Mise au point de la méthode d'analyses

L'appareil utilisé pour les analyses de TOC est le SSM-5000A couplé au TOC-5000A fabriqués par Shimadzu. Les sédiments à analyser ont tous été préalablement lyophylisés puis broyés au mortier. Les courbes de calibration ont été élaborées à l'aide d'acide oxalique dihydrate (Fluka) pour l'analyse du TC et de carbonate de sodium anhydre (Nacalai Tesque, Japon) pour le TIC. Les creusets dans lesquels sont effectués les combustions des échantillons ont été préalablement calcinés à 900 °C pendant 2 heures puis stockés dans un récipient en verre fermé préalablement lavé avec HCl 1 M. Les pincettes utilisées pour manipuler les creusets ont été chauffées dans la flamme d'un bec Bunsen avant utilisation.

L'analyse directe du TIC d'un sédiment de surface de 50 mg à l'aide de 0.4 ml d'acide phosphorique à 85% (Shimadzu, recommandé par le fabricant) n'a pas conduit à un pic franc permettant une quantification. La méthode différentielle de mesure du TOC (TOC=TC-TIC) a donc été abandonnée. La méthode directe a dès lors été adoptée. Le sédiment a été soumis dans un premier temps à un chauffage à 200-250 °C en présence d'acide phosphorique concentré afin d'éliminer le carbone minéral. Dans un second temps, ce même échantillon a été placé dans le four à la température de 900-980 °C afin de mesurer la teneur en carbone organique total. Toutefois l'acide phosphorique porté à près de 1000 °C se transforme en une mousse débordant en partie du creuset contenant l'échantillon. La réduction du volume d'acide phosphorique à 85% ou sa dilution n'a pas permis de résoudre ce problème. L'utilisation de fibres céramiques inertes pour empêcher ce débordement n'a pas été concluant. De plus, après un certain nombre de mesures, l'utilisation d'acide phosphorique à haute température a provoqué l'empoisonnement partiel du catalyseur conduisant à des mesures de moins en moins précises. L'usage d'acide phosphorique a donc été abandonné au profit de l'acide chlorhydrique qui est sans effet sur le catalyseur. Ce dernier a été remplacé au même moment.

6.3 Procédure adoptée

La procédure adoptée utilise trois standards d'acide oxalique dihydrate de masse 5, 10 et 15 mg. La courbe de calibration obtenue possède un coefficient de corrélation supérieur à 0.99. 10 à 100

mg de sédiment lyophilisé et broyé sont mouillés à l'aide de 0.4 ml d'HCl 6N puis passés au four à 200-250 °C sous un courant d'oxygène. Le creuset contenant l'échantillon est ensuite passé à 900-980 °C pour analyse du TOC.

7 Conclusion

Cette deuxième partie a permis de passer en revue chaque étape de la procédure expérimentale depuis le carottage jusqu'à la quantification finale d'un biomarqueur précis. Cette connaissance du mode opératoire, indispensable avant toute interprétation des résultats de la troisième partie, permet de mieux cerner certains inconvénients liés à une procédure expérimentale spécifique. La réaction de désulphurisation par NaBH4/NiCl2, qui conduit à différentes réactions parasites, peut être citée à titre d'exemple. L'élimination des hydrocarbures linéaires par inclusion sur un nouveau type de tamis moléculaire rend également compte des effets discriminatoires associés avec d'anciens tamis. Les problèmes de pertes engendrées par l'élimination du soufre élémentaire, problème résolus dans cette seconde partie, est un autres exemple illustrant les faiblesses inhérentes à certaines procédures expérimentales.

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