B a n c d ’ e s s a i
Comprendre le Généthon
L'activité principale de Généthon est la théra- pie génique et le développement de nouvelles stratégies de traitement de maladies rares, Le Département Développement des Biopro- cédés dirigé par O.W. Merten est une charniè- re importante entre les groupes de recherche et le département Production.
Ses objectifs sont :
- L’évaluation et développement de nouvelles méthodes de production et de purification - La transposition à plus grande échelle de ces méthodes pour produire les quantités de vec- teur requises pour les essais cliniques de Généthon
Au sein de l’équipe d’O.W. Merten, le servi- ce Développement Purification du Généthon sous la responsabilité de Damien Bataille tra- Créé et financé par l’AFM (Association Française contre les Myopathies) depuis
1990, Généthon est un laboratoire qui a su, depuis sa création, être un formidable accélérateur de la recherche génétique et un lieu d’innovation unique : réalisation des premières cartes du génome humain, contribution à la découverte des gènes responsables de plusieurs centaines de maladies, mise au point de vecteurs inno- vants pour transporter les gènes-médicaments. Aujourd’hui, Généthon illustre le che- min parcouru par l’AFM grâce aux dons du Téléthon en abordant la dernière ligne droite : l’application à l’homme des thérapies issues de la connaissance des gènes
pour les maladies rares. Généthon prépare ainsi d’ici 2007-2008 quatre essais sur l’homme pour des maladies neuromuscu- laires et un déficit immunitaire. Le laboratoire est également doté d’une unité de production de vecteurs à usage clinique ayant reçu cette année la labellisation BPF (Bonnes Pratiques de Fabrication) délivrée par l’AFSSAPS.
L E G É N É T H O N , S T R AT É G I E E T T H É R A P I E P O U R L E S M A L A D I E S R A R E S ...
Généthon et Pall Life Sciences, une étroite collaboration
Publi-communiqué 52
Entretien avec Damien Bataille, responsable de laboratoire de Développement en Purification au Généthon
Sur quels critères avez-vous sélectionné votre partenaire ? Pall Life Sciences travaille sur un certain nombre de projets communs au Généthon, notamment
en ce qui concerne la purification de vecteurs viraux. Fin 2003 des travaux réalisés sur des vecteurs
"lentiviraux" avec une équipe amé- ricaine ont attiré l’attention du ser- vice. Ces travaux mettaient en évi- dence l’utilisation de la chromatographie sur membrane afin de purifier les vecteurs de thérapie génique. Ces membranes Mustang‚
sur lesquelles sont fixées des charges électrostatiques ont l’avan- tage, par rapport aux colonnes de
chromatographie classiques de mieux interagir avec les grosses molécules. Nous avons donc commencé à établir une collaboration avec Pall Life Sciences afin de tester ces mem- branes Mustang sur les vecteurs AAV, vecteurs utilisés dans la moitié des essais cliniques du Généthon. Dans le cadre de cette collaboration, Pall nous a proposé un support technique ainsi que des prêts de matériel. Pall Life Sciences était le pre-
mier à commercialiser ces produits sur le marché et disposait d’une gamme allant du laboratoire à l’échelle industrielle.
Cette continuité dans la gamme des produits et les services supports apportés sont pour nous des points très importants.
Quels autres services votre parte- naire vous a-t-il apporté ? La division BioSepra de Pall Life Sciences utilise une technologie pour réaliser des études de dévelop- pement de procédés de purification à toute petite échelle : Process Pro- teomics (SELDI). Généthon a utili- sé à plusieurs reprises ces services qui nous font gagner beau- coup de temps dans le développement des procédés. Enfin, le nouveau système de Pall pour le développement des procédés chromatographiques (gamme des systèmes PKL) est particu- lièrement adapté à la taille des lots de production du Géné- thon. En s’équipant avec trois systèmes, le Généthon a facili- té les transferts de technologie entre le département Développement et le département Production.
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Publi-communiqué 53
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vaille maintenant sur la production à grande échelle des vecteurs pour les essais cliniques.
Pour tester leurs protocoles thérapeutiques, les chercheurs du Généthon injectent dans les cellules des malades des vec- teurs qui contiennent des gènes qui vont permettre de soigner et de réparer ces cel- lules. Ces vecteurs, pour être efficaces, doivent être les plus purs possible. Pall intervient dans les étapes de fabrication, de purification et de concen- tration de ces vecteurs.
Généthon au fils des ans Généthon a été créé en 1990 par une association de malades, l'Association Française contre les Myopathies (AFM) afin de lutter contre l'ensemble des mala- dies musculaires génétiques rares (myo- pathies). Les activités du laboratoire ont évoluées avec l’avancée de la recherche et peuvent être regroupées en 5 périodes.
- Généthon I (1990-95) : recherche sur le séquençage qui a amené le Généthon à être le premier laboratoire à fournir une carte du génome humain.
- Généthon II (1995-97) : connaissance du génome permettant de réaliser un important travail d’identification des gènes impliqués dans des maladies géné- tiques : le génotypage.
- Généthon III (1997-2002) : identifica- tion de gènes liés aux myopathies per- mettant le démarrage du programme de thérapie génique.
- Généthon IV (2003-04) : premiers pas vers la production de lots cliniques aboutissant en 2005 au lancement de 4 programmes ayant reçu la désignation de maladie orpheline par l’EMEA (Agence Européenne du Médicament).
Qui est Pall Life Sciences ? Pall Life Sciences, lea- der mondial en matière de solutions de filtration, de séparation et de purification met à la dispo- sition de ses clients un s a v o i r - f a i r e dans l’en- semble des domaines phar- maceutiques et b i o t e c h n o l o - giques. Fort de ses connaissances techniques, de ses gammes de produits étendues et de ses prestations de services, Pall Life Sciences est
présent à tous les stades du processus de déve- loppement du médicament. Au-delà d’être un fournisseur, il se positionne comme un parte- naire pour ses clients, les accompagne pour développer à petite échelle des procédés qui sont transposables à l’échelle industrielle. Ces deux acteurs des biotechnologies, Généthon et Pall Life Sciences, ont su tisser un partenariat à toutes épreuves pour la plus noble des causes : faire avancer la recherche.
Les vecteurs viraux peuvent-être :
- Extracellulaires, c’est à dire directement produits dans le surnageant. C’est le cas des rétrovirus et les lentivirus.
- Intracellulaires, comme c’est le cas des adénovirus et des adénovirus associés.
Une lyse des cellules est alors effectuée pour la récupération de ces vecteurs.
Dans les deux cas, une purification en plusieurs étapes est nécessaire. Les techniques principales utilisées sont la filtration frontale et la filtration tangentielle afin d’élimi- ner les débris cellulaires le cas échéant et de concentrer les vecteurs. S’en suit l’éta- pe de purification du vecteur par chromatographie, permettant d’éliminer les conta- minants cellulaires issus de la culture. En fonction du vecteur et de la pureté à atteindre, le service des Bioprocédés développe les étapes de purification adaptées.
Tout au long du protocole de purification de nombreuses analyses biochimiques et virologiques sont effectuées afin de garantir la pureté et l’efficacité de la préparation virale finale. Un schéma classique de purification est décrit ci-dessous.
Procédés de purification des vecteurs viraux
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