Test Elisa
Le but de ce TP n’est pas seulement de mettre des produits dans des tubes ! À l’issue de la séance, vous devez être capable de :
1. Comprendre la raison d’être de chaque étape 2. Savoir représenter ce test sous forme d’une figure.
Manipulation
Le sérum A est dans un microtube de couleur jaune.
Le sérum B est dans un microtube de couleur blanche.
Le PBS-Tween est dans un tube à hémolyse.
L’anticorps de détection est dans un microtube de couleur verte.
Le TMB est dans un tube recouvert de papier aluminium. Il vous sera fourni au dernier moment car il se dégrade rapidement.
Puits 1 Puits 2 Puits 3 = témoin Puits 4 = témoin 1. Tapissage des puits par
l’Ag (BSA) Les barrettes fournies ont déjà subi cette étape dite de “ cotting ” (fixation de la BSA au fond du puits
2. Incubation du sérum à tester (contenant ou non l’anticorps anti-BSA)
80 µl de sérum A 80 µl de sérum B 80 µl de sérum A
Laisser incuber 15 minutes à température ambiante. Vider la barette en la renversant d’un geste énergique sur le papier absorbant. Laver deux fois avec le tampon PBS-Tween (détergeant) : le lavage s’effectue en remplissant totalement les puits puis en vidant leur contenu par retournement.
3. Incubation de
l’anticorps de détection (=
anticorps anti-anticorps)
80 µl 80 µl 80 µl
Laisser incuber 15 minutes à température ambiante. Vider les puits par retournement sur le papier absorbant et laver deux fois avec du tampon PBS- Tween.
4. Révélation par ajout d’un substrat enzymatique (=TMB)
80 µl 80 µl 80 µl 80 µl
Attendre quelques minutes qu’une coloration éventuelle se développe.
Interpréter les résultats.
Etude d’un document : d’autres test ELISA
Il existe de nombreuses variantes ; en utilisant le document joint, cherchez à comprendre quel est le but des différentes étapes, à chaque fois.
