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Submitted on 6 Jun 2020
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Etat de pluripotence des cellules souches pluripotentes nécessaire pour obtenir des lapins transgéniques
Marielle Afanassieff
To cite this version:
Marielle Afanassieff. Etat de pluripotence des cellules souches pluripotentes nécessaire pour obtenir des lapins transgéniques. Journées d’Animation des Crédits Incitatifs du Département de Physiologie Animale et Systèmes d’Elevage (JACI Phase 2010), Oct 2010, Tours, France. 15 diapos. �hal-02814590�
JACI Phase 2010 Page 9/26
Atelier 2 : Cellules souches
Le lundi 11 octobre 2010 de 14h00 à 18h30 amphithéâtre Camille Danguillaume (rdc) Animé par Jean-Stéphane Joly (NED Gif/Yvette) et Jean-René Huynh (Institut Curie)
Programme
14h00 Les Cellules souches de la lignée germinale chez la drosophile
Jean-René Huynh, Institut Curie Paris 14h30 Lignage germinal aviaire : approches comparative de la gestion de la biodiversité
Bertrand Pain, IGFL Lyon 14h45 GERMFISH : un projet pour la caractérisation de la niche germinale des cellules spermatogoniales souches
chez les poissons téléostéens Jean-Jacques Lareyre, SCRIBE Rennes
15h00 Etude de la méthylation des promoteurs des gènes pou2, sox2, c-myc et nanog au cours du développement
chez le poisson rouge Catherine Labbé, Lucie Marandel, SCRIBE Rennes
15h15 Etat de pluripotence des cellules souches pluripotentes nécessaire pour obtenir des lapins transgéniques
Marielle Afanassieff, PrimaStem Lyon 15h30 Analyse protéomique des mécanismes épigénétiques de contrôle de la transition des cellules souches entre
un état pluripotent et un état différencié Anne Mey, IGFL Lyon
15h45 Reprogrammation de différents noyaux pluripotents chez la souris
Alice Jouneau, BDR Jouy en Josas 16h00 Implication de séquences rétrovirales endogènes dans l'établissement et le maintien de la pluripotence
Véronique Duranthon, BDR Jouy en Josas 16h15 Pause
16h30 Discussion générale
Posters rattachés à cet atelier
Implication de séquences rétrovirales endogènes dans l'établissement et le maintien de la pluripotence
Véronique Duranthon, BDR Jouy en Josas Reprogrammation de différents noyaux pluripotents chez la souris
Alice Jouneau, BDR Jouy en Josas Pluripotence induite dans des cellules souches embryonnaires de lapin et de poulet nécessaires pour obtenir
des animaux transgéniques Jean-Stéphane Joly, NED Gif/Yvette
Mise au point de chimères Canards par injection de cellules de blastoderme
Pauline Aubel, UMR Inserm/CNRS Clermont-Ferrand Comparative genomics of sex differentiation, new insights from the medaka oryzias latipes
Galiana Delphine, IGFL Lyon Analyse protéomique des mécanismes épigénétiques de contrôle de la transition des cellules souches entre
un état pluripotent et un état différencié Anne Mey, IGFL Lyon
Mise au point des conditions d'utilisation de cellules souches pluripotentes induites (cellules iPS) pour la création de lapins transgéniques, modèles animaux de maladies humaines Yann Tapponnier, PrimaStem Lyon Comparaison de la capacité de cellules ES dépendantes du FGF2 ou dépendantes du LIF à coloniser
le blastocyste de lapin Pierre Osteil, PrimaStem Lyon
Etude de la méthylation des promoteurs des gènes pou2, sox2, c-myc et nanog au cours du développement
chez le poisson rouge Catherine Labbé, Lucie Marandel, SCRIBE Rennes
Etat de pluripotence
des cellules souches pluripotentes nécessaire pour obtenir
des lapins transgéniques
Marielle Afanassieff
ICM Blastocyste
Cellules ES
Cellules différenciées
Cellules iPS
Reprogrammation
Sox2 c-Myc Klf4
Oct4
Origine et propriétés des cellules souches pluripotentes
EpiSC
Epiblaste Ovocylindre
Cellules souches pluripotentes Autorenouvellement
Différenciation
Endoderme
Mésoderme
Ectoderme
T u mor igé n ès e
Les cellules souches pluripotentes et la transgénèse
ICM Blastocyste
Cellules ES
Cellules différenciées
Cellules iPS
Reprogrammation
Sox2 c-Myc Klf4
Oct4
EpiSC
Epiblaste Ovocylindre
TRANSGENESE Souris
ESC iPSC
Lapin
?
?
Le lapin comme animal modèle
ü Avantages du lapin:
petit animal facile à élever et peu coûteux
animal prolifique avec un temps générationnel court
physiologiquement et génétiquement proche de l’Homme
ü Recherche fondamentale:
modèle d’étude des grandes fonctions agronomiques: lactation,
reproduction, développement embryonnaire, croissance musculaire…
ü Recherche médicale:
modèle d’étude de maladies humaines: athérosclérose, tuberculose, arrhythmie, obésité, infections virales…
ü Industrie: bioréacteur
ü Biotechnologie:
modèle pour la mise au point des techniques de transgénèse
Les cellules souches pluripotentes de lapin
RbESC RbiPSC
è Dépendantes du FGF2
è Caractéris3ques de cellules ES de primate
è Incapables de coloniser un blastocyste receveur
Poster de Pierre Osteil Poster de Yann Tapponnier
Capacité à
coloniser l’embryon
après micro-injection dans un blastocyste
Cellules ES Homme, rhesus, lapin
amorcées
(FGF2 + Activine-Smad)
Cellules souches pluripotentes naïves et amorcées
Blastocyste (E3.5)
Cellules ES de souris naïves
(LIF-Stat3) Rex1
+, Stella
+, Klf2
+, Klf4
+Cellules iPS de souris naïves
(LIF-Stat3)
Rex1
+, Stella
+, Klf2
+, Klf4
+EpiSC de souris amorcées
(FGF2 + Activine-Smad) Fgf5
+, Tbra
+, Sox17
+Ovocylindre (E6.5)
implantation
Cellules iPS Homme, rhesus, lapin
amorcées
(FGF2 + Activine-Smad)
Mécanisme de maintien de l’autorenouvellement
Noyau de Pluripotence
Klf2 Klf4
Nanog
Sox2 Oct4
LIF
Stat3
Cellules naïves
FGF2 Activine
Smad 2/3
Noyau de Pluripotence
Nanog
Sox2 Oct4
Cellules amorcées
Capacité à
coloniser l’embryon
après micro-injection dans un blastocyste
Cellules ES Homme amorcées
(FGF2 + Activine-Smad)
Cellules rES de souris naïves
(LIF-Stat3) Rex1
+, Stella
+, Klf2
+, Klf4
+Réversion des cellules ES amorcées vers un état naïf
EpiSC de souris amorcées
(FGF2 + Activine-Smad) Fgf5
+, Tbra
+, Sox17
+Réversion génétique à l’aide de gènes de pluripotence (Klf4, Nanog)
+ inhibiteurs des voies de différenciation
+ LIF
Cellules rES Homme
naïves
(LIF-Stat3)
+ LIF
Réversion génétique à l’aide de gènes de
pluripotence (Klf4, Klf2, Oct4)
+ inhibiteurs des voies de différenciation
Cellules ES et iPS Lapin
amorcées
(FGF2 + Activine-Smad)
Capacité à
coloniser l’embryon
après micro-injection dans un blastocyste
Cellules rES de souris naïves
(LIF-Stat3) Rex1
+, Stella
+, Klf2
+, Klf4
+Réversion des cellules souches pluripotentes de lapin
Réversion génétique à l’aide de gènes de pluripotence (Klf4, Nanog)
+ inhibiteurs des voies de différenciation
+ LIF
Cellules ES et iPS Lapin
naïves
(LIF-Stat3)
EpiSC de souris amorcées
(FGF2 + Activine-Smad)
Fgf5
+, Tbra
+, Sox17
+Obtention de cellules ES naïves de lapin
Projet de thèse de Pierre Osteil
Cellules ES Lapin naïves
(LIF-Stat3)
Cellules ES Lapin amorcées
(FGF2 + Activine-Smad)
Surexpression de Klf2, Klf4, Sox2, Oct4, Nanog et/ou Stat3ER
T2R éve rs ion
Inhibiteurs de différenciation Facteurs de croissance
Petites molécules
D ér ivati on
RbES dépendantes du LIF
Obtention de cellules iPS naïves de lapin
Projet de thèse de Yann Tapponnier
Cellules iPS Lapin naïves
(LIF-Stat3)
Cellules iPS Lapin amorcées
(FGF2 + Activine-Smad)
Surexpression de Klf2, Klf4, Sox2, Oct4, Nanog et/ou Stat3ER
T2R éve rs ion
Inhibiteurs de différenciation Facteurs de croissance
Petites molécules
R ep rogr ammati on
Stratégie 1: Expression transitoire à l’aide de vecteurs plasmidiques et sélection des gènes actifs
Réversion des cellules ES et iPS de lapin
CAG DsRed IRES Hygro
r+1
5’TR CAG Gène 1 3’TR
+1
Gène 2
2A
