Evaluation de l’hépatotoxicité des extraits de Nigella sativa

Après avoir démontré l’effet hypoglycémiant de quelques des extraits des graines de Nigella sativa nous nous sommes intéressés à l’approche toxicologique d’évaluer la toxicité hépatique subaiguë de ses extraits. Plusieurs méthodes ont été utilisées ; les tests sur les PCLS, dosage des paramètres enzymatiques et non enzymatiques de l’intégrité hépatique et l’examen histologiques des tissus après le traitement des rats diabétiques par les différents extraits des graines de Nigella sativa.

3.1. Evaluation de l’hépatotoxicité des extraits de Nigella sativa par la méthode des PCLS Pour remplacer l’utilisation des cellules isolées qui avait quelques limitations et inconvénients comme la destruction des membranes des cellules, la rupture des jonctions cellulaires suite à l’utilisation des enzymes protéolytiques et la perte de la polarité normale des hépatocytes comparé à un foie saint (Evdokimova et al, 2001), le modèle des PCLS a été choisi pour

mieux évaluer l’huile totale des graines de Nigella sativa sur les hépatocytes. Le control de l’effet des extraits est obtenu par le dosage de l’ATP, exprimé en nmoles d’ATP/mg de protéines.

Trois extraits (méthanolique délipidé, l’huile totale et la fraction polaire de l’huile totale) ont été testés en présence et en absence d’un d’acétaminophen (paracétamol), agent hépatotoxique. Les effets des extraits et de l’acétaminophen sont comparés à l’action d’un composé hépato-protecteur, le N-acetyl-cysteine (NAC) (Figure 49).

Figure 48 : Evaluation de l’hépato-toxicité des extraits des graines de Nigella sativa.CT: slices de control (sans traitement), AC: Slices traitées avec l’acetaminophen, Ac+NAC: Slices traitées avec acetaminophen + N-acetyl-cysteine, Ac+TL: slices avec l’acetaminophen et l’huile totale de Nigella sativa , Ac+Me: slices traitées avec acetaminophen + l’extrait méthanolique de Nigella sativa, Ac+PLF: slices traitées avec l’acetaminophen + la fraction polaire de l’huile de Nigella sativa, TL: slices traitées avec l’huile totale de Nigella sativa, Me: slices traitées avec l’extrait méthanolique de Nigella sativa, PLF: slices traitées avec la fraction polairede l’huile de Nigella sativa. PCLS ont été incubées durant 24h à 37°C. Concentrations utilisées sont comme suit: AC: acetaminophen, 10 mM, NAC: N-acetyl-cystein: 10mM, TL: huile totale de Nigella sativa : 1 mg/ml, Me: extrait méthanolique de Nigella sativa: 1 mg/ml, PLF: fraction polaire de l’huile de Nigella sativa: 1 mg/ml. P ≤ 0.05 comparés aux valeurs du control (à l’exception de PNAC), * amélioration significative (p≤0.05) comparé à AC+NAC.

Dans les conditions normales (CT) et en absence d’agents chimique, le niveau de l’ATP est d’environ 3.88±0.3nmol/mg. L’acétaminophen utilisé avec une concentration de 10 mM induit une diminution du taux de l’ATP jusqu’à 1.7±0.3 nmol/mg. Par contre, la présence du NAC protège les tissus hépatiques contre l’effet toxique de l’acétaminophen. Cet effet se traduit par la conservation d’un taux quasi normal de l’ATP (3.6 ±0.45 nmol/mg) comparé au slices normales. * 0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 4 4.5

CT Ac Ac+Nac Ac+TL Ac+Me Ac+PLF TL Me PLF

Extraits nM ATP/mg proteines

Les extraits des graines de Nigella sativa ont été testés dans les mêmes conditions. En absence de l’acétaminophen, l’extrait méthanolique délipidé réduit le niveau de l’ATP à 2.4 ±0.2 nmol/mg par rapport à 3.88 nmol/mg du control. En présence de l’acétaminophen, le taux de l’ATP est de 1.8±0.3 nmol/mg. L’huile totale utilisée seule (en absence de l’acétaminophen) permet une génération de 2.9± 0.2 nmol/mg d’ATP et en présence de l’acétaminophen, le niveau de l’ATP est de 2.7nmol/mg. Finalement la fraction polaire seule engendre un niveau d’ATP de 3.0±0.15nmol/mg et en présence de l’acétaminophen, l’ATP décroit jusqu’à 2.25±0.2 nmol/mg. La comparaison des niveaux d’ATP en présence des extraits des graines de Nigella sativa par rapport aux contrôles CT, AC et AC+NAC montre que :

- Les trois extraits n’ont pas un effet protecteur contre l’action de l’AC. Cela est observé lorsqu’on compare les taux de l’ATP dans les traitements AC+TL, AC+Me et AC+PLF à AC+NAC, l’amélioration du taux d’ATP n’est pas significative.

- Le traitement des slices avec uniquement (TL, Me et PLF) améliore globalement le niveau d’ATP, comparé au traitement AC (p≤0.05). Cependant, cette augmentation n’est aussi importante que celle observée dans le traitement AC+NAC. Seule la fraction PLF améliore significativement de taux d’ATP (p≤0.05). Par conséquence, ces trois extraits peuvent être considérés comme non hépato- protecteurs mais pas ou peu toxiques comparés à l’AC.

Des études réalisées sur l’effet hépato-protecteur des extraits des graines de Nigella sativa montrent que la thymoquinone, le composé actif de l’huile essentielle de Nigella sativa, exerce une activité hépato-protective (1mM) en inhibant la diminution de la viabilité cellulaire et le largage des enzymes induit par le TBHP, dans les cellules hépatiques isolées. Il est bien connu que la thymoquinone conduit une préservation du GSH intracellulaire, ce qui peut expliquer son effet hépato-protecteur (Daba et Abdel-Rahman, 1998).

Il a été rapporté que l’huile volatile des graines de Nigella sativa pouvait empêcher la peroxydation des lipides responsable de l’altération des cellules hépatiques chez les lapins rendus diabétiques (Meral et al., 2001). L’effet protecteur est le résultat de la diminution de l’activité des systèmes de défense antioxydants, comme le taux du GSH et la concentration de la céruloplasmine d’une part et la diminution de la teneur plasmatique de la malondialdehyde (MDA) d’autre part (Meral et al., 2001).

3.2. Hépatotoxicité évaluée par les méthodes classiques chez le rat diabétique

Dans le but de mieux exploiter la toxicité des extraits des graines de Nigella sativa ayant donnés des effets hypoglycémiants significatifs; le dosage des marqueurs d’intégrité

hépatique ont été réalisés, à la fin de l’expérience, sur les rats, traités avec les différents extraits des graines de Nigella sativa. L’analyse des marqueurs hépatiques des rats rendus diabétiques par la N/STZ et traites, durant 17 jours, avec l’huile totale des graines de Nigella sativa, ses fractions polaire et neutre, la thymoquinone et métformine révèle une absence de toxicité (Tableau 25).

Tableau 25 : Analyse des marqueurs hépatiques des rats traités par les extraits de Nigella sativa