"Toujours" dans" le" but" d’identifier" une" réponse" NFP" dépendante," un" groupe" de" marqueurs" représentatifs"de"différentes"voies"de"défense"telles"que"les"PR"protéines"(thaumatine,"inhibiteurs"de" protéases," chitinase)," le" stress" oxydant" (peroxydase," famille" des" NADPH" oxidases)," le" métabolisme" secondaire"(chalcone"et"stilbène"synthase,"phenylammonialyase,"vestitone"reductase)"et"de"la"voie" jasmonate" (lipase" et" lipoxygenase)" a" été" choisi." Sélectionnés" à" partir" des" gènes" répondant" à" l’infection" par" Aphanomyces0 euteiches," ils" se" sont" révélés" être" " des" marqueurs" généraux" de" l’immunité"induits"par"des"éliciteurs"tels"que"la"flagelline"ou"la"chitine,"au"cours"des"travaux"réalisés" par" Amaury" Nars." Ainsi," la" régulation" de" ce" groupe" de" gènes" a" été" étudiée" sur" les" échantillons" sélectionnés"à"l’issue"des"tests"ROS.""
Il" s’est" avéré" que" tous" sont" fortements" induits" chez" A17" en" réponse" au" filtrat" de" culture" de" l’oomycète" de" 1,7" (RboH" G)" fois" à" 277" fois" (Thaumatine" et" Peroxydase" anionique)." De" manière" intriguante,"cette"activation"transcriptionnelle"apparaît"même"exacerbée"par"la"préPincubation"avec"
les"lipochitooligosaccharides"passant""pour"certains"d’entre"eux"de"277"à"284"fois"pour"la"thaumatine" 27"à"53"fois"pour"un"inhibiteur"de"protéase,"277"à"363"fois"pour"la"peroxydase"anionique"et"5,7"à"7,4" fois"pour"une"lipoxygénase."De"manière"encore"plus"frappante,"ces"gènes"sont"tous"drastiquement" plus" induits" dans" nfp%20 que" dans" A17":" de" 2,5" fois" pour" la" RboHG" à" plus" de" 520" fois" pour" la" thaumatine""et"la"peroxydase"anionique00(Figure"12)."
"
Figure"12":Sélection"de"marqueurs"de"l’immunité"et"de"la"production"de"ROS"dont"la"réponse"au"traitement"avec"les"filtrats" de"culture"est"suivie"par"RTPqPCR"(n=3)."
Ainsi" ces" marqueurs" transcriptionnels" de" l’immunité" viennent" contrarier" les" observations" faites" précédemment" avec" les" ROS." Dans" la" mesure" où" ces" derniers" paraissent" plus" robustes" car" spécifiques,"il"est"tentant"de"considérer"ces"résultats"en"priorité."Il"est"vrai"qu’un"grand"nombre"de" facteurs,"notamment"développementaux,"sont"susceptibles"d’affecter"l’homéostasie"des"ROS,"ce"qui" peut"engendrer"des"artefacts"en"dépit"des"contrôles"positifs"introduits"systématiquement."Il"est"tout" de" même" curieux" de" noter" que" les" plantes" dans" lesquelles" la" réponse" ROS" n’a" pas" été" observée" exhibent" les" plus" fortes" régulations" géniques." En" ce" sens," il" est" vrai" que" la" mutation" NFP" ou" l’application"de"lipochitooligosaccharides"a"un"effet"sur"l’expression"des"marqueurs"bien"que"ce"ne" soit" pas" celui" intuitivement" attendu." Le" suivi" de" l’expression" de" ces" marqueurs" au" long" d’une" cinétique"détaillée"après"traitement"avec"les"filtrats"pourrait"permettre"d’observer"des"nuances"qui" nous"ont"échappé"avec"le"seul"temps"de"quatre"heures"après"élicitation."Ainsi,"un"délai"dans"la"mise" en" place" de" la" réponse" chez" les" mutants" nfp" et" au" cours" des" préPtraitements" lipochitooligosaccharides"pourrait"être"observé."A"l’inverse,"une"réponse"immunitaire"plus"soutenue" dans"le"temps"chez"A17"en"l’absence"lipochitooligosaccharidique"pourrait"être"mise"en"évidence."A" titre" indicatif," des" plantes" incubées" pendant" quatre" heures" avec" des" lipochitooligosaccharides" bactériens"avant"d’être"inoculées"par"A.0euteiches"n’ont"révélé"aucune"altération"de"leur"niveau"de" résistance,"que"ce"soit"A17"vers"la"sensibilité"ou"F83005.5"vers"la"résistance"(données"non"montrées)." Ainsi," l’effet" des" lipochitooligosaccharides" observés" chez" A17" visPàPvis" de" la" perception" des" filtrats" d’Aphanomyces0euteiches0ne"peut"pas"être"associé"à"une"modification"du"comportement"de"la"plante" face"au"parasite."
D. Conclusion du chapitre
"L’objectif"de"ce"chapitre"était"de"caractériser"le"rôle"de"NFP"dans"l’immunité"de"Medicago0truncatula." De"manière"complémentaire"à"l’approche"de"phénotypage"dans"laquelle"des"mutants"apparaissent" plus"sensibles" à" A.0 euteiches,"il" a" pu" être" mis" en" évidence"que" la" surexpression" de" NFP"permettait" d’améliorer"la"résistance"à"l’oomycète."De"façon"intriguante,"il"a"été"montré"que"l’expression"était" rapidement"réduite,"y"compris"lorsque"le"gène"était"sous"le"contrôle"d’un"promoteur"constitutif."Ces" résultats"suggèrent"l’existence"d’une"régulation"postPtranscriptionnelle"qui"pourrait"être"induite"par" le"parasite"luiPmême,"mais"cette"dernière"hypothèse"reste"à"démontrer."Toujours"estPil"que"le"niveau" d’expression" basal" du" gène" semble" être" important" pour" le" niveau" de" résistance" observée" dans" la" plantes." Tous" ces" résultats" suggèrent" un" rôle" précoce" du" gène" dans" les" étapes" précoces" de" l’interaction." Ce" rôle" dans" les" étapes" précoces" de" l’interaction" est" aussi" supporté" par" l’expression" altérée" de" centaines" de" gènes" dans" le" mutant" nfp%2" par" rapport" au" sauvage" A17," 24" heures" après" inoculation" avec" A.0 euteiches." Ces" gènes" ne" semblent" pas" être" associés" directement" à" la" réponse" immunitaire" mais" plutôt" à" des" processus" de" dynamique" cellulaire." Les" mutants" nfp0 ont" aussi" été" caractérisés" au" cours" de" l’interaction" avec" Colletotrichum0 trifolii" et" se" sont" également" révélés" plus" sensibles" à" ce" champignon." Ces" observations" plaident" en" faveur" d’un" rôle" général" de" NFP" dans" la" résistance"de"la"plante."Son"intervention"en"tant"que"récepteur"transmembranaire"à"domaines"LysM" dans"la"perception"de"composés"microbiens"contenant"des"résidus"à"NPacetylglucosamine"paraît"être" l’hypothèse"la"plus"directe"pour"expliquer"son"rôle"dans"l’immunité."Cependant,"la"perception"de"COs" a" été" étudiée" chez" les" mutants" nfp" sans" révéler" d’altération" de" la" perception" de" ces" MAMPs" au" travers" de" la" mise" en" place" de" réponses" telles" que" les" ROS" ou" l’activation" de" marqueurs" transcriptionnels"de"défense."Si"les"préparations"des"filtrats"de"culture"d’A.0euteiches"se"sont"révélées" être" activatrices" de" l’immunité," un" rôle" de" NFP" n’a" pu" être" décelé" dans" leur" perception." Enfin," la" comparaison"de"nos"données"transcriptomiques"avec"celles"issues"de"traitements"avec"des"LCOs"dont" la"perception"dépend"de"NFP"a"révélé"que"des"gènes"associés"au"métabolisme"lipidique"pourraient" être" activés" chez" A17" de" manière" dépendante" de" ce" récepteur." Ce" dernier" résultat" constitue" une" piste"de"choix"pour"élucider"la"contribution"de"ce"gène"au"cours"des"interactions"avec"des"parasites." L’obtention" récente," au" sein" de" l’équipe," de" données" transcriptomiques" de" perception" des" chitosaccharides"pariétaux"d’A.0euteiches"chez"A17"et"les"mutants"nfp"devrait"permettre,"de"préciser" les" fonctions" dépendantes" de" NFP" au" cours" de" l’interaction" avec" A.0 euteiches" avant," peutPêtre," de" généraliser"son"rôle"visPàPvis"de"Colletotrichum0trifolii,"par"exemple."
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