINCIPE DE MESURE DES AUTOMATES I - ANALYSE PAR IMPEDANCE ............................................................................. 25 II- ANALYSE PAR DIFFRACTION LASER .............................................................. 26 III- ANALYSE PAR CYTOCHIMIE ........................................................................ 26 III.1 - REACTION DES PEROXYDASES .................................................................... 26 IV- ANALYSE PAR UN COURANT A HAUTE FREQUENCE......................................... 27 V- LYSE CHIMIQUE ............................................................................................... 27 VI-METHODES DE MESURE : CYTOMETRIE ET LASER ASSOCIES A L’IMPEDANCE OU A LA CYTOCHIMIE .......................................................................................... 28. 1 - SYSMEX XE-5000 ........................................................................................... 28 2 - BECKMAN COULTER LH 780 ........................................................................... 31.

(24) 3 - ABBOTT CELL-DYN SAPPHIRE ...................................................................... 34 4 - SIEMENS ADVIA 2120I ..................................................................................... 38 VII - APPLICATION A LA NUMERATION DES ELEMENTS DU SANG ...................... 41 1 - ANALYSE DE LA LIGNEE ROUGE ....................................................................... 41 1.1 - Numération des hématies ou globules rouges ............................................ 41 1.2 - Dosage de l'hémoglobine ............................................................................ 41 1.3 - Volume globulaire moyen........................................................................... 42 1.4 - Hématocrite ................................................................................................. 43 1.5 - Teneur corpusculaire moyenne en hémoglobine ........................................ 43 1.6 - Concentration corpusculaire moyenne en hémoglobine ............................. 43 1.7 - Autres indices érythrocytaires .................................................................... 44 2- ANALYSE DES PLAQUETTES ............................................................................ 45 2.1 - NUMERATION DES PLAQUETTES .................................................................... 45 2.2 - INDICES PLAQUETTAIRES .............................................................................. 46 3 - ANALYSE DES LEUCOCYTES OU GLOBULES BLANCS...................................... 47 3.1 - NUMERATION DES LEUCOCYTES ................................................................... 47 3.2 - FORMULE LEUCOCYTAIRE AUTOMATISEE ..................................................... 47 3.3 - PRINCIPES DE LA FORMULE AUTOMATISEE .................................................... 48 3.4 - LIMITES DE LA FORMULE AUTOMATISEE ....................................................... 49 4- ANALYSE DES RETICULOCYTES ...................................................................... 50 CHAPITRE 3 : VALIDATION D'UN HEMOGRAMME I - HEMOGRAMME NORMAL ................................................................................ 51 II - ANALYSE D'UN HEMOGRAMME ANORMAL ................................................... 51.

(25) CHAPITRE 4 : PRINCIPALES ANOMALIES DE L’HEMOGRAMME I - LIGNEE ROUGE ............................................................................................... 59 II - GLOBULES BLANCS ....................................................................................... 60 III - PLAQUETTES ................................................................................................ 62 CONCLUSION …………………………………………….……………….…63 RESUME BIBLIOGRAPHIE.

(26) Liste des figures. Figure 1 Quadrillage ‘Cellule de malassez’ .......................................................... 5 Figure 2 Technique d'étalement d'un frottis de sang. ............................................ 8 Figure 3 L’automate "CELL-DYN SMS" de coloration et confection des frottis……………………………………………………………………………10 Figure 4 Etapes de Coloration des Frottis par l'automate ................................... 11 Figure 5 Echantillons du frottis ........................................................................... 13 Figure 6 Globules rouges .................................................................................... 15 Figure 7 Plaquettes .............................................................................................. 16 Figure 8 Polynucléaires neutrophiles (PN) ......................................................... 16 Figure 9 Polynucléaires éosinophiles (PE) ......................................................... 17 Figure 10 Polynucléaires basophiles (PB) .......................................................... 18 Figure 11 Monocytes ........................................................................................... 18 Figure 12 Petits lymphocytes .............................................................................. 19 Figure 13 Grands lymphocytes ........................................................................... 20 Figure 14 Illustration : Sysmex XE-5000 ........................................................... 28 Figure 15 Illustration : Beckman Coulter LH 780 .............................................. 31 Figure 16 Illustration : Abbott CELL-DYN Sapphire ........................................ 34 Figure 17 Illustration : Siemens Advia 2120i ..................................................... 38 Figure 18 Courbe de Price Jones ......................................................................... 41 Figure 19 Coefficient d'anisocytose .................................................................... 44 Figure 20 Histogramme des PLT ........................................................................ 47 Figure 21 Plaquettes Sanguines........................................................................... 54.

(27) Figure 22 Satellitisme plaquettes aux PNN ........................................................ 55 Figure 23 exemple d’anomalie qualitatives des polynucléaires ......................... 55 Figure 24 Examen entre lame et lamelle ............................................................. 56.

(28) Liste des abréviations MGG : May-Grünwald-Giemsa WBC: White Blood Cell RBC: Red Blood Cell Hb: hemoglobin Hct: hematocrit MCV: mean corpuscular volume MCH: mean corpuscular hemoglobin MCHC: Mean Corpuscular Hemoglobin Concentration PLT: platelet Neut: neutrophil Mono: Monocyte Lymph: lymphocyte Eos: eosinophil Baso: basophil NRBC: nucleated red blood cell Retic: Reticulocyt RDW-SD: width standard deviation.

(29) RDW-CV: Coefficient of Variation of Red Cell Distribution Width IRF: immature RET fraction PLT-O: fluorescent optical platelet count HPC: Hematopoietic Progenitor Cell MPV: mean platelet volume IG: Immature Granulocyte RET-HE: Reticulocyt Hemoglobin IPF: Immature platelet fraction MRV: mean reticulocyt volume TNC: total nucleated cells CSF: cerebrospinal fluid MSCV: Mean Spherized Corpuscular Volume RPD: research population data RstRBC : lytic resistant ASYM: flags asymmetry HDW: Hemoglobin Concentration Distribution Width LUC: large unstained cells CHr: reticulocyte hemoglobin content.

(30) MCVr : mean Hb concent ration of reticulocyts PMN : Polymorphonuclear Neutrophil MN: mononuclear MPC: mean platelet component MPM: mean platelet mass.

(31) INTRODUCTION. Durant les 40 dernières années, la biologie médicale a beaucoup évolué et les moyens techniques dont elle dispose se sont considérablement améliorés. La tendance à l’augmentation du degré d’automatisation des analyses concerne toutes les disciplines biologiques, l'hématologie n'y fait pas exception. Les analyseurs de cytologie hématologique ont désormais supplanté les dilutions à la pipette, les colorations manuelles et l’observation par l’œil humain au microscope optique. Pour ce faire, ces appareils ont du faire la preuve de leur capacité à différencier et dénombrer les différents éléments figurés du sang. Les techniques utilisées sont devenues de plus en plus sophistiquées. Elles permettent désormais d'obtenir des informations qu'un observateur. microscopique ne pourrait. appréhender. Notre travail s’est fixé comme objectif de rapporter l’intérêt de l’utilisation de l’automatisme en hémogramme par rapport aux techniques manuelles classiques. Après une description du fonctionnement des automates, nous nous intéressons à souligner les pièges des phases pré-analytique et technique afin d’éviter les difficultés d’interprétation.. 1.

(32) CHAPITRE I : HISTORIQUE I-Hématimétrie manuelle I.1-Définition de l’hémogramme L’hémogramme correspond à l’étude quantitative et qualitative du sang. Il est classiquement dénommé ‘’Numération Formule Sanguine’’ (NFS). Il comprend, parmi d’autres, les paramètres suivants : Numération des cellules sanguines ; Dosage de l’hémoglobine ; Mesure et calcul des constantes et indices érythrocytaires et plaquettaires ; . Etablissement de la différentielle leucocytaire.. I.1.1-Prélèvement Le prélèvement devrait toujours être pratiqué au même moment de la journée, si possible après un jeune de huit heures, les résultats pouvant être influencés par des variations circadiennes et par l’alimentation. L’idéal serait d’observer un décubitus d’une demi-heure avant le prélèvement, ce qui n’est réalisable qu’en cas d’hospitalisation. Le patient ambulatoire sera prélevé en position assise. Lorsque le prélèvement veineux n’est pas indispensable ,le sang capillaire peut alors être utilisé :prélèvement au niveau de la pulpe digitale , le lobe d’une oreille ou le talon chez le nourrisson .un réchauffement sous l’eau tiède peut augmenter la circulation capillaire .le site du prélèvement est d’abord nettoyé sans pression excessive à l’alcool à 70 %.une piqure cutanée franche est effectuée à l’aide d’une lancette stérile à usage unique .la première goutte est rejetée en raison de possibles contaminations , les gouttes suivantes sont 2.

(33) recueillies dans les pipettes ; il faut éviter toute compression du lieu de prélèvement pouvant entrainer des modifications de la composition cellulaire du sang. Le prélèvement veineux est le plus utilisé, surtout s’il est nécessaire pour d’autres analyses biologiques ou si une injection intraveineuse est prévue. Après ponction veineuse franche, le sang est recueilli dans un tube préparé spécialement avec l’EDTA, en le remplissant jusqu’à l’index indiqué et en agitant aussitôt le prélèvement effectué. L’EDTA cristallisé dans le tube est un chélateur du calcium bloquant toute coagulation .il n’interfère pas avec les mesures effectuées [1]. I.1.2-Examen quantitatif a)La numération des éléments figurés du sang i. La numération des hématies Le liquide de dilution La composition exacte du diluant, présent dans le diluteur à usage unique, n’est pas connue, [2] A titre documentaire, la composition du liquide de Marcano est : • Sulfate de sodium cristallisé : 5g • Méthanal : 1mL • Eau distillée : qsp 100mL • Taux de dilution : Le taux est de 200. On utilise une Unopette spécial hématies. 3.

(34) ii.La numération des leucocytes Le liquide de dilution Le diluant pour les leucocytes contenu dans le diluteur, a une composition proche de celle du liquide de Hayem utilisé avec les anciennes pipettes de dilution. Sa composition exacte est donnée ci-dessous : • Bleu de méthylène : 0,25g • Acide éthanoïque : 5mL • Eau distillée : qsp 100mL C’est un liquide hémolysant mais il conserve les leucocytes. Taux de dilution : Le taux est de 20. On utilise une Unopette spécial leucocytes. L’hémolyse totale est obtenue au bout de 10 à 15 minutes. iii.La numération des thrombocytes Le liquide de dilution Le liquide possède les propriétés suivantes : • Il est hémolysant : milieu hypotonique • Il inhibe l’agglutination et l’adhésion des thrombocytes • Il provoque leur gonflement. Taux de dilution : Le taux est de 100.. 4.

(35) On utilise une Unopette tte spécial plaquettes. L’hémolyse totale est obtenue au bout de 10 à 15 . iv.Les Les différentes cellules et résultats La cellule de Malassez Le quadrillage gravé délimite 100 rectangles dont 25 sont subdivisés en 20 carrés. Chaque rectangle représente 1/100ème 1/100ème de millimètre cube, un carré 1/2000 millimètre cube. L’ensemble de la cellule représente 1 millimètre cube. cube. Figure 1 Quadrillage ‘cellule de malassez’[2] Numération des. Numération des. Numérations des. Globules Rouges. Leucocytes. Plaquettes. Dilution 1/200. Dilution 1/20. Dilution 1/100. Compter 4 rectangles. Compter 5 bandes. Compter 2 bandes. Soit N le nombre de GR. Soit N le nombre de GB. NPlt/L = N × 100 × 106 5.

(36) NGR/L=. NGB/L = N × 2 × 20 × 106. Le résultat s’exprime en 1012/L. Erreur ± 4%. Le résultat s’exprime en. Le résultat s’exprime en. 109/L. 109/L. Erreur ± 4%. Erreur ± 10%. La cellule de Thomas Le quadrillage gravé délimite 16 grands carrés séparés les uns des autres par un double trait et subdivisés eux-mêmes en 16 petits carrés. Chaque grand carré représente 1/250 millimètre cube, chaque petit 1/4000. L’ensemble de la cellule 1/10 millimètre cube. Cette cellule sert, en générale, à compter les plaquettes sur toute la cellule ou un grand carré (1/250 mm3) NPlt/L = N × 250 × 100 × 10 a)Détermination de l’hématocrite L’hématocrite peut être mesuré par centrifugation d’un échantillon de sang en tube capillaire pendant 10 minutes à l’aide d’une micro centrifugeuse. b)Dosage de l’hémoglobine Sous l’action de l’hexacyanoferrate 3 de potassium et du cyanure de potassium, contenus dans le réactif de Drabkin, l’hémoglobine est transformée en 6.

(37) cyanméthémoglobine. Ce dérivé de l’hémoglobine stable et soluble est dosé colorimétriquement à 540nm. Toutes les formes de l’hémoglobine, sauf la sulfhémoglobine, sont transformées en cyanméthémoglobine et dosées la technique est se fait par la réalisation une gamme d’étalonnage à l’aide d’une solution étalon commercialisé de cyanméthémoglobine. L’essai est réalisé en ajoutant 20µL de sang à 5mL de réactif de Drabkin. Pour des concentrations en hémoglobine supérieures à 200g/l, la loi de BeerLambert n’est plus respectée, il est donc nécessaire de diminuer la prise d’essai de sang. La réaction est immédiate et stable plusieurs heures. L’absorbance de chaque tube est lue à 540 nm et la concentration en hémoglobine du sang calculée. c)La formule leucocytaire Elle correspond à la distribution des différentes variétés de leucocytes identifiés lors d’un parcours qui tient compte de la distribution de ces leucocytes lors de l’étalement. Les granulocytes et les monocytes se situent sur les bords et les bouts du frottis. On doit identifier environ 200 leucocytes à l’aide du compte cellules [2].. I.1.3-Examen qualitatif I.1.3.1-Confection de frottis L'étalement est réalisé à partir de sang frais (prélèvement de moins de 3 heures) prélevé sur éthylène-diamine-tétra-acétique (EDTA) ou, plus rarement, 7.

(38) directement par prélèvement capillaire. Les lames doivent être en verre, dégraissées, à bords rodés à 45°, à pans coupés. Figure 2 Technique d'étalement d'un frottis de sang [4] La technique manuelle d'étalement est la suivante : • déposer unee goutte de sang à l'extrémité d'une lame posée horizontalement sur un plan dur; • maintenir cette lame d'une main et de l'autre une seconde lame inclinée à 45°, juste à l'avant de la goutte; • amener la seconde lame au contact du sang et laisser diffuser le long l de l’arête; d'un mouvement rapide, tirer le sang vers l'extrémité de la lame horizontale; • identifier le frottis (nom du patient, numéro de travail...) et le laisser sécher à l'air sans accélérer le séchage (agitation, séchoir). L'inclinaison de la lame effectuant le frottis varie suivant la viscosité du sang :. 8.

(39) • viscosité basse (anémie) : il faut compenser la fluidité du sang par un mouvement plus rapide ou en tenant la lame plus verticalement (angle avec l’horizontale > 45°); • viscosité. haute. (polyglobulie,. hyperleucocytose. majeure,. hypergammaglobulinémie): mouvement lent ou lame moins verticale (angle avec l’horizontale < 45°). Le même principe est adopté maintenant sur certains automates. Ils tiennent compte de l'hématocrite pour adapter la vitesse de l’étalement. Dans la plupart des cas, le frottis est réalisé pour établir une formule leucocytaire et doit être coloré rapidement (dans moins de 48 heures) sans fixation préalable [4] . I.1.3.2-L'automatisation de confection et de coloration des frottis: L’automatisation de la réalisation et la coloration des frottis sanguins a subi de grands progrès passant du stade des automates qui réalisent l’étalement et la coloration indépendamment aux automates qui réalisent en même temps l’étalement et la coloration. a)Présentation de l'automate de confection et de coloration des frottis : Le CELL-DYN SMS que nous avons utilisé pour réaliser la confection et la coloration. automatique des frottis est un instrument autonome. Il est conçu. pour un usage in vitro dans les laboratoires cliniques. Ses paramètres ont été optimisés afin de produire des frottis sanguins compatibles et de réduisant la nécessité de procéder à des ajustements pour les échantillons avec des valeurs d'hématocrite extrêmes.. 9.

(40) Figure 3 :L’automate L’automate "CELL-DYN "CELL DYN SMS" de coloration et confection des frottis. [7]. b) Confection des frottis par l'automate SMS Abbott : Cet automate présente deux modes de prélèvement des échantillons : « fermé » et « ouvert »options : Dans le mode d'échantillonnage fermé, l'auto-chargeur l'auto a une capacité de 50 positions. Il mélange, identifie l'échantillon, et en aspire un très faible volume pour confectionner le frottis (200µL (200µL dans le mode d'échantillonnage fermé et seulement 30µL 30µL dans le mode ouvert). c) Coloration des frottis tis par l'automate L’automate opère les différentes étapes automatiquement comme le montre la figure ci-dessous.. 10.

(41) Figure 4 : Etapes de Coloration des Frottis par l'automate [7] Après étalement des frottis, l’automate l’automate réalise l’opération de coloration au cours de laquelle les lames portant le frottis sanguin passent successivement par : - le bain d’éthanol ; May ; - le bain de colorant May-Grunwald - le bain d’eau neutre ; - le bain de colorant Giemsa ; - le bain de rinçage ; - l’étape de séchage. I.1.3.3-La La coloration de May-Grunwald-Giemsa May a)Principe Le colorant de May-Grunwald Grunwald est une solution neutre d'éosine et de bleu de méthylène dans de l'alcool méthylique, ce qui permet la fixation des éléments. Lorsqu'on utilise ce colorant lorant isolément, les noyaux sont colorés en bleu pâle, les cytoplasmes en bleu très clair ou sont incolores, les granulations secondaires des granulocytes en rouge clair pour la lignée neutrophile, en bleu foncé pour la lignée basophile et en rouge-orangé rouge pour la lignée éosinophile. Les hématies sont colorées en beige rosé. 11.

(42) Le colorant de Giemsa est une combinaison d'éosine et de dérivés du bleu de méthylène dont l'azur. Il colore les noyaux en violet, les cytoplasmes en bleu plus ou moins intense ou en rose selon les cellules et les granulations primaires des granulocytes en rouge-pourpre intense (granulations dites alors azurophiles). Ces deux colorants, qui donnent des résultats complémentaires, ont été associés par Pappenheimer dans une coloration panoptique.. 1.1.3.4-Coloration de Wright a)Principe Très répandue aux Etats Unis, la coloration de Wright permet la réalisation de formule sanguine et médullaire. Le colorant de Wright est un mélange de Bleu de méthylène, d’Eosine et d’Azur de méthylène. Il fixe le frottis par son alcool méthylique et comme tous les colorants neutres en solution alcoolique, il ne libère son activité colorante qu’après addition d’eau tamponnée. b)Les colorations d’identification Noyaux Cytoplasme. Rose-violet des Bleu à Bleu-. lymphocytes. gris. Granulations neutrophiles Violet-rose Granulations éosinophiles Rouge-orangé Granulations basophiles. Violet foncé. Plaquettes. Violet pourpre. Hématies. Rougeâtres. 12.

(43) Qualité du frottis I.1.3.5-Qualité La bonne qualité du frottis est un préalable indispensable indispensable à l'analyse du frottis de sang après coloration. En effet, des frottis mal faits risquent d'être à la source d'erreurs dues à une mauvaise appréciation du pourcentage des populations leucocytaires liée à une répartition hétérogène une difficulté d'identification des cellules anormales; une difficulté d'analyse des hématies.. Figure 5 : Echantillons du frottis [6] Un frottis de bonne qualité est homogène en longueur et en largeur, légèrement lég plus étroit que la lame, il diminue régulièrement d'épaisseur vers son extrémité qui ne comporte pas de franges terminales et reste à distance du bord de lame. Un frottis de bonne qualité (la première photo ci-dessus) ci dessus) doit être : 13.

(44) • d’une taille suffisamment grande, de manière à occuper au moins la moitié (de ½ au ¾) de la lame ; • de bonne densité, goutte étalée en entier, assez distante des bords de la lame pour être accessible en tout point à l’observation microscopique. Les six photos ci-dessus (présentées ensemble) illustrent, par contre, le cas de frottis sanguins obtenus suite à une confection de mauvaise qualité. I.1.3.6-Examen des frottis sanguins L'examen du frottis de sang permet d'établir une formule leucocytaire et d'examiner la morphologie des hématies, des globules blancs et des plaquettes. L’examen du frottis sanguin au faible grossissement (objectif x40) permet d’apprécier la qualité du frottis. L’étude cytologique (objectif x100, à l’immersion) permet de réaliser : - l’observation des éventuelles anomalies morphologiques des globules rouges : anomalies de forme, de taille, de coloration, ou présence d’inclusions intra-érythrocytaires. - l’observation des éventuelles anomalies morphologiques des plaquettes (taille, forme), la présence éventuelle d’amas plaquettaire, et, la confirmation de la densité de la numération plaquettaire. - l’établissement de la Formule Leucocytaire a)Morphologie des cellules sanguines Les photos suivantes sont des exemples typiques représentatifs des différents éléments figurés sanguins. Elles ont été prises pour des frottis de sang normal coloré au MGG (au grossissement x 100). 14.

(45) i. Globules rouges Sur frottis, les globules rouges ont : • une forme circulaire ; • une taille uniforme avec un diamètre moyen de 8µm ; • une coloration on gris rosé avec un centre plus clair. Figure 6 : Frottis Frottis de sang normal coloré au MGG (Gr × 100) [6] ii.Plaquettes Sur frottis, les plaquettes ont : • une forme arrondie à contours irrégulier ; • une taille uniforme avec un diamètre ; moyen de 1-2µm ; • une coloration gris clair parsemée de fines granulations rosées. 15.

(46) Figure 7: Frottis rottis de sang normal coloré au MGG (Gr × 100) [6] iii.Polynucléaires neutrophiles (PN) Sur frottis, les polynucléaires neutrophiles ont : • une forme arrondie ; • un diamètre moyen 12-14µm 12 ; • une forme polylobée de leur noyau ; • des granulations cytoplasmiques fines, de couleur beige rosée (neutrophile).. Figure 8 : Frottis is de sang normal coloré au MGG (Gr× 100) [6] 16.

(47) philes (PE) iv.Polynucléaires éosinophiles Sur frottis, les polynucléaires éosinophiles ont : • une forme arrondie ; • un diamètre moyen 12-14µm 12 ; • un noyau bilobé ; • des granulations cytoplasmiques sphériques de couleur orangée (éosinophile).. is de sang normal coloré au MGG (Gr × 100) 100 [6] Figure 9 : Frottis. v. Polynucléaires basophiles (PB) Sur frottis, les polynucléaires basophiles ont : • une forme arrondie ; • un diamètre moyen 10-14µm 10 ; • un noyau bilobé masqué par des granulations cytoplasmiques de taille tai hétérogène de couleur pourpre (basophile).. 17.

(48) Figure 10 : Frottis is de sang normal coloré au MGG (Gr × 100) 100 [6]. vi.Monocytes Sur frottis, les monocytes ont : • un diamètre moyen 20-40µm 20 ; • un noyau arrondi ou ovalaire, plus souvent réniforme ou irrégulier ; • un cytoplasme gris bleuté, avec de fines granulations rosées assez nombreuses qui se fondent avec le fond cytoplasmique ; • parfois des vacuoles intra cytoplasmiques.. Figure 11 : Frottis is de sang normal coloré au MGG (Gr × 100) 100 [6]. 18.

(49) vii.Lymphocyte a) Sur frottis, les petits lymphocytes ont : • un diamètre moyen 7-9µm 7 • un noyau arrondi ou ovalaire • un cytoplasme peu étendu clair ou légèrement bleu.. Figure 12 : Frottis Frott de sang normal coloré au MGG (Gr × 100) [6]. b) Sur frottis, les grands lymphocytes ont : • un diamètre moyen 9-15µm 9 • un noyau central ou légèrement excentré • un cytoplasme plus étendu entourant le noyau, hyalin ou légèrement bleu.. 19.

(50) Figure 13 : Frottis Frottis de sang normal coloré au MGG (Gr × 100) [6]. I.1.3.7-Conservation Conservation de frottis Si les frottis colorés doivent être conservés au-delà au delà de quelques semaines, il est préférable de les monter sous sous lamelle à l'aide d'un milieu synthétique (par exemple de type Eukitt) pour les protéger de la poussière, des rayures et pour limiter l'altération de la coloration. On peut ensuite les classer (date, ordre alphabétique) et les ranger dans des tiroirs appropriés. ap I.1.4-Le Le calcul des indices érythrocytaires On les calculs lors des techniques manuelles. Pour cela, il nous faut la numération des hématies (NGR), l’hématocrite (Ht) et la concentration en hémoglobine (Hb). I.1.4.1-Le Le VGM (Volume Globulaire Moyen) Moy Il représente le volume moyen d’une hématie. 20.

(51) Le VGM s’exprime en fl. I.1.4.2-Le TCMH (Teneur Corpusculaire Moyenne en Hémoglobine) Il représente la quantité moyenne d’hémoglobine contenue dans une hématie.. Le TCMH s’exprime en pg I.1.4.3-Le CCMH (Concentration Corpusculaire Moyenne en Hémoglobine) Il représente la quantité moyenne d’hémoglobine contenu dans un litre d’hématies. Elle exprime la saturation de l’hématie en hémoglobine.. Le CCMH s’exprime en g d’Hb/litre. II-L’Automatisation II.1-Historique et progrès de l’automatisation Le terme « automate », apparu en 1532, est défini comme étant un appareil mû par. un. mécanisme. intérieur. et. imitant. les. mouvements. de. l’être. humain.L’automatisation est considérée comme étape d’un progrès technique ou apparaissent des dispositifs techniques susceptible de seconder l’homme ; non seulement dans ses efforts musculaires ; mais également dans son travail intellectuel de surveillance et de contrôle. 21.

(52) C’est à la fin du XIXème siècle avec notamment les travaux de Paul Ehrlich sur les colorants que la cytologie hématologique voit le jour. En effet, en colorant les éléments figurés du sang, il devient possible d’en distinguer les différents constituants par observation microscopique et d'en apprécier les proportions. Au fil des années, les colorants évoluent (Romanovski puis May-Grünwald-Giemsa en Europe, Wright aux Etats-Unis) mais la méthode reste manuelle, longue, fastidieuse, observateur-dépendante et peu précise car effectuée sur un faible nombre de cellules. Il faut attendre les années 1950 pour découvrir les premiers appareils de cytologie hématologique automatisée qui fonctionnent selon le principe de variation d’impédance (encore utilisé de nos jours). Toutefois, ces appareils ne réalisent pas la formule leucocytaire et les paramètres mesurés sont peu nombreux. Une observation microscopique parallèle est toujours nécessaire. Dans les années 1960-70, cette technologie s’améliore et les résultats obtenus sont de plus en plus satisfaisants, surtout en l’absence d’anomalie cytologique. Le recours à la formule leucocytaire microscopique devient circonstanciel. Pour caractériser certaines pathologies, les biologistes effectuent souvent des colorations cytochimiques (myéloperoxydase, estérase...) sur lame afin de préciser la nature des cellules anormales. C’est en 1970, lors d’un congrès new-yorkais, que le monde médical découvre la cytochimie en flux : la Technicon Instrument Corporation® y présente pour la première fois son projet de différentiation enzymatique en flux des leucocytes. Cette technologie permet de distinguer les leucocytes selon leur taille et la quantité de myéloperoxydase qu'ils contiennent. Le premier automate équipé de cette technologie innovante, l’Hemalog-D, est commercialisé par la firme Technicon® en 1974. En 1981, cette société combine sa technologie de 22.

(53) cytochimie en flux avec celles utilisées pour la mesure de l'hémoglobine et les numérations érythrocytaire et plaquettaire ; l’H-6000, automate d’hématologie à 5 canaux, est mis sur le marché. Celui-ci est même muni d’un étaleur-colorateur de frottis sanguins. Puis, en 1987, le premier appareil muni d’un canal d’analyse de la densité nucléaire (qui remplace avantageusement l’ancien canal basophile) est commercialisé : c’est le Technicon® H1. Arrivent ensuite le H2 en 1990 et le H3 en 1993. Le Technicon® H3 comporte en plus de ses prédécesseurs un canal de comptage des réticulocytes.. 23.

(54) CHAPITRE 2 : Principe de mesure des automates Effectuer un hémogramme automatisé consiste à analyser les caractéristiques des cellules circulantes du sang périphérique puis à les quantifier. Il comprend dans tous les cas des données quantitatives qui étaient obtenues autrefois par des techniques manuelles longues, fastidieuses et peu reproductibles. Il s'agit : • des paramètres érythrocytaires - nombre d'hématies ou globules rouges (GR), taux d'hémoglobine (Hb), hématocrite (Ht), volume globulaire moyen (VGM), teneur corpusculaire en Hb (TCMH), concentration corpusculaire moyenne en Hb (CCMH); • du nombre des leucocytes ou globules blancs (GB); • du nombre des plaquettes (Pl). Depuis les années 1960, des automates de plus en plus performants ont été mis au point. Ce sont des cytomètres en flux qui utilisent différentes méthodes physiques et chimiques pour caractériser puis décompter les éléments du sang. D'abord limités aux paramètres quantitatifs précédents, ils proposent maintenant une formule leucocytaire complète - polynucléaires neutrophiles (PN), éosinophiles (PE), basophiles (PB), lymphocytes (Ly) et monocytes (Mo) et, pour certains, la numération des réticulocytes. La diffusion des automates dans les laboratoires d'analyse a permis d'améliorer la reproductibilité et la précision des mesures sous réserve d'un calibrage et d'un suivi rigoureux des instruments. Néanmoins, ces techniques automatisées ont des limites et des causes d’erreur [15],, et le biologiste doit rester vigilant et poser l'indication de contrôles manuels dans certaines circonstances.. 24.

(55) Différentes méthodes d'analyse physique des cellules sont utilisées, seules ou associées. à. des. techniques. cytochimiques. ou. à. des. marqueurs. fluorescents [14,18]. I-Analyse par impédance L'analyse par impédance permet de compter les hématies, les leucocytes et les plaquettes. Elle utilise le « principe Coulter ». Les cellules mises en suspension dans un liquide conducteur et guidées à travers un petit orifice cylindrique vont déclencher lors de leur passage entre deux électrodes immergées dans ce liquide une augmentation de la résistance électrique (variation d'impédance) qui génère une impulsion électrique : • le nombre d'impulsions correspond au nombre de cellules ayant franchi l'orifice; • l'amplitude de l'impulsion est proportionnelle au volume de la cellule. Les instruments permettent d'éviter les artefacts liés à la recirculation des cellules déjà comptées dans la zone de détection (flux de balayage par le diluant) ou au passage simultané de deux cellules (correction de coïncidence). Les impulsions aberrantes par la taille ou la forme sont écartées de l'analyse ultérieure. Les impulsions sont ensuite classées dans différents canaux selon leur amplitude, ce qui permet la construction d'histogrammes de distribution volumétrique.. 25.

(56) II-Analyse par diffraction laser Les cellules en suspension sont acheminées dans une gaine liquide et hydrofocalisées afin de les aligner. Chaque cellule passe ainsi individuellement devant un faisceau laser dont elle diffracte la lumière. La lumière diffractée peut alors être analysée sous différents angles : • aux petits angles (0-3°), dans l'axe du faisceau incident, la mesure de la lumière diffractée par la cellule donne des indications sur le volume de la cellule; • aux grands angles (15°, 90°), la lumière traverse la membrane cellulaire et est diffusée par les organites intracellulaires. La mesure de cette lumière renseigne sur la granularité du cytoplasme et la densité chromatinienne de la cellule. De plus, les polynucléaires éosinophiles peuvent être décomptés grâce à leur propriété de dépolariser la lumière laser à 90°. III-Analyse par cytochimie Ces techniques sont utilisées par certains constructeurs pour identifier ou sélectionner les populations leucocytaires. III.1-Réaction des peroxydases Elle repose sur la mise en évidence de la peroxydase contenue dans les granulations primaires de certains leucocytes. Les lymphocytes sont négatifs pour cette réaction. En présence d'eau oxygénée et d'un substrat (4-chloro-1-. 26.

(57) naphtol), l'action de la peroxydase cellulaire est révélée par un précipité coloré qui sera analysé par absorption lumineuse. IV-Analyse par un courant à haute fréquence Un courant de haute fréquence est appliqué simultanément au courant continu sur deux électrodes. Le passage d'une cellule crée une différence de potentiel qui est fonction du degré de conductivité cellulaire donnant ainsi des indications sur le contenu du cytoplasme et la structure du noyau. V-Lyse chimique Des procédés de lyse sont appliqués à la numération des polynucléaires basophiles sur certains instruments. Cette lyse détruit la membrane des leucocytes et les réduit à leur noyau à l'exception des basophiles qui conservent leur membrane et leur cytoplasme et sont ainsi identifiés puis numérés par leur taille. D’autres réactifs de lyse réagissent préférentiellement avec la membrane des granuleux les plus matures, sélectionnant ainsi les populations plus immatures.. 27.

(58) V. Méthodes de mesure : cytométrie et laser associés à l’impédance ou à la cytochimie 1-Sysmex XE-5000. Figure 14 Illustration : Sysmex XE-5000 5000[9] • Principes. : -Cytométrie de Flux Fluorescente -Méthode détection RF/DC (radio radio frequency)/(direct. current). • Rubrique de test : -Les paramètres [13] sont mises sous forme de tableau ‘menu standard’:. (White. Blood. Cell Cell). WBC Red WBC,(. Blood. Cell)RBC,(hemoglobin)Hb,(hematocrit)Hct, (mean corpuscular volume) volume MCV, (mean corpuscular hemoglobin) Hemoglobin Concentration) Concentration. MCHC,. (platelet). MCH, (Mean. Corpuscular. PLT, %&#( neutrophil) neutrophil neut, (Monocyte). mono, (lymphocyte) lymph, (eosinophil) eos, (basophil) baso’: standard menu (left) plus: (Reticulocyte)retic retic. %&#,. (nucleated red blood cell). (width standard deviation)RDW--SD, (Coefficient of. Variation of Red Cell Distribution Width)RDW-CV,. IRF,. NRBC %&#,. (immature. RET fraction). (fluorescent optical o platelet count)PLT-O, (Hematopoietic Progenitor Cell). 28.

(59) HPC#,. (mean platelet volume). (Reticulocyte Hemoglobin). MPV, (Immature. Granulocyte). IG%, IG#,. RET-He, (Immature platelet fraction)IPF.. -Entités remarquables: PLT clumps, PLT ABN distribution, WBC ABN scattergram, blast, left shift, atypical lymphocytes, abnormal lymphocytes/blast, RBC ABN distribution, RBC lyse resistance, RBC agglutinins, turbidity. -tests spécifiques: Reticulocyte hemoglobin, immature platelet fraction, hematopoietic progenitor cell, immature reticulocyte fraction, reportable immature granulocyte #&%, RBC/WBC/(total count)TC/two-part differentia. • Linéarité : - WBC count/RBC count: 0–440/0–8 -Hemoglobin/Platelet. : 0–25/0–5,000. -MCV (fL) or Hct (%) : 0–75 (Hct) • Précision : -WBC count/RBC count : <3 %/<1.5 % -Hemoglobin/Platelet. : <1.0 %/<4.0 %. -MCV or Hct. : <1.5 % (Hct). 29.