Matériel et méthodes
3. Etude de la sensibilité de l’ensemble de 81 isolats par microméthode :
La macrométhode nous a servi de référence pour la validation de la microméthode. Les résultats obtenus par les deux méthodes étant superposables, nous avons pu évaluer par microméthode la sensibilité des différents isolats hospitalièrs aux différents produits.
3. Etude de la sensibilité de l’ensemble de 81 isolats par microméthode :
3.1. Préparation des inocula :
La préparation des inocula était faite de la même manière décrite précédemment.
3.2. La Préparation des solutions antiseptiques et désinfectantes :
Les différentes dilutions préparées de chaque produit ont été choisies en tenant compte de la concentration préconisée par le fabriquant (Tableau XI).
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Tableau XI : les dilutions préconisées et les dilutions testées de chaque produit dans notre
étude.
Produit Concentrations
préconisées
Dilutions testées
Bétadine scrub® Pur, 1|3 pur, 1|3, 1|10, 1|100, 1|1000
Septeal® Pur pur, 1|10, 1|100, 1|1000
Alcool éthylique 70° Pur pur, 1|2, 1|10, 1|100, 1|1000
Surfanios® 1|400 (0,25%) pur, 1|10, 1|100, 1|200, 1|400,
1|1000, 1|10000, 1|1000000
Produit X 1|50 (2%) pur, 1|10, 1|50, 1|100, 1|1000
Figure 6 : Différentes dilutions préparées. Exemple de la Bétadine
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36 3.3. Essai par microméthode :
L’étude de la sensibilité des 81 isolats était réalisée par microméthode comme elle a été décrite dans le paragraphe de validation.
Figure 7 : Essai en microméthode de la Bétadine scrub®.
Figure 8 : Essai en
microméthode du Surfanios® microméthode du produit X Figure 9 : Essai en Numéro des isolats
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Après une nuit d'incubation en aérobie à 37 °C, les signes visibles de croissance bactérienne (turbidité) n’ont pas été possibles à détecter dans certains puis compte tenu des qualités macroscopiques du mélange produit-bouillon au niveau de l’ensemble des tubes y compris les tubes témoins. Pour opter à une méthode de travail uniforme, tous les puits ont été repiqués sur gélose BCP fraîchement préparée à 37 °C pendant 24 heures.
Le nombre d’unité formant colonies a été compté sur chaque boite. Les boites sur lesquelles il n’était pas possible de compter manuellement (plage de colonies), le nombre d’unité formant colonies a été considéré comme supérieur à 107.
La lecture de chaque boite a été validée par l’absence de croissance dans les puits de contrôle de stérilité et par une croissance bactérienne dans les puits de contrôle de fertilité.
Les taux de la réduction logarithmique des différents produits ont été calculés.
Figure 10 : Colonies d’Acinetobacter baumannii sur gélose BCP après contact avec différentes dilutions d’alcool 70°.
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38 Analyse des résultats :
L'analyse statistique a été réalisée à l’aide du logiciel statistique SPSS version 13.0. et Microsoft Office Excel 2007 en utilisant le test chi-carré. Les valeurs de p inférieures à 0,05 étaient considérées comme statistiquement significatives. Des comparaisons entre la sensibilité des isolats issus des prélèvements des patients et des isolats environnementaux aux différents produits ont été établies. Les résultats ont été présentés à l'aide des tableaux et graphiques.
Evaluation de la sensibilité d’Acinetobacter baumannii aux antiseptiques et désinfectants
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40 Les isolats bactériens :
Au cours de cette étude, 81 isolats d’Acinetobacter baumannii ont été inclus. Il s’agissait de 45 souches issues des prélèvements des patients, en milieu de réanimation pour la plupart, et 36 à partir des prélèvements environnementaux réalisés exclusivement au sein des services de réanimation médicale et chirurgicale de l’HMIMV.
Les souches isolées à partir des patients séjournant aux services de réanimation chirurgicale et médicale représentaient respectivement 42,2% et 33,3% (Figure 11).
Les isolats infectants représentaient 48,9% de l’ensemble des souches issues des prélèvements des patients (Figure 12).
Les infections pulmonaires suivies des infections urinaires représentaient respectivement 45,5% et 31,8% des infections dues à ces isolats (Figure 13).
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RCH : réanimation chirurgicale ; RM : réanimation médicale ; URG : urgences ; ENDO : endocrinologie ; EXT : externe ; RHUMATO : rhumatologie ; NEPHRO : néphrologie ; CVIP : clinique VIP
Figure 11 : Répartition par service des isolats d’Acinetobacter baumannii issus des
prélèvements des patients (n=45).
42,2% 33,3% 4,4% 2,2% 6,7% 2,2% 2,2% 4,4% 2,2%
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Figure 12 : Distribution des souches infectantes et colonisantes (n=45).
Figure 13 : Distribution des souches infectantes selon les sites (n=22). 51,1%
48,9%
Souches colonisantes souches infectantes
45,5%
4,5% 4,5%
13,6%
31,8%
4,5%
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43 Résultats du sreening par microméthode :
Bétadine scrub®:
A l’état pur, l’ensemble des isolats testés a été sensible.
A la dilution 1|3, 24,44% (n=11) des isolats issus des prélèvements des patients et 11,11% (n=4) des isolats environnementaux ont été résistants, soit un total de 18,51% (n=15) des isolats résistants. (Tableau XII)
Septeal® :
A l’état pur, l’ensemble des isolats testés a été sensible. (Tableau XIII) Alcool éthylique 70° :
A l’état pur, l’ensemble des isolats testés a été sensible. (Tableau XIV) Surfanios® :
A la dilution 1|400 toutes les souches ont été sensibles. (Tableau XV) Produit X :
A la dilution 1|50, 97,77% (n=44) des isolats issus des prélèvements des patients et 94,44% (n=34) des isolats environnementaux ont été résistants, soit un total de 96,29% (n=78) des isolats résistants. (Tableau XVI)
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Tableau XII : Taux de résistance des souches d’A.baumannii vis-à-vis de Bétadine scrub®
Origine de la souche Total
(n=81) P Patients (n=45) Environnement (n=36) BTS pur 0% (0) 0% (0) 0% (0) - BTS 1|3 24,44% (11) 11,11% (4) 18,51% (15) 0,125 BTS 1|10 BTS 1|100 100% (45) 100% (45) 69,44% (25) 100% (36) 86,41% (70) 100% (81) < 0,01 - BTS 1|1000 100% (45) 100% (36) 100% (81) - BTS: Bétadine scrub®
La difference entre les taux de résistance des isolats issus des prélèvements des patients et des isolats environnementaux a été significative à la dilution 1|10 de
Bétadine scrub®.
Tableau XIII: Taux de résistance des souches d’A.baumannii vis-à-vis de Septeal®
Origine de la souche Total
(n=81) P Patients (n=45) Environnement (n=36) SPT pur 0% (0) 0% (0) 0% (0) - SPT 1|10 13,33% (6) 0% (0) 7,40% (6) 0,31 SPT 1|100 51,11% (23) 66,66 % (24) 58,02% (47) 0,159 SPT 1|1000 100% (45) 100% (36) 100% (81) - SPT: Septeal®
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Tableau XIV : Taux de résistance des souches d’A.baumannii vis-à-vis de l’Alcool 70°
Origine de la souche Total
(n=81) P Patients (n=45) Environnement (n=36) AL pur 0% (0) 0% (0) 0% (0) - AL 1|2 37,77% (17) 11,11% (4) 25,92% (21) 0,007 AL 1|10 93,33% (42) 80,55% (29) 87,65% (71) 0,100 AL 1|100 100% (45) 100% (36) 100% (81) - AL 1|1000 100% (45) 100% (36) 100% (81) -
AL: alcool éthylique 70°
La difference entre les taux de résistance des isolats issus des prélèvements des patients et des isolats environnementaux a été significative à la dilution 1|2 de
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Tableau XV : Taux de résistance des souches d’A.baumannii vis-à-vis de Surfanios®
Origine de la souche Total
(n=81) P Patients (n=45) Environnement (n=36) SF pur 0% (0) 0% (0) 0% (0) - SF 1|10 0% (0) 0% (0) 0% (0) - SF 1|100 0% (0) 0% (0) 0% (0) - SF 1|400 0% (0) 0% (0) 0% (0) - SF 1|1000 24,44% (11) 8,33% (3) 17,28% (14) 0,057 SF 10-4 86,66% (39) 69,44% (25) 79,01% (64) 0,059 SF 10-5 100% (45) 100% (36) 100% (81) - SF 10-6 100% (45) 100% (36) 100% (81) -
Tableau XVI : Taux de résistance des souches d’A.baumannii vis-à-vis de Produit X
Origine de la souche Total
(n=81) P Patients (n=45) Environnement (n=36) PRODUIT X pur 24,44% (11) 0% (0) 13,58% (11) 0,001 PRODUIT X 1|10 66,66% (30) 19,44% (7) 45,67% (37) < 0,01 PRODUIT X 1|50 97,77% (44) 94,44% (34) 96,29% (78) 0,582 PRODUIT X 1|100 100% (45) 100% (36) 100% (81) - PRODUIT X 1|1000 100% (45) 100% (36) 100% (81) -
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La difference entre les taux de résistance des isolats issus des prélèvements des patients et des isolats environnementaux a été significative à l’état pur et à la dilution 1|10 du Produit X.
Le tableau XVII présente un récapitulatif des souches résistantes aux dilutions d’utilisation préconisées de chaque produit.
Tableau XVII : Récapitulatif des taux de résistance des souches d’A.baumannii aux dilutions
d’utilisation préconisées
BTS Pur BTS 1|3 SPT Pur AL Pur SF 1|400 PDT X
1|50