Extraction et caractérisation de l’huile de Nigella sativa 1 Extraction de l’huile

L’extraction de l’huile totale des graines de Nigella sativa est réalisée par soxlhet. La première étape d’extraction est effectuée par le méthanol (1:5; M/V) durant 6 heures, suivie

par une évaporation du solvant a l’aide d’un évaporateur rotatif jusqu’à élimination totale du méthanol. L’extrait méthanolique, ainsi obtenu, est soumis à une extraction liquide-liquide, à température ambiante, par le n-hexane. Ceci est réalisé par extraction successive avec 3 x 50ml d’hexane. Après évaporation totale du solvant par évaporateur rotatif, l’extrait est séché sous flux d’azote puis le flacon est fermé hermétiquement et conservé au frais. La Figure 29 résume les différentes étapes d’extractions.

Figure 28:Schéma d’extraction de l’huile et de l’extrait méthanolique à partir des graines de Nigella sativa

2.2. Fractionnement de l’huile de Nigella sativa par chromatographie sur colonne

L’huile totale des graines de Nigella sativa est fractionnée sur une colonne de chromatographie ouverte de dimensions : 30cm x 20mm selon la méthode décrite par Ramadan et Morcel (2002). La phase stationnaire est constituée de gel de silice 60 (70-230 Mesh ; 0,063-0,2 mm). L’élution des différentes fractions est effectuée grâce un système de solvants constitué de chloroforme, acétone, méthanol et acide acétique.

2.3. Caractérisation physico-chimique de l’huile des graines de Nigella sativa

Seule l’huile totale des graines de Nigella sativa a fait l’objet de l’étude des caractéristiques physico-chimiques. Les paramètres et indices étudiés ont été déterminés selon les protocoles de la pharmacopée européenne 5.0 (Conseil de l’Europe, 2005)

40 g de poudre des graines de Nigella

sativa

Extraction avec 200 ml de Methanol(soxlhet)

Extrait Methanolique

Sechage sous vide Extraction avec 50ml x 3 of hexane

Fraction des lipides Extrait méthanolique délipidé

Séchage sous vide

Extrait méthanolique délipidé _{L’huile totale de Nigella}

- Densité

La densité d’une substance est le rapport entre la masse d’un volume donné de cette substance à température t1 et la masse d’un volume égal d’eau à une température t2. Pour estimer la

densité de l’huile des graines de Nigella sativa, nous avons mesuré la densité d2020 et qui est

liée à la masse volumique ρ20, définie comme la masse d’une unité de volume de la substance

à 20°C et exprimée en kilogramme par mètre cube ou en gramme par centimètre cube selon l’équation suivante :

d2020= 1,00180 x ρ20

- Indice de réfraction

L’indice de réfraction d’un milieu rapporté à l’air est égal au sinus de l’angle d’incidence d’un rayon lumineux dans l’air au sinus de l’angle de réfraction du rayon réfracté dans le milieu considéré. Ainsi, l’indice de réfraction mesuré est déterminé à 20±0,5C° et rapporté à la raie D du sodium (λ= 589,3nm), le symbole est donc n D20.L’indice de réfraction est déterminé

grâce à un réfractomètre de marque ABBE. - Viscosité

La détermination de la viscosité est effectuée par un viscosimètre capillaire. La viscosité de l’huile est mesurée à 20°C. La viscosité (η) est donnée par la formule suivante : η=k ρ t.

ou k est la constante de l’appareil, ρ est la masse volumique de l’huile et t est temps d’écoulement, de l’huile en secondes.

- Indice d’acide

L’indice d’acide IA est le nombre qui exprime en milligramme la quantité d’hydroxyde de

potassium nécessaire à la neutralisation des acides libres présents dans 1gramme de substance. Pour déterminer l’indice d’acide, 2 g de l’huile totale des graines de Nigella sativa sont solubilisés dans 10 ml d’un mélange alcool et d’éther (v/v) neutralisé au préalable par l’hydroxyde de potassium 0,1 M en présence de 0,5 ml de solution de phénolphtaléine. La titration a été réalisée par l’hydroxyde de potassium 0,1M. L’indice d’acide est déterminé comme suit :

IA= 5,610 n/m, n : le nombre de ml de l’hydroxyde de potassium, m : la masse de l’huile.

- Indice d’esters

L’indice d’ester est le nombre IEqui exprime en mg la quantité d’hydroxyde de potassium

nécessaire à la saponification des esters présents dans 1 g de substance. Il est calculé à partir de l’indice de saponification ISet l’indice d’acide selon la formule IE= IS– IA

- Indice d’hydroxyde

L’indice d’hydroxyde IOH est le nombre qui exprime en mg la quantité d’hydroxyde de

potassium nécessaire à la neutralisation de l’acide qui se combine par acylation à 1g de substance. Afin de déterminer l’indice d’hydroxyde, nous avons introduit dans un ballon de 150 ml muni d’un réfrigérant, 2g de l’huile auquel 5ml de la solution d’anhydre acétique sont ajoutés. Après chauffage au bain marie et refroidissement du mélange à température ambiante, 5 ml d’eau sont ajoutés. Le mélange est chauffé une deuxième fois au bain marie pendant 10min. Après refroidissement, le réfrigérant et les parois du ballon sont rincés avec 5ml d’une solution de méthanol neutralisé au préalable en présence d’une solution de phénolphtaléine. La titration est effectuée avec l’hydroxyde de potassium alcoolique 0,5M.

IOH= 28,05 (n2–n1) /m + IA

n2: nombre de ml de l’hydroxyde de potassium alcoolique de l’essai blanc; n1: nombre de ml

de l’hydroxyde de potassium alcoolique de l’échantillon analysé, m : masse de l’échantillon. - Indice d’iode

L’indice d’iode II est le nombre qui exprime en g la quantité d’halogène, calculée en iode,

susceptible d’être fixée par 100g de substance. L’indice d’iode est déterminé en introduisant 0,5g d’huile totale des graines de Nigella sativa solubilisé dans 15ml de chloroforme dans un récipient de 250ml muni d’un bouchon rodé. 25 ml de solution de bromure d’iode (10%) sont ajoutés. Après addition de 10 ml d’une solution d’iodure de potassium à 100g/l et de 100ml d’eau, la mélange est titré par le thiosulfate de sodium 0,1M jusqu’à disparition presque totale de la coloration jaune. Cinq ml d’une solution d’amidon sont ensuite ajoutés tout en continuant la titration jusqu’à disparition de la coloration. L’indice d’iode est calculé en appliquant la formule suivante : II= 1,269 (n2–n1) /m ou n2 est nombre de ml de thiosulfate

de sodium 0,01M de l’essai blanc, n1est le nombre de ml de thiosulfate de sodium 0,1 M ml

l’échantillon analysé et m est la masse de l’échantillon. - Indice de peroxyde

L’indice de peroxyde Ip est le nombre qui exprime en milliéquivalents d’oxygène actif la

quantité de peroxyde contenue dans 1 Kg de substance, déterminé par la méthode suivante : 2g de l’huile totale des graines de Nigella sativa ont été mélangés avec 30 ml d’un mélange chloroforme / acide acétique glacial (2v/3v), déposés dans une fiole conique à bouchon rodé. Après une minute d’agitation, 0,5ml d’une solution saturée d’iodure de potassium sont ajoutés et le mélange est titré par le thiosulfate de sodium 0,01M. L’indice de peroxyde est calculé selon la formule :

Ip = 10 (n2–n1) /m ou n2 est nombre de ml de thiosulfate de sodium 0,01M de l’essai blanc,