Résultats des analyses quantitatives

Une fois le protocole d’extraction et la séquence RMN optimisés, nous avons décidé de vérifier la conformité de nos résultats, pour cela nous avons utilisé la formulation 8, Super Shred ne contenant qu’un seul ester de testostérone et dont les résultats obtenus en RMN du carbone sont directement comparables à ceux de la RMN du proton. Pour cet exemple, une première quantification par RMN du proton menée dans les conditions décrites ci-avant (i.e 50 mg extrait 2 fois) donne une valeur de 498 ± 2 mg. En comparaison de ce protocole, 2 autres protocoles ont été menés, le premier en utilisant le protocole « carbone » sur 2 jeux de pesées que l’on regroupe à la fin et que l’on reprend dans 2 mL de solvant deutéré. Les solutions seront redivisées en deux, l’une d’entre elle sera dosée avec une

126 quantification proton avec du TSP comme référence interne, et l’autre sera dosée avec le protocole carbone et du 1,3,5-trioxane comme référence interne. Dans le premier cas on obtient une valeur de 468 mg et dans le second 478 mg, soit une erreur de 2% dont on peut considérer qu'elle est dans l’erreur de la méthode.

Dans un second temps en utilisant le protocole « carbone », le même tube sera quantifié en proton en utilisant le 1,3,5-trioxane avant l’ajout de Cr(acac)3 comme référence interne en RMN du proton puis

après ajout de Cr(acac)3 en RMN du carbone. Les valeurs obtenues sont respectivement 475 et 473 mg

soit une erreur négligeable (< 0,5%).

Une remarque importante est néanmoins à souligner ici, après avoir réalisé le protocole « carbone », au moment de la ré-solubilisation il reste une goutte d’huile contenant une quantité variable d’actifs mais dont la quantité maximale n’excède jamais 5% de celle mesurée. Il est donc important de noter que toutes les valeurs données ici en dosage carbone peuvent être sous-estimé jusqu’à 5%.

Une fois le protocole contrôlé, toutes les expériences quantitatives ont été réalisées, tant en RMN du carbone qu’en RMN du proton. Pour la RMN du proton le protocole décrit précédemment, à savoir 2 extractions consécutives sur 50 mg d’huile a été utilisé.

Au vu de la différence importante de rapport signal sur bruit (30 en 13_{C pour 250 en} 1_{H) le processing}

de spectres a également dû être optimisé. En effet, à cause de l’ajout de Cr(acac)3 il était important

d’appliquer un facteur d’apodisation, ici il a été choisi d'appliquer une multiplication exponentielle avec un facteur de 0,5. Pour éviter toute erreur humaine, l'intégration a elle été automatisée pour intégrer chaque pic d’intérêt sur 20 fois la largeur moyenne à mi-hauteur, soit ici 0,8 Hz * 20 = 16Hz. De la façon suivante :

Trioxane: 96,353 – 96,226 ppm Cypionate: 42,662 – 42,534 ppm Propionate: 11,358 – 11,230 ppm Enanthate: 16,129 – 16,002 ppm

La ligne de base de base est corrigée de façon globale sur le spectre puis contrôlée sous chaque pic d’intérêt pour éviter d’éventuelles aberrations.

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Tableau 8 : Récapitulatif des produits détectés par SM et RMN et dosés par RMN 13_{C et} 1_H.

Nom Composition annoncé Détection MS

Quantification

13_C

(en mg/flacon)a

Quantification 1_H

(en mg/flacon)a,b

Rapport des quantités mesurées par

RMN 13_{C et}

RMN 1_H

Super Ace Acetate de trenbolone 120 mg/1 mL Propionate de testostérone Cypionate de testostérone (ε) 557 ± 1 NQ 576 ± 8 96,8 % Super Big Enanthate de testostérone 150 mg/mL Cypionate de testostérone 150 mg/mL Décanoate de nandrolone 150 mg/mL Enanthate de testostérone Cypionate de testostérone Propionate de testostérone (ε) 247 ± 7 246 ± 2 NQ 488 ± 10 101,0 %

Super Bold Undécylénate de boldenone 250 mg/mL Cypionate de testostérone Propionate de testostérone

643 ± 11

418 ± 22 1155 ± 32 92,0 %

Super Cyp Cypionate de testostérone 300 mg/mL Cypionate de testostérone Propionate de testostérone

611 ± 21

412 ± 16 1064 ± 5 96,2 %

Super Deca Décanoate de nandrolone 300 mg/mL

Enanthate de testostérone Cypionate de testostérone Propionate de testostérone (ε) 581 ± 17 501 ± 16 NQ 1149 ± 14 94,2 %

Super Primo Méthénolone 120 mg/mL Cypionate de testostérone

Propionate de testostérone

689 ± 37

411 ± 18 1138 ± 2 96,7 %

Super Prop Propionate de testostérone 120 mg/mL Cypionate de testostérone Propionate de testostérone 623 ± 27 412 ± 18 1187 ± 1 96,3% Super Shred Propionate de testostérone 100 mg/mL Acetate de trenbolone 100 mg/mL Propionate de drostanolone 100 mg/mL Propionate de testostérone 486 ± 5 498 ± 2 97,6 % Super Sust Propionate de testostérone 60 mg/mL Enanthate de testostérone 120 mg/mL Cypionate de testostérone 120 mg/mL Cypionate de testostérone Propionate de testostérone 710 ±3 434 ± 12 1140 ± 22 100,4 %

Super Test Enanthate de testostérone 300 mg/mL Cypionate de testostérone Propionate de testostérone 686 ± 35 473 ± 25 1209 ± 11 96,0 % Super Tri007 Enanthate de testostérone 75 mg/mL Acétate de trenbolone 75 mg/mL Hexahydro-benzylcarbonate de trenbolone 75 mg/mL Propionate de testostérone Cypionate de testostérone Acétate de trenbolone (ε) 341 ± 19 NQ X 351 ± 4 97,0 % Super Tri008 Enanthate de testostérone 75 mg/mL Acétate de trenbolone 75 mg/mL Hexahydro-benzylcarbonate de trenbolone 75 mg/mL Propionate de testostérone Acétate de trenbolone (ε) 479 ± 7 X 533 ± 4 X 90,0 %

a _{chaque flacon est annoncé d'une contenance de 10 mL.}

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.Ce tableau met en évidence la bonne concordance entre les résultats des quantifications par RMN du

carbone-13 et RMN du proton. Cela démontre que le protocole de quantification que nous avons proposé en RMN du carbone-13 permet de détecter et quantifier sélectivement les stéroïdes avec un taux de récupération satisfaisant à condition qu’ils soient présents en concentration suffisante. Ce tableau met également en évidence la prépondérance de l’utilisation de propionate et de cypionate de testostérone, au dépendant de l’ensemble des esters de stéroïdes annoncés, surement pour des raisons financières.