Décrire et identifier

Há quase duas décadas, vários estudos têm descrito o papel da ANXA1 na função leucocitária, na fisiofarmacologia dos mediadores inflamatórios e no processo de ativação e recrutamento dos leucócitos (D'acquisto, Paschalidis

, 2008). Inicialmente, é essencial pontuar que uma das principais fontes de síntese de ANXA1 endógena é os neutrófilos (Perretti, Christian , 2000; Movitz e Dahlgren, 2001; Oliani e Perretti, 2001), monócitos e macrófagos (Solito, De Caterina , 1993; Comera e Russo-Marie, 1995), visto que mesmo em condições normais estes tipos celulares possuem altos níveis da proteína em seu citoplasma. Os neutrófilos humanos possuem uma grande proporção de ANXA1 citoplasmática estocada junto aos seus grânulos de gelatinase (Perretti, Christian

, 2000; Lominadze, Powell , 2005), podendo ser rapidamente secretada se as células forem expostas baixas concentrações de quimioatractantes ou mesmo se houver adesão às células endoteliais ativadas (Vong, D'acquisto , 2007). Vários trabalhos envolvendo lavado peritoneal ou linhagens celulares

29 também demonstraram que os monócitos/macrófagos contem uma abundante quantidade de ANXA1 e que esta pode ser secretada no meio (Blackwell, Carnuccio , 1980; Peers, Smillie , 1993). A ativação destes fagócitos estimula a mobilização da ANXA1 do citoplasma para a membrana de modo célula-específico, sendo que a realocação da proteína normalmente ocorre na superfície externa da membrana celular. Em adição, baixas concentrações extracelulares de cálcio induzem uma alteração conformação da ANXA1, tal qual a região N-terminal é então exposta, levando à forma ativa da proteína (Gerke, Creutz , 2005).

A ANXA1 recombinante humana (hrANXA1) e os peptídeos derivados da região N-terminal da proteína, mantém as propriedades de inibição e de migração dos leucócitos em vários modelos de inflamação aguda (Perretti, Ahluwalia , 1993; La, Tailor , 2001; Brancaleone, Dalli , 2011) e crônica (Gibbs, Carollo , 2002; Yang, Y., Morand, E. , 2004; D'acquisto, Merghani , 2007). A atividade principal é exercida sobre a regulação da adesão dos neutrófilos (Perretti e Flower, 2004) e dos monócitos (Solito, De Coupade , 2001) às células endoteliais ativadas, por meio da ligação da ANXA1 com os receptores FPR e da regulação das moléculas de adesão L-selectina e integrina (La, M, D'amico, M , 2001). No entanto, a ação da proteína termina dentro de poucos minutos, após a sua clivagem realizada por enzimas (PR3, elastase) ligadas à membrana (Rescher, Goebeler , 2006; Vong, D'acquisto , 2007). Os modelos em ratos e camundongos demonstraram que a proteína ANXA1 e seus miméticos reduzem o dano induzido por leucócitos na lesão por isquemia/reperfusão no coração (Gavins, Leoni , 2006), no cérebro (Gavins, F., Dalli, J. , 2007), intestino (La, Tailor , 2001). Recentemente, nosso grupo demonstrou que em um modelo de I/R nos rins, o tratamento prévio com o peptídeo Ac2-26 protegeu fortemente contra a migração de neutrófilos, impedindo a alteração funcional e mantendo a integridade tecidual das estruturas renais (Facio, Sena , 2011) (vide Capítulo VI).

As atividades antiinflamatórias da ANXA1 ou dos seus miméticos é consistente com o fenótipo de neutrófilos $% &-/-, os quais mostram transmigração aumentada na microcirculação de camundongos, possivelmente

30 devido ao aumento da expressão de L-selectina e CD11b e conseqüente quimiotaxia, se comparados aos neutrófilos não-modificados geneticamente (Chatterjee, Yona , 2005). Outras investigações com animais $% &-/- têm revelado o desenvolvimento de uma lesão articular mais severa, quando comparado aos animais selvagens, em um modelo de artrite monoarticular induzida por antígeno, como resultado do aumento exacerbado da expressão de IL-1 e IL-6 nesses tecidos (Yang, Y., Morand, E. , 2004). Em um modelo de endotoxemia, ainda em animais deficientes versus selvagens, foi observado que há um aumento da sinalização intracelular e a aceleração da síntese de TNF-α, IL-1 e IL-6, contribuindo para a letalidade induzida pela administração de LPS (Damazo, Yona , 2005).

A proteína ANXA1 não está só envolvida com a inibição do recrutamento de fagócitos, mas também participa da regulação de um dos mecanismos mais utilizados na resposta inicial a uma infecção, a liberação de espécies reativas de oxigênio (EROs). O pré-tratamento de neutrófilos e monócitos/macrófagos com peptídeos sintetizados a partir de diferentes regiões do N-terminal da proteína, tais como Ac2-26 e Ac9-25, parecem regular a produção anions superóxido e, de acordo com o receptor no qual eles se ligam (família dos FPRs), essas moléculas ativam ou inibem a liberação de EROs por um fagócito ativado (Karlsson, Fu

, 2005; Pickles, Brooks , 2010).

Outros papéis relacionados à resolução da ação inflamatória causada pelos fagócitos têm sido atribuídos à ANXA1: a apoptose e a fagocitose (Lim e Pervaiz, 2007). O dos leucócitos apoptóticos é um processo antiinflamatório, visto que previne a exposição dos tecidos lesados ao conteúdo potencialmente imunogênico das células necróticas. Nesse processo, a principal etapa é a fagocitose das células apoptóticas, evento que estimula a liberação de mediadores antiinflamatórios e inibe a secreção de citocinas pró-inflamatórias pelos fagócitos. Uma sequência de estudos demonstrou que a adição de sobrenadantes de macrófagos tratados com GCs, ou de neutrófilos apoptóticos ou do peptídeo Ac2-26, modula a fagocitose de PMN apoptóticos por macrófagos da medula, via FPR2/ALX (Dalli, Jones , 2012). Este mecanismo leva ao rearranjo da actina, liberação de TGF-β1 e ativação de SOCS3, seguida de

31 inibição da síntese de IL-6, MIP-2 e IL-8 (Scannell, Flanagan , 2007; Pupjalis, Goetsch , 2011; Iwasa, Takahashi , 2012). A ANXA1 ainda parece atuar na apoptose em um processo no qual a proteína é recrutada do citoplasma e exportada para a membrana externa, por um modo caspase-dependente, onde ela se co-localiza com a fosfatidilserina, auxiliando na sinalização do alvo apoptótico e contribuindo também para o local (Arur, Uche , 2003). O resumo das principais mecanismos da ANXA1 sobre os fagócitos está ilustrado na Figura 5.

> N; , 2! , . 4 . , 8 , > / , ,.!, 2 ;

Modificado de Perretti e D'acquisto (2009).