La différence au niveau des propriétés cinétiques des CPSIs sur les O-LMs entre les différents groupes d‟âges peut être expliquée par la différence en composition de sous-unité du GABAAR. En effet, il a été rapporté que la sous-unité α5 du récepteur GABAA
démontrait des CPSIs à cinétique plus lente dans des cellules pyramidales de souris (Caraiscos et al, 2004, Glykys et Mody, 2006, Prenosil et al, 2006, Ali et Thomson, 2008) et n‟était pas impliquée dans des cinétiques rapides (Zarnowska et al, 2009). Aussi, cette sous-unité est présente dans le str. O/A de l‟hippocampe (Sperk et al, 1997) et son expression augmente pendant la maturation jusqu‟au jour 30 (Yu et al, 2006).
Afin de déterminer si la sous-unité α5 est impliquée dans le changement dans les propriétés cinétiques, le L-655,708 (l‟agoniste inverse de la sous-unité α5, qui agit en tant qu'antagoniste) a été utilisé. Cet agent pharmacologique, à de faible concentration (50 nM), est très spécifique, se liant préférentiellement à la sous-unité α5 plus de cinquante fois par rapport aux autres sous-unités du GABAAR (Quirk et al, 1996, Casula et al, 2001). Il est
possible de voir que le L-655,708 était efficace en réduisant l‟amplitude des CPSIs dans les interneurones des animaux plus âgés que P26 (61.4 ± 13.0 % du contrôle, n = 5, P < 0.05, Figure 12B), mais pas dans les interneurones des animaux juvéniles (18 < P < 24, 107.8 ± 15.3 % du contrôle, n = 6, P > 0.05, Figure 12A). Étant donné qu‟aucun changement significatif du PPR (juvénile : 120.5 ± 13.9 % du contrôle, n = 6, P > 0.05; adulte : 130.7 ± 14.4 % du contrôle, n = 5; P > 0.05) et du CV (juvénile : 99.7 ± 9.0 % du contrôle, n = 6, P > 0.05; adulte : 97.4 ± 6.5 % du contrôle, n = 5; P > 0.05) n‟a été observé dans l‟ensemble des cellules, il est donc possible de dire que l‟effet du L-655,708 était du côté postsynaptique (Figure 12C). [Il est à noté ici qu‟étant donnée que quelques cellules ont démontré un effet lors de l‟application du L-655,708, tel qu‟observé par la grande valeur de
l‟erreur type du PPR, certaines synapses peuvent présenter la sous-unité α5 au niveau présynaptique.] L‟effet de cet agent était associé avec le temps de monté : de sorte à ce que plus le temps de monté était lent, plus l‟effet du L-655,708 était prononcé. Donc, la diminution de l‟amplitude des CPSIs en présence du L-655,708 était plus proéminente chez les animaux adultes (juvénile : temps de monté : 2.11 ± 0.28 ms, effet de L-655,708 : 7.8 ± 15.3 % du contrôle, n = 6; adulte : temps de monté : 4.55 ± 0.72 ms, effet de L-655,708 : 38.6 ± 13.0 % du contrôle, n = 5). Le L-655,708 n‟agissait pas sur la sous-unité α5 exprimée au niveau extrasynaptique car le courant auquel la cellule était maintenue (courant imposé ou « holding current ») et le bruit synaptique n'étaient pas modifiés après l‟application de l‟agent (courant imposé : 106.4 ± 12.6 % du contrôle; bruit synaptique : 100.8 ± 23.7% du contrôle; n = 5; P > 0.05, Figure 12E). IL est a noter ici qu‟étant donnée la grande vlauer de „erreur type, l‟effet de l‟agent pharmacologique était variable et peut être assicié a une augmentation ou une diminution du bruit synaptique dans différentes cellules. Cependant, glogallement, il n‟y avait pas de changement dans le bruit synaptique. Ces données démontrent ainsi une absence d‟inhibition tonique impliquant la sous-unité α5 dans majorité des interneurones O-LM dans les conditions de bases (un effet a été observé dans un nombre insuffisant de cellules). Afin de vérifier si une forme d‟inhibition tonique serait induite dans les O-LMs par la concentration ambiante de GABA, le GABA (5 µM, imitant une concentration ambiante) a été appliqué dans le bain et le courant imposé et le bruit synaptique ont été analysés. Les données ont montré que le GABA ne produit aucun changement significatif dans ces deux paramètres (différence en courant imposé entre la condition contrôle et après l‟application du GABA : -11.8 ± 7.8 pA; bruit synaptique : contrôle : 5.1 ± 0.3 pA, après l‟application du GABA : 7.1 ± 0.5; n = 4, P > 0.05), ce qui indique que les O-LMs ne subissent pas d‟inhibition tonique. Ces résultats peuvent suggérer que la sous-unité α5 du récepteur GABAA devrait être exprimée spécifiquement
aux synapses inhibitrices des interneurons O-LM plus tard lors de la maturation post-natale. Dans le but de valider les effets observés lors de l‟application du L-655,708, des CPSIs dans les O-LMs ont été enregistrés dans une lignée de souris transgéniques n‟exprimant pas la sous-unité α5 du GABAAR, les Gabra5-/-. Les données ont montré que,
par rapport aux souris sauvages (WT), les CPSIs enregistrés dans des interneurones O-LM de souris Gabra5-/- ne démontrent pas de différence au niveau des propriétés cinétiques lors
31 de la maturation des animaux (Figure 13, A et B). En effet, ni l‟amplitude (juvénile : 15.6 ± 3.11 pA, n = 7; adulte : 12.4 ± 2.2 pA, n = 6; P > 0.05), le temps de monté (juvénile : 1.6 ± 0.3 ms, n = 7; adulte : 2.3 ± 0.45 ms, n = 6; P > 0.05), le taux d‟affaiblissement (juvénile : 13.3 ± 3.1 ms, n = 7; adulte : 16.6 ± 2.3 ms, n = 6; P > 0.05), et donc l‟aire sous la courbe (juvénile : 232.6 ± 51.3 pA x ms, n = 7; adulte : 209.0 ± 37.3 pA x ms, n = 6; P > 0.05) n‟ont montré de différence significative entre les deux groupes d‟âges (Figure 13C). Ensemble, ces données démontrent que la sous-unité α5 du GABAAR est responsable du
Figure 12 : Effet du L-655,708 sur les CPSIs des interneurones O-LM.
A-B, Graphique de l‟amplitude de CPSIs en fonction du temps d‟un exemple représentatif (A1, B1) et de la moyenne des groupes (A2, B2 ; normalisé ; à partir des cinq premières minutes d'enregistrements) obtenues à partir de souris juvéniles (A, n=6) et adultes (B, n=5)
33 illustrant l'effet de l‟application du L-655,708. Les tracés au-dessus sont la moyenne de 30 tracés consécutifs de CPSIs obtenues au temps indiqué. C, L'effet du L-655,708 dans des animaux P18-23 (blanc) et P26-40 (noir). D, Graphique résumant l'effet du L-655,708 dans des animaux P18-23 (blanc) et P26-40 (noir) par rapport au temps de monté. E, L'effet du L-655,708 sur le courant imposé et le bruit synaptique enregistrés dans les tranches d‟animaux adultes.
Figure 13 : Propriétés cinétiques des CPSIs des interneurones O-LM des souris Gabra5-/-. A, Exemples représentatifs de CPSIs enregistrés dans deux groupes d‟âges de souris sauvages et Gabra5-/-. B, Représentation graphique du temps de monté en fonction du taux d‟affaiblissement de tranches de souris Gabra5-/- comparé aux souris sauvages, démontrant aucune différence significative entre les deux groupes d‟âges Gabra5-/-
. C, Propriétés des CPSIs chez les souris Gabra5-/- juvéniles et adultes, démontrant une perte de modification dans la cinétique des CPSIs lors de la maturation en absence de la sous-unité α5 du