TP : recherche d’Anticorps dans un sérum, TEST ELISA CORRECTION
Problème : On cherche à vérifier qu’un patient, blessé, est toujours immunisé contre la toxine tétanique, sachant que le seuil d’immunisation est à 0,1 UI/ml : PB posé
Proposez une résolution pratique en utilisant un test ELISA.
Principe : (les schémas sont volontairement simplistes)
1/ fixation de l’Ag au fond des puits
2/ Sérum à tester, fixation des AC(1) spécifiques
3/ solution d’AC(2) anti- anticorps associé à une enzyme
4/ ajout du substrat de l’enzyme à coloration
La couleur des puits sera proportionnelle à la réaction enzymatique, c’est à dire à la quantité d’anticorps spécifiques fixés à l’étape 2 ó concentration en AC spécifiques
Proposition de résolution :
Quoi Test ELISA : Principe = mettre en évidence et doser la présence d’AC spécifique dans une solution en utilisant les AG spécifique, et en révélant les AC spécifiques présents en utilisant des AC antiAC associés à une enzyme réagissant avec un substrat en provoquant une coloration proportionnelle à la quantité d’AC spécifiques présents
Comment et avec quoi
Au fond des puits : Ag, toxine tétanique
Solution(s) d’AC1 : une gamme de solutions d’AC anti-toxine de concentration croissante afin de comparer avec le sérum de notre patient où nous cherchons à déterminer la concentration d’AC.
On ajoutera après rinçage (élimination des AC non fixés) des AC anti-AC associés à une enzyme, puis le substrat spécifique de l’enzyme.
Pour quels résultats
Si toujours immunisé ? on observera une coloration du puits qui correspond à la coloration d’un puits « étalon » où la coloration est supérieure au seuil
d’immunisation (0,1 UImL-1). Les AC anti-toxine présents dans le sérum se seront fixés sur les AG ; non éliminés au rinçage, ils auront fixé les AC anti-AC et ceux-ci réagiront avec le substrat donnant une coloration.
Si plus immunisé ? On n’observera pas de coloration ou une coloration très faible qui correspondra aux étalons de coloration correspondant à une concentration < à 0,1 UImL-1 : Aucun, ou juste quelques AC anti-toxine présents se seront fixés sur les Ag, peu ou pas d’AC de révélation, pas ou peu de coloration
Mise en œuvre du protocole : Travail autonome
Aides mineures Aides majeures Aucun résultat
Présentation des résultats pour les communiquer afin qu’ils apportent des informations pour résoudre le problème (sous la forme de votre choix mais vous devez y intégrer au moins le schéma de 2 puits : un résultat + ; un résultat -)
Exploitation des résultats (je vois, je sais, je déduis, je conclus) Je vois que
…seuls les 3 premiers puits, ≥ 0,1 UImL-1 (seuil d’immunisation) présentent une coloration
verteàjaune ; Le puits de notre patient reste rose, l’intensité de la coloration correspond ± au puits 4 : 0,05 UImL-1 et correspond à la coloration du témoin non immunisé.
Je sais que
-la coloration est proportionnelle à la quantité des AC anti-toxine fixés sur les Ag et qui étaient donc présents dans la solution testée ;
- que le seuil d’immunisation est de 0,1 UImL-1 qui correspond à la coloration du puits 3 J’en déduis que
Notre patient possède dans son sérum une quantité d’AC anti-toxine < à 0,1 UImL-1 Je conclue
…Notre patient n’est plus immunisé contre la toxine tétanique, il doit être revacciné, et peut être subir une sérothérapie
Attention ne pas confondre
Vaccination = PREVENTION, acquisition d’une mémoire immunitaire de longue durée Sérothérapie = CURATION, transfert d’AC permettant une action immédiate mais de courte durée, elle devra être suivie d’une vaccination pour retrouver une immunisation.
