II. DEUXIEME PARTIE : CADRE, MATERIEL ET METHODES
2.1 Cadre d’étude
2.2.4. Réactif
Les réactifs de dosages utilisés sont essentiellement le kit pour le dosage de L’ALAT (BIOLABO), L’ASAT (BIOLABO) et le coffret pour le dosage du GAMMA GT (BIOLABO).
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ALAT
LHD
Il s’agit d’une étude prospective, transversale analytique et comparative qui s’est effectuée du 22 Juillet au 14 Octobre 2018.
2.3.2. Echantillonnage 2.3.2.1. Population d’étude
L’étude porte sur une population de 50 sujets séropositif incluant 32 sujets sous ARV (antirétroviraux) et 18 en phase pré thérapeutique retenus dans le centre hospitalier ou envoyées par le CiPEC.
2.3.2.2. Choix des sujets 2.3.2.2.1. Critères d’inclusion
Sont incluses dans cette étude les PV-VIH ayant un suivi régulier 2.3.2.2.2. Critères d’exclusion
Sont exclues de l’étude les PV-VIH déclarés positifs à d’autres tests sérologiques dont AgHBS, HCV, ou autres.
2.3.3. Phase pré-analytique
Les échantillons prélevés sur tube sec après enregistrement du patient (nom et prénom, sexe, âge et motif de l’analyse) sont centrifugés pendant 5 min à 3000 tours.
2.3.4 Phase analytique
Dosage de L’ALAT (Méthode cinétique) Principe
La détermination de l’activité enzymatique de l’ALAT est basée sur le principe suivant :
Alanine + α-cétoglutarate Pyruvate + Glutamate
Pyruvate + NADH + H+ Lactate + NAD+
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ASAT
MDH
Ainsi, la densité optique lue au spectrophotomètre à 340 nm permet la détermination de la vitesse de disparition du NADH qui est proportionnelle à l’activité enzymatique de l’ALAT.
Tableau I : Mode opératoire du dosage de l’ALAT
Réactif Sérum contrôle Echantillons
Contrôle 1000 µL 100 µL
Dosage 1000 µL 100 µL
Mélanger et lire immédiatement (2 à 5 secondes) au spectrophotomètre à 505 nm.
Dosage de l’ASAT (Méthode cinétique) Principe
L'aspartate aminotransférase (ASAT) catalyse la transformation de l'aspartate en oxaloacétate. L'oxaloacétate formé est réduit en malate en présence d'une quantité connue de coenzyme NADH'H+ et du malate déshydrogénase (MDH). La cinétique de cette dernière réaction est déterminée par les mesures successives de l'absorbance du coenzyme NADH'H+ à 340 nm. De cette cinétique est déduite la concentration de l'aspartate aminotransférase (ASAT).
ASATAspartate + α-cetoglutarate Oxaloacétate + Glutamate
Oxaloacetate +NADH + H+ L-Malate+ NAD+
Tableau II : Mode opératoire du dosage de l’ASAT
Réactif Sérum contrôle Echantillons
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Principe
GGT
L-G-Glutamyl-3-Carboxy-4-nitroanilid + glycylglycine L-G-Glutamyl-glycylglycine + p- nitroaniline
La vitesse de formation du p- nitroaniline, directement proportionnelle à l’activité GGT dans le spécimen, est mesurée à 405 nm
Tableau III : Mode opératoire du dosage du Gamma GT Ramener les rectifs et échantillons à température ambiante
Introduire dans une cuve thermostatée de 1 cm de trajet optique
Réactif 1 mL
Laisser la température s’équilibrer à 37°C (30°C) puis ajouter
Spécimen ou calibrant 50 µL
Mélanger. Après 30 s, lie l’absorbance à 405 nm toutes les minutes pendant 3 minutes.
Calculer la moyenne des variations d’absorbance par minute ∆Abs/min
2.3.5. Phase post-analytique
Une fois les analyses terminées, les différentes valeurs de contrôle prise ont été consignées dans le cahier de paillasses. Les réactifs sont aussi rangés, le matériel décontaminé et rangé, les gants retirés et mis dans la poubelle adéquate, les résultats enregistrés.
2.3.6. Analyses statistiques
Une base de données a été créée avec le logiciel EpiData, les tests statistiques ont été effectués avec les logiciels STATA 11. Le tableau Excel 2013 a servi aux calculs. Les différences et la corrélation sont jugées significatives à p< 0,05.
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3. Résultats et discussion 3.1. Résultats
3.1.1 Caractéristiques sociodémographiques de la population d’étude.
Répartition de la population d’étude suivant le sexe
La population d’étude comprend 32 sujets sous ARV et 18 en phase pré thérapeutique ; ce qui correspond respectivement à 90% et 10%. La population d’étude est majoritairement composée de sujet de sexe féminin avec un pourcentage de 60%.
Figure 4 : Répartition de la population suivant le sexe.
3.1.2. Répartition de la population suivant l’âge
Figure 5 : Répartition de la population suivant l’âge.
40%
60%
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L’âge moyen de la population d’étude est de 49,12 ± 13,6 ans. Notre population d’étude était dominée par les sujets de la tranche d’âge de 50 à 60 ans (26%). Les sujets âgés de 70 à 80 ans étaient les moins représentés. La moyenne d’âge chez les hommes est légèrement inférieure à celle chez les femmes : 48,53 ± 13,03 ans (chez les hommes) contre 49,75 ± 14,18 (chez les femmes).
3.1.3. Fréquence des troubles hépatiques au sein de la population d’étude.
Répartition de l’ALAT suivant la durée du traitement
Tableau IV : Répartition de l’ALAT en fonction de la durée du traitement
Durée de
L’analyse de ce tableau nous montre que, chez les sujets sous ARV, au fur et à mesure que la durée de traitement augmente, l’activité de l’ALAT accroit (P < 0,0001). Cependant, jusqu’à trois ans de traitement, la valeur moyenne chez les sujets sous ARV est toujours inférieure à celle chez les sujets en phase pré thérapeutique.
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Répartition de l’ASAT suivant la durée du traitement
Tableau V : Répartition de l’ASAT en fonction de la durée du traitement
Durée de thérapeutique est inférieure aux valeurs moyennes des sujets sous ARV quel que soit la durée du traitement. Chez ces derniers, on ne remarque aucune influence de la durée de traitement sur l’activité enzymatique.
Répartition des gamma GT suivant la durée du traitement
Tableau VI : Répartition des gamma GT en fonction de la durée du traitement
Durée de
Les sujets en phase pré thérapeutique ont une valeur moyenne faible de l’activité des gamma GT par rapport aux sujets sous ARV. Chez ces derniers, la valeur moyenne augmente de un à trois ans et baissent au-delà.
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3.1.4. Association de l’élévation de l’activité des enzymes à la durée du traitement Tableau VII : Répartition de la population en fonction des cas d’activité enzymatique élevée.
Durée de
Le tableau ci-dessous montre le plus grand nombre de cas d’ALAT supérieure à 48 UI/L et de Gamma GT supérieure 40 UI/L se trouve respectivement chez les sujets sous aucun traitement et sous traitement ARV depuis plus de trois ans. Le nombre de cas d’activité enzymatique de l’ASAT supérieure à 42 UI/L se répartit équitablement d’une part chez les sujets sous ARV depuis 0 à 1an et 1 an à 2 ans (2 cas) et d’autre part chez les sujets sous ARV depuis 2 ans à 3 ans et plus de 3 ans (4 cas). Pour le cas de l’ALAT 06 sujets en phase pré thérapeutique présentent une activité enzymatique supérieur à la normale. En ce qui concerne les patients sous ARVN, nous remarquons que le nombre de cas augmente avec la durée du traitement.
Avec un nombre moyen de 5, les activités enzymatiques les plus représenté dans notre population d’étude sont celles des gammaglobulines. Aussi nous notons une répartition aléatoire de cas de Gamma GT élevé dans notre population d’étude.
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3.2. Discussion
La présente étude a permis de montrer l’impact du traitement antirétroviral sur la Gamma GT et les activités de l’ALAT et l’ASAT. Elle a porté sur une population d’étude constituée majoritairement de sujets ayant entre 50 à 60 ans (26%). Cette observation est une preuve que le VIH atteint beaucoup plus les personnes âgées. Tout comme pour les travaux réalisés par Fokunang et al. en 2010, la gente féminine prédomine dans la population d’étude (Fokunang et al., 2010). Cette prédominance pourrait être justifie par la vulnérabilité du sexe féminin face au VIH.
A l’issue de cette étude, nous avons enregistré 20 cas de cas de Gamma GT élevé pour les sujets sous antirétroviraux soit 40% de la population d’étude. Ces résultats concordent avec ceux des travaux de Vince Rodrigue (49,5%) réalisés en 2009 sur les sujets sous antirétroviraux (Vince, 2009). Cette fréquence des cas hyper hypergammaglobulinémie suggère que les ARV ont un impact significatif sur les fonctions du foie. Cependant, on note une variation significative (p˂0,0001) entre les valeurs moyennes de l’ALAT chez les patients sous ARV depuis plus de de 2 ans et chez ceux dont le traitement dure moins de 2 ans. Seuls les sujets sous ARV depuis plus 3 ans présentent une valeur moyenne supérieur à celle des sujets en phase pré thérapeutique. Ainsi l’activité de l’ALAT augmente suivant la durée de traitement dans notre population d’étude. La valeur moyenne d’ASAT dans la population d’étude chez les sujets en phase pré thérapeutique est inférieur à celle chez les sujets sous ARV. Chez ces derniers elle augmente jusqu’à 3 ans et baise au-delà. Cette évolution de l’activité de l’ASAT montre que le traitement antirétroviral est donc la cause d’élévation de l’activité de l’ASAT chez les PV-VIH.
En 2008, les résultats des travaux de Wilkin et Gulick ont révélé une plus faible proportion (2 à 14%) de l’hépatotoxicité chez les PV-VIH sous traitement antirétroviral (Wilkin et Gulick, 2008). L’ASAT et l'ALAT contenues dans le sérum proviennent majoritairement du foie mais sont aussi sécrétées par le cœur. L’évolution des activités de l’ALAT et de l’ASAT, associée à l’hépatotoxicité serait une cause de la plus grande fréquence des cas d’atteinte hépatique chez les PV-VIH sous ARV de la présente étude. Nos résultats montrent que plus la durée du traitement est grande, plus les fonctions hépatiques sont affectées. L’évolution des
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activités de l’ALAT et de l’ASAT, associée à l’hépatotoxicité serait une cause de la plus grande fréquence des cas d’atteinte hépatique chez les PV-VIH sous ARV de la présente étude.
L’évolution des activités de l’ALAT et de l’ASAT, associée à l’hépatotoxicité serait une cause de la plus grande fréquence des cas d’atteinte hépatique chez les PV-VIH sous ARV de la présente étude.
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Au terme de notre étude portant sur le dosage des transaminases et de la Gamma GT chez les PV/VIH sous traitement au CHD Mono Couffo, Les prévalences des transaminases et des Gamma GT étant élevées chez les PVVIH enquêtées, une bonne prise en charge, la non- consommation d’alcool, du tabac et un contrôle régulier des paramètres biologiques tels que les dosages des enzymes hépatiques, le sérodiagnostic des hépatites B et C pourraient réduire les effets hépatotoxiques auprès de nos PVVIH.
Ce taux élevé touche majoritairement ceux sous traitement antirétroviral depuis plus de 2 ans.
Les antirétroviraux ont donc un impact significatif sur la fonction hépatique.
Cette étude peut s’élargir à une taille d’échantillon plus grande, et même s’étendre sur plusieurs années avec beaucoup plus de suivi dans l’évolution des divers paramètres biochimiques chez les sujets sous traitement antirétroviral afin d’avoir une précision sur l’impact des ARV sur le foie.
CONCLUSION
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A l’issu de notre étude, nous suggérons :
• A la Direction du PNLS :
De doter les laboratoires d’analyses biomédicales de matériel analytique performant et fiable permettant de déterminer tous les paramètres intervenant dans le suivi biologique des porteurs du VIH.
• Aux prescripteurs :
De tenir compte des impacts des ARV sur le foie et les reins, lors la prescription des examens de routine réalisés pour le suivi des PV-VIH sous traitement. Nous leur proposons donc d’inclure d’autres paramètres permettant d’évaluer les fonctions hépatiques et rénales dans les bilans de suivi des porteurs du VIH, sous traitement antirétroviral.
• Aux chercheurs :
D’approfondir cet axe de recherche en utilisant des marqueurs plus spécifiques et des techniques plus précises telles que les méthodes moléculaires. La PCR quantitative en temps réel par exemple, permettra de déterminer la charge virale exacte afin de la comparer à la durée du traitement et aux divers paramètres biologiques. On pourra donc évaluer non seulement l’efficacité du traitement, mais aussi le fonctionnement des organes vitaux.
SUGGESTIONS
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Réalisé et présenté par Lionel Francis Olatounde Akandé CHOGNIKA 25
Ammari L. 2013. Antirétroviraux : Classification, Mécanisme d’action. Tunis 32p. disponible sur : : http:// www. infectiologie.org.tn/ pdf/ cmi/ 09012013/ mecanismes ammari. pdf
Benhamou JP. 2002. Traité d’hépatologie clinique. Éditions Flammarion. Médecine- Sciences 134-64.
Chang CY, Schiano TD. 2007. Drug hepatotoxicity Aliment Pharmacol Ther ; 25 :1135-51.
Crum-Cianflone N, Ganesan A, Teneza-Mora N, Riddle M, Medina S, Barahona I et al. 2010 Prevalence and Factors Associated with Renal Dysfunction Among HIV-Infected Patients.
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Fokunang C. N., Banin A. N., Kouanfack C. and Ngogang J. Y. 2010. Evaluation of hepatotoxicity and nephrotoxicity in HIV patients on highly active anti- retroviral therapy.
Journal of AIDS and HIV Research. March ; pp. 048- 057 Germanaud D. 2009. Disponible sur www.snv.jussieu.fr
Nishijima T, Komatsu H, Gatanaga H, Aoki T, Watanabe K, Kinai E, Honda H et al. 2011 Impact of small body weight on tenofovir-associated renal dysfunction in HIV-infected patients : a retrospective cohort study of Japanese patients. PLoS One. 6(7) : e22661.
ONUSIDA. 2013. Rapport l’épidémie mondiale du SIDA. Genève : 2013. 274p.
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Scherzer R, Estrella M, Li Y, Deeks SG, Grunfeld C, Shlipak MG. 2012. Association of Tenofovir Exposure with Kidney Disease Risk in HIV Infection. AIDS. Apr 24; 26(7): 867–75.
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REFERENCES
Dosage des transaminases et de la gamma gt chez les PV/VIH sous traitement au CHD MONO COUFFO de LOKOSSA
LISTE DES ENSEIGNANTS DU DEPARTEMENT DE GENIE DE BIOLOGIE
HUMAINE ...ii
DEDICACE ... iii
REMERCIEMENTS ... iv
HOMMAGES ... v
LISTE DES SIGLES ET ABREVIATIONS ... vi
LISTE DES TABLEAUX... vii
SYNTHESE BIBLIOGRAPHIQUE ... 3
1.1 Définition du virus ... 4
1.2 Structure du virus ... 4
1.3 Le traitement antirétroviral... 5
1.3.1 Mécanismes d’action des ARV(Antirétroviraux) ... 5
1.3.2 Les différentes classes d’antirétroviraux ... 6
1.4 La mesure des transaminases et des Gamma GT... 6
II. DEUXIEME PARTIE : CADRE, MATERIEL ET METHODES ... 8
2.1 Cadre d’étude... 9 TABLE DES MATIERES
Dosage des transaminases et de la gamma gt chez les PV/VIH sous traitement au CHD MONO COUFFO de LOKOSSA
Réalisé et présenté par Lionel Francis Olatounde Akandé CHOGNIKA 27
2.2.2. Equipements ... 12
2.2.3. Consommable ... 12
2.2.4. Réactif ... 12
2.3. METHODES D’ETUDE ... 12
2.3.1. Type d’étude ... 12
2.3.2. Echantillonnage ... 12
2.3.3. Phase pré-analytique ... 13
2.3.4 Phase analytique ... 13
2.3.5. Phase post analytique ... 14
2.3.6. Analyses statistiques ... 15
TROISIEME PARTIE : RESULTATS ET DISCUSSION ... 16
4. Résultats et discussion ... 17
4.1. Résultats ... 17
4.2. Discussion... 21
CONCLUSION ... 23
SUGGESTIONS... 24
REFERENCES ... 25
TABLE DES MATIERES ... 26
ANNEXE ... 28
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Réalisé et présenté par Lionel Francis Olatounde Akandé CHOGNIKA 29
22,07 20,95 M 45
21,88 13,52 F 16
49,51 58,41 F 45
25,35 67,34 M 29
67,27 37,77 M 20
45,12 76,67 F 67
20,45 18,87 F 85
34,45 45,78 F 59
18,37 64,24 M 24
56,35 60,49 M 18
38,45 87,45 M 56
12,78 50,58 F 78
50,86 30,63 M 67
31,97 80,72 M 88