La souris PRM/Alf, puzzle génétique à phénotype patchwork

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La souris PRM/Alf, puzzle génétique à phénotype

patchwork

Geneviève Aubin Houzelstein

To cite this version:

Geneviève Aubin Houzelstein. La souris PRM/Alf, puzzle génétique à phénotype patchwork. Sciences du Vivant [q-bio]. 2010. �tel-02815251�

Demande
d’Habilitation
à
Diriger



les
Recherches


Université
Paris
XII


Dr
Geneviève
Aubin­Houzelstein




Dr
Geneviève
Aubin‐Houzelstein,
CR1
INRA


UMR955
INRA‐ENVA
de
GénéBque
Moléculaire
et
Cellulaire


Ecole
NaBonale
Vétérinaire
d’Alfort


7,
avenue
du
Général
de
Gaulle


F
94704
Maisons‐Alfort
cedex


Tél:
+33
1
43
96
72
97


Mél:
ghouzelstein@vet‐alfort.fr


SOMMAIRE



 
 
 Imprimé
de
demande
d’inscription
au
D.
H.
D.
R.
…..………


page
5
 
 
 
 Lettre
d’introduction
du
Directeur
de
Recherche…..………


page
7
 
 
 
 Curriculum
Vitae
détaillé………..………


page
9
 
 
 
 Liste
des
travaux,
articles,
publications,
participation
à
des
congrès,

 à
des
groupes
de
recherche……….………


page

17
 
 
 
 Document
d’évolution
scientifique
……….………


page

21
 
 
 
 


5 UNIVERSITE PARIS 12

Scolarité Générale Bureau des Thèses e

61, avenue du Général de Gaulle 94010 CRETEIL CEDEX

Tél. : 01.45.17.12.37 ou 19.72 E-mail : ly@univ-paris12.fr

Fax : 01.45.17.12.41 latifa.belbou@univ-paris12.fr

DEMANDE D'INSCRIPTION AU DIPLOME D'HABILITATION A DIRIGER DES RECHERCHES

Nom du candidat : Mme AUBIN, épouse HOUZELSTEIN

Prénoms (dans l'ordre de l'Etat Civil ) : Geneviève, Florence, Françoise, Marie Nationalité : française née (e) le : 04/04/1969 à Evreux (27)

Adresse : 7 résidence le parc, 72 rue du 11 novembre 1918, 94700 MAISONS-ALFORT Tél : 01 43 78 22 67

Doctorat de  l'Université Obtenu le 31 mars 1999 à Paris

Titre de la Thèse : Etude génétique et analyse développementale du lignage mélanocytaire chez le mutant murin patchwork

Doctorat en Médecine Vétérinaire: . Obtenu le 19 septembre 1997 à Créteil et DEA de : Génétique Humaine

Obtenu le : septembre 1994 à l’Université Paris VII

Diplôme équivalent : ...……… Travaux ...………. Le candidat doit se rattacher à une Ecole Doctorale :

 ED : SCIENCES et INGENIERIE, MATERIAUX, MODELISATION, ENVIRONNEMENT

 ED : SCIENCES de la VIE et de la SANTE

 ED :LETTRES SCIENCES HUMAINES et SCIENCES SOCIALES

 ED : DROIT EUROPE et SOCIETE  ED: ECO, GESTION, ESPACE

Date : 03/09/09 Signature :

_________________________________________________________________________________ Avis motivé du Directeur de Recherche ou Avis du Conseil Scientifique du Responsable de l'Ecole Doctorale de l'Université

Date et Signature :  FAVORABLE

 DEFAVORABLE

__________________________________________________________________________________ Décision de la Présidente de l'Université :

 FAVORABLE  DEFAVORABLE

25-28, Rue du Docteur Roux 75724 Paris Cedex 15 Téléphone : +33 (0)1 45 68 85 55 Télécopie : +33 (0)1 45 68 86 34

Unité de Génétique fonctionnelle

de la Souris, URA CNRS 2578

Paris, le 2 Septembre 2009.

De : Jean-Jacques Panthier Téléphone : Télécopie : E-mail : 01 45 68 85 55 01 45 68 86 34 panthier@pasteur.fr Objet
:
Lettre
d’introduction
du
Directeur
de
Recherche
 


Madame
 Geneviève
 AUBIN‐HOUZELSTEIN,
 Docteur
 vétérinaire,
 Docteur
 de
 l’Université
 Paris
7,
a
travaillé
sous
ma
direction
scientifique
depuis
septembre
1993,
à
l’exception
de
 la
 période
 d’un
 stage
 post‐doctoral
 qu’elle
 a
 effectué
 au
 National
 Institute
 for
 Medical
 Research
 
 à
 Londres
 entre
 1999
 et
 
 2001.
 Mme
 Geneviève
 AUBIN‐HOUZELSTEIN,
 CR1
 à
 l’INRA,
a
fait
la
preuve
de
ses
capacités
à
l’encadrement
de
stagiaires
de
Master
(1ère_et
2ème

années),
 d’étudiant
 d’école
 d’ingénieur
 et
 de
 doctorants.
 Elle
 a
 participé
 à
 des
 jurys
 de
 soutenance
 de
 diplôme
 et
 à
 des
 jurys
 de
 recrutement.
 Elle
 a
 co‐organisé
 des
 meetings
 scientifiques
 et
 a
 été
 invitée
 à
 délivrer
 des
 communications
 orales
 lors
 de
 congrès
 internationaux.
 Enfin,
 elle
 assume
 des
 responsabilités
 administratives
 importantes
 à
 l’INRA
 et
 à
 l’Ecole
 Nationale
 Vétérinaire
 d’Alfort
où
 elle
 dirige
 en
 particulier
 l’UMR955
 INRA
 de
 Génétique
 Moléculaire
 et
 Cellulaire.
 Elle
 anime
 un
 groupe
 de
 recherche
 qui
 s’intéresse
 à
 l’auto‐renouvellement
 et
 à
 la
 différenciation
 des
 cellules
 souches
 des
 mélanocytes
 en
 utilisant
 les
 outils
 et
 les
 méthodes
 de
 la
 Génétique
 de
 la
 Souris.
 
 Pour
 toutes
 ces
 raisons,
 je
 suis
 très
 favorable
 à
 ce
 que
 Mme
 Geneviève
 AUBIN‐HOUZELSTEIN
 puisse
soutenir
son
HDR
rapidement.
 
 
 Professeur
Jean‐Jacques
Panthier
 Chef
de
l’Unité
de
Génétique
fonctionnelle
 de
la
Souris,
Institut
Pasteur


Geneviève Aubin-Houzelstein Rapport Demande HDR Curriculum Vitae 9 CURRICULUM  VITAE         Geneviève  AUBIN-­HOUZELSTEIN   40  ans  

Née  le  04/04/69  à  Evreux  (Eure)  

Mariée  ;  deux  enfants  :  Pierre,  10  ans,  et  Antoine,  7  ans  

Adresse  personnelle  :  7  résidence  le  Parc,  72  rue  du  11/11/1918,  94700  Maisons-­‐Alfort    

 

Situation  professionnelle  :  

Chargée   de   recherche   de   1ère   classe   à   l’Institut   National   de   Recherche   Agronomique.  

Date  d’entrée  à  l’INRA  :  1er  _{octobre  2001.}  

Date  d’entrée  dans  le  grade  :  1er  _{octobre  2005.}  

 

Affectation:              

UMR955  INRA-­‐ENVA  de  Génétique  Moléculaire  et  cellulaire       Ecole  Nationale  Vétérinaire  de  Maisons-­‐Alfort        

7  avenue  du  Général  de  Gaulle             F-­‐94704  Maisons-­‐Alfort  cedex  

Téléphone  :  01  43  96  71  97                 Télécopie  :  01  43  96  71  69  

E-­‐mail  :  ghouzelstein@vet-­‐alfort.fr    

Depuis  le  1er  _{juillet  2007  :}    

Mise   à   disposition   à   mi-­‐temps   à   l’Institut   Pasteur,   dans   l’Unité   de   Génétique   Fonctionnelle  de  la  Souris,  directeur  :  Jean-­‐Jacques  Panthier.  

   

                 

1. CURSUS  PROFESSIONNEL    

Oct.  1994-­mars  1999     Stage  de  doctorat    

        UMR955  INRA-­‐ENVA  de  génétique  moléculaire  et  cellulaire   Etude   génétique   et   analyse   développementale   du   lignage   mélanocytaire   chez   le   mutant   murin   patchwork   (Directeur   de   thèse:  Pr  J.  J.  Panthier).  

Avril  1999-­sept.  2001     Stage  postdoctoral  

Division   of     Molecular   Neuroendocrinology,   National   Institute   for  Medical  Research,  Londres,  U.  K.  

        Directeur:  Pr  Iain  Robinson  

Geneviève Aubin-Houzelstein Rapport Demande HDR Curriculum Vitae

10 Financement  :  Association  pour  la  Recherche  contre  le  Cancer   puis  Commission  Européenne:  bourse  Marie  Curie.  

Oct.  2001-­sept.  2005       Chargée  de  recherche  de  2ème  _{classe  à  l’INRA,}      

UMR955  INRA-­‐ENVA  de  génétique  moléculaire  et  cellulaire.  

Depuis  oct.  2005         Chargée  de  recherche  de  1ère  classe  à  l’INRA  

UMR955  INRA-­‐ENVA  de  génétique  moléculaire  et  cellulaire.  

Janv.  à  déc.  2008   Directrice   Adjointe   de   l’UMR955   INRA-­‐ENVA   de   génétique   moléculaire  et  cellulaire.  

Depuis  janvier  2009     Directrice   de   l’UMR955   INRA-­‐ENVA   de   génétique   moléculaire   et  cellulaire.  

     

2. ETUDES  EFFECTUEES,  DIPLOMES  OBTENUS    

Juin  1987   Baccalauréat  série  C,  mention  assez  bien,  lycée  Van  Gogh  (Val  d’Oise)  

Sept.  1994     DEA  de  génétique  humaine,  mention  très  bien,  Paris  VII  

Sept.  1997    Doctorat   vétérinaire,   mention   très   honorable   avec   félicitations   du   jury,  médaille  d’argent,  Maisons-­‐Alfort  

 

Mars  1999    Doctorat   de   génétique   humaine,   mention   très   honorable   avec   félicitations  du  jury,  Paris  VII  

   

 

3. FORMATIONS    

Mars  1997:    Formation   de   15   jours   pour   l’obtention   du   diplôme   d'aptitude   à   l'expérimentation  animale  de  niveau  1,  Maisons-­‐Alfort.  

Février  2004     Formation  de  2  jours  :  «  La  conduite  de  l’entretien  d’appréciation  »,  à   Jouy  en  Josas,  organisée  par  la  formation  permanente  INRA  du  Centre   de  Recherche  de  Jouy  en  Josas.  

Mars-­mai  2007     Formation   de   4   jours  :   «  De   l’encadrement   d’un   projet   doctoral   au   devenir   professionnel   du   docteur  »,   à   Paris,   organisée   par   la   Maison   des  Ecoles  Doctorales  et  l’Université  Paris  VI.  

Geneviève Aubin-Houzelstein Rapport Demande HDR Curriculum Vitae

11

Mai-­décembre   2008     Formation   de   10   jours  :   «  Nouveaux   directeurs   d’unité  »,   à   Paris,  

organisée  par  la  formation  permanente  nationale  de  l’INRA.  

1er  _{décembre  2008     Eucomm   practical   informatics   training   day,   Wellcome   Trust   Sanger}  

Institute,  Hinxton,  Cambridge,  UK.  

5  février  2010   Formation   «  Management   de   la   prévention   et   responsabilités   juridiques   des   DU  »   à   Jouy   en   Josas,   organisée   par   la   formation   permanente  INRA  du  Centre  de  Recherche  de  Jouy  en  Josas.  

31  mars  2010   Formation   «  Présidents   de   jury   de   concours   externe   de   recrutement   des  ITA  »  à  Paris,  organisée  par  la  formation  permanente  nationale  de   l’INRA.  

   

4. MEMBRE  DE  SOCIETES  SAVANTES  

 

Depuis  2008     Membre  de  la  European  Society  for  Pigment  Cell  Research,     Membre  de  l’International  Mouse  Genome  Society  

 

Depuis  2001     Membre  de  la  Société  Française  de  Génétique    

   

5. ENSEIGNEMENT    

1995-­1999      INRA,   Centre   de   Recherche   de   Jouy   en   Josas.   En   charge   des   TP-­‐TD   d’anatomie  et  de  physiologie  des  animaux  de  laboratoire  dans  le  cadre   de   la   formation   des   animaliers   de   niveau   2   (public:   techniciens   de   laboratoire).  36  heures  par  an.  

Depuis  1996      Institut  Pasteur.  En  charge  du  cours  de  physiologie  de  la  reproduction   de  la  souris  dans  le  cadre  du  cours  de  génétique  de  la  souris  (public:   niveau  DEA  ou  plus).  1h30  par  an.  

2002-­2006      Université  Paris  VII.  En  charge  du  cours  d’introduction  à  la  génétique   murine   dans   le   cadre   du   module   “Les   ressources   de   la   souris  :   introduction   à   l’exploitation   de   cet   organisme   modèle”   de   l’école   doctorale  de  la  logique  du  vivant.  1h30  par  an.  

Depuis  2006        Ecole   Vétérinaire   d’Alfort.   Co-­‐encadrement   des   travaux   dirigés   de   biologie   du   développement  :   «  Observation   d’embryons   de   souris  

Geneviève Aubin-Houzelstein Rapport Demande HDR Curriculum Vitae

12 transgéniques   aux   stades   postimplantatoire.   Suivi   du   devenir   de   cellules  de  crête  neurale  et  du  lignage  mélanocytaire  ».  8h  par  an.    

 

6. ENCADREMENT  SCIENTIFIQUE    

Encadrement  de  personnel  :    

 

Encadrement  du  personnel  de  l’animalerie  souris  de  l’UMR955    

• Audrey  Casanova-­‐Bouchtat,  ATP2  INRA,  2004-­‐   • Marie-­‐Laure  Daupin,  ATP2  INRA,  2001-­‐2009   • Corine  Koenen,  ATP2  INRA,  2001-­‐  

• Patricia  Wiart,  TR  INRA,  2008-­‐.    

Encadrement  de  2  techniciens  de  recherche  de  l’UMR955    

• Stéphanie  Gadin,  TR  INRA,  2006-­‐   • Pierrick  Salaün,  TR  INRA,  2001-­‐    

 

Encadrement  d’étudiants  :  

   

Maître  de  stage  d’étudiants  ENVA  2ème  _{année  (stages  de  1  mois)}  

 

• Marie  Brunet,  2009   • Isabelle  Dumas,  2009    

Encadrement   de   stage   en   vue   de   l’obtention   du   Diplôme   de   l’Ecole   Pratique   des   Hautes   Etudes    

 

• Pierrick  Salaün:  Etude  génétique  d’une  dolichomégalie  (allongement  du  tube   digestif)  chez  la  souris.  Soutenance  le  30  novembre  2004  :  mention  très  bien.    

Geneviève Aubin-Houzelstein Rapport Demande HDR Curriculum Vitae

13  

Encadrement  de  stages  de  Master  1,  Université  Paris  6  

 

• Betsy  Julienne,  mars-­‐mai  2003  :  Recherche  de  remaniements  génomiques  en   amont  du  gène  Strawberry  Notch  homolog  2  chez  la  souris,  par  Southern  blot.   Mention  bien.  

• Ghania   Taleb,   mars-­‐juin   2005  :   Rôle   de   Mbd3  dans  un  phénotype  de  pelage   chez  la  souris.  Mention  bien.  

• Adeline  Caux,  avril-­‐juin  2010  :  Validation  génétique  de  gènes  candidats  pour   le  phénotype  d’allongement  intestinal  des  souris  de  la  lignée  PRM/Alf.  

 

Encadrement  de  stage  de  4ème  _{année  d’école  d’ingénieurs}    

 

• Sandrine  Schwob,  avril-­‐juillet  2005  :  stage  d’initiation  à  la  recherche  de  4ème   année   d’école   d’ingénieur   en   agriculture   (Esitpa,   Rouen)  :   Etude   d’une   mutation   génétique   qui   affecte   le   processus   de   différenciation   des   cellules   souches  chez  la  souris.  Rapport  écrit  :  mention  très  bien  avec  félicitations  du   jury.  

 

Encadrement  de  stages  de  Master  2,  Université  Paris  6  

 

• Johanna   Djian,   oct.   2004-­‐sept.   2005  :   Etudes   de   mutations   au   locus  

patchwork  chez  la  souris.  Mention  bien.  

• Sabrine   Hammiche,   oct.   2006-­‐juill.   2007  :   Déterminisme   génétique   de   la   dolichomégalie   intestinale   chez   les   souris   PRM/Alf.   Soutenance   le   27   juin   2007.  Mention  bien.  

• Cyrine   Rammah,   oct.   2009-­‐juin   2009  :   Etude   du   rôle   de   Strawberry   Notch  

homolog  2  (Sbno2)  dans  le  développement  embryonnaire  et  le  maintien  des  

cellules   souches   de   mélanocytes   chez   la   souris.   Soutenance   le   24juin   2009.   Mention  assez  bien.  

 

Co-­‐encadrement  de  thèse  de  doctorat    

• Participation  à  l’encadrement  de  Nelly  Da  Silva  pendant  la  fin  de  son  stage  de   doctorat   de   Science   et   Technologie,   spécialité   Génétique   Humaine,   de   l’Université  Paris  7  :  oct.  2001-­‐déc.  2002  :  Dépigmentation  et  dolichomégalie   chez   une   souris  :   analyses   génétiques   et   phénotypique.   Thèse   de   doctorat  

Geneviève Aubin-Houzelstein Rapport Demande HDR Curriculum Vitae

14 soutenue  le  20  décembre  2002;  mention  très  honorable  avec  les  félicitations   du  jury.  

 

• Johanna   Djian,   oct.   2005-­‐sept.   2008  :   stage   de   doctorat   de   Science   et   Technologie,  mention  Biologie  Cellulaire  et  Moléculaire,  spécialité  Génétique,   de   l’Université   Paris   6  :   Etude   du   contrôle   de   l’homéostasie   des   cellules   souches   des   mélanocytes   chez   la   souris.   Thèse   de   doctorat   soutenue   le   15   octobre  2008  ;  mention  très  honorable  avec  les  félicitations  du  jury.  

 

7. ANIMATION  SCIENTIFIQUE    

2000-­  2002     Responsable   du   chromosome   7   de   rat   dans   le   cadre   du   Single   Rat  

Chromosome  Committee  (SRCC)  

Depuis  2009   Co-­‐responsable  du  réseau  «  Gènes  de  Coloration  des  Animaux  Domestiques  »  

du  Département  de  Génétique  Animale  de  l’INRA  :    

Organisation  d’un  séminaire  les  22  et  23  juin  2009  à  Maisons-­‐Alfort   Gestionnaire  d’une  liste  de  diffusion  

Coordinatrice  dans  la  mise  en  place  d’un  site  web  

2009     Co-­‐organisatrice   de   la   Journée   du   Département   de   Génétique   Animale   de   l’INRA  :  Apports  de  la  Souris  à  la  Santé  et  aux  Productions  Animales,  qui  aura   lieu  les  9  et  10  novembre  2009.    

    8. ACTIVITES  TRANSVERSALES     Management    

Depuis  octobre  2001    Responsable   de   l’animalerie   rongeurs   de   l’UMR   955   (environ   2500  

souris).   Encadrement   des   4   animalières  ;   gestion   budgétaire  ;     gestion   sanitaire  ;  gestion  technique  ;  référent  des  fournisseurs.  

Depuis  mars  2004     Conduite  de  l’entretien  de  deux  techniciens  de  recherche  et  de  quatre  

agents   d’animalerie   dans   le   cadre   de   l’évaluation   bisannuelle   du   personnel   ITA  INRA  

2008         Directrice  Adjointe  de  l’UMR  955  

Depuis  janvier  2009    Directrice  de  l’UMR955  

   

Geneviève Aubin-Houzelstein Rapport Demande HDR Curriculum Vitae

15

Membre  de  jurys  de  concours  de  recrutement  

 

Nov-­déc  2003       Membre   du   jury   du   concours   AJA11   pour   le   recrutement   d’agents   animaliers,  Jouy  en  Josas.  

Mai-­juin  2006       Membre   du   jury   du   concours   TRA12   pour   le   recrutement   de   techniciens  de  recherche,  Jouy  en  Josas.  

Avril-­juin  2010   Présidente   du   jury   du   concours   TRA07   pour   le   recrutement   de   techniciens  en  élevage  et  production  animale,  Jouy  en  Josas.  

Avril-­juin  2010   Membre  du  jury  du  concours  CR2-­‐2  pour  le  recrutement  de  chargés  de   recherche  de  2ème  _{classe,  Paris.}  

 

Membre  de  jurys  de  soutenance  de  diplôme  

 

30  novembre  2004       Examinatrice   dans   le   jury   de   soutenance   du   Diplôme   de   l’Ecole  

Pratique   des   Hautes   Etudes   de   M.   Pierrick   Salaün.   :   Etude   génétique   d’une  dolichomégalie  (allongement  du  tube  digestif)  chez  la  souris.    

29  octobre  2008       Examinatrice   dans   le   jury   de   soutenance   de   thèse   de   doctorat   de   l’université   de   Limoges   de   M.   Amro   Kabbara  :   Coloration   de   la   robe   chez   le   bovin.   Etudes   fonctionnelles   des   allèles   du   gènes   Silver/Pmel17   bovin   et   contribution   à   l’identification   de   gènes   impliqués  dans  le  changement  post-­‐natal  de  la  coloration  chez  la  race   gasconne.  

15  octobre  2008   Membre  du  jury  de  soutenance  de  thèse  de  doctorat  de  Mlle  Johanna   Djian   en   tant   que   co-­‐directrice   de   thèse  :   Etude   du   contrôle   de   l’homéostasie  des  cellules  souches  des  mélanocytes  chez  la  souris.    

 

Activités  collectives  d’organisation  de  la  recherche  :  

 

Mai  2007        Membre   élu   du   Conseil   Scientifique   de   Centre   de   Jouy   en   Josas   pour   l’exercice  2007-­‐2011.  

 

Depuis  2009   Membre   du   Comité   d’éthique   en   matiière   d’expérimentation   animale   AFSSA/ENVA/Université  Paris  12.  

 

Depuis  2009   Membre  du  Pôle  d’Expérimentation  Animale  «  Animaux  modèles  »  de   l’INRA.  

 

 

Geneviève Aubin-Houzelstein Rapport Demande HDR Liste des publications et travaux 17

LISTE
DES
TRAVAUX,
ARTICLES,
PUBLICATIONS,
PARTICIPATION
A



DES
CONGRES,
A
DES
GROUPES
DE
RECHERCHE



 
 
Articles
dans
des
revues
internationales
ou
nationales
avec
comité
de
lecture
 


• X
 Montagutelli,
 ME
 Hogan,
 G
 Aubin,
 A
 Lalouette,
 JL
 Guenet,
 LE,
 King,
 Jr,
 JP
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(1996).
Lanceolate
hair
(lah):
a
recessive
mouse
mutation
with
alopecia
 and
abnormal
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J
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107
:20‐25.





• G.
 Aubin­Houzelstein,
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 Bernex,
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 (1998).
 Survival
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is
dependent
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in
the
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 • G.
Aubin­Houzelstein
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J.
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Panthier
(1999).
The
patchwork
mouse
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 implication
for
melanocyte
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• G.
 Aubin­Houzelstein,
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 Bellier,
 P
 Salaun,
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 Genetic
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 between
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 factor
 and
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 zygotic
 genome
controls
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intestine
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• S.
 Bellier,
 N.
 R.
 Da
 Silva,
 G.
 Aubin­Houzelstein,
 C.
 Elbaz
 and
 J.
 J.
 Panthier.
 Accelerated
 intestinal
 transit
 in
 inbred
 mice
 with
 an
 increased
 number
 of
 interstitial
 cells
 of
 Cajal
 (2005).
 Am
 J
 Physiol
 Gastrointest
 Liver
 Physiol,
 288(1):G151‐8





• G.
Aubin­Houzelstein,
J.
Djian‐Zaouche,
F.
Bernex,
S.
Gadin,
V.
Delmas,
L.
Larue,
J.
 J.
 Panthier.
 Melanoblasts
 proper
 location
 and
 timed
 differentiation
 depend
 on
 Notch/RBP‐J
 signaling
 in
 postnatal
 hair
 follicles
 (2008).
 J.
 Invest.
 Dermatol.
 28:2686‐95.





• S.
 Allix,
 E.
 Reyes‐Gomez,
 G.
 Aubin­Houzelstein,
 D.
 Noël,
 L.
 Tiret,
 J.J.
 Panthier,
 F.
 Bernex.
Uterine
contractions
depend
on
Kit‐positive
interstitial
cells
in
the
mouse
:
 Genetic
and
pharmacological
evidence
(2008).
Biol.
Reprod.
79:510‐517.


• J.
 Djian‐Zaouche,
 S.
 Gadin,
 F.
 Bernex,
 F.
 Relaix,
 M.
 Buckingham,
 J.J.
 Panthier,
 G.


Aubin­Houzelstein.
Analysis
of
Pax3­GFP/+
mice
highlights
novel
aspects
of
PAX3


expression
 in
 hair
 follicles
 and
 reveals
 that
 PAX3
 is
 not
 required
 for
 melanocyte
 differentiation.
Soumis
pour
publication.
 
 Articles
de
revue
dans
des
revues
avec
comité
de
lecture
 
 • G.
Aubin­Houzelstein
et
J.
J.
Panthier
(1998).
L'effet
de
communauté,
un
concept
 embryologique
sujet
à
controverse.
Médecine/Science,
14:1176‐84.


Geneviève Aubin-Houzelstein Rapport Demande HDR Liste des publications et travaux

18 


• J.J.
 Panthier,
 
 G.
 Aubin­Houzelstein,
 S.
 Bellier
 (2006).
 Régulation
 de
 la
 taille
 des
 organes
:
génétique
et
physiopathologie
d'un
allongement
du
tube
digestif
chez
la
 Souris.
Bull.
Acad.
vét.
Fr,
159:255‐259.
 
 • G.
Aubin­Houzelstein,
J.
Djian‐Zaouche,
J.
J.
Panthier
(2008).
Les
cellules
souches
 de
mélanocytes.
J
Soc
Biol.
202(1):25‐32.
 
 


Conférences
 invitées
 et
 conférences
 données
 à
 l’invitation
 du
 Comité
 d’organisation
 dans
un
congrès
national
ou
international






• G.
Aubin­Houzelstein,
NR
Da
Silva,
F.
Bernex,
J.
Djian,
D.
Leroux
and
JJ.
Panthier.
 Defective
 communication
 among
 melanocyte
 stem
 cells
 in
 hair
 follicles
 of
 the
 patchwork
mutant
mouse.
Communication
donnée
par
JJ
Panthier
au
12th_meeting

of
the
European
Society
for
Pigment
Cell
Research,
22‐25
septembre
2004,
Paris.
 


• S
Bellier,
G.
Aubin­Houzelstein,
NR
Da
Silva,
,
JM
Vanderwinden,
X
Montagutelli,
 and
JJ
Panthier.
Genetic
and
physiological
analysis
of
the
intestinal
lengthening
in
 mouse
 strains.
 Communication
 donnée
 par
 JJ
 Panthier
 
 à
 la
 19th_{International}

Mouse
Genome
Conference,
5‐8
novembre
2005,
Strasbourg.





• G.
 Aubin­Houzelstein,
 F.
 Bernex,
 J.
 Djian‐Zaouche,
 V.
 Delmas,
 I.
 Yajima
 and
 JJ.
 Panthier.
 Notch/RBP‐J
 signaling
 controls
 melanocyte
 lineage
 development.
 Communication
donnée
par
JJ
Panthier
au
13th_{meeting
of
the
European
Society
for}

Pigment
Cell
Research,
24‐27
septembre
2006,
Barcelone,
Espagne.





• G.
 Aubin­Houzelstein,
 J.
 Djian‐
 Zaouche,
 F.
 Bernex,
 V.
 Delmas
 and
 JJ.
 Panthier.
 Premature
 melanocyte
 differentiation
 in
 notch/RBP‐J
 mutants.
 Communication
 donnée
par
JJ
Panthier
au
2007
Pigment
Cell
Development
Workshop,
14‐15
juin
 2007,
Reykjavik,
Islande.





• G.
 Aubin­Houzelstein,
 J.
 Djian‐
 Zaouche,
 F.
 Bernex,
 V.
 Delmas
 and
 JJ.
 Panthier.
 Melanocyte
precocious
differentiation
and
ectopic
localization
in
Notch
conditional
 loss‐of‐function
 mice.
 Communication
 donnée
 par
 G.
 Aubin‐Houzelstein
 au
 14th

meeting
of
the
European
Society
for
Pigment
Cell
Research,
14‐17
octobre
2007,
 Bari,
Italie.
 
 
 Communications
par
affiche
dans
un
congrès
international
ou
national

 


• G.
 Aubin­Houzelstein,
 NR
 Da
 Silva,
 S
 Bellier,
 P
 Salaun,
 X
 Montagutelli,
 and
 JJ
 Panthier.
Phenotypic
and
genetic
analysis
of
the
intestinal
lengthening
in
PRM/Alf
 mice.
 Poster
 présenté
 par
 G.
 Aubin‐Houzelstein
 à
 la
 17th_{International
 Mouse}

Genome
Conference,
8‐11
novembre
2003,
Braunschweig,
Allemagne.
 


• G.
Aubin­Houzelstein,
NR
Da
Silva,
F.
Bernex,
J.
Djian,
D.
Leroux
and
JJ.
Panthier.
 Defective
 communication
 among
 melanoblasts
 in
 hair
 follicles
 of
 the
 patchwork


Geneviève Aubin-Houzelstein Rapport Demande HDR Liste des publications et travaux

19 mutant
 mouse.
 Poster
 présenté
 par
 G.
 Aubin‐Houzelstein
 à
 la
 19th_{International}

Mouse
Genome
Conference,
5‐8
novembre
2005,
Strasbourg.





• G.
 Aubin­Houzelstein,
 P.
 Salaün,
 L.
 Guillaud,
 and
 JJ.Panthier.
 Phenotypic
 instability
 of
 patchwork
 mutation:
 an
 epigenetic
 effect?
 Poster
 présenté
 par
 G.
 Aubin‐Houzelstein
 au
 13th_{meeting
 of
 the
 European
 Society
 for
 Pigment
 Cell}

Research,
24‐27
septembre
2006,
Barcelone,
Espagne.
 


• J.
 Djian‐Zaouche,
 G.
 Aubin­Houzelstein,
 F.
 Bernex,
 and
 J.J.
 Panthier.


Characterization
 of
 the
 melanocyte
 lineage
 in
 patchwork
 hair
 follicles.
 Poster


présenté
par
J.
Djian‐Zaouche
au
13th_{meeting
of
the
European
Society
for
Pigment}

Cell
Research,
24‐27
septembre
2006,
Barcelone,
Espagne.





• G.
 Aubin­Houzelstein,
 F.
 Bernex,
 J.
 Djian‐Zaouche,
 V.
 Delmas,
 I.
 Yajima
 and
 JJ.
 Panthier.
Notch/RBP‐J
signaling
controls
melanocyte
lineage
development.
Poster
 présenté
par
J.J.
Panthier
à
la
20th_{International
Mouse
Genome
Conference,
12‐15}

novembre
2006,
Charleston,
USA.
 


• J.
 Djian‐Zaouche,
 G.
 Aubin­Houzelstein,
 F.
 Bernex,
 and
 J.J.
 Panthier.


Characterization
 of
 the
 melanocyte
 lineage
 in
 patchwork
 hair
 follicles.
 Poster


présenté
par
J.
Djian‐Zaouche
au
14th_{meeting
of
the
European
Society
for
Pigment}

Cell
Research,
14‐17
octobre
2007,
Bari,
Italie.
 


Communications
avec
actes
dans
un
congrès
international
ou
national
 


• Characterization
 of
 the
 melanocyte
 lineage
 in
 patchwork
 hair
 follicles.
 J.
 Djian‐ Zaouche,
 G.
 Aubin­Houzelstein,
 F.
 Bernex,
 N.
 Da
 Silva,
 P.
 Salaün,
 J.J.
 Panthier.
 Pigment
Cell
Research
19(5),
516.
OCT
2006,
Meeting
Abstract.





• Phenotypic
 instability
 at
 the
 patchwork
 locus
:
 an
 epigenetic
 effect
?
 G.
 Aubin­

Houzelstein,
P.
Salaün,
L.
Guillaud,
J.J.
Panthier.
Pigment
Cell
Research
19(5),
518.


OCT
2006,
Meeting
Abstract.
 


Communications
orales
sans
actes
dans
un
congrès
international
ou
national
 


• G.
 Aubin­Houzelstein.
 Etude
 de
 patchwork,
 une
 mutation
 murine
 affectant
 les
 cellules
 souches
 de
 mélanocytes.
 4ème_{rencontre
 du
 réseau
 GCAD
 «
Gènes
 de}

Coloration
des
Animaux
Domestiques
»,
INA
P‐G,
Paris,
12
et
13
février
2004.
 


• G.
 Aubin­Houzelstein.
 Données
 récentes
 en
 génétique
 de
 la
 souris.
 3ème
 journée
 scientifique
 et
 technique"transgenèse
 souris"
 organisée
 par
 le
 Département
 de
 physiologie
animale
et
systèmes
d’élevage,
FIAP,
Paris,
23
mars
2004.





• G.
Aubin­Houzelstein.
Le
piégeage
de
gènes
:
principe,
intérêts
et
limites.
Journée
 d’animation
 scientifique
 "Recherche
 de
 gènes
 impliqués
 dans
 la
 fertilité
 :


Geneviève Aubin-Houzelstein Rapport Demande HDR Liste des publications et travaux

20 programmes
 en
 cours
 et
 nouvelles
 stratégies"
 organisée
 par
 le
 groupe
 de
 transversalité
"Contrôle
génétique
de
la
reproduction",
INRA,
Paris,
12
juin
2006.





• G.
Aubin­Houzelstein.
Intérêt
et
limites
des
modèles
animaux
pour
comprendre


les
 pathologies
 humaines.
 Séminaire
 de
 réflexion
 des
 départements
 de
 Santé
 Animale
et
de
Génétique
Animale
de
l’INRA,
Tours,
3
mars
2009.





Rapport
diplômant
 


• G.
 Aubin­Houzelstein.
 Etude
 génétique
 et
 analyse
 développementale
 du
 lignage
 mélanocytaire
 chez
 le
 mutant
 murin
 patchwork.
 Thèse
 pour
 l’obtention
 du
 diplôme
de
docteur
de
l’université
Paris
7,
spécialité
génétique
humaine,
soutenue
 le
31
mars
1999.
 
 
 Rapport
diplômant
à
caractère
bibliographique
 


• G.
 Aubin­Houzelstein.
 Les
 gènes
 de
 pigmentation
 chez
 la
 souris.
 Thèse
 pour
 l’obtention
 du
 diplôme
 de
 docteur
 vétérinaire,
 soutenue
 le
 19
 septembre
 1997.
 Médaille
d'argent.
 
 

 Participation
à
des
groupes
de
recherche
 
 • 2000­
2002

 Responsable
du
chromosome
7
de
rat
dans
le
cadre
du
Single
Rat
 Chromosome
Committee
(SRCC)
 
 • Depuis
2009
 Co‐responsable
du
réseau
«
Gènes
de
Coloration
des
Animaux
 Domestiques
»
du
Département
de
Génétique
Animale
de
l’INRA
:

 Organisation
d’un
séminaire
les
22
et
23
juin
2009
à
Maisons‐Alfort
 Gestionnaire
d’une
liste
de
diffusion
 Coordinatrice
dans
la
mise
en
place
d’un
site
web
 



 
 
 





























DOCUMENT
D’EVOLUTION
SCIENTIFIQUE


Geneviève  Aubin-­Houzelstein                        Rapport  Demande  HDR   Document  d’évolution  scientifique  

 

  23  

TABLE  DES  MATIERES  

 

TABLE  DES  MATIERES...23  

INTRODUCTION...25  

PATCHWORK  :  UNE  MUTATION  QUI  PORTE  BIEN  SON  NOM… ...25   UN  PATCHWORK  DE  PHENOTYPES  : ...25   UN  PATCHWORK  DE  RESULTATS  : ...25  

UN  PATCHWORK  DE  CONTRIBUTEURS  :...25   UNE  PRESENTATION…EN  PATCHWORK  : ...25  

1ERE  _{PARTIE  :  1993-­2001  :  LES  ANNEES  D’APPRENTISSAGE...27}  

ANALYSE  DU  PHENOTYPE  DES  SOURIS  PRM/Alf...27   1.   ORIGINE  DE  LA  LIGNEE  PRM/ALF...27  

2.   PHENOTYPE  DE  PELAGE...27  

2.1.   Examen  macroscopique ...27  

2.2.   Un  effet  de  communauté  entre  mélanoblastes  est  à  l’origine    du  phénotype  poivre  et  sel   des  souris  patchwork...28  

2.3.   La  mutation  patchwork  affecte  les  cellules  du  lignage  mélanocytaire  à  tous  les  stades  de   différenciation...29  

2.4.   Analyse  de  la  transmission  de  la    réversion  phénotypique  associéE  à  la  mutation  

patchwork ...30   3.   PHENOTYPE  D’ALLONGEMENT  INTESTINAL  ET  UTERIN ...30  

3.1.   Analyse  du  phénotype  d’allongement  intestinal...31  

3.2.   Analyse  du  phénotype  d’allongement  utérin...31  

2EME  _{PARTIE  :  2001-­2008  :  LES  ANNEES  DE  PRISE  D’AUTONOMIE ...}  

ET  D’APPRENTISSAGE  DE  L’ENCADREMENT  SCIENTIFIQUE ...33   1.   DE  LA  MUTATION  PATCHWORK  A  LA  VOIE  NOTCH  :  LES  MUTATIONS  AFFECTANT  LES  CELLULES  SOUCHES   DE  MELANOCYTES...33  

1.1.   Identification  de  Strawberry  Notch  homolog  2  comme  gène  candidat  pour  patchwork33  

1.1.1.   Cartographie  génétique  et  physique  du  locus  patchwork... 33   1.1.2.   Approche  gène  candidat ... 33   1.1.3.   Les  souris  surexprimant  Strawberry  Notch  homolog  2  dans  le  lignage  mélanocytaire  récapitulent  le   phénotype  patchwork. ... 34  

1.2.   Rôle  de  la  voie  Notch  dans  le  développement  et  la  biologie  du  lignage  mélanocytaire...34  

1.2.1.   La  voie  Notch  participe  à  l’homéostasie  des  cellules  souches  de  mélanocytes. ... 34   1.2.2.   La  voie  Notch  est  nécessaire  au  contrôle  de  la  migration  et  de  la  différenciation  des  cellules  du   lignage  mélanocytaire. ... 35   1.2.3.   La  surexpression  de  Notch1  dans  le  lignage  mélanocytaire  n’affecte  pas  la  biologie  des  cellules   souches  de  mélanocytes... 36   1.2.4.   Des  mutations  dans  Strawberry  Notch  2  et  Notchless,  deux  potentiels  gènes  modificateurs  de  la  voie   Notch,  conduisent  à  un  blanchiment  accéléré  du  pelage. ... 37   1.2.5.   Etude  de  la  fonction  de  Strawberry  Notch  homolog  2    chez  la  souris... 41  

2.   DETERMINISME  GENETIQUE  DE  L’ALLONGEMENT  INTESTINAL  DES  SOURIS  PRM/ALF...43  

2.1.   L’allongement  intestinal  des  souris  PRM/Alf  est  un  caractère  polygénique  complexe....43  

2.1.1.   Mode  de  transmission  du  phénotype  d’allongement  intestinal ... 43   2.1.2.   Influence  du  sens  de  croisement... 44   2.1.3.   Interaction  des  génomes  maternels  et  zygotiques... 44  

2.2.   Approche  gènes  candidats...44  

2.2.1.   Il  existe  dans  la  région  patchwork  un  ou  plusieurs  gènes  qui  influencent  la  taille  du  tube  digestif... 44   2.2.2.   La  longueur  du  tube  digestif  est  associée  au  génotype  pour  Igf1... 45  

3EME  _{PARTIE:  2009-­  :  LA  PERIODE  DE  GESTION  DE  PROJETS ...47}  

1.   CONTROLE  GENETIQUE  DE  L’HOMEOSTASIE  ET  DE  LA  TUMORIGENESE  DES  CELLULES  SOUCHES  DE   MELANOCYTES...47  

Geneviève  Aubin-­Houzelstein                        Rapport  Demande  HDR   Document  d’évolution  scientifique  

 

  24  

1.2.   Méthodologie ...48  

1.2.1.   Etude  des  mécanismes  régulant  l’homéostasie  des  cellules  souches  de  mélanocytes  à  l’aide  de  souris   génétiquement  modifiées ... 48  

2.   RECHERCHE  DE  LOCI  ASSOCIES  A  L’ALLONGEMENT  INTESTINAL  DES  SOURIS  PRM/ALF...50  

2.1.   Problématique,  hypothèses  et  objectifs  du  projet ...50  

2.2.   Methodologie ...51  

2.2.1.   Recherche  d’une  association  entre  le  génotype  aux  loci  Igfbp1  à  6,  Apoa1  et  Mfge8  et  la  longueur  du   tube  digestif  des  individus  BC1  entre  les  lignées  PRM/Alf  et  DBA/2J ... 51   2.2.2.   Comparaison  de  l’état  de  méthylation  des  loci  Igfbp  des  ADN  des  souris  PRM/Alf  descendant  de   femelles  PRM/Alf  ayant  ou  n’ayant  pas  reçu  l’aliment  hyperméthylant... 51  

CONCLUSION...53  

BIBLIOGRAPHIE ...55  

Geneviève  Aubin-­Houzelstein                        Rapport  Demande  HDR   Document  d’évolution  scientifique  

 

  25  

INTRODUCTION  

 

PATCHWORK  :  UNE  MUTATION  QUI  PORTE  BIEN  SON  NOM…  

   

UN  PATCHWORK  DE  PHENOTYPES  :    

 

Nous   nous   sommes   initialement   intéressés   à   la   souris   patchwork   pour   son   phénotype   de   pelage   tout   à   fait   particulier.   Au   cours   de   notre   travail,   nous   avons   découvert   que   les   souris   de   la   lignée   PRM/Alf   sur   laquelle   est   conservée   la   mutation   présentaient   d’autres   phénotypes   conduisant   à   des   modifications   physiologiques   que   nous  avons  étudiées.    

 

UN  PATCHWORK  DE  RESULTATS  :  

 

Accumulés  au  cours  de  16  ans  de  travail,  les  résultats  ont  été  concrétisés  par  des   publications,  ou,  intrigants  mais  non  compris,  ils  ont  été  mis  provisoirement  de  côté  en   attendant  d’arriver  à  les  placer  dans  l’image  d’ensemble.  J’ai  fait  le  choix  de  présenter  le   plus  de  résultats  non  publiés  possible  dans  la  mesure  du  format  imparti,  afin  de  montrer   les  pistes  qui  ont  été  investiguées  et  l’évolution  de  notre  réflexion  scientifique,  liée  aux   révolutions   conceptuelles   que   nous   avons   connues,   telles   que   la   notion   de   cellules   souches,  normales  et  cancéreuses,  l’identification  des  cellules  souches  de  mélanocytes,   et  la  probable  existence  de  cellules  souches  de  mélanomes.  

 

UN  PATCHWORK  DE  CONTRIBUTEURS  :  

 

Même   si   la   mutation   patchwork   et   la   souris   PRM/Alf   ont   constitué   le   cœur   de   mon  activité  de  recherche  depuis  mon  DEA  en  1993  (hormis  mes  deux  années  et  demi   de  stage  postdoctoral  à  Londres),  elles  ont  «  occupé  »  de  nombreux  jeunes  chercheurs,  et   ont  été  l’objet  de  la  thèse  de  doctorat  de  trois  d’entre  eux.  J’ai  été  la  première  des  trois   doctorantes,  j’ai  participé  à  l’encadrement  des  deux  autres  ainsi  que  de  six  étudiantes  de   niveau   Master   1   et   2   et   de   plusieurs   étudiantes   vétérinaires.   Cette   souris   m’aura,   assurément,  permis  de  me  former  et  de  former  nombre  d’étudiants  par  et  à  la  recherche.        

UNE  PRESENTATION…EN  PATCHWORK  :    

J’ai   fait   le   choix   de   présenter   les   résultats,   en   me   basant   sur   les   questions   scientifiques,   pour   essayer   d’appréhender   chaque   question   dans   sa   globalité,   sans   me   préoccuper  du  moment  où  chaque  résultat  a  été  obtenu.  Néanmoins,  pour  plus  de  clarté,   j’ai  découpé  ce  mémoire  en  trois  parties  chronologiques:  les  années  d’apprentissage,  qui   couvrent  la  période  1993-­‐2001;  les  années  de  prise  d’autonomie  et  d’apprentissage  de   l’encadrement  scientifique,  qui  correspondent  à  la  période  2001-­‐2008  ;  et  la  période  de   gestion  de  projets,  qui  a  débuté  en  2009.  Cependant,  ce  découpage  est  artificiel  puisque   les  résultats  sur  un  sujet  donné  ont  été  accumulés  de  façon  non  linéaire.  

Geneviève  Aubin-­Houzelstein                        Rapport  Demande  HDR   Document  d’évolution  scientifique  

 

  26  

Geneviève  Aubin-­Houzelstein                        Rapport  Demande  HDR   Document  d’évolution  scientifique  

 

  27  

1

ERE

 _{PARTIE  :  1993-­2001  :  LES  ANNEES  D’APPRENTISSAGE}  

ANALYSE  DU  PHENOTYPE  DES  SOURIS  PRM/Alf  

 

 

 

1. ORIGINE  DE  LA  LIGNEE  PRM/Alf  

 

La   mutation   récessive   patchwork   (pwk)   est   apparue   spontanément   dans   l’élevage  d’un  marchand  d’animaux  à  San  Francisco,  sur  un  fonds  génétique  indéterminé.   En   1990,   Karen   Moore,   alors   chercheuse   dans   le   laboratoire   de   Nancy   Jenkins   et   Neal   Copeland   au   National   Cancer   Institute   de   Frederick,   Maryland,   a   rapatrié   des   souris   homozygotes   patchwork   dans   son   laboratoire.   Elle   a   effectué   onze   générations   de   croisements  consanguins  et  cartographié  la  mutation  sur  le  chromosome  10  de  la  souris,   avant   de   transmettre   la   lignée   de   souris   patchwork   à   Jean-­‐Jacques   Panthier.   Trois   femelles   et   quatre   mâles   homozygotes   pour   la   mutation   patchwork   ont   été   envoyés   à   notre   laboratoire   en   août   1993,   où   J’ai   continué   à   dériver   une   lignée   consanguine.   La   lignée   consanguine   a   été   appelée   PRM/Alf   (Pretty   Mice   d’Alfort).   Ces   souris   se   sont   avérées   avoir   plusieurs   phénotypes   intéressants  :   outre   leur   phénotype   de   pelage,   les   souris   PRM/Alf   présentent   un   allongement   considérable   de   leur   intestin,   et   dans   une   moindre  mesure,  de  leur  utérus  (Figure  1).  

 

   

Figure  1  :  Phénotype  des  souris  PRM/Alf  pwk/pwk.  A,  B  :  phénotype  de  pelage.  C,  D  :  

phénotype  d’allongement  intestinal.    

 

2. PHENOTYPE  DE  PELAGE      

2.1. EXAMEN  MACROSCOPIQUE  

Les  souris  PRM/Alf  pwk/pwk  présentent  une  dilution  de  la  couleur  du  pelage.  Le   pelage  est  composé  de  la  juxtaposition  de  poils  pigmentés  et  de  poils  blancs,  donnant  un   aspect   poivre   et   sel   (Figure   1A).   Les   poils   pigmentés   sont   tous   noirs,   jamais   gris.   Au   cours  des  cycles  successifs  de  croissance  du  poil,  un  follicule  pileux  produisant  un  poil   noir  donne  toujours  un  poil  noir,  et  un  follicule  pileux  produisant  un  poil  blanc  donne   toujours  un  poil  blanc  1_.  

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Les  mutations  conduisant  à  une  hypopigmentation  chez  la  souris  appartiennent  à   deux  catégories.  La  première  comporte  des  mutations  dans  des  gènes  impliqués  dans  le   développement   embryonnaire   du   lignage   mélanocytaire.   Ces   mutations   altèrent   la   survie,  la  migration  et/ou  la  prolifération  des  mélanoblastes.  Elles  se  traduisent  toutes   par   l’apparition   d’un   pelage   comportant   des   taches   blanches   dépourvues   de   mélanocytes.  La  deuxième  catégorie  comporte  des  mutations  dans  des  gènes  impliqués   dans   la   différenciation   terminale   des   mélanoblastes   en   mélanocytes.   Ce   sont   essentiellement   des   mutations   affectant   les   enzymes   de   la   voie   de   biosynthèse   des   mélanines  et  la  structure  ou  la  fonction  des  mélanosomes.  Le  phénotype  associé  à  ces   mutations  est  une  dilution  homogène  de  l’ensemble  du  pelage.  Dans  les  deux  catégories   de  mutations,  le  pelage  comporte  des  poils  entièrement  pigmentés,  entièrement  blancs,   mais  aussi  des  poils  hypopigmentés.  patchwork  ne  peut  clairement  pas  être  classée  dans   l’une  ou  l’autre  catégorie  de  mutations  d’hypopigmentation  du  pelage.  

Près  des  deux  tiers  des  souris  PRM/Alf  homozygotes  pwk/pwk  présentent  une  ou   plusieurs  taches  de  phénotype  sauvage  sur  leur  pelage,  comme  si  une  mutation  réverse   de   l’allèle   muté   vers   l’allèle   sauvage   était   intervenue.   Parmi   les   souris   PRM/Alf,   on   trouve  tous  les  intermédiaires  entre  une  souris  entièrement  poivre  et  sel  et  une  souris   entièrement  noire  (Figure  1B).    

 

  Les  deux  questions  auxquelles  nous  avons  tenté  de  répondre  sont  les  suivantes  :   -­‐ quelle  est  l’étiologie  du  phénotype  de  pelage  poivre  et  sel  des  souris  patchwork  ?   Nous   avons   partiellement   répondu   à   la   première   question   au   cours   de   ma   thèse   de   doctorat,  pendant  laquelle  nous  avons  étudié  la  mise  en  place  du  phénotype  patchwork   au   cours   de   l’embryogenèse.   Le   phénotype   en   période   postnatale   a   été   étudié   par   les   deux  doctorantes  qui  m’ont  succédé,  Nelly  da  Silva  (1998-­‐2002)  et  Johanna  Djian  (2006-­‐ 2008),  et  que  j’ai  co-­‐encadrées.    

-­‐ quel  est  l’événement  à  l’origine  de  la  réversion  phénotypique  ?    

Bien   que   nous   ayons   travaillé   sur   la   réversion   phénotypique   pendant   ma   thèse   de   doctorat,  nous  n’avons  toujours  pas  répondu  à  la  deuxième  question.  

 

2.2. UN  EFFET  DE  COMMUNAUTE  ENTRE  MELANOBLASTES  EST  A  L’ORIGINE    DU   PHENOTYPE  POIVRE  ET  SEL  DES  SOURIS  PATCHWORK.  

Au   cours   du   développement   embryonnaire,   la   détermination,   la   migration,   la   prolifération   et   la   survie   des   mélanoblastes   patchwork   sont   normales   jusqu’au   17ème  

jour   de   vie   embryonnaire   (E17,5).   A   E18,5,   alors   que   les   mélanoblastes   colonisent   les   follicules   pileux   en   formation,   on   trouve   des   mélanoblastes   en   apoptose   dans   certains   follicules   pileux   patchwork,   jamais   dans   les   follicules   témoins.   La   mutation   patchwork   provoque  donc  la  mort  prématurée  de  mélanoblastes  dans  des  follicules  pileux  en  fin  de   vie   embryonnaire.   A   l’aide   de   croisements   génétiques   et   en   produisant   des   chimères   d’agrégation,   nous   avons   montré   que   la   mutation   patchwork   entraîne   la   mort   des   mélanoblastes  lorsqu’ils  sont  présents  en  faible  nombre  dans  le  follicule  pileux,  que  la   cible   de   la   mutation   est   le   mélanoblaste   et   non   pas   son   environnement,   et   que   la   mutation  agit  de  façon  non  autonome  cellulaire.  

L’ensemble  de  ces  résultats  nous  a  permis  de  proposer  un  modèle  d’action  pour   patchwork.   La   protéine   patchwork   est   impliquée   dans   la   transmission   d’un   signal   de   survie   entre   mélanoblastes   en   fin   de   vie   embryonnaire.   La   mutation   patchwork   altèrerait  la  transmission  du  signal  sans  l’abroger.  Lorsque  le  nombre  de  mélanoblastes   mutants   dépasse   un   seuil,   la   transduction   du   signal   peut   avoir   lieu.   Lorsqu’il   est   trop   faible,   la   transduction   du   signal   ne   se   fait   pas   correctement   et   les   mélanoblastes  

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meurent.  Dans  le  follicule  pileux,  les  mélanoblastes  patchwork  communiquent  entre  eux,   et  semblent  avoir  un  moyen  de  se  «  compter  ».  Leur  survie  dépend  de  leur  nombre.  Un   phénomène  analogue  a  été  décrit  par  J.  B.  Gurdon  dans  le  contexte  du  développement   embryonnaire  du  Xénope.  Il  a  baptisé  «  effet  de  communauté  »  cette  coopération  entre   plusieurs   cellules   de   même   type,   nécessaire   à   leur   entrée   dans   une   voie   de   différenciation  donnée  et/ou  à  l’achèvement  de  leur  différenciation,  et  n’ayant  lieu  que   lorsque   le   nombre   de   cellules   dépasse   une   valeur   seuil   2_{.   patchwork   est   à   notre}  

connaissance  la  seule  mutation  suggérant  l’existence  d’un  effet  de  communauté  in  vivo   chez  un  mammifère  

  L’ensemble   de   ces   résultats   ont   fait   l’objet   des   deux   articles   scientifiques   et   de   l’article  de  revue  publiés  pendant  ma  thèse  de  doctorat  1,  3,  4_.  

 

2.3. LA  MUTATION  PATCHWORK  AFFECTE  LES  CELLULES  DU  LIGNAGE   MELANOCYTAIRE  A  TOUS  LES  STADES  DE  DIFFERENCIATION.  

Dans  un  follicule  pileux  en  anagène  (phase  de  croissance  du  poil),  les  cellules  du   lignage   mélanocytaire   se   trouvent   dans   des   localisations   histologiques   bien   définies   selon  leur  stade  de  différenciation  (Figure  2)  :  les  cellules  souches  sont  situées  dans  un   renflement   de   la   gaine   épithéliale   externe,   appelée   bulge   5_{;   les   précurseurs   de}  

mélanocytes  migrent  dans  la  gaine  épithéliale  externe  depuis  le  bulge  vers  le  bulbe  ;  les   mélanocytes   différenciés   sont   situés   dans   la   matrice   du   bulbe   où   ils   transmettent   les   pigments  de  mélanine  aux  kératinocytes  du  poil  en  formation.    

 

     

Figure   2  :     Distribution   des   cellules   du   lignage   mélanocytaire   dans   un   follicule   pileux  en  anagène  

 

Chez  les  souris  homozygotes  patchwork,  les  follicules  pileux  produisant  des  poils   blancs   sont   dépourvus   de   mélanocytes  1_{.   Nous   voulons   comprendre   le   mécanisme   en}  

cause.  Ce  phénotype  peut  être  dû  à  :  (i)  un  défaut  de  colonisation  des  follicules  pileux   par   les   mélanoblastes   à   la   fin   de   l’embryogenèse  ;   (ii)   un   défaut   de   colonisation   de   la   niche,   de   survie,   d’auto-­‐renouvellement   ou   de   différenciation   des   cellules   souches   en   précurseurs   de   mélanocytes;   (iii)   un   défaut   de   migration,   de   prolifération   et/ou   de   survie   des   précurseurs   de   mélanocytes;   (iv)   un   défaut   de   différenciation   des   précurseurs  en  mélanocytes.  Ces  hypothèses  ne  sont  pas  exclusives  les  unes  des  autres.     Pendant  son  travail  de  doctorat,  Johanna  Djian  a  cherché  quelles  étaient  les  cibles   de  la  mutation  patchwork  :  la  cellule  souche,  le  précurseur,  ou  le  mélanocyte  différencié  

6_{.   Pour   répondre   à   cette   question,   Johanna   a   tiré   parti   des   deux   gènes   rapporteurs   du}  

lignage   mélanocytaire   :   le   transgène   Dct::lacZ  7   _{et   l’allèle   knock-­in   Pax3}GFP   8,   9_{.   Elle   a}  

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Elle  a  isolé  des  follicules  pileux  lors  des  deux  premières  phases  anagène.  Elle  a  étudié  la   distribution   et   compté   le   nombre   des   cellules   du   lignage   mélanocytaire   dans   les   différentes  parties  du  follicule  pileux.  

Quelle  que  soit  la  couleur  du  poil  produit,  les  follicules  pileux  des  souris  pwk/pwk   comportent   moins   de   précurseurs   de   mélanocytes   que   les   follicules   pileux   des   souris  

pwk/+.   Cependant,   les   tiges   pilaires   pigmentées   produites   par   les   follicules   pileux   pwk/pwk   sont   semblables   à   celles   de   souris   témoins.   Une   pigmentation   normale   de   la  

tige  pilaire  peut  être  obtenue  avec  un  nombre  de  précurseurs  plus  réduit  que  dans  un   follicule  pileux  de  génotype  sauvage.  

Johanna  a  montré  que  la  mutation  patchwork  affecte  à  la  fois  la  colonisation  des   follicules   pileux   par   les   mélanoblastes   à   la   fin   de   l’embryogenèse,   le   renouvellement   et/ou   la   survie   des   cellules   souches   dans   le   bulge,   les   précurseurs   dont   le   nombre   est   très   réduit   entre   le   bulge   et   le   bulbe,   et   leur   différenciation   terminale   en   mélanocytes   dans  le  bulbe  6_.    

 

2.4. ANALYSE  DE  LA  TRANSMISSION  DE  LA    REVERSION  PHENOTYPIQUE   ASSOCIEE  A  LA  MUTATION  PATCHWORK  

Au   cours   de   mon   stage   doctoral,   j’ai   étudié   la   transmission   de   la   réversion   phénotypique.  Nous  avons  montré  qu’il  n’existe  pas  de  corrélation  entre  le  pourcentage   de  réversion  des  parents  et  de  leurs  petits,  ni  entre  celui  des  frères  et  sœurs.  Ainsi,  un   individu   «  révertant   phénotypique   total  »   (de   génotype   pwk/pwk,   mais   de   phénotype   sauvage)   peut   être   obtenu   par   croisement   de   parents   entièrement   poivre   et   sel,   posséder  des  frères  et  sœurs  poivre  et  sel,  et  donner  des  individus  poivre  et  sel.  

Pour   savoir   si   un   événement   de   réversion   peut   être   récupéré   via   la   lignée   germinale,   j’ai   croisé   23   souris   révertantes   phénotypiques   totales   (pwk/  ?)   avec   des   souris   pwk/pwk   poivre   et   sel.   Aucun   animal   pwk/+   n’a   été   produit   à   l’issue   de   ces   croisements.   Il   semble   qu’aucun   événement   de   réversion   phénotypique   ne   puisse   être   récupéré  via  la  lignée  germinale.  

Trois  hypothèses  peuvent  être  avancées  pour  expliquer  cette  observation  :  

-­‐ L’événement   de   réversion   est   tardif   au   cours   de   l’embryogenèse,   il   survient   après   la   séparation  des  lignées  germinale  et  mélanocytaire.  

-­‐ Les  cellules  porteuses  de  la  réversion  phénotypique  sont  incapables  de  contribuer  à  la   lignée  germinale.  

-­‐ L’événement  à  l’origine  de  la  réversion  phénotypique  est  épigénétique.    

 

3. PHENOTYPE  D’ALLONGEMENT  INTESTINAL  ET  UTERIN    

Les   souris   PRM/Alf   pwk/pwk   sont   caractérisées   par   la   distension   de   leur   abdomen,  qui  est  visible  dès  l’âge  de  1  mois.  Au  cours  de  notre  stage  de  doctorat,  Nelly   Da   Silva   et   moi   avons   recherché   la   cause   de   ce   phénotype.   En   calculant   leur   indice   de   masse  corporelle,  nous  avons  montré  que  les  souris  PRM/Alf  n’étaient  pas  plus  grasses   que   les   souris   des   autres   lignées.   En   revanche,   en   disséquant   leur   tube   digestif,   nous   avons  observé  que  les  souris  PRM/Alf  présentaient  un  allongement  considérable  de  leur   intestin  (Figure  1,  C-­‐D).  Ce  phénotype  étant  propre  à  la  lignée  consanguine  PRM/Alf,  il  a   une  composante  génétique.  Nous  nous  sommes  intéressées  à  ce  phénotype  dans  le  but   d’isoler  des  molécules  impliquées  dans  le  contrôle  de  la  taille  de  l’intestin.  Alors  que  le   contrôle  de  la  croissance  d’un  organisme  entier  est  bien  connu,  les  mécanismes  régulant   la  taille  d’un  organe  spécifique  le  sont  très  mal.  D’autre  part,  l’isolement  de  molécules  à