III. Traitement des échantillons au laboratoire
I.2. Observations macroscopiques et microscopiques des isolats
Nous avons obtenu sept isolats caractères morphologiques variés
I.2.1. Caractérisation
Les résultats de la caractérisation macroscopique des isolats fongiques âgés de 15 jours sur le milieu PDA est illustrés dans le tableau
Tableau n 03: Caractérisation macroscopiques des isolats fongiques
Code de la boite Face supérieure B1 B2 B3
Observations macroscopiques et microscopiques des isolats fongiques
Nous avons obtenu sept isolats fongiques sur le milieu PDA, ces isolats présentent des caractères morphologiques variés
Caractérisation macroscopique des isolats fongiques
ts de la caractérisation macroscopique des isolats fongiques âgés de 15 jours sur le dans le tableau 03
: Caractérisation macroscopiques des isolats fongiques
Face supérieure Face inférieure Description Couleur marron pour les deux faces. Mycélium cotonneux Colonie de à croissance rapide Forme croissance modérée Couleur noir entouré d’une bande grise face supérieure et une couleur noir entourée du jaune inférieure. Forme Colonie mycélium de texture cotonneuse. le revers est blanc -
Observations macroscopiques et microscopiques des isolats fongiques :
, ces isolats présentent des
des isolats fongiques
ts de la caractérisation macroscopique des isolats fongiques âgés de 15 jours sur le
Description
ouleur marron-miel pour les deux faces. Mycélium cotonneux
olonie de forme ronde, à croissance rapide
orme irrégulière à roissance modérée
ouleur noir entouré d’une bande grise sur la face supérieure et une couleur noir entourée du
sur sa face inférieure.
orme ronde.
olonie blanche avec mycélium de texture cotonneuse. le revers est
B4 B5 B6 B7
Dans notre étude nous avons détecté la présence de plusieurs types de colonies mais de ces colonies ne présente les caractéristique de
de ce dernier a été détaillée par plusieurs auteurs dont on cite Lahlou (1983), Cherrab et al. (2002)
auteurs verticillium est caractérisé compact très mélanisé et noirâtre
Colonie de verdâtre
mince bonde jaune. - Le revers est de
noir foncé entouré d’une mince bonde jaune
Forme colonie Colonie à croissance modérée de marron
supérieure, et noire sur la face inférieure.
-Colonie de régulière.
brun-grise sur la face supérieure et noire avec une mince bordure rouge sur la face inférieure.
-Colonie de régulière lente de
foncé sur la face supérieure, et noire foncée sur la face inférieure.
Dans notre étude nous avons détecté la présence de plusieurs types de colonies mais
de ces colonies ne présente les caractéristique de Verticillium . La description macroscopique de ce dernier a été détaillée par plusieurs auteurs dont on cite Bellahcen (2004), Boisson et Lahlou (1983), Cherrab et al. (2002) Harir (2010), et Pegg et Brady (2002)
caractérisé par mycélium blanc à l’état jeune devenant avec l’âge noirâtre par la production abondante des microsclérotes
olonie de couleur gris verdâtre entourée d’une mince bonde jaune.
e revers est de couleur noir foncé entouré d’une mince bonde jaune
orme irrégulière de colonie.
olonie à croissance modérée de couleur marron foncé sur la face supérieure, et noire sur la face inférieure.
Colonie de forme régulière. de couleur
grise sur la face supérieure et noire avec une mince bordure rouge sur la face inférieure.
olonie de forme régulière à croissance lente de -couleur brun foncé sur la face supérieure, et noire foncée sur la face inférieure.
Dans notre étude nous avons détecté la présence de plusieurs types de colonies mais aucune La description macroscopique Bellahcen (2004), Boisson et et Pegg et Brady (2002). Selon ces jeune devenant avec l’âge par la production abondante des microsclérotes.
I.2.2. Analyse microscopique :
Les résultats de l’analyse microscopique des isolats fongiques sont mentionnés dans le tableau ci-dessous en utilisant un microscope (G*40) :
Tableau n°04 : Caractérisation microscopique des isolats fongiques :
Code Image sous microscope Description de la souche
B1, B6 Conidies non formées.
Hyphe brun pâle, ramifié angulairement avec des branches latérales
cloisonnées près des hyphes principaux, et rétrécies à la base
B2
G X 10 G X 40
-les spores sont globuleuses plus ou moins arrondies. -l’apophyse, bien
développée, à une forme d’entonnoir B7, B5 - présence de conidies pluricellulaires en chaines brunes irrégulières. -Conidies piriformes, cloisonnées longitudinalement et transversalement
B4 -les conidies sont muriforme cloisonnées transversalement et longitudinalement.
-les conidiophores sont renflés.
B3 - Mycélium de type
cloisonné.
- Présence de nombreux conidiophores isolés, ramifiés, terminés par une structure en forme de Pinceau
L’observation microscopique a permis de constater une diversité de conidies, de conidiophores, toutefois, aucune des observations ne correspond à la description du
Verticillium,dahliae. En effet, ce dernier se caractérise par des conidiophores hyalins, érigés,
portant des masses de spores apicales dans chaque phialide verticillaire en 3 parties fertiles: les phialides se rétrécissant progressivement vers l'apex. Les conidies sont hyalines, ellipsoïdales. Les Sclérotes sont composés de cellules agrégées brun foncé à paroi épaisse (Watanabe, 2001 ; Jabnoun-Khiareddine et al , 2010 ; Lola et al , 2011 ; Kumar et al ; 2012, ).
Selon Barnett et Hunter (1972), l’identification de l’espèce est basée sur les caractéristiques morphologiques des hyphes et des organes de reproduction asexuée, La caractérisation macroscopique et microscopique des isolats a permis d’identifier 05 genres fongiques :
- Les isolats B7 et B5 correspond au genre Alternaria, les espèces de ce genre possèdent un mycélium de type non cloisonné associé à la présence de conidies pluricellulaires en chaines brunes irrégulières qui ont souvent l’aspect de « zigzag » ; souvent en forme de massue, cloisonnées longitudinalement et transversalement. (Criquet et al., 2008).
- Les isolats B1 et B6 correspond au genre Rhizoctonia, les espèces de ce genre possèdent un mycelium septé stérile, ne produisant pas de conidies, les hyphes sont bruns pâle ou bruns, ramifiés, avec des branches latérales presque à angle droit resserrées à la base, cloisonnées entre les hyphes principaux et les branches latérales (Watanabe,2001)
- L’isolat B4 correspond à Stemphylium ; selon Watanabe (2001), les espèces de ce genre se caractérisent par des conidiophores brun pâle, érigés, simples, souvent formant des nœuds, portant des conidies simples sur l'apex légèrement gonflé. Les conidies sont brunes, ellipsoïdales ou cylindriques à extrémité arrondie, rugueuses à la surface, et muriformes.
- L’isolat B3 correspond a Penicillium sp, D’après Mourida (2014), Le mycélium de
Penicillium est de type cloisonné portant de nombreux conidiophores isolés, ramifiés,
terminés par un pénicille ; Pénicille constitue de phialides branchés directement à l'extrémité du conidiospores
- L’isolat B2 correspond au genre Absidia. Selon Watanabe (2001), les hyphes
d'Absidia sont non cloisoné et relativement larges à 6 - 15 µm de diamètre. Les
espèces d'Absidia ressemblent à des espèces de Rhizopu . Les sporangiophores se ramifient et s'élargissent apicalement où ils forment une apophyse conique immédiatement au-dessous de la columelle. Les sporanges ont un diamètre de 20 à 90 µm et sont de forme sphérique à pyriforme. À maturité, la paroi sporangiale se dissout en libérant des sporangiospores rondes à ovales (3 à 5 µm), laissant une petite collerette à la rencontre de l'apophyse et du sporange
Les symptomes observés sur l’olivier peuvent être du à d’autres champignons tels que Le
stemphylium ou Rhizoctonia. Selon certains auteurs, ces deux champignons peuvent être
associés au dépérissement des oliviers (Al Shabel, 2005)
II.