Les couplages au palladium décrits précédemment nous ont permis de fonctionnaliser les triazoles en position 5 par des groupements aromatiques encombrants (phényle, 6-MeO-2-napthyle) ou par des alcynes plus petits : (acétylène, 3-hydroxypropyne). Dans le but d’accéder à des inhibiteurs capables d’une meilleure fixation au site catalytique. La triple
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liaison des composés 171ad’ et 171cd’ a été réduite en double ou simple liaison. Les alcynes
171ad’ et 171cd’ ont donc été réduits en 5-éthyltriazoles 201a et 201c qui ont été déprotégés
pour fournir les inhibiteurs 202a et 202c de la GP. Les composés 203a et 203c portant une double liaison sont quant à eux susceptibles d’être fonctionnalisés par différentes méthodes permettant ainsi de moduler la structure, l’encombrement ainsi que la polarité du substituant en position 5.
Schéma IV-33 : Réduction partielle ou totale de la triple liaison des alcynes XX et XX
Afin de fonctionnaliser la double liaison des 5-vinyltriazoles 203a et 203c trois types de réactions ont été tenté (Schéma IV-34) : (1) La dihydroxylation par le tétroxyde d’osmium, (2) l’époxydation suivie d’une ouverture de l’époxyde 205 par un nucléophile et enfin (3) la réaction de métathèse avec l’acrylate de méthyle afin de conduire aux esters , -insaturés
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Schéma IV-34 : Essais de fonctionnalisation de la double liaison
Aucune des méthodes testées (Tableau IV-6) n’a conduit produit souhaité, quelles que soient les conditions utilisées. Dans tous les cas, aucune conversion du produit de départ 203 n’a été observé par CCM, ce qui suggère que l’encombrement stérique induit par la présence du sucre en position 1 et du substituant en position 4, bloque l’accès à la double liaison, empêchant ainsi toute réaction sur ce site.
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Réaction Conditions Résultat
Dihydroxylation (1) AD-mix cat. tBuOH/H2O 1:1 t.a., 16h Produit de départ (1) AD-mix cat. tBuOH/H2O 1:1 0°C, 24h Produit de départ (1)
AD-mix cat. + OsO4 cat.
tBuOH/H2O/CH3CN 1:1:0.1 0°C, 24h Produit de départ (1) OsO4 (1 éq.) tBuOH/H2O/CH3CN 1:1:0.1 -20°C, 16h puis 0°C, 24h Produit de départ Epoxydation (2) m-CPBA (1.5 éq.)
THF, t.a. 16h puis 60°C, 8h Produit de départ
(2) m-CPBA (10 éq.)
THF, t.a. 5h puis 60°C 16h Produit de départ
Métathèse (3)
Grubbs II (5% mol)
CH2Cl2 30°C, 10h Produit de départ
Tableau IV-6 : Conditions des réactions testées sur les dérivés XXa et XXb
V. Conclusions
Les résultats obtenus sur les différents couplages réalisés ont montré que dans tous les cas, lorsque du Pd(PPh3)4 est utilisé sur les dérivé iodés, l’étape d’addition oxydante a bien lieu. En effet l’obtention de l’intermédiaire 200 isolable dans le cas de la réaction de Heck va dans ce sens. En revanche dans le cas des dérivés bromés, le cycle catalytique de la réaction de Suzuki-Miyaura se déroule normalement mais dans les conditions de Sonogashira, l’absence de conversion du produit de départ suggère que la première étape d’addition oxydante n’a pas lieu. Ceci peut être attribué à la réactivité moindre des dérivés bromés vis-à-vis de l’addition oxydante. La présence de 5-prototriazole en fin de réaction indique une
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réaction parasite parallèle au cycle catalytique. Le fait que la proportion de ce produit diminue lorsque les conditions réactionnelles sont plus rigoureusement anhydres démontre que ce produit est formé en présence de traces d’eau. Enfin, les couplages de Heck n’ont pas abouti car l’intermédiaire 200 issu de l’addition oxydante, trop stable, est peu apte à subir l’insertion de la double liaison, bloquant ainsi la suite du processus. Ceci peut venir soit de l’impossibilité du complexe trans à s’isomériser, soit de l’encombrement stérique trop important pour permettre l’approche de la double liaison. Ce phénomène stérique peut aussi être invoqué dans le cas des réactions tentées sur les 5-vinyltriazoles 203a et 203c qui n’ont montré aucune conversion du produit de départ.
Les réactions décrites dans ce chapitre ont permis de synthétiser 14 inhibiteurs potentiels du site catalytique de la GP (Figure IV-4). Les deux 5-vinyltriazoles n’ont pas été déprotégés car d’autres essais de fonctionnalisation de la double liaison sont envisageables.
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Chapitre V : Evaluation des inhibiteurs
synthétisés : enzymologie, cristallographie et
activités biologiques
Les synthèses exposées précédemment ont conduit à divers glyco- et glucomimétiques en majorité sous forme acétylée. Leur déacétylation a conduit, avec de très bon rendements, aux analogues du glucose visés dans notre recherche d’inhibiteurs ligands du site actif de la glycogène phosphorylase. Ces composés ont été étudiés dans le groupe du Dr. Evangelia Chrysina à Athènes pour l’aspect enzymologie et cristallographie des complexes enzyme-ligand.
Les données enzymatiques concernant les inhibitions de la GP, en général la forme non phosphorylée extraite du muscle de lapin (RMGPb), sont exprimées par les concentrations équivalentes à une inhibition de 50% (IC50). Compte tenu de l’existence pour la GP de plusieurs sites de liaison et pour avoir une conaissance fine du mode de liaison associé à la structure quaternaire du complexe enzyme-ligand, une étude structurale a été réalisée ou est en cours pour la plupart des molécules inhibitrices.
Enfin, les composés les plus prometteurs ont fait l’objet de tests cellulaires in vitro et dans les tous meilleurs cas, d’études in vivo sur le rat. Ces mesures sur cultures primaires d’hépatocytes de rat ainsi que sur l’animal ont été coduites sous la responsabilité du Dr. Jacqueline Azay-Milhau par J. Leroy puis S. Balzarin au centre de pharmacologie et d’innovation dans le diabète à la faculté de pharmacie de Montpellier, université Montpellier I. Les études sur cultures primaires d’hépatocytes humains, qui constituent un modèle plus prédictif, ont été réalisées par C. Duret, ingénieur d’étude dans l’unité INSERM U1040 à Montpellier. C’est cet ensemble de résultats qui exposé ci-après.
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