Discussion : Implication de la voie des TLRs

L’objectif de cette deuxième partie est de processus inflammatoire initié

des TLRs (Shih & Yang, 2010; Goldberg, et al., 2007)

privilégier. Ainsi, le deuxième objectif de cette partie est de démontrer l conjointement HO-1 et les TLRs pour

Nous avons démontré que l’activation de HO

Nf-κb2 et que l’effet inverse est observé

tandis qu’aucun effet n’est observé avec

29C). D’autres études ont déjà montré que l’activation de

(Tsoyi, et al., 2008), CLI-095

Figure 5-29. Schéma des effets induits par les différentes molécules utilisées

(A) CoPP (Activateur de l’Hème oxygénase

Comme pour la plupart des familles de facteurs de transcription, famille NF-κB a de nombreux membres.

NF-κB2 (p52; p100), c-REL et RELB terminale structurellement conservée dimérisation, de localisation nu

Plus particulièrement les protéines NF précurseurs, NF-κB1 p105 et

protéasome afin de produire les facteurs de transcription kappaB2. En outre, p105 et p100 sont

NF-kB), qui retiennent les sous

: Implication de la voie des TLRs

L’objectif de cette deuxième partie est de confirmer l’implication de la voie des TLRs dans le processus inflammatoire initié in vitro par les îlots. Par son interaction reconnue avec la

(Shih & Yang, 2010; Goldberg, et al., 2007), HO-1 est également privilégier. Ainsi, le deuxième objectif de cette partie est de démontrer l

et les TLRs pour prévenir ou limiter la réponse inflammatoire activation de HO-1 par CoPP (Fig. 4-29A) induit inverse est observé avec l’inhibiteur de TLR-4, CLI

fet n’est observé avec l’inhibiteur de TLR-4 et TLR-2, OxPAPc ( D’autres études ont déjà montré que l’activation de NF-κB peut être diminuée par HO

095 (Seki, et al., 2010) et OxPAPc (Eligini, et al., 2002)

. Schéma des effets induits par les différentes molécules utilisées

(Activateur de l’Hème oxygénase-1) ; (B) CLI-095 (Inhibiteur de TLR-4) ; (C) OxPAPc TLR-2 et -4)

Comme pour la plupart des familles de facteurs de transcription, chez les mammifères la a de nombreux membres. Ils comprennent RELA (p65), NF

REL et RELB (Li & al, 2002). Ces protéines ont une

conservée de 300 acides aminés, qui contient les domaines de nucléaire et de liaison à l'ADN.

lus particulièrement les protéines NF-κB1 et NF-κB2 sont produites sous forme de

B1 p105 et NF-κB2 p100 respectivement. Celles-ci sont clivées par le protéasome afin de produire les facteurs de transcription matures NF-κB1 p50 et

p105 et p100 sont connus pour fonctionner comme Iκ

sous-unités associées de NF-κB dans le cytoplasme des cellules 152 l’implication de la voie des TLRs dans le ar son interaction reconnue avec la voie également une cible à privilégier. Ainsi, le deuxième objectif de cette partie est de démontrer l’intérêt de cibler

la réponse inflammatoire in vitro. induit l’activation de 4, CLI-095, (Fig. 4-29B) 2, OxPAPc (Fig. 4-peut être diminuée par HO-1 (Eligini, et al., 2002).

. Schéma des effets induits par les différentes molécules utilisées

; (C) OxPAPc (Inhibiteur de

chez les mammifères la Ils comprennent RELA (p65), NF-κB1 (p50; p105), . Ces protéines ont une région

amino-tient les domaines de

sont produites sous forme de protéines ci sont clivées par le B1 p50 et NF-κB2 P52 connus pour fonctionner comme IκBs (inhibiteurs de B dans le cytoplasme des cellules

153 non stimulées (Beinke & Ley, 2004). Ainsi, nos résultats suggèrent que l’activation de

κB2 observée en présence de CoPP pourrait exercer un effet inhibiteur sur l’activation de NF-κB via p100. Toutefois, OxPAPc ne semble pas interagir avec NF-NF-κB2.

NF-κB est un médiateur important de la voie des TLRs. Quelque soit l’adaptateur recruté, la cascade de signalisation conduit à l'activation de NF-κB. Bien que NF-κB soit un facteur de transcription essentiel pour l'activation de nombreux gènes, il n'agit pas de façon isolé mais en tant que composant d’une série complexe d'événements moléculaires nécessaires pour la transcription de gènes. NF-κB interagit avec un certain nombre de facteurs de transcription, y compris C/ EBP, l'AP-1, Sp-1, LSR, STAT6 et SEF (Carmody & Chen, 2007). Ainsi, NF-kB est clairement l'un des régulateurs les plus importants de l'activation des gènes pro-inflammatoires. Par conséquent, la synthèse de cytokines, telles que TNF-α, IL-1β, IL-6, et IL-8, est médiée par NF-κB comme l’expression de COX-2 (Tak & Firestein, 2001).

D’ailleurs, nous avons également observé une inhibition de la sécrétion d’IL-6 et de CCL2, une inhibition de l’activation du gène Cox-2 après induction d’HO-1 avec CoPP ou le traitement des îlots avec les inhibiteurs des TLRs. Les inhibitions s’accompagnent d’une diminution de la production de ROS et d’une augmentation de la capacité antioxydante totale (Fig. 4-29). Nos résultats sont en adéquation avec la littérature qui confirme les effets anti-inflammatoires de CoPP (Roach, et al., 2009; Shih & Yang, 2010), de CLI-095 (Yamada, et al., 2008; Küper, et al., 2012; Aye, et al., 2012), et de OxPAPc (Aye, et al., 2012; Eligini, et al., 2002). Toutefois, l’action inhibitrice de CLI-095 sur Ho-1 n’est pas relatée dans la littérature, mais cette donnée suggère une véritable régulation entre HO-1 et TLR-4.

D’après nos résultats, les effets induits par CoPP, CLI-095 et OxPAPc se caractérisent par une activité inflammatoire et oxydante. Il faut tout de même noter que les effets anti-inflammatoires semblent plus importants avec CoPP par rapport à ceux induits des inhibiteurs des TLRs. En revanche, les effets anti-oxydants sont équivalents quelle que soit la molécule utilisée. Ainsi, ces données suggèrent une interaction évidente entre l’inflammation et le stress oxydant dans ce processus.

Par ailleurs, la régulation de l’activité NF-κB n’est pas exclusive à la voie des TLRs. Non seulement les ROS sont capables d’activer NF-κB, mais il existe un lien de réciprocité entre les ROS et NF-κB. Ce dernier exerce un véritable rôle de régulateur négatif de l’activité oxydante induite en réponse au stress et aux cytokines (Bubici, et al., 2006). Ainsi, l’activation de Nf-κb2 et la production diminuée des ROS pourraient être le reflet de ce processus anti-inflammatoire et anti-oxydant. En revanche, la diminution de l’activation de

154 l’activité anti-inflammatoire des molécules utilisées. En outre, nos résultats justifient le ciblage de cette voie de signalisation pour prévenir le développement du processus inflammatoire dans l’îlot in vitro.

D’autre part, nous avons démontré que l’activation de Ho-1 et l’inhibition de la voie des TLRs de façon concomitante induit un effet anti-inflammatoire et anti-oxydant encore plus efficace que celui induit par Ho-1 seul. Toutefois, en fonction de la voie des TLRs ciblée les résultats peuvent légèrement varier. En effet, les effets anti-inflammatoires et anti-oxydants de CoPP et CLI-095 semblent être induits par l’activation de l’inhibiteur de NF-κb, Nf-κb2 (Fig.

4-30A). Les effets engendrés par CoPP et OxPAPc semblent, quant à eux, se concentrer sur

Cox-2 (Fig. 4-30B).

Figure 5-30. Schéma des effets induits par les différentes molécules utilisées

(A) CoPP + CLI-095; (B) CoPP + OxPAPc

En outre, l’usage de ces molécules de façon simultanée montre qu’il existe un véritable réseau d’interaction entre les différents médiateurs ciblés. D’après nos résultats, le ciblage exclusif de la voie des TLRs ou de HO-1 est moins efficace qu’un ciblage simultané. Ces résultats suggèrent donc que les deux cibles étudiées contribuent de manière indépendante mais synergique à la réponse inflammatoire observée. Cette observation est justifiée par l’inhibition accrue de COX-2, IL-6 et MCP-1 dans ce contexte.

NF-κκκκB2

COX-2

TLR-2

HO-1

CCL2

IL-6

ROS

CAT

TLR-4

CLI-095

CoPP

A

NF-κκκκB2

COX-2

TLR-2

HO-1

CCL2

IL-6

ROS

CAT

TLR-4

OxPAPc

CoPP

B

155