Croissance des cellules MDA-MB-231 Scr et sh27A in vitro

sh27a2 Jours A. U .

MDA-MB-231 Scr

MDA-MB-231 sh27A1

Croissance des cellules MDA-MB-231

Scr et sh27A in vitro

Scr sh27A1 Jours A. U .

! """! 4D38G"! )&! 4D38G3! 5)*()&&)/&! E)! *6E',*)! E)! <Fp! +%! 7'%/&,&6! ECG>\(! ->I1=>b! (%,4! )++)4! )/&*%i/)/&! %'44,! '/)! E,(,/'&,./! E)! JFp! )&! RFp! *)45)-&,0)()/&! E)! +%! 7'%/&,&6! ECG>\(! ->I1=I! N\E]RCH& 8/S& "& HD& #91! $)4! 4D>\G! '&,+,464! %;,/! EC,/D,=)*! +C)H5*)44,./! E)! >G_38_! E,(,/')/&! +C)H5*)44,./! E)! -)! @I/)! E)! <Fpb! (%,4! +)! 4D38_"! E,(,/')! %'44,! E)! <Fp! +C)H5*)44,./! E)! >G_38G1! _,)/! 7'C,+4! /)! 4.,)/&! 5%4! 5%*;%,&4b! /.'4! %0./4! '&,+,46! +)4! 4D>\G!4D38G"!)&!4D38_3!5.'*!+%!4',&)!E)!+C6&'E)1!!

! $)4! )H.4.()4! E)4! -)++'+)4! WMGTW_T3J"! )H5*,(%/&! +)4! 4D>\G! -./&*S+)! NX-*9b! 4D38G"! .'! 4D38_3! ./&! 6&6! 5'*,;,64! 5%*! '+&*%-)/&*,;'@%&,./41! $%! 7'%/&,&6! &.&%+)! E)! 5*.&6,/)4! )H.4.(%+)4! 46-*6&6)4! /)! (./&*)! 5%4! E)! E,(,/'&,./! E)! +%! 46-*6&,./! E)4! )H.4.()4! 5%*! +)4! -)++'+)4! /C)H5*,(%/&! 5%4! >G_38G! .'! >G_38_! N\E]RCH& 8/S& 291! G'! -./&*%,*)b!4C,+!L!%!'/)!E,;;6*)/-)b!-)++)T-,!4)*%,&!5+'&S&!E%/4!+)!4)/4!EC'/)!%'@()/&%&,./!E)! +%! 46-*6&,./! 5%*! *%55.*&! %'H! -)++'+)4! -./&*S+)41! $.*47')! /.'4! %0./4! *)-D)*-D6! +%! 5*64)/-)! E)4! (%*7')'*4! 4'*! +)4! )H.4.()4! 46-*6&64! 5%*! "R1"F2_{! -)++'+)4! )H5*,(%/&! +)4!}

4D>\G!X-*b!4D38G"!)&!4D38_3b!/.'4!/C%0./4!5'!E6&)-&)*!7')!G+,H!)&!U4@"F"!N\E]RCH& 8/S& '91!Q4-8F!)&!YM2J!/C./&!5%4!6&6!E6&)-&64b!)&!/.'4!/C%0./4!5%4!EC%/&,-.*54!*)-.//%,44%/&! +%!5*.&6,/)!YMA!D'(%,/)1!$)4!E)'H!(%*7')'*4!G+,H!)&!U4@"F"!4./&!%'@()/&64!E%/4!+)4! -'+.&4!EC)H.4.()4!5*.E',&4!5%*!+)4!-)++'+)4!WMGTW_T3J"!4D38G"!)&!4D38_3!5%*!*%55.*&! %'H! WMGTW_T3J"! X-*1! G,/4,b! 4,! >G_38G! )&! >G_38_! 4./&! ,(5+,7'6)4! E%/4! +%! 0.,)! E)! 46-*6&,./! E)4! )H.4.()4! 5%*! -)4! -)++'+)4b! )++)4! +)! 4./&! 4)+./! '/! (6-%/,4()! E,;;6*)/&! E)! -)+',!)H,4&%/&!E%/4!+)4!(.EI+)4!('*,/4!7')!/.'4!%0./4!6&'E,64!)&!E%/4!+)!(.EI+)!D'(%,/! Q)$%1!X,!/.'4!-./;,*(./4!5%*!+%!4',&)!7')!+C,/D,=,&,./!E)!+C)H5*)44,./!E)!>G_38G!.'!E)! >G_38_!,/E',&!'/)!%'@()/&%&,./!E)!+%!46-*6&,./!E)4!)H.4.()4b!%+.*4b!E%/4!-)&&)!+,@/6)! -)++'+%,*)b! +)4! 5*.&6,/)4! >G_38! 5.'**%,)/&! %0.,*! -.(()! *S+)! EC,/D,=)*! +%! ;'4,./! E)4! W^_4!%0)-!+%!()(=*%/)!5+%4(,7')1!!

! G5*I4! %0.,*! 06*,;,6! 7')! +)4! -)++'+)4! WMGTW_T3J"! )H5*,(%/&! .'! /./! >G_38G! 5*.+,;6*%,)/&!?!+%!(h()!0,&)44)!!"#$!36%!N\E]RCH&8/IV&"9b!/.'4!%0./4!6&'E,6!+%!-*.,44%/-)! E)! -)4! &'()'*4! E%/4! E)4! 4.'*,4! ,(('/.E6;,-,)/&)4b! +)4! 4.'*,4! _%+=#-! \]M! XYBM1! :.'*! -)+%b!/.'4!%0./4!,/a)-&6!"1"F2_{!-)++'+)4!)/!4.'4T-'&%/6!)&!%0./4!4',0,!+%!-*.,44%/-)!4'*!'/!}

)/0,*./!JF!a.'*4!N\E]RCH& 8/IV& #9!Z!+)4!&'()'*4!/C)H5*,(%/&!5%4!>G_38G!5.'44)/&!5+'4! +)/&)()/&! 7')! +)4! &'()'*4! -./&*S+)41! $%! E,;;6*)/-)! E)! &%,++)! )/&*)! +)4! E)'H! &L5)4! E)! &'()'*4!)4&!4,@/,;,-%&,0)!%'44,!=,)/!%'!(,+,)'!E)!+%!-*.,44%/-)!%'!a.'*!"Rb!7'C%'!a.'*!JF! 5)'!%0%/&!+)!4%-*,;,-)!E)4!4.'*,4!N\E]RCH&8/IV&291!>G_38G!4)(=+)!E./-!a.')*!'/!*S+)!5*.T &'(.*%+!E%/4!+)!(.EI+)!WMGTW_T3J"!&.'&!-.(()!/.'4!+C%0./4!.=4)*06!E%/4!+)!(.EI+)!

Figure 2.11 :Analyse des populations myéloïdes infiltrant les tumeurs et présentes dans les rates des souris portant une tumeur MDA-MB-231 Scr ou sh27A.

A. Comparaison de l’expression des marqueurs Ly6G et Ly6C par les cellules CD11b+ provenant de la rate d’une souris Balb/c sauvage (gauche) ou d’une souris Balb/c NOD SCID (droite). B. Exemples représentatifs des marquages CD11b, CD11c, Ly6G et Ly6C sur les cellules vivantes présentes dans les tumeurs MDA-MB-231 Scr et sh27A. C. Quantification des populations CD11b+ et CD11b+/Ly6G+ infiltrant les tumeurs à jour 33 (pourcentage parmi les cellules vivantes). D. Quantification des populations CD11b+ et CD11b+/Ly6G+ dans la rate de souris portant une tumeur (Scr et sh27A) ou de souris sans tumeur à jour 33 (pourcentage parmi les cellules vivantes). n=2 expériences indépendantes, avec 8 souris portant les tumeurs MDA-MB-231 Scr (Scr), 8 souris portant les tumeurs MDA-MB-231 sh27A (sh27A) et deux souris contrôles sans tumeur (ctle). La barre horizontale représente la médiane. Analyse statistique test t de student non paramétrique (Mann Whitney) pour les tumeurs et One-way ANOVA non paramétrique (Kruskall-Wallis), post test de Dunn pour les rates. * p<0,05.

B.

MDA-MB-231 Scr MDA-MB-231 sh27A

C.

D.

0 10 20 30 40 50 60 0 10 20 30 40 * 0 5 10 15 20 * 0 5 10 15 20 * TUMEURS CD11b+ CD11b+ Ly6G + CD11b+ CD11b+ Ly6G + % d e s ce llu le s vi va n te s % d e s ce llu le s vi va n te s

Scr sh27A Scr sh27A Scr sh27A ctle

RATES

*

_*

Scr sh27A ctle

A.

Souris Balb/c sauvage Souris NOD SCID

0 100 1000 10000 1x105 CD11b 0 100 1000 10000 1x105 C D 1 1 c 18.2 5.59 0 100 1000 10000 1x105 Ly6C 0 100 1000 10000 1x105 L y 6 G 65.9 5.21 15.9 13 C D 1 1 c L y6 G 0 100 1000 10000 1x105 CD11b 0 100 1000 10000 1x105 C D 1 1 c 14.3 1.48 0 100 1000 10000 1x105 Ly6C 0 100 1000 10000 1x105 L y 6 G 3.46 77.2 14.9 4.45 C D 1 1 c L y6 G CD11b Ly6C CD11b Ly6C 0 100 1000 10000 1x105 CD11b 0 100 1000 10000 1x105 C D 1 1 c 12.1 0 100 1000 10000 1x105 Ly6C 0 100 1000 10000 1x105 L y 6 G 95.3 0.407 2.65 1.68 0 100 1000 10000 1x105 CD11b 0 100 1000 10000 1x105 C D 1 1 c 7.49 0 100 1000 10000 1x105 Ly6C 0 100 1000 10000 1x105 L y 6 G 83.7 0.863 8.68 6.74 C D 1 1 c C D 1 1 c L y6 G L y6 G CD11b Ly6C CD11b Ly6C

! ""3! KU"1!O/!*)0%/-D)b!+)4!(6-%/,4()4!,(5+,7'64!4)*./&!&*I4!-)*&%,/)()/&!E,;;6*)/&4!4,!/.'4! -./;,*(./4! 7')! +C,/D,=,&,./! E)! >G_38G! /C,/E',&! 5%4! E)! E,(,/'&,./! E)! +%! 46-*6&,./! E)4! )H.4.()4!E%/4!+)!(.EI+)!WMG1!

! $)4!5.5'+%&,./4!,(('/,&%,*)4!(L6+.VE)4!,/;,+&*%/&!+)4!&'()'*4!WMGTW_T3J"!./&! 6&6!%/%+L46)4!5%*![GYX!N+)4!5.5'+%&,./4!+L(5D.VE)4!4./&!%=4)/&)4!E)4!4.'*,4!\]M!XYBM! E%/4!+)47')++)4!5.'44)/&!+)4!&'()'*4!)&!/C./&!E./-!5%4!6&6!*)-D)*-D6)49!N\E]RCH& 8/II91! $)4! 5.5'+%&,./4! (L6+.VE)4! 5*64)/&)4! E%/4! +)4! 4.'*,4! \]M! XBYM! /)! 4./&! 5%4! +)4! (h()4! 7')! E%/4! +)4! 4.'*,4! 4%'0%@)4!Z! +)! (%*7'%@)! )/! [GYX! /)! 5)*()&! 5%4! E)! ()&&*)! )/! 60,E)/-)! '/)! 5.5'+%&,./! E)! /)'&*.5D,+)4! )H5*,(%/&! ?! +%! ;.,4! $L2Y! )&! $L2c! 5%*(,! +)4! -)++'+)4! )H5*,(%/&! +)! (%*7')'*! YM""=! -.(()! -C)4&! +)! -%4! E%/4! +)4! 4.'*,4! 4%'0%@)4! N)H)(5+)4! E)! (%*7'%@)4! 4'*! +)4! *%&)4!Z& \E]RCH& 8/II& "91! G! +C,/0)*4)b! '/)! 5.5'+%&,./! YM""=x#$L2cx#$L2YT! %=4)/&)! E%/4! +)4! 4.'*,4! 4%'0%@)4b! *)5*64)/&)! '/)! 5.5'+%&,./! 7'%/&,&%&,0)()/&! ,(5.*&%/&)! 5%*(,! +)4! -)++'+)4! (L6+.VE)4! E)4! 4.'*,4! \]M! XYBM1! \.'4! 5.'0./4! 4'55.4)*! 7')! -)&&)! 5.5'+%&,./! -.**)45./E! .'! &.'&! E'! (.,/4! -./&,)/&! +)4! /)'&*.5D,+)4b! (%,4! /.'4! /)! +C%0./4! 5%4! 06*,;,61! \.'4! %0./4! -.(5%*6! +)4! 5.5'+%&,./4! (L6+.VE)4! ,/;,+&*%/&! +)4! &'()'*4! WMGTW_T3J"! X-*! )&! WMGTW_T3J"! 4D38Gb! )&! %0./4! 5'! (./&*)*! 7')! +%! 5*.5.*&,./! E)! -)++'+)4! YM""=x! ,/;,+&*%/&! +)4! &'()'*4! -./&*S+)4! )4&! 4,@/,;,-%&,0)()/&! 5+'4! 6+)06)! 7')! E%/4! +)4! &'()'*4! /C)H5*,(%/&! 5%4! >G_38G1! U.'&! -.(()! E%/4! +)! (.EI+)! KU"! (%,4! E)! ;%j./! (.,/4! ;+%@*%/&)b! +)4! &'()'*4! WMGTW_T3J"! E%/4! +)47')++)4! +C)H5*)44,./! E)! >G_38G! %! 6&6! ,/D,=6)! *)-*'&)/&! (.,/4! E)! -)++'+)4! YM""=x! )&! 5+'4! 5%*&,-'+,I*)()/&! (.,/4! E)! -)++)4! )H5*,(%/&! +)! (%*7')'*! $L2c! N\E]RCH& 8/II& 291!Y)&&)!(h()!5.5'+%&,./!)4&!%'44,!4,@/,;,-%&,0)()/&!%'@()/&6)!E%/4!+%!*%&)!E)4! 4.'*,4! 5.*&%/&! '/)! &'()'*! WMGTW_T3J"! -./&*S+)! (%,4! 5%4! E%/4! +%! *%&)! E)4! 4.'*,4! 5.*&%/&! '/)! &'()'*! /C)H5*,(%/&! 5%4! >G_38G! N\E]RCH& 8/II& '91! G,/4,b! +C,/D,=,&,./! E)! +C)H5*)44,./!E)!>G_38G!E%/4!+)4!-)++'+)4!&'(.*%+)4!4)(=+)!)(5h-D)*!+C%--'('+%&,./!E)! -)++'+)4! (L6+.VE)4! )H5*,(%/&! +)! (%*7')'*! $L2cb! -.(()! /.'4! +C%0./4! (,4! )/! 60,E)/-)! E%/4!+)!(.EI+)!KU"1!>G_38G!5.'**%,&!E./-!E%/4!-)!(.EI+)!D'(%,/!E)!-%/-)*!E'!4),/b! -.(()! E%/4! +)! (.EI+)! ('*,/! KU"b! a.')*! '/! *S+)! 5*.T&'(.*%+! )/! %@,44%/&! 4'*! +)! (,-*.)/0,*.//)()/&!&'(.*%+!)&!5+'4!5%*&,-'+,I*)()/&!)/!,/;+')/j%/&!+)!*)-*'&)()/&!E)! -)*&%,/)4!5.5'+%&,./4!(L6+.VE)41!!

! ""J! NJ&'EPFRPPEMQ&

! $)4! )H56*,)/-)4! 5*6+,(,/%,*)4! 5*64)/&6)4! E%/4! -)&&)! 5%*&,)! %0%,)/&! 5.'*! ='&! EC6&'E,)*!+)!*S+)!E)!>G_38G!)&!>G_38_!E%/4!+%!46-*6&,./!E)4!)H.4.()4!5%*!'/)!+,@/6)! &'(.*%+)! D'(%,/)! )&! E%/4! +%! -*.,44%/-)! E)! -)4! -)++'+)4! &'(.*%+)4! !"# $!$%1! X)'+)! +C,/D,=,&,./! E)! +C)H5*)44,./! E)! ->I1=>! %! 5'! h&*)! *6%+,46)! E)! ;%j./! *)+%&,0)()/&! 456-,;,7')! N%0)-! &.'&! E)! (h()! '/)! E,(,/'&,./! E)! JFp! E)! +C)H5*)44,./! E)! ->I1=I91! Y)5)/E%/&b!+C%/%+L4)!E)!+C)H5*)44,./!E)4!@I/)4!->I1=>!)&!->I1=I!5%*!7>UT:Y>!/C%!6&6! );;)-&'6)!7'C?!'/!4)'+!&)(54!%5*I4!,/&*.E'-&,./!E)4!4D>\G!)&!E%/4!'/)!4)'+)!)H56*,)/-)! 4)'+)()/&1!B+!;%'E*%!E./-!*660%+')*!+C);;)&!E)4!4D>\G!4'*!+C)H5*)44,./!E)!>G_38G!)&!E)! >G_38_!%;,/!E)!4C%44'*)*!E)!+)'*!456-,;,-,&61!

! $C,/D,=,&,./! E)! +C)H5*)44,./! E)! >G_38G! /C%! 5%4! E,(,/'6b! 0.,*)! %! %'@()/&6b! +%! 46-*6&,./! E)4! )H.4.()4! 5%*! +)4! -)++'+)4! WMGTW_T3J"1! Y)5)/E%/&b! E%/4! +)4! E)'H! )H56*,)/-)4! 7')! /.'4! %0./4! *6%+,46)4b! +%! 7'%/&,&6! EC)H.4.()4! 46-*6&6)! 5%*! +)4! -)++'+)4! WMGTW_T3J"! X-*! )4&! 6&.//%(()/&! =%44)b! )&! /.'4! 5*6;I*)*,./4! -./;,*()*! +)4! *64'+&%&4! .=&)/'4!%0%/&!E)!-./-+'*)!7'%/&!%'!*S+)!N.'!?!+C%=4)/-)!E)!*S+)9!a.'6!5%*!>G_38G!E%/4! +%!46-*6&,./!E)4!)H.4.()4!5%*!+)4!-)++'+)4!D'(%,/)4!WMGTW_T3J"1!!

! G;,/! E)! 5.'0.,*! 6&'E,)*! +%! -*.,44%/-)! E)! -)4! -)++'+)4! D'(%,/)4! !"#$!$%b! /.'4! +)4! %0./4! ,/a)-&6)4! E%/4! E)4! 4.'*,4! ,(('/.E6;,-,)/&)4b! +)4! 4.'*,4! _%+=#-! \]M! XYBM1! \.'4! %0./4! .=4)*06! '/! /)&! *%+)/&,44)()/&! E)! +%! -*.,44%/-)! E)4! &'()'*4! WMGTW_T3J"! /C)H5*,(%/&! 5%4! +%! 5*.&6,/)! >G_38G! 5%*! *%55.*&! %'H! &'()'*4! -./&*S+)41! >G_38G! 4)(=+)! E./-! a.')*! '/! *S+)! 5*.T&'(.*%+! E%/4! -)! (.EI+)1! MC%'&*)! 5%*&b! +)4! 5.5'+%&,./4! (L6+.VE)4! ,/;,+&*%/&! +)4! &'()'*4! 4)(=+)/&! h&*)! (.E'+6)4! E)! ;%j./! 4,(,+%,*)! ?! -)! 7')! /.'4! %0./4! .=4)*06! E%/4! +)4! &'()'*4! KU"! )/! ;./-&,./! E)! +C)H5*)44,./! E)! >G_38G1! O/! );;)&b!E)4!-)++'+)4!(L6+.VE)4!)H5*,(%/&!+)4!(%*7')'*4!YM""=!)&!$L2c!4C%--'('+)/&!E%/4! +)4! &'()'*4! WMGTW_T3J"! X-*! )&! E%/4! +%! *%&)! E)4! 4.'*,4! 5.*&%/&! -)4! &'()'*41! Y)&&)! %--'('+%&,./! 4)(=+)! h&*)! E65)/E%/&)! E)! +C)H5*)44,./! E)! >G_38G! 5%*! +)4! -)++'+)4! &'(.*%+)4! 5',47'C)++)! /C)4&! 5+'4! ,/E',&)! E%/4! +)4! 4.'*,4! 5.*&%/&! '/)! &'()'*! WMGTW_T 3J"! 4D38G1! Y)5)/E%/&b! E%/4! +)! (.EI+)! KU"b! /.'4! %0./4! (./&*6! 7')! +)4! )H.4.()4! 46-*6&64! E)! ;%j./! E65)/E%/&)! E)! >%=38%! )&! %44.-,64! ?! E)4! ;%-&)'*4! 4.+'=+)4! 4./&! /6-)44%,*)4! ?! +%! (.E'+%&,./! E)4! 5.5'+%&,./4! ,(('/,&%,*)4! (L6+.VE)4! )&! ?! +C%'@()/&%&,./! E)! +%! 5*.5.*&,./! E)! -)++'+)4! E)! &L5)! @*%/'+.-L&)4! /)'&*.5D,+)41! ]*! ,-,b! /.'4!/C%0./4!5'!()&&*)!)/!60,E)/-)!E)!*6E'-&,./!E)!+%!46-*6&,./!E)4!)H.4.()4!4',&)!?! +C,/D,=,&,./! E)! +C)H5*)44,./! E)! >G_38Gb! ;%0.*,4%/&! +CDL5.&DI4)! EC'/! (6-%/,4()!

! ""K! ,/E65)/E%/&!E)4!)H.4.()4!)&!E./-!E,;;6*)/&!E)!-)+',!E,4-'&6!E%/4!+)!(.EI+)!KU"1!\.'4! /C%0./4!5%4!)/-.*)!60%+'6!+)!*S+)!E)!>G_38G!E%/4!+%!46-*6&,./!E)!;%-&)'*4!4.+'=+)4!5%*! +)4!-)++'+)4!WMGTW_T3J"b!)&!,+!4)*%!,(5.*&%/&!E)!+)!;%,*)!5%*!+%!4',&)1!M)!5+'4b!Y1!>)--D,! &*%0%,++%/&!E%/4!+)!+%=.*%&.,*)!E)!W1!X)%=*%!&*%0%,++)!4'*!+C);;)&!E)!+C,/D,=,&,./!E)!>G_38G! 4'*! +)4! -%5%-,&64! (,@*%&.,*)4! -)4! -)++'+)4! WMGTW_T3J"1! $)4! *64'+&%&4! 7'C)++)! .=&,)/&! (./&*)/&! 7')! +)4! -)++'+)4! WMGTW_T3J"! E%/4! +)47')++)4! +C)H5*)44,./! E)! >G_38G! )4&! ,/D,=6)! 46-*I&)/&! (.,/4! E)! +%! (6&%++.5*.&6%4)! WUGTWW:b! E)! ;%j./! 4)(=+)T&T,+! ,/E65)/E%/&)! E)4! )H.4.()41! Y)4! -)++'+)4! 5*64)/&)/&! %+.*4! E)4! -%5%-,&64! *6E',&)4! E)! (,@*%&,./! )/! (%&*,@)+1! G,/4,b! /.'4! /)! 5.'0./4! 5%4! /6@+,@)*! E%/4! -)! (.EI+)b! -.(()! 5*6-6E)(()/&! E%/4! +)4! (.EI+)4! KU"! )&! UX#Gb! +)! *S+)! E)! >G_38G! E%/4! +)4! 0.,)4! E)! 46-*6&,./!-+%44,7')41!!

Y./-)*/%/&! +%! *65./4)! ,(('/,&%,*)! ,/E',&)! 5%*! +)4! &'()'*4! WMGTW_T3J"! )H5*,(%/&! .'! /./! >G_38Gb! E)'H! %45)-&4! 5*,/-,5%'H! -.(5+,7')/&! +C6+%=.*%&,./! EC'/! (6-%/,4()!)&!+%!-.(5%*%,4./!%0)-!-)!7')!/.'4!%0./4!(./&*6!E%/4!+)!(.EI+)!KU"!Z!N"9! \.'4! '&,+,4./4! ,-,! '/! (.EI+)! E)! 4.'*,4! ,(('/.E6;,-,)/&)4! N4.'*,4! \]M! XYBM9! %;,/! EC60,&)*! +)! *)a)&! E)4! -)++'+)4! WMGTW_T3J"! '/,7')()/&! 5.'*! +%! *%,4./! 7'C)++)4! 4./&! EC.*,@,/)! D'(%,/)1! G,/4,b! +%! -*.,44%/-)! E)4! -)++'+)4! WMGTW_T3J"! )4&! 0.+./&%,*)()/&! 6&'E,6)! E%/4! '/! -./&)H&)! .r! +%! *65./4)! ,(('/,&%,*)! %E%5&%&,0)! )4&! %=4)/&)1! \.'4! /)! 5.'0./4! E./-! 5%4! %/%+L4)*! +%! *65./4)! ,(('/,&%,*)! &'(.*%+)! E%/4! 4%! @+.=%+,&6! -.(()! /.'4!+C%0./4!;%,&!%0)-!+)4!&'()'*4!KU"1!B+!)4&!&.'&!E)!(h()!5.44,=+)!EC6&'E,)*!+%!*65./4)! ,(('/,&%,*)! ,//6)! )&! /.&%(()/&! +)4! 5.5'+%&,./4! (L6+.VE)4! 7',! /.'4! ./&! ,/&6*)4464! E%/4!+)!(.EI+)!KU"b!(%,4!E%/4!E)4!-./E,&,./4!7',!*)4&)/&!E,;;6*)/&)4!E)!-)++)4!)H,4&%/&! E%/4! '/)! 4.'*,4! 4%'0%@)! %0)-! '/! 4L4&I()! ,(('/,&%,*)! -.(5+)&1! $%! E,;;6*)/-)! E)! -*.,44%/-)!)/&*)!+)4!&'()'*4!KU"TX-*!)&!+)4!&'()'*4!KU"T4D38G!%0%,&!&.'&!E)!(h()!6&6! (,4)! )/! 60,E)/-)! %'44,! =,)/! E%/4! +)4! 4.'*,4! ,(('/.E6;,-,)/&)4! ! >Gc"-T#T_{! 7')! E%/4! +)4!}

4.'*,4! 4%'0%@)41! G,/4,b! 4,! +)! (h()! &L5)! E)! (6-%/,4()! E)! (.E'+%&,./! E'! 4L4&I()! ,(('/,&%,*)!)H,4&)!E%/4!+)!(.EI+)!WMGTW_T3J"b!,+!E)0*%,&!5.'0.,*!h&*)!(,4!)/!60,E)/-)! E%/4!+)4!4.'*,4!\]M!XYBM1!W%,4!+C,/-./06/,)/&!E)!-)4!4.'*,4!)4&!7')b!)/!5+'4!E)!+C%=4)/-)! E)4! 5.5'+%&,./4! +L(5D.VE)4! $Ub! $_! )&! \fb! +)4! 5.5'+%&,./4! (L6+.VE)4! /)! 4)(=+)/&! 5%4! h&*)! +)4! (h()4! 7')! -)++)4! .=4)*06)4! E%/4! +)4! 4.'*,4! 4%'0%@)41! O/! );;)&b! E%/4! +)4! 4.'*,4! \]M! XYBM! /.'4! /C%0./4! 5%4! 5'! ()&&*)! )/! 60,E)/-)! '/)! 5.5'+%&,./! E)! /)'&*.5D,+)4! )H5*,(%/&! +)4! E)'H! (%*7')'*4! $L2c! )&! $L2Y1! O/! *)0%/-D)b! /.'4! %0./4! 0'! '/)! 5.5'+%&,./! )H5*,(%/&! '/,7')()/&! +)! (%*7')'*! $L2cb! 7',! /C)H,4&)! 5%4! E%/4! +)4! 4.'*,4!

! ""R! 4%'0%@)4! )&! 7',! 5.'**%,&! 60)/&')++)()/&! -.**)45./E*)! %'H! /)'&*.5D,+)4b! (%,4! %0)-! '/! 5D6/.&L5)!E,;;6*)/&!)&!E./-!5)'&Th&*)!'/)!;./-&,.//%+,&6!E,;;6*)/&)1!N39!\.'4!&*%0%,++./4! %0)-! '/! (.EI+)! E)! &'()'*! D'(%,/)! E%/4! '/! DS&)! ('*,/1! $)4! ;%-&)'*4! 4.+'=+)4! )&! 064,-'+%,*)4!5*.E',&4!5%*!+)4!-)++'+)4!&'(.*%+)4!4./&!E./-!E)4!;%-&)'*4!D'(%,/4b!(%,4!+)4! (.+6-'+)4!7',!5.'**%,)/&!4)*0,*!E)!*6-)5&)'*4!?!-)4!;%-&)'*4!4./&!E)4!5*.&6,/)4!('*,/)41! M)!/.(=*)'4)4!0.,)4!E)!-.(('/,-%&,./!)&!E)!4,@/%+,4%&,./!)H,4&%/&!)/&*)!+%!&'()'*!)&! 4./! DS&)! 0,%! +%! 46-*6&,./! E)! ;%-&)'*4! 4.+'=+)4! )&! 064,-'+%,*)4! /)! 5.'**./&! -)*&%,/)()/&! 5%4!4)!()&&*)!)/!5+%-)!-.**)-&)()/&!)/&*)!'/)!&'()'*!D'(%,/)!)&!'/!DS&)!('*,/1!O&%/&! E.//6!7')!/.'4!%0./4!&.'&!E)!(h()!-./4&%&6!'/!);;)&!E)!+C,/D,=,&,./!E)!+C)H5*)44,./!E)! >G_38G!4'*!+%!-*.,44%/-)!&'(.*%+)b!,+!5.'**%,&!h&*)!,/&6*)44%/&!E)!-D)*-D)*!+)4!;%-&)'*4! 46-*6&64! N5*.=%=+)()/&! 4.'4! ;.*()! 4.+'=+)9! 5.&)/&,)++)()/&! ,(5+,7'64! ,-,1! \.'4! 5.'0./4!4'55.4)*!7')!-)4!;%-&)'*4!D'(%,/4!5.44IE)/&!+%!-%5%-,&6!EC%@,*!-D)P!+%!4.'*,4b! -)!7',!5.'**%,&!60)/&')++)()/&!*)4&*),/E*)!+C60)/&%,+!E)!5.44,=,+,&641!

! G,/4,b!4,!>G_38G!4)(=+)!a.')*!'/!*S+)!5*.T&'(.*%+!E%/4!+)!(.EI+)!WMGTW_T3J"b! )&! 4,! +)! (6-%/,4()! ,(('/,&%,*)! ,(5+,7'6! ,-,! *)44)(=+)! ?! -)+',! .=4)*06! E%/4! +)! (.EI+)! KU"b! E)4! )H56*,)/-)4! -.(5+6()/&%,*)4! E.,0)/&! h&*)! (,4)4! )/! 5+%-)! %;,/! E)! 06*,;,)*! -)4! 5*)(,)*4!*64'+&%&4!)&!E)!()&&*)!)/!60,E)/-)!+)4!(6-%/,4()4!-)++'+%,*)4!)&!(.+6-'+%,*)41! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! !

! ""2!

***/&'(21((-.&

"4&+%(1)%&'%(&+%(1$!"!(&

& $)4!&*%0%'H!);;)-&'64!%'!-.'*4!E)!(%!&DI4)!(C./&!5)*(,4!EC6&'E,)*!E,0)*4!%45)-&4! E)! +%! =,.+.@,)! -)++'+%,*)! )&! E)! +C,(('/.+.@,)! E)4! &'()'*4b! )/! +,)/! %0)-! +)4! )H.4.()41! M%/4! +)! ='&! EC6&'E,)*! +)! *S+)! E)4! )H.4.()4! E%/4! +%! -*.,44%/-)! &'(.*%+)b! /.'4! %0./4! ,/D,=6! +)'*! 46-*6&,./! )/! ,/&)*;6*%/&! %0)-! +C)H5*)44,./! E)! >%=38%! E%/4! E)4! -)++'+)4! &'(.*%+)4! ('*,/)41! Y)+%! /.'4! %! ;,/%+)()/&! ()/64! 0)*4! &*.,4! %/@+)4! EC6&'E)! N;E]RCH& I/809!Z!!

N"9! Y%*%-&6*,4%&,./! E)4! 5.5'+%&,./4! EC)H.4.()4! 46-*6&6)4! )/! 5*64)/-)! )&! )/! %=4)/-)!E)!>%=38%1!

N39! O0%+'%&,./! E)! +C,(5+,-%&,./! E)! >%=38%! E%/4! +%! 46-*6&,./! EC%'&*)4! &L5)4! E)! 064,-'+)4!)&!E%/4!+)4!0.,)4!E)!46-*6&,./!E)4!;%-&)'*4!4.+'=+)41!

NJ9! O&'E)! E'! -.(5.*&)()/&! E)4! &'()'*4! /C)H5*,(%/&! 5%4! >%=38%! !"# $!$%b! 5%*! *%55.*&! %'H! &'()'*4! -./&*S+)4b! E'! 5.,/&! E)! 0')! E)! +%! 0,&)44)! E)! -*.,44%/-)b! E)! +%! E,446(,/%&,./!(6&%4&%&,7')!)&!E)!+%!*65./4)!,(('/,&%,*)!&'(.*%+)1!

\.'4!%0./4!E%/4!'/!5*)(,)*!&)(54!-./4&%&6!7')!>%=38%!6&%,&!,(5+,7'6)!E%/4!+%! 46-*6&,./! EC'/)! 5.5'+%&,./! E)! 064,-'+)4! 5*64)/&)4! E%/4! +)! -'+.&! EC'+&*%-)/&*,;'@%&,./! ?! "FF1FFFH@b! (%,4! EC%'&*)4! 5.5'+%&,./4! E%/4! -)! -'+.&! 4./&! 46-*6&6)4! 5%*! '/)! 0.,)! ,/E65)/E%/&)! E)! >%=38%1! $)4! 5.5'+%&,./4! E)! 064,-'+)4! 5*64)/&)4! E%/4! +)! -'+.&! EC)H.4.()4! 4./&! D6&6*.@I/)4! )/! &%,++)b! )/! E)/4,&6! )&! )/! -.(5.4,&,./! 5*.&6,7')1! \.'4! 5*.5.4./4!7')!-)&&)!D6&6*.@6/6,&6!5.'**%,&!h&*)!)H5+,7'6)!5%*!E,;;6*)/&4!(6-%/,4()4!E)! =,.@)/I4)!)&!E)!46-*6&,./!E)4!064,-'+)41!!

M%/4! '/! 4)-./E! &)(54b! /.'4! %0./4! 6&'E,6! +%! 456-,;,-,&6! EC%-&,./! E)! +%! 5*.&6,/)! >%=38%! E%/4! +%! 0.,)! E)! 46-*6&,./! E)4! )H.4.()41! :.'*! -)+%b! /.'4! %0./4! 7'%/&,;,6! EC'/)! 5%*&!+%!46-*6&,./!E)4!5+'4!@*.44)4!064,-'+)4!.'!!l!(,-*.064,-'+)4!m!N-'+.&!E)!"F1FFFH@9!)&! EC%'&*)! 5%*&! +%! 46-*6&,./! E)! E,;;6*)/&4! ;%-&)'*4! 4.+'=+)41! \.'4! %0./4! -./;,*(6! 7')! >%=38%! /C6&%,&! 5%4! ,(5+,7'6)! E%/4! +%! *6@'+%&,./! E)! +%! 46-*6&,./! E)4! 064,-'+)4! 5+'4! @*.44)4! 7')! +)4! B$^4! E)4! W^_4! )&! E./-! *)/;.*j%/&! +CDL5.&DI4)! 7'C)++)4! 4)! ;.*()/&! 5%*! =.'*@).//)()/&! E)! +%! ()(=*%/)! 5+%4(,7')1! O/! *)0%/-D)b! +C,/D,=,&,./! E)! >%=38%! (.E'+)!+%!46-*6&,./!E)!-)*&%,/4!E)4!;%-&)'*4!4.+'=+)4!5*.E',&4!)&!+,=6*64!E%/4!+)4!(,+,)'H!

! ""8! E)! -'+&'*)! 5%*! +)4! -)++'+)41! $%! 5+'5%*&! E'! &)(54! -)&&)! 46-*6&,./!)4&! %'@()/&6)! 5%*! +C,/D,=,&,./!E)!>%=38%!-.(()!-C)4&!+)!-%4!5.'*!cTYX[!NY4;J9b!fY!NYH-+"9b!WB:J!!NY-+3F9! )&! WY:T"! NY-+391! B+! 4)(=+)! %,/4,! 7')! >%=38%! 4.,&! ,(5+,7'6)! E%/4! +%! 0.,)! E)! 46-*6&,./! *6@'+6)!E)!5+'4,)'*4!;%-&)'*4!4.+'=+)4!Z!/.'4!5*.5.4./4!7'C)++)!5%*&,-,5)*%,&!?!)(5h-D)*! +%!46-*6&,./!)/!%=4)/-)!E)!4&,('+'4b!+C,/D,=,&,./!E)!+C)H5*)44,./!E)!>%=38%!)/&*%i/)*%,&! %,/4,!'/)!%'@()/&%&,./!E)!46-*6&,./!7',!5.'**%,&!%+.*4!4)!5*.E',*)!,/E65)/E%(()/&!E)! +%!*6-)5&,./!EC'/!4,@/%+!5%*!+%!-)++'+)!N46-*6&,./!-./4&,&'&,0)91!

! O/;,/b!+)!='&!E)!-)!&*%0%,+!E)!&DI4)!6&%,&!EC6&'E,)*!+)!*S+)!E)4!)H.4.()4!46-*6&64!!"#

$!$%! E%/4! +%! -*.,44%/-)! &'(.*%+)! )&! E%/4! +%! *65./4)! ,(('/,&%,*)! &'(.*%+)1! M%/4! +)!

(.EI+)! E)! -%*-,/.()! (%((%,*)! 5)'! ,(('/.@I/)! )&! (6&%4&%&,7')! KU"b! /.'4! %0./4! (./&*6!7')!>%=38%!a.'%,&!'/!*S+)!5*.T&'(.*%+b!;%0.*,4%/&!+%!-*.,44%/-)!E)4!&'()'*4!)&! +%!E,446(,/%&,./!(6&%4&%&,7')1!O/!*)0%/-D)b!E%/4!+)!(.EI+)!UX#Gb!>%=38%!/)!5%*&,-,5)! 5%4! ?! +%! -*.,44%/-)! &'(.*%+)1! M)4! -)++'+)4! E)! &L5)! /)'&*.5D,+)4! .'! (L6+.VE)4! 4'55*)44,0)4!4./&!*)-*'&6)4!5%*!+)4!&'()'*4!KU"!E)!;%j./!E65)/E%/&)!E)!+C)H5*)44,./!E)! >%=38%1! Y)&&)! 5.5'+%&,./! ,(('/,&%,*)! /)! 4C%--'('+)! 5%4! E%/4! +)4! &'()'*4! UX#Gb! (./&*%/&! 7')! -)4! &'()'*4! 4)! -.(5.*&)/&! &*I4! E,;;6*)(()/&! 0,4T?T0,4! E'! 4L4&I()! ,(('/,&%,*)1! \.'4! %0./4! E./-! 4'55.46! 7')! +C);;)&! 5*.T&'(.*%+! E)! >%=38%! E%/4! +)! (.EI+)! KU"! 6&%,&! Eo! ?! 4./! *S+)! E%/4! +)! *)-*'&)()/&! E)! -)++'+)4! ,(('/,&%,*)4! 5.'0%/&! ,/E',*)! '/! )/0,*.//)()/&! ;%0.*%=+)! ?! +%! -*.,44%/-)! E)! +%! &'()'*1! Y)! 4)*%,&! 5%*! 4./! ,(5+,-%&,./!E%/4!E,0)*4)4!0.,)4!E)!46-*6&,./!7')!>%=38%!5)*()&&*%,&!+)!*)-*'&)()/&!E)! -)&&)! 5.5'+%&,./! ,(('/,&%,*)1! :%*! E)4! )H56*,)/-)4! *6%+,46)4! !"# $!36%! /.'4! %0./4! 5'! ()&&*)!)/!60,E)/-)!+C%-&,./!-./a.,/&)!E)4!;%-&)'*4!4.+'=+)4!+,=6*64!5%*!+)4!&'()'*4!(%,4! %'44,! E)4! )H.4.()4! 46-*6&64! E)! ;%j./! E65)/E%/&)! E)! >%=38%! E%/4! +C,/E'-&,./! E)! +%! 5.5'+%&,./! E)! -)++'+)4! /)'&*.5D,+)4#WMXY4b! E%/4! +)! (.EI+)! KU"1! $)4! E.//6)4! EC)H5*)44,./!E)!->I1=>!E%/4!E)4!=,.54,)4!E)!-%/-)*!E'!4),/!NE)!5%&,)/&)4!E)!+CQS5,&%+! Y'*,)!)&!?!5%*&,*!EC'/)!=%/7')!5'=+,7')!E)!E.//6)49!./&!(./&*6!'/)!4'*)H5*)44,./!E)! >G_38G!E%/4!+)4!&'()'*4!D'(%,/)4!5%*!*%55.*&!%'!&,44'!4%,/!)&!5+'4!5%*&,-'+,I*)()/&! E%/4! +)4! &'()'*4! E)! 4&%E)! %0%/-6! )&! E)! 5+'4! (%'0%,4! 5*./.4&,-! NO>T! QO>3T91! Y)-,! -.**I+)*%,&! %0)-! '/! 60)/&')+! *S+)! 5*.T&'(.*%+! E)! >G_38G! -D)P! +CQ.(()b! (%,4! 5%4! /6-)44%,*)()/&! E%/4! &.'4! +)4! &L5)4! E)! &'()'*4b! &.'&! -.(()! /.'4! +C%0./4! 0'! -D)P! +%! 4.'*,41!!

\.'4! %++./4! E%/4! -)&&)! E)*/,I*)! 5%*&,)! E'! (%/'4-*,&! E,4-'&)*! +)4! +,(,&)4! E)! /.4! 6&'E)4! )&! )/! -.(5%*)*! /.4! *64'+&%&4! %0)-! +)4! E.//6)4! E)! +%! +,&&6*%&'*)1! O/;,/b! /.'4!

! ""<! )H5.4)*./4! +)4! 5)*45)-&,0)4! E)! -)4! &*%0%'H! E%/4! +)! ='&! E)! *65./E*)! %'H! 7')4&,./4! 7',! *)4&)/&!)/-.*)!)/!4'45)/41! & &

**#4&$%(&5-51$"!-.(&'%&,%(21$%(&%!&(-1(45-51$"!*-.(&**

'>%6-(-)%(&

! I[&$HP&GELEDHP&NR&DCBYBEG&

! \.'4! %0./4! E%/4! -)&&)! 5%*&,)! E)! (./! 5*.a)&! E)! &DI4)! 6&'E,6! +)4! E,;;6*)/&)4! 5.5'+%&,./4! E)! 064,-'+)4! 46-*6&6)4! 5%*! +)4! -)++'+)4b! )&! -.T5'*,;,6)4! E%/4! +)! -'+.&! EC)H.4.()41! Y)! &*%0%,+! ()&! )/! %0%/&b! -.(()! EC%'&*)4! +C./&! ;%,&! %0%/&b! +C,(5.*&%/-)! EC6&%=+,*! '/)! E6;,/,&,./! 5*6-,4)! E)4! )H.4.()4! 7',! 4.,&! %E.5&6)! 5%*! +C)/4)(=+)! E)! +%! -.(('/%'&6!&*%0%,++%/&!4'*!-)4!064,-'+)41!G-&')++)()/&b!%'-'/)!E6;,/,&,./!/C)4&!%E(,4)! E)!;%j./!-./4)/4')++)1!X)+./!/.'4b!+)!5*,/-,5%+!-*,&I*)!5)*()&&%/&!E)!E6;,/,*!'/)!064,-'+)! -.(()!6&%/&!'/!l!)H.4.()!m!)4&!4./!.*,@,/)!)/E.4.(%+)!Z!+)4!)H.4.()4!4./&!+)!*64'+&%&! E)! +%! 46-*6&,./! E)4! 064,-'+)4! ,/&*%+'(,/%+)4! -./&)/')4! E%/4! +)4! W^_41! $)4! -*,&I*)4! -.(5+6()/&%,*)4! 4./&! +%! E)/4,&6b! +%! &%,++)! )&! +%! -.(5.4,&,./! )/! 5*.&6,/)4! )&! +,5,E)4! N)&! -)*&%,/)()/&!=,)/&S&!%-,E)4!/'-+6,7')49b!7',!4./&!+)!*);+)&!E)4!-%*%-&6*,4&,7')4!E)4!B$^41!

$)4!)H.4.()4!4./&!E)4!4&*'-&'*)4!*)+%&,0)()/&!E,;;,-,+)4!?!6&'E,)*!Z!-)4!064,-'+)4! E)!+C.*E*)!E'!/%/.(I&*)!/)!4./&!5%4!0,4,=+)4!)/!(,-*.4-.5,)!.5&,7')!?!;+'.*)4-)/-)b!/,! E,*)-&)()/&!5%*![GYX!N&.'&!E'!(.,/4!5%4!5%*!-)'H!7',!4./&!?!/.&*)!E,45.4,&,./!E%/4!+)! +%=.*%&.,*)9!Z!,+4!4./&!&*.5!5)&,&4!5%*!*%55.*&!?!+%!*64.+'&,./!)&!%'H!-%5%-,&64!E)!E6&)-&,./! E)! -)4! %55%*),+41! B+4! /)! 5)'0)/&! h&*)! .=4)*064! 7')! 5%*! (,-*.4-.5,)! 6+)-&*./,7')! ?! &*%/4(,44,./b!7',!)4&!'/)!&)-D/,7')!);;,-%-)b!(%,4!+.'*E)!?!()&&*)!)/!'0*)1!$)!/.(=*)! E)! 5*.&6,/)4! 5.'0%/&! h&*)! -.T(%*7'6)4! 4'*! '/! (h()! 6-D%/&,++./! )4&! +,(,&6! )&! -)*&%,/4! %/&,-.*54!/)!;./-&,.//)/&!EC%,++)'*4!5%4!%5*I4!+)4!&*%,&)()/&4!4'=,4!5%*!+)4!6-D%/&,++./41! \.'4!/C%0./4!%,/4,!5'!6&'E,)*!7')!+%!+.-%+,4%&,./!E)!YMA!E)!;%j./!;,%=+)b!%+.*4!7')!/.'4! %'*,./4!0.'+'!-.(5%*)*!-)!(%*7'%@)!%'!(.,/4!?!-)+',!E)!YM2J1!! \.'4!%0./4!0.'+'!6&'E,)*!+)4!E,;;6*)/&)4!5.5'+%&,./4!E)!064,-'+)4!5*64)/&)4!E%/4! +)4!-'+.&4!EC)H.4.()4b!(%,4!,+!/C)H,4&)!5%4!E)!&)-D/,7')4!5)*()&&%/&!E)!465%*)*!E)!;%j./! 4%&,4;%,4%/&)!+)4!064,-'+)4!E./&!+%!&%,++)!5)'&!0%*,)*!)/&*)!JF!)&!"RF!/(!E)!E,%(I&*)b!-)! 7',!)4&!+)!-%4!E)4!)H.4.()41!:.'*!-)&&)!*%,4./b!,+!)4&!E,;;,-,+)!EC6&'E,)*!-)4!5.5'+%&,./4!E)!

! ""A! 064,-'+)4!,/E,0,E')++)()/&!)&!E)!+)4!-.(5%*)*!)/&*)!)++)41!$%!;+.&&%,4./!E)4!064,-'+)4!4'*! '/! @*%E,)/&! E)! 4'-*.4)! 4)(=+)! h&*)! +C'/)! E)4! (),++)'*)4! ;%j./4! E)! 465%*)*! %'! (.,/4! 7')+7')4! '/)4! E)! -)4! 4.'4T5.5'+%&,./41! Y)5)/E%/&b! ,+! /CL! %! 5%4! )'! EC6&'E)! *6%+,46)! %;,/! EC60%+')*! +)4! E,;;6*)/&)4! 5.44,=,+,&64! E)! 465%*%&,./! E)4! 5.5'+%&,./4! E)! 064,-'+)4b! )&! E)! E6;,/,*!+)!(),++)'*!5*.&.-.+)!?!'&,+,4)*!E%/4!-)!='&!N&)(54!E)!-)/&*,;'@%&,./b!!5%+,)*4!E)! E)/4,&6! E)4! ;*%-&,./4! E'! @*%E,)/&91! B+! ;%'E*%! E./-! -%*%-&6*,4)*! +)4! 5.5'+%&,./4! E)! 064,-'+)4!.=&)/')4!)/!;./-&,./!E)4!E,0)*4!5*.&.-.+)4!E)!465%*%&,./!)&!60%+')*!-)!7')!+C./! -./4,EI*)!-.(()!E)4!4.'4T5.5'+%&,./4!E,4&,/-&)4!.'!/./!)&!4,!&.'&)4!4./&!E)4!)H.4.()4! .'!/./1!s/!,/-./06/,)/&!&)-D/,7')!E)4!@*%E,)/&4!E)!4'-*.4)!)4&!7'C,+!)4&!5+'4!E,;;,-,+)!E)! E6&)-&)*! -)*&%,/4! (%*7')'*4!Z! +)! (%&6*,)+! 6&%/&! *65%*&,! )/&*)! 5+'4,)'*4! ;*%-&,./4b! 4)'+)4! +)4! 5*.&6,/)4! &*I4! )/*,-D,)4! .'! -./&*)! +)47')++)4! ,+! )H,4&)! E)! =./4! %/&,-.*54! N=.//)4! %;;,/,&6!)&!456-,;,-,&69!4)*./&!E6&)-&%=+)4!4'*!+)4!;*%-&,./4!E)4!@*%E,)/&4!E)!4'-*.4)1!\.'4! /C%0./4!%,/4,!E%/4!/.&*)!6&'E)!5%4!5'!()&&*)!)/!60,E)/-)!+%!+.-%+,4%&,./!E)4!(%*7')'*4! U4@"F"b! G+,Hb! )&! Q4-8Fb! )&! 5%*;.,4! (h()! E)! W;@)<! E%/4! +)4! ;*%-&,./4! E)4! @*%E,)/&4! E)! 4'-*.4)1!

O/;,/b!'/)!+,(,&)!E)!/.&*)!6&'E)b!7',!)4&!0*%,)!5.'*!+C)/4)(=+)!E)4!*64'+&%&4!7')! /.'4!%0./4!5*64)/&64!)4&!+)!;%,&!7')!/.'4!/C%0./4!'&,+,46!7'C'/!4)'+!4D>\G!%;,/!EC,/D,=)*! +C)H5*)44,./!E)!>%=38%!.'!E)!>%=38=1!\.'4!%0./4!5)/46!7')!+)4!);;)&4!/./!456-,;,7')4! E)4!4D>\Gb!4C,+!L!)/!%0%,&b!-./4,4&)*%,)/&!5*,/-,5%+)()/&!?!,/D,=)*!+C)H5*)44,./!E)!+C%'&*)! ,4.;.*()!Z! +CG>\(! +)! 5+'4! 5*.-D)! E)! -.<1=.! 6&%/&! -)+',! E)! -.<1=<! )&! 0,-)! 0)*4%1! \.'4! %0./4!)/!);;)&!.=4)*06!7')!+%!5+'5%*&!E)4!4D>\G!&)4&64!(.E'+%,&!+C)H5*)44,./!E)4!E)'H! ,4.;.*()41! YC)4&! EC%,++)'*4! 5.'*! -)&&)! *%,4./! 7')! /.'4! /C%0./4! 5'! '&,+,4)*! 7'C'/! 4)'+! 4D>\G! 5.'*! ,/D,=)*! 456-,;,7')()/&! +C)H5*)44,./! E)! >%=38%! .'! E)! >%=38=1! M)! 5+'4b! +C%=4)/-)! EC%/&,-.*54! *)-.//%,44%/&! &*I4! 456-,;,7')()/&! >%=38%! )&! E)! >%=38=! %! *)/E'! E,;;,-,+)!+%!06*,;,-%&,./!E)!+C)H5*)44,./!%'!/,0)%'!E)!+%!5*.&6,/)1!X,!/.'4!%0./4!;,/%+)()/&! 5'!)/!.=&)/,*!'/!5.'*!>%=38%!'&,+,4%=+)!)/!d)4&)*/!=+.&!NW*1!X)%=*%!NU.+(%-D.0%!)&!%+1b! 3FFK99b!-)+%!/C%!5%4!6&6!+)!-%4!5.'*!>%=38=!)&!/.'4!/C%0./4!E./-!5%4!5'!7'%/&,;,)*!-)&&)! ,4.;.*()!E%/4!/.4!-)++'+)41!$)!*,47')!EC'/!%'&*)!);;)&!/./!456-,;,7')!5%*!+)!4D>\G!*)4&)! 5.44,=+)! )&! ,+! 4)*%,&! 5+'4! 5*'E)/&! E)! -./;,*()*! /.4! *64'+&%&4! )/! ,/E',4%/&! +C)H5*)44,./! EC'/! E.(,/%/&! /6@%&,;! E)! +%! 5*.&6,/)! >%=38%! .'! E)! +%! 5*.&6,/)! >%=38=! .'! )/-.*)! )/! *6%+,4%/&!E)4!)H56*,)/-)4!E)!-.(5+6()/&%&,./!5%*!+C,/&*.E'-&,./!ECG>\(!E)!>%=38%!.'! >%=38=!*64,4&%/&4!%'H!4D>\G!E%/4!+)4!-)++'+)4!)H5*,(%/&!-)4!4D>\G1!

! "3F! 8[&2ML^BCBEPMQ&BYHF&GHP&NMQQTHP&NH&GB&GEDDTCBDRCH&

BJ&<TDTCM]TQTEDT&NHP&YTPEFRGHP&NBQP&GHP&FRGMDP&N>HUMPMLHP&

M)!/.(=*)'H!&*%0%'H!%0%,)/&!5*6-6E)(()/&!(,4!)/!60,E)/-)!+CD6&6*.@6/6,&6!E)4! 064,-'+)4! 5*64)/&)4! E%/4! +)4! -'+.&4! EC)H.4.()4!Z! +)4! ,(%@)4! .=&)/')4! )/! (,-*.4-.5,)! 6+)-&*./,7')! ?! &*%/4(,44,./! E)4! )H.4.()4! 5'*,;,64! ?! 5%*&,*! E)4! (,+,)'H! E)! -'+&'*)! E)! +L(5D.-L&)4! _! &*%/4;.*(64! 5%*! +)! 0,*'4! O_^! N>%5.4.! )&! %+1b! "AA29b! E)4! -)++'+)4! E)/E*,&,7')4! NUD)*L! )&! %+1b! "AAAk! w,&0.@)+! )&! %+1b! "AA<9b! E)4! 5+%7')&&)4! NQ),a/)/! )&! %+1b! "AAA9b!E)4!-)++'+)4!65,&D6+,%+)4!,/&)4&,/%+)4!N0%/!\,)+!)&!%+1b!3FF"9b!E)4!-)++'+)4!&'(.*%+)4! NG/E*)! )&! %+1b! 3FF3=k! n.+;)*4! )&! %+1b! 3FF"9b! E)4! +L(5D.-L&)4! U! N_+%/-D%*E! )&! %+1b! 3FF39b! E)4! -)++'+)4! (,-*.@+,%+)4! N:.&.+,--D,.! )&! %+1b! 3FFR9! )&! /)'*./%+)4! N[%'*)! )&! %+1b! 3FF291! $C6&'E)! E)! +%! *65%*&,&,./! E)! -)*&%,/4! (%*7')'*4! %5*I4! 465%*%&,./! E)4! 064,-'+)4! 4'*! '/! @*%E,)/&!E)!4'-*.4)!(./&*)!7')!-)'HT-,!/)!4)!*65%*&,44)/&!5%4!E)!;%j./!,E)/&,7')!)/&*)! +)4!E,;;6*)/&)4!;*%-&,./41!G,/4,b!'/)!6&'E)!*6%+,46)!4'*!+)4!)H.4.()4!E)!$_!(./&*)!7')!+)4! (.+6-'+)4! E'! YWQ! BB! 4./&! 5+'4! ;.*&)()/&! )/*,-D,)4! E%/4! +%! ;*%-&,./! E)! E)/4,&6! "b"J! @#($b! 7')! YM<3! 4)! *65%*&,&! E)! ;%j./! 6@%+)! E%/4! +)4! ;*%-&,./4! E)! E)/4,&6! "b"3! )&! "b"J! @#($!)&!)/;,/b!7')!YM<"!4)!&*.'0)!(%a.*,&%,*)()/&!E%/4!+)4!;*%-&,./4!"b"J!)&!"b"K!@#($! NO4-.+%! )&! %+1b! "AA<91! s/)! %'&*)! 6&'E)! *6%+,46)! 4'*! +)4! )H.4.()4! E'! +,7',E)! 46(,/%+! N%55)+64!5*.4&%4.()49!(./&*)!%'44,!'/)!*65%*&,&,./!,/6@%+)!E)4!(%*7')'*4!YMA!)&!:XYG! N:*.4&%&)!X&)(!Y)++!G/&,@)/9!)/&*)!+)4!E,;;6*)/&)4!;*%-&,./4!E)!064,-'+)4!.=&)/')4!%5*I4! 465%*%&,./! )/! ;./-&,./! E)! +%! &%,++)! 5%*! -D*.(%&.@*%5D,)! EC)H-+'4,./! NG%+=)*&4! )&! %+1b! 3F"391! :+'4,)'*4! E)! -)4! ;*%-&,./4! ./&! 6&6! @*.'56)4! 5',4! 4.'(,4)4! ?! '/)! 465%*%&,./! 4'*! @*%E,)/&!E)!4'-*.4)!5)/E%/&!"2!D)'*)41!M)!/.'0)%'b!+)4!E)'H!(%*7')'*4!./&!'/!5*.;,+!E)! *65%*&,&,./!E,;;6*)/&!E%/4!+)4!E,0)*4)4!;*%-&,./4Z!YMA!)4&!5+'4!)/*,-D,!E%/4!+)4!;*%-&,./4! E)/4)4! E)! "b3J! ?! "b32! @#($b! %+.*4! 7')! :XYGb! 7',! )4&! %'44,! 5*64)/&! E%/4! -)4! (h()4! ;*%-&,./4b!)4&!;.*&)()/&!E6&)-&6!E%/4!+)4!;*%-&,./4!E)!E)/4,&6!"b"3T"b"K!@#($1!Y)&&)!6&'E)! (./&*)!%'44,!7')!4,!+%!;+.&&%,4./!E%/4!+)!@*%E,)/&!)4&!*6%+,46)!5)/E%/&!J3!D)'*)4!%'!+,)'! E)! "2! D)'*)4b! %+.*4b! -)4! E)'H! (%*7')'*4! 5*64)/&)/&! ;,/%+)()/&! '/! (h()! 5*.;,+! E)! *65%*&,&,./! )/! ;./-&,./! E)! +%! E)/4,&6b! )&! ,+4! 4./&! &.'4! +)4! E)'H! 5*,/-,5%+)()/&! )/*,-D,4! E%/4! +)4! ;*%-&,./4! "b"3T"b3F! @#($1! G,/4,b! +)4! 064,-'+)4! ;+.&&%/&! ?! E)4! E)/4,&64! 6+)06)4! %5*I4!4)'+)()/&!"2!D)'*)4!E)!-)/&*,;'@%&,./!E%/4!+)!@*%E,)/&!/C%0%,)/&!5%4!%&&),/&!+)'*! 67',+,=*)!)&!5*64)/&)/&!'/!l!*)&%*E!E)!;+.&&%,4./!m1!$C6&'E)!)/!(,-*.4-.5,)!6+)-&*./,7')!?! &*%/4(,44,./!(./&*)!7')!-)4!064,-'+)4!4)!E,;;6*)/-,)/&!%'44,!5%*!+)'*!&%,++)!Z!R2!±!"J!/(!

! "3"! E)!E,%(I&*)!5.'*!+)4!064,-'+)4!E)!;.*&)!E)/4,&6b!)&!"FR!±!3R!/(!E)!E,%(I&*)!5.'*!-)++)4! E)! 5+'4! ;%,=+)! E)/4,&61! G,/4,b! %'! (.,/4! E)'H! 5.5'+%&,./4! E)! 5*.4&%4.()4! )H,4&)/&1! :.'*&%/&!-)4!E)'H!5.5'+%&,./4!5*64)/&)/&!+)4!E)'H!(%*7')'*4!YMA!)&!:XYG!N(h()!4,!+)4! 5*.5.*&,./4!5)'0)/&!60)/&')++)()/&!0%*,)*9!)&!./&!+%!(h()!E)/4,&6!%5*I4!-)/&*,;'@%&,./! ?! +C67',+,=*)1! W%,4! )++)4! 4./&! E,;;6*)/&)4! )/! &%,++)b! )/! E)/4,&6! %55%*)/&)! %5*I4! '/)! ;+.&&%,4./! E)! "2! D)'*)4! 4'*! +)! @*%E,)/&! E)! 4'-*.4)! )&! '/)! %/%+L4)! 5+'4! 5.'446)! E)! +)'*! -.(5.4,&,./! %! (,4! )/! 60,E)/-)! +%! 5*64)/-)! E)! -)*&%,/)4! 5*.&6,/)4! )H-+'4,0)()/&! 5*64)/&)4! 4'*! +C'/)! .'! +C%'&*)! E)! -)4! 5.5'+%&,./41! O/;,/b! '/)! %'&*)! 6&'E)! %0%,&! %'44,! (./&*6!+%!5.44,=,+,&6!5.'*!'/)!(h()!-)++'+)!E)!46-*6&)*!E)'H!5.5'+%&,./4!E)!064,-'+)4! 5*64)/&%/&!+)4!-%*%-&6*,4&,7')4!E)4!)H.4.()4!)&!5.'*&%/&!=,)/!E,4&,/-&)4!N0%/!\,)+!)&!%+1b! 3FF"91!M%/4!-)&&)!6&'E)b!+)4!%'&)'*4!./&!%/%+L46!+)4!)H.4.()4!46-*6&64!5%*!E)4!-)++'+)4! 65,&D6+,%+)4b! )/! E,4&,/@'%/&! )&! )/! -.(5%*%/&! +)4! 064,-'+)4! 46-*6&6)4! %'! /,0)%'! E'! 5S+)! =%4%+!)&!-)++)4!5*.E',&)4!%'!/,0)%'!E'!5S+)!%5,-%+1!Y)4!E)'H!5.5'+%&,./4!E)!064,-'+)4!4./&! E,;;6*)/&)4!5%*!+)'*!(.*5D.+.@,)b!+)'*!&%,++)!)&!+)'*!-.(5.4,&,./1!!

\.4!*64'+&%&4!4C,/4-*,0)/&!E./-!E%/4!+%!+,@/6)!E)!-)4!5*6-6E)/&4!&*%0%'Hb!)&!/.'4! (./&*./4! %'44,! +%! 5*64)/-)! E)! E,;;6*)/&)4! 5.5'+%&,./4! EC)H.4.()4! 46-*6&64! 5%*! +)4! -)++'+)4! 65,&D6+,%+)4! &'(.*%+)4! KU"1! $C.=4)*0%&,./! 7',! /.'4! %! %()/64! ?! 6&'E,)*! +%! 5*64)/-)! 60)/&')++)! E)! E,;;6*)/&)4! 5.5'+%&,./4! E)! 064,-'+)4! )4&! +%! E,;;6*)/-)! E)! -.(5.*&)()/&!E)!-)*&%,/4!(%*7')'*4!)H.4.(%'H!%5*I4!,/D,=,&,./!E)!>%=38%!Z!%+.*4!7')! YM2Jb! Q4-8F! )&! U4@"F"! 4./&! E,(,/'64! E%/4! +)4! -'+.&4! EC)H.4.()4! E)4! -)++'+)4! /C)H5*,(%/&!5%4!>%=38%b!YMA!)&!W;@)<!/)!4./&!5%4!(.E,;,641!Y)-,!/C%0%,&!5%4!6&6!.=4)*06! E%/4!+C6&'E)!*6%+,46)!E%/4!+)!+%=.*%&.,*)!%0)-!+)4!-)++'+)4!D'(%,/)4!Q)$%!N]4&*.d4e,!)&! %+1b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b!3F"3k!0%/!\,)+!)&!%+1b!3FF"9!,/E,7'%,&!7')!E)4!(6-%/,4()4!E)! =,.@6/I4)! E,;;6*)/&4! 5.'0%,)/&! h&*)! ,(5+,7'64! E%/4! +%! ;.*(%&,./! E)! -)4! 064,-'+)41! \.4! *64'+&%&4!*)/;.*-)/&!-)&&)!DL5.&DI4)!)/!(./&*%/&!7')!-)*&%,/)4!064,-'+)4!/6-)44,&)/&!+%!

Cytosol ARNs (miRNA, ARNm…) Appareil de Golgi Endosomes précoces Endosomes tardifs/ Corps multivésiculaires Milieu extracellulaire Autres compartiments intracellulaires

Exosomes portant les marqueurs endosomaux CD63, Tsg101, Alix, Hsc70 Microvésicules, microparticules, ectosomes

CD9, Mfge8

BLW0X$

Y$

ou Vésicules co- centrifugées avec les exosomes CD9, Mfge8

Figure 3.1 : Schématisation des voies de sécrétion des différentes populations de vésicules extracellulaires.

(1) Les cellules produisent des vésicules de taille très hétérogènes par bourgeonnement au niveau de la membrane plasmique : les microvésicules, les microparticules et les ectosomes. (2) D’autre part, les cellules sécrètent des exosomes, vésicules classiquement purifiées par des ultracentrifugations successives se terminant par une centrifugation à 100.000xg. Nous avons montré qu’une partie des vésicules ainsi purifiées semblait bien correspondre à des exosomes : leur sécrétion est dépendante de Rab27a (indiquant fortement une origine endosomale) et elles portent des marqueurs d’endosomes. (3) Une autre partie de ces vésicules est cependant produite de façon indépendante de Rab27a et elles portent les marqueurs Mfge8 et CD9 mais pas les marqueurs endosomaux. Nous ne savons pas si ces vésicules se forment dans des compartiments intracellulaires ou au niveau de la membrane plasmique.

1

2

3

! "33! 5*64)/-)!E)!>%=38%!5.'*!5.'0.,*!h&*)!46-*6&6)4b!%+.*4!7')!EC%'&*)4!4./&!+,=6*6)4!E%/4!+)! (,+,)'! )H&*%-)++'+%,*)! 4)+./! '/! (6-%/,4()! ,/E65)/E%/&! E)! >%=38%1! \.'4! 5)/4./4! 7')! +)4! 064,-'+)4! 46-*6&6)4! E)! ;%j./! E65)/E%/&)! E)! >%=38%! -.**)45./E)/&! +)! (,)'H! ?! +%! E6;,/,&,./! E)4! )H.4.()4! E)! 5%*! +)'*! &*I4! 5*.=%=+)! .*,@,/)! )/E.4.(%+)1! O/! *)0%/-D)b! /.'4!/)!4%0./4!5%4!4,!+)4!064,-'+)4!-.T-)/&*,;'@6)4!5*.0,)//)/&!E)!+%!46-*6&,./!EC%'&*)4! -.(5%*&,()/&4! ,/&*%-)++'+%,*)4! E)! ;%j./! ,/E65)/E%/&)! E)! >%=38%b! .'! EC'/! =.'*@).//)()/&! %'! /,0)%'! E)! +%! ()(=*%/)! 5+%4(,7')b! )&! 4,! )++)4! 4./&! .'! /./! E)4! )H.4.()41!:.'*!*64'()*!&.'&!-)-,b!aC%,!*)5*64)/&6!E%/4!+%!\E]RCH&7/I!+)4!E,;;6*)/&4!&L5)4! E)!064,-'+)4!)H&*%-)++'+%,*)4!5*.E',&)4!5%*!+)4!-)++'+)4b!%,/4,!7')!+)'*4!0.,)4!E)!46-*6&,./Z! N"9! +)4! (,-*.064,-'+)4b! (,-*.5%*&,-'+)4! )&! )-&.4.()4! 7',! =.'*@).//)/&! ?! +%! ()(=*%/)! 5+%4(,7')b!N39!+)4!)H.4.()4!7',!4./&!;.*(64!E%/4!+)4!W^_4!5',4!+,=6*64!5%*!;'4,./!%0)-! +%!()(=*%/)!5+%4(,7')b!)&!)/;,/!NJ9!+)4!%'&*)4!064,-'+)4!-.T5'*,;,6)4!%0)-!+)4!)H.4.()4! )&!E./&!+C.*,@,/)!/C%!5%4!6&6!E6&)*(,/6)1! ! aJ&$HP&LBC_RHRCP&N>HUMPMLH&K&_RHGGH&P^TFE\EFEDT&g& $)!5*.&.-.+)!-+%44,7')!E)!5'*,;,-%&,./!E)4!)H.4.()4!,/E,7')!7')b!%5*I4!+)4!6&%5)4! E)!5'*,;,-%&,./!5%*!'+&*%-)/&*,;'@%&,./!E,;;6*)/&,)++)b!+%!5*64)/-)!E)4!)H.4.()4!E%/4!+)4! -'+.&4! E.,&! )4&! 06*,;,6)! 5%*! (,-*.4-.5,)! 6+)-&*./,7')! ?! &*%/4(,44,./! )&! 5%*! +%! E6&)-&,./! E)! l!(%*7')'*4! EC)H.4.()4!m! 5%*! d)4&)*/! =+.&1! $)4! E,;;6*)/&)4! 5*.&6,/)4! 7')! /.'4! %0./4! '&,+,46)4! -.(()! E)4! (%*7')'*4! EC)H.4.()4!Z! YMAb! W;@)<b! YM2Jb! Q4-8Fb! G+,Hb! )&! U4@"F"!./&!6&6!E6-.'0)*&)4!E%/4!+)4!)H.4.()4!+.*4!EC6&'E)4!5*.&6.(,7')4!*6%+,46)4!)/! "AAA! )&! 3FF"! NUD)*L! )&! %+1b! 3FF"k! UD)*L! )&! %+1b! "AAA91! \.'4! %0./4! -./;,*(6! +)'*! )/*,-D,44)()/&!E%/4!+)4!)H.4.()4!E)4!+,@/6)4!&'(.*%+)4!('*,/)4!KU"b!UX#G!)&!WYG!5%*! *%55.*&! %'H! +L4%&4! -)++'+%,*)41! M)! /.(=*)'H! %'&*)4! (%*7')'*4! E)4! )H.4.()4! ./&! 6&6! -%*%-&6*,464!)&!4./&!*65)*&.*,64!4'*!+)!4,&)!,/&)*/)&!OH.-%*&%!NW%&D,0%/%/!%/E!X,(54./b! 3FFA9!)&!=,)/&S&!4'*!+)4!4,&)4!O^5)E,%!)&!0)4,-+)5)E,%1!Y)5)/E%/&b!/.'4!(./&*./4!,-,!7')! -)*&%,/4!E)!-)4!(%*7')'*4b!YMA!)&!W;@)<b!/)!4./&!5%4!456-,;,7')4!E)4!)H.4.()4!Z!,+4!4./&! )/*,-D,4!4'*!+)4!5+'4!5)&,&)4!064,-'+)4!5*64)/&)4!E%/4!+)4!-'+.&4!EC)H.4.()4!)&!%'44,!4'*! +)4! (,-*.064,-'+)4! 7',! 4./&! 5'*,;,6)4! %5*I4! '/)! -)/&*,;'@%&,./! ?! "F1FFFH@! N5)/E%/&! JF! (,/9! N;E]RCH& 7/I91! \.'4! /C%0./4! 5'! E6&)-&)*! E)! ;%j./! ;,%=+)! +%! 5*64)/-)! EC%'&*)4! (%*7')'*4!4'*!+)4!5+'4!5)&,&)4!064,-'+)4!)/!(,-*.4-.5,)!6+)-&*./,7')!?!&*%/4(,44,./1!O/! *)0%/-D)! /.'4! %0./4! 5'! (,)'H! -%*%-&6*,4)*! +)4! (,-*.064,-'+)4! 5%*! d)4&)*/! =+.&! )&!

! "3J! (./&*)*! 7')! +)4! (%*7')'*4! YM2Jb! G+,Hb! Q4-8F! .'! U4@"F"! /CL! 4./&! 5%4! N.'! &*I4! 5)'9! 5*64)/&41! Y)4! *64'+&%&4! 5)*()&&)/&! E)! *%55)+)*! 7')! +)! &)*()! l!(%*7')'*! )H.4.(%+!m! 4,@/,;,)! 7')! +)4! 5*.&6,/)4! %,/4,! 7'%+,;,6)4! 4./&! &*I4! %=./E%/&)4! 4'*! +)4! )H.4.()4b! (%,4! -)+%! /)! 4,@/,;,)! 5%4! 7'C)++)4! 5)*()&&)/&! EC,E)/&,;,)*! 456-,;,7')()/&! +)4! )H.4.()4! )&! E)! +)4! E,4&,/@')*! E)4! %'&*)4! 064,-'+)4b! -./&*%,*)()/&! ?! +C'&,+,4%&,./! 7'C)/! ;./&! E)! /.(=*)'4)4!5)*4.//)41!

7[&5HCP^HFDEYHP&

! \.'4!%0./4!,E)/&,;,6!E,;;6*)/&)4!5.5'+%&,./4!EC)H.4.()4!)/!;./-&,./!E)!Z!N"9!+)'*! (.E)! E)! 46-*6&,./! E65)/E%/&! .'! /./! E)! >%=38%b! N39! +)'*! E,;;6*)/-)! E)! -.(5.*&)()/&! E%/4! +)! @*%E,)/&! E)! 4'-*.4)! NE)/4,&6! )&! *)&%*E! E)! ;+.&&%,4./9b!NJ9! +)'*! &%,++)! 60%+'6)! )/! (,-*.4-.5,)! 6+)-&*./,7')b! NK9! +%! 5*.5.*&,./! E)4! E,;;6*)/&4! (%*7')'*4! 7'C)++)4! -./&,)//)/&1! :.'*! %55*.;./E,*! +C6&'E)b! /.'4! 5.'**,./4! -%*%-&6*,4)*! 5+'4! -.(5+I&)()/&! +)4!E,;;6*)/&)4!;*%-&,./4!E)!064,-'+)4!7',!4./&!465%*6)4!%5*I4!"2!D)'*)4!E)!-)/&*,;'@%&,./! 4'*! +)! @*%E,)/&! E)! 4'-*.4)! N)&! /.&%(()/&! +)4! 064,-'+)4! 7',! /C./&! 5%4! )/-.*)! %&&),/&! +%! E)/4,&6! EC67',+,=*)! 5%*! *%55.*&! ?! -)++)4! 7',! +C./&! E6a?! %&&),/&)91! B+! 4)*%,&! /.&%(()/&! ,/&6*)44%/&!EC%/%+L4)*!+)'*!(.*5D.+.@,)!)/!(,-*.4-.5,)!6+)-&*./,7')!?!&*%/4(,44,./b!)&! +)'*!-.(5.4,&,./!)/!5*.&6,/)4b!+,5,E)4!)&!%-,E)4!/'-+6,7')41!$)4!;./-&,./4!E)4!E,;;6*)/&)4! 5.5'+%&,./4!%,/4,!,E)/&,;,6)4!4)*./&!)/4',&)!6&'E,6)41!M%/4!'/!5*)(,)*!&)(54b!/.'4!/.'4! ,/&6*)44)*,./4! 5+'4! 5%*&,-'+,I*)()/&! ?! +)'*4! );;)&4! 4'*! +)4! -)++'+)4! E'! 4L4&I()! ,(('/,&%,*)1!!

\.'4! %'*,./4! %'44,! 4.'D%,&6! 465%*)*! )&! -%*%-&6*,4)*! EC'/)! 5%*&! +)4! 064,-'+)4! 46-*6&6)4! E)! ;%j./! E65)/E%/&)! E)! >%=38%! )&! EC%'&*)! 5%*&! -)++)4! 46-*6&6)4! E)! ;%j./! ,/E65)/E%/&)!E)!>%=38%1!\.'4!/C%0./4!%-&')++)()/&!5%4!+)4!.'&,+4!/.'4!5)*()&&%/&!E)! ;%,*)!-)+%1!O/!*)0%/-D)b!)/!%55*.;./E,44%/&!+%!-%*%-&6*,4%&,./!)&!+%!-.(5%*%,4./!)/&*)!+)4! 064,-'+)4! 46-*6&6)4! 5%*! +)4! -)++'+)4! )H5*,(%/&! .'! /./! >%=38%b! /.'4! 5.'**,./4! 60)/&')++)()/&!()&&*)!)/!60,E)/-)!E)4!(%*7')'*4!456-,;,7')4!E)!-D%-'/!E)4!E)'H!&L5)4! E)!064,-'+)41!M%/4!+)4!6&'E)4!*6%+,46)4!4'*!+)4!5*.4&%4.()4!)&!+)4!-)++'+)4!65,&D6+,%+)4!E)4! (%*7')'*4!456-,;,7')4!E)!-D%-'/)!E)4!5.5'+%&,./4!EC)H.4.()4!./&!6&6!(,4!)/!60,E)/-)! 5%*! %/%+L4)! 5*.&6.(,7')! NG%+=)*&4! )&! %+1b! 3F"3k! 0%/! \,)+! )&! %+1b! 3FF"9! )&! +%! 5*64)/-)! E)! E)'H! EC)/&*)! )++)4!%! 6&6! -./;,*(6)! 5%*! d)4&)*/! =+.&! Z! c$B:>3! N@+,.(%! 5%&D.@)/)4,4! *)+%&)E! 39! )&! G//)H,/)! G"1! Y)4! (%*7')'*4! 5.'**%,)/&! E./-! h&*)! *)-D)*-D64! E%/4! +)4!

! "3K! -'+.&4! EC)H.4.()4! E)4! -)++'+)4! )H5*,(%/&! .'! /./! >%=38%1! $)4! (%*7')'*4! YM2Jb! G+,Hb! Q4-8F! )&! U4@"F"! 4)(=+)/&! %'44,! E)! =./4! -%/E,E%&4! )/! &%/&! 7')! 5.44,=+)4! (%*7')'*4! 456-,;,7')4! E)! +%! 5.5'+%&,./! 46-*6&6)! E)! ;%j./! E65)/E%/&)! E)! >%=38%b! 6&%/&! E.//6)! +%! ;.*&)! E,(,/'&,./! E)! +)'*! 5*64)/-)! E%/4! +)4! -'+.&4! EC)H.4.()4! %5*I4! ,/D,=,&,./! E)! >%=38%1! B+4! 4./&! &.'&! E)! (h()! )/-.*)! E6&)-&%=+)4! E%/4! -)4! -'+.&4b! -)! 7',! 5)'&! 4C)H5+,7')*! 5%*! '/)! 46-*6&,./! *64,E')++)! E)! +%! 5.5'+%&,./! E)! 064,-'+)4! 0,%! +)4! 7')+7')4! 5*.&6,/)4!>%=38%!)/-.*)!5*.E',&)4!E%/4!-)4!-)++'+)4!N+C,/D,=,&,./!5%*!+)!4D>\G!/C)4&!5%4! E)! "FFp9! .'! %+.*4! 5%*! +)'*! 5*64)/-)! 4'*! +)4! %'&*)4! 064,-'+)4! 46-*6&6)4! E)! ;%j./! ,/E65)/E%/&)!E)!>%=38%1!\.4!E.//6)4!/)!5)*()&&)/&!5.'*!+)!(.()/&!5%4!E)!-./-+'*)b! '/)! %/%+L4)! )/! (,-*.4-.5,)! 6+)-&*./,7')! %0)-! E)! =./4! %/&,-.*54! 5.'**%,&! 60)/&')++)()/&! /.'4! %,E)*! ?! E6&)*(,/)*! 4C,+4! 4./&! E)4! (%*7')'*4! *)4&*,-&,;4! .'! /./1! B+! 5.'**%,&! %'44,! h&*)! ,/&6*)44%/&! E)! 465%*)*! %0)-! E)4! =,++)4! -.'5+6)4! ?! '/! %/&,-.*54! %/&,T YM2J!+)4!5.5'+%&,./4!)H5*,(%/&!.'!/./!YM2J!)&!E)!-.(5%*)*!-)!7')!+C./!.=&,)/&!?!5%*&,*! E)4! -'+.&4! EC)H.4.()4! E)4! -)++'+)4! -./&*S+)4! .'! E)! -)++'+)4! /C)H5*,(%/&! 5%4! >%=38%1! O/;,/b!'/)!&)-D/,7')!EC%/%+L4)!E)4!)H.4.()4!5%*!-L&.(6&*,)!)/!;+'H!N%0)-!+)!-L&.(I&*)! _M!B/;+'HUW_{9!)4&!%-&')++)()/&!'&,+,46)!E%/4!+)!+%=.*%&.,*)!E)!n1!X&..*0.@)+!)&!)++)!)4&!)/!}

&*%,/! ECh&*)! 5)*;)-&,.//6)! %;,/! E)! 5.'0.,*! %/%+L4)*! E)! 5+'4! )/! 5+'4! E)! 5%*%(I&*)41! G-&')++)()/&b!)++)!5)*()&!E)!E,4&,/@')*!E)4!5.5'+%&,./4!EC)H.4.()4!)/!;./-&,./!E)!+)'*! &%,++)! )&! E)! +)'*! -.(5.4,&,./! NE)'H! (%*7')'*4! 5)'0)/&! h&*)! %/%+L464! )/! (h()! &)(549! NQ.)/! )&! %+1b! 3F""91! $C'&,+,4%&,./! E)! -)&&)! /.'0)++)! &)-D/,7')! 5.'*! -.(5%*)*! +)4! 5.5'+%&,./4!E)!064,-'+)4!5*64)/&)4!E%/4!+)4!-'+.&4!EC)H.4.()4!E)4!-)++'+)4!)H5*,(%/&!.'! /./!>%=38%!5.'**%,&!/.'4!5)*()&&*)!E)!(,)'H!+)4!-%*%-&6*,4)*1!

! $)4!+,5,E)4!)&!%-,E)4!/'-+6,7')4b!)/!5+'4!E)4!5*.&6,/)4!4)*./&!%'44,!-)*&%,/)()/&! E,;;6*)/&4! EC'/)! 5.5'+%&,./! E)! 064,-'+)4! ?! +C%'&*)1! $.*47')! /.'4! 4)*./4! -%5%=+)4! E)! 465%*)*! );;,-%-)()/&! +)4! E,;;6*)/&)4! 5.5'+%&,./4! E)! 064,-'+)4b! ,+! ;%'E*%! %/%+L4)*! +)'*! -.(5.4,&,./!)/!+,5,E)4!)&!4'*&.'&!)/!%-,E)4!/'-+6,7')41!B+!)H,4&)!E)4!+,5,E)4!;+'.*)4-)/&4! 7',! (%*7')/&! E,;;6*)/&)4! ()(=*%/)4! )&! .*@%/,&)4! E)! +%! -)++'+)! )/! ;./-&,./! E)! +)'*! -.(5.4,&,./! )/! +,5,E)4! )&! E)! +)'*! ;+',E,&61! $)4! +,5,E)4! ;+'.*)4-)/&4! 4',! 4)! -./-)/&*)/&! E%/4! +)4! -.(5%*&,()/&4! )/E.4.(%'H! 4)! *)&*.'0)/&! )/4',&)! E%/4! +)4! )H.4.()41! s/)! 6&'E)!%!(./&*6!7')!+.*47')!+)4!)H.4.()4!E)!-)*&%,/)4!-)++'+)4!+)'-6(,7')4!4./&!,4.+64! )/!;./-&,./!E)!+)'*!-.(5.4,&,./!)/!YWQ!BBb!)/!YM<"!)&!)/!YM2J!N%0)-!E)4!=,++)4!-.'5+6)4! ?! E)4! %/&,-.*54! *)-.//%,44%/&! 456-,;,7')()/&! -)4! 5*.&6,/)49b! ,+4! /)! 5*64)/&)/&! 5%4! +)! (h()!)/*,-D,44)()/&!5.'*!+)4!&*.,4!E,;;6*)/&4!+,5,E)4!;+'.*)4-)/&4!'&,+,464N$%'+%@/,)*!)&!

! "3R! %+1b! 3FFR91! O&%/&! E.//6! 7')! -D%-'/! E)! -)4! (%*7')'*4! 6&%,&! 5*64)/&! E%/4! E)4! -.(5%*&,()/&4! E,4&,/-&4! E)! +%! -)++'+)b! -)4! *64'+&%&4! 4)(=+)/&! ,/E,7')*! 7')! +)4! 5.5'+%&,./4! EC)H.4.()4! (,4)4! )/! 60,E)/-)! 4./&! +)! *64'+&%&! E)! E,;;6*)/&)4! 0.,)4! E)! =,.@)/I4)1! $)4! *64'+&%&4! EC)H56*,)/-)4! *6%+,46)4! ?! +C%,E)! E)! (%*7')'*4! +,5.5D,+)4! ;+'.*)4-)/&4!E.,0)/&!-)5)/E%/&!&.'a.'*4!h&*)!*)@%*E64!%0)-!5*6-%'&,./!E%/4!+)!4)/4!.r! E)4! %@*6@%&4! E)! -)4! (%*7')'*4! 5)'0)/&! h&*)! -.T-)/&*,;'@64! %0)-! +)4! )H.4.()4b! )&! '/! (%*7'%@)! /./! 456-,;,7')! %44)P! ,(5.*&%/&! )4&! EC%,++)'*4! 0,4,=+)! E%/4! +C'/)! E)4! )H56*,)/-)4! E)! -)&&)! 5'=+,-%&,./1! Y)4! (6&D.E)4! 4./&! E./-! ,/&6*)44%/&)4! (%,4! E.,0)/&! h&*)! '&,+,46)4! %0)-! 5*'E)/-)! )&! )/! -.(=,/%,4./! %0)-! +)4! %'&*)4! &)-D/,7')4! 5+'4! -+%44,7')4!N(,-*.4-.5,)!6+)-&*./,7')b!d)4&)*/!=+.&b!@*%E,)/&!E)!4'-*.4)91!

! :.'*!;,/,*b!/.'4!%0./4!(./&*6!7')!E)4!(%*7')'*4!-+%44,7')4!E)4!)H.4.()4b!YMA! )&! W;@)<b! 4./&! %'44,! ;.*&)()/&! )/*,-D,4! 4'*! +)4! (,-*.064,-'+)4! 5'*,;,6)4! ?! "F1FFFH@1! M)! 5+'4b! -)4! E)'H! (%*7')'*4! /)! 4./&! 5%4! %;;)-&64! 5%*! +C,/D,=,&,./! EC)H5*)44,./! E)! >%=38%! %+.*4!7')!+)4!%'&*)4!(%*7')'*4!4./&!E,(,/'64!E%/4!+)4!-'+.&4!EC)H.4.()41!$%!5+'5%*&!E)4! (%*7')'*4!EC)H.4.()4!,E)/&,;,64!)&!E64.*(%,4!*65)*&.*,64!4'*!+)!4,&)!,/&)*/)&!OH.-%*&%b! /C./&! 5%4! 6&6! %/%+L464! 4'*! +)4! (,-*.064,-'+)4! )&! ,+4! /C./&! 4.'0)/&! 5%4! /./! 5+'4! 6&6! %/%+L464!%5*I4!465%*%&,./!E)4!064,-'+)4!4'*!'/!@*%E,)/&!E)!4'-*.4)1!s/)!*6%/%+L4)!E)!+%! 5*64)/-)! E)! -)4! (%*7')'*4! 4'*! +)4! )H.4.()4b! +)4! (,-*.064,-'+)4! )&! 4'*! +)4! 064,-'+)4! 46-*6&6)4!E)!;%j./!E65)/E%/&)!.'!,/E65)/E%/&)!E)!>%=38%!E.,&!h&*)!*6%+,46)!5%*!+%!4',&)! %;,/!E)!(,)'H!-.//%i&*)!+)4!(%*7')'*4!7')!/.'4!'&,+,4./41! ! !

**24&$%&+-$%&'%(&5+-!%.%(&+"#89&'".(&$%(&,-%(&'%&(%2+%!*-.&**

! I[&$HP&GELEDHP&NR&DCBYBEG&

\.'4! %0./4! 6&'E,6! +)! *S+)! E)4! 5*.&6,/)4! >%=38%! )&! >%=38=! E%/4! +)4! 0.,)4! E)! 46-*6&,./! E)4! )H.4.()4b! E)4! (,-*.064,-'+)4! )&! E)4! 5*.&6,/)4! 4.+'=+)4! E%/4! E,;;6*)/&)4! +,@/6)4!&'(.*%+)4!('*,/)41!$C)H5*)44,./!E)4!5*.&6,/)4!>%=38%!)&!>%=38=!%!6&6!,/D,=6)!?! +C%,E)! E)! 4D>\G! 5%*! ,/;)-&,./! +)/&,0,*%+)1! \.'4! %0./4! )/4',&)! 7'%/&,;,6! +)4! )H.4.()4! N5*.&6,/)4! &.&%+)4! .'! (%*7')'*4! )H.4.(%'H9b! +)4! (,-*.064,-'+)4! N,E)(9! )&! '/! -)*&%,/! /.(=*)! E)! ;%-&)'*4! 4.+'=+)4! N-*,=+)! E)! "KK! 5*.&6,/)4! YL&.e,/)! G/&,=.EL! W,-*.%**%Lb! O$BXGb! Y_G#$'(,/)H91! \.'4! %0./4! %,/4,! (./&*6! 7')! >%=38%! 6&%,&! /6-)44%,*)! ?! +%!

! "32! 46-*6&,./!E)4!)H.4.()4!(%,4!5%4!?!-)++)!E)4!(,-*.064,-'+)4b!)&!5%*&,-,5%,&!?!+%!46-*6&,./! E)!5+'4,)'*4!;%-&)'*4!4.+'=+)41!\.'4!/C%0./4!-)5)/E%/&!5%4!6&'E,6!E)!;%j./!)HD%'4&,0)!+)! *S+)!E)!>%=38%!E%/4!+%!46-*6&,./!E)4!;%-&)'*4!4.+'=+)4!Z!/.'4!%0./4!-,=+6!/.&*)!6&'E)!4'*! +)4! ;%-&)'*4! E)! -*.,44%/-)b! -L&.e,/)4! )&! -D,(,.e,/)4b! )&! /.'4! /C%0./4! ()4'*6! E)! ;%j./! 7'%/&,&%&,0)! 7'C'/)! 5%*&,)! E)4! 5*.&6,/)4! ,E)/&,;,6)4! 4'*! +)4! ()(=*%/)4! E'! -*,=+)! )&! /C%0./4! E./-! 5%4! 0%+,E6! &.'4! +)4! *64'+&%&4! .=&)/'4! 5%*! +)! -*,=+%@)1! \.'4! %0./4! %,/4,! 7'%/&,;,6!+%!46-*6&,./!E)!cTYX[b!fYb!WY:T"b!WB:J!!)&!YH-+"2b!(%,4!+)4!(6&%++.5*.&6%4)4! WW:3!5.'*!UX#Gb!WW:J!)&!5*.TWW:A!5.'*!KU"!./&!%'44,!'/)!46-*6&,./!7',!4)(=+)!h&*)! %;;)-&6)!5%*!+C,/D,=,&,./!E)!>%=38%!)&!/.'4!/)!+)4!%0./4!5%4!6&'E,6)4!5+'4!)/!E6&%,+41!

Y)! 7',! *)44.*&! E)! -)&&)! 6&'E)b! )4&! +%! E,0)*4,&6! E)4! *S+)4! 7')! a.')! +%! 5*.&6,/)! >%=38%! E%/4! 5+'4,)'*4! 0.,)4! E)! 46-*6&,./1! U.'&);.,4b! /.'4! /C%0./4! 5%4! %55*.;./E,! -)4! *64'+&%&4! %0)-! EC%'&*)4! (6&D.E)4! E)! =,.+.@,)! -)++'+%,*)! Z! 6&'E)! )/! (,-*.4-.5,)! ?! ;+'.*)4-)/-)! E)4! -.(5%*&,()/&4! ,/&*%-)++'+%,*)4! %*=.*%/&! >%=38%! N*)45./4%=+)4! E)! +%! 46-*6&,./! E)4! )H.4.()4! .'! E)4! ;%-&)'*4! 4.+'=+)49! )&! +)'*! -%*%-&6*,4%&,./b! %/%+L4)! E)4! (.'0)()/&4! E)! -)4! -.(5%*&,()/&4! E)! 46-*6&,./! )&! E)! +)'*! %/-*%@)! ?! +%! ()(=*%/)! 5+%4(,7')! 5%*! (,-*.4-.5,)! ?! ./E)4! 60%/)4-)/&)4! 5%*! )H)(5+)1! $C%=4)/-)! EC%/&,-.*54! 456-,;,7')4!E)!>%=38%!'&,+,4%=+)4!)/!(,-*.4-.5,)!-.(5+,7')!+C6&'E)!E)4!-.(5%*&,()/&4! 7',! *)-*'&)/&! -)&&)! 5*.&6,/)!Z! ,+! )4&! %+.*4! /6-)44%,*)! EC,/&*.E',*)! E%/4! +)4! -)++'+)4! '/! 5+%4(,7')! -.E%/&! +%! 5*.&6,/)! >%=38%! ;'4,.//6)! ?! '/)! 5*.&6,/)! ;+'.*)4-)/&)! -.(()! +%! c[:1! Y)-,! -./E',&! E./-! ?! '/)! 4'*)H5*)44,./! E)! >%=38%b! )&! /)! 5)*()&! 5%4! E)! 0,4'%+,4)*! E,*)-&)()/&!+%!+.-%+,4%&,./!E)!+%!5*.&6,/)!)/E.@I/)b!(%,4!-C)4&!'/!(.L)/!;*67')(()/&! '&,+,46!)/!=,.+.@,)!-)++'+%,*)!5.'*!6&'E,)*!+%!+.-%+,4%&,./!E)!-)*&%,/)4!5*.&6,/)41! ! 8[&2ML^BCBEPMQ&BYHF&GHP&NMQQTHP&NH&GB&GEDDTCBDRCH& BJ&$HP&^CMDTEQHP&+Ba&HD&GB&PTFCTDEMQ&NHP&HUMPMLHP& \.'4!%0./4!(,4!)/!60,E)/-)!'/!*S+)!E)!+%!5*.&6,/)!>%=38%!E%/4!+%!46-*6&,./!E)4! )H.4.()4b! .'! EC'/)! 5.5'+%&,./! EC)H.4.()4b! (%,4! 5%4! E%/4! +%! 46-*6&,./! E)4! (,-*.064,-'+)4b! 5%*! &*.,4! +,@/6)4! &'(.*%+)4! ('*,/)4!Z! WYGb! UX#G! )&! KU"1! O/! *)0%/-D)b! >%=38=! /)! 5%*&,-,5)! 5%4! ?! -)&&)! 0.,)! E)! 46-*6&,./! -./&*%,*)()/&! ?! -)! 7',! %! 6&6! (./&*6! E%/4!+%!+,@/6)!D'(%,/)!Q)$%1!M%/4!+%!+,@/6)!WMGTW_T3J"!ND'(%,/)9b!%'-'/)!E)4!E)'H! ,4.;.*()4! /)! 4)(=+)! 5%*&,-,5)*! ?! +%! 46-*6&,./! E)4! )H.4.()4b! (h()! 4,! -)4! *64'+&%&4! *)4&)/&! ?! -./;,*()*1! G,/4,b! /.4! E.//6)4! 4.'+,@/)/&! +%! 0%*,6&6! E)4! 0.,)4! E)! 46-*6&,./! )&!

! "38! E)4!%-&)'*4!(.+6-'+%,*)4!,(5+,7'64!E%/4!-)4!0.,)4!4)+./!+)4!-)++'+)4!-./4,E6*6)4!Z!)45I-)b! &L5)!-)++'+%,*)b!(.EI+)!&'(.*%+!)&!-%*%-&6*,4&,7')4!5*.5*)4!?!-)!(.EI+)!5%*!*%55.*&!?!'/! %'&*)1! Y.(()! /.'4! +C%0./4! 0'! )/! ,/&*.E'-&,./b! +)4! E.//6)4! 7')! +C./! &*.'0)! E%/4! +%! +,&&6*%&'*)!4'*!+)4!5.44,=+)4!(6-%/,4()4!E)!=,.@)/I4)!E)4!064,-'+)4!,/&*%+'(,/%+)4!E%/4! +)4!W^_4!5.,/&)/&!%'44,!0)*4!'/)!E,0)*4,&6!E)4!(6-%/,4()4!E)!=,.@)/I4)!E)4!)H.4.()41! YD%7')! &L5)! -)++'+%,*)! 5.'**%,&! E./-! '&,+,4)*! +C'/! .'! 5+'4,)'*4! E)! -)4! (6-%/,4()4b! )&! ,+! )4&!5*.=%=+)!7'C,+!/CL!%,&!5%4!'/!(6-%/,4()!@6/6*%+,4%=+)!?!&.'4!+)4!&L5)4!-)++'+%,*)4!&.'&! -.(()!,+!/C)H,4&)!5)'&Th&*)!5%4!/./!5+'4!'/)!0.,)!7',!4.,&!456-,;,7')!E)!+%!46-*6&,./!E)4! )H.4.()41!M%/4!+%!;%(,++)!E)4!5)&,&)4!cU:%4)4!>%=b!>%=""!)&!>%=JR!5)'0)/&!5%*&,-,5)*!?! +%!46-*6&,./!E)4!)H.4.()41!>%=""!4)(=+)!h&*)!5*,/-,5%+)()/&!,(5+,7'6)!E%/4!'/)!0.,)! E)! 46-*6&,./! *6@'+6)! N)&! /./! -./4&,&'&,0)9! E)4! )H.4.()4! E%/4! '/)! +,@/6)! +)'-6(,7')! 6*L&D*.-L&%,*)NX%0,/%!)&!%+1b!3FFR91!M%/4!-)&&)!6&'E)b!+)4!%'&)'*4!(./&*)/&!EC%,++)'*4!7')! -)! *S+)! E)! >%=""! E65)/E! E'! &L5)! -)++'+%,*)! -./4,E6*6! )&! E'! /,0)%'! EC)H5*)44,./! E)! >%=""b!&.'&!-.(()!/.'4!.=4)*0./4!7')!>%=38%!)&!>%=38=!/)!4./&!5%4!,(5+,7'64!E%/4! +%! 46-*6&,./! E)4! )H.4.()4! 5%*! &.'4! +)4! &L5)4! -)++'+%,*)41! >%=JR! )4&! /6-)44%,*)! ?! +%! 46-*6&,./! E)! 064,-'+)4! 5.*&%/&! +%! :$:! N5*.&6,/)! 5*.&6.+,5,E)9! 5%*! +)4! .+,@.E)/E*.-L&)4! NQ4'! )&! %+1b! 3F"F91! Y)5)/E%/&! E%/4! -)&&)! 6&'E)b! +)4! 064,-'+)4! 6&'E,6)4! /C./&! 5%4! 6&6! -%*%-&6*,46)4! 5%*! (,-*.4-.5,)! 6+)-&*./,7')b! /,! 5%*! d)4&)*/! =+.&! N*)-D)*-D)! E)4! (%*7')'*4! -+%44,7')4! EC)H.4.()491! B+! /C)4&! %,/4,! 5%4! -.//'! 4,! -)&&)! 5*.&6,/)! )4&! ,(5+,7'6)! E%/4! +%! 46-*6&,./! E)4! )H.4.()4! 5%*! 5+'4,)'*4! &L5)4! -)++'+%,*)4b! .'! '/,7')()/&!E%/4!+%!46-*6&,./!EC'/)!5.5'+%&,./!5%*&,-'+,I*)!E)!064,-'+)4!.'!EC)H.4.()4b! 46-*6&6)! 5%*! +)4! .+,@.E)/E*.-L&)41! $)! -*,=+%@)! 4'*! +)4! 5*.&6,/)4! >%=! *6%+,46! %'! +%=.*%&.,*)!/C%0%,&!5%4!5)*(,4!E)!()&&*)!)/!60,E)/-)!'/!*S+)!E)!>%=""!)&!E)!>%=JR!E%/4! +%!46-*6&,./!E)4!)H.4.()4!5%*!+)4!-)++'+)4!&'(.*%+)4!D'(%,/)4!Q)$%1!!

:.'*!-)&&)!*%,4./b!)&!E)!5%*!+)4!,/;.*(%&,./4!E.//6)4!E%/4!+)4!%*&,-+)4!E6-*,0%/&! +)'*! *S+)! E%/4! +%! 46-*6&,./! E)4! )H.4.()4b! /.'4! %0./4! 5)/46! 7')! >%=""! )&! >%=JR! 5%*&,-,5%,)/&! ?! +%! 46-*6&,./! E)4! )H.4.()4! E%/4! E)4! -)++'+)4! )&! E%/4! E)4! -./E,&,./4! 5%*&,-'+,I*)4b! )&! /.'4! %0,./4! -D.,4,! 5.'*! /.&*)! 5*.a)&! EC,/&)*;6*)*! %0)-! +C)H5*)44,./! E)! >%=38%!)&!>%=38=!5.'*!(.E'+)*!+%!46-*6&,./!E)4!)H.4.()41!\.'4!(./&*./4!;,/%+)()/&! 7')!>%=38%!)&!>%=38=!/)!4./&!5%4!/./!5+'4!,(5+,7'6)4!E%/4!+%!46-*6&,./!E)4!)H.4.()4! E%/4!&.'4!+)4!&L5)4!-)++'+%,*)4b!)&!E%/4!-)4!-%4T+?!EC%'&*)4!>%=!5.'**%,)/&!%+.*4!*)(5+,*! -)! *S+)1! O/! -./-+'4,./b! ,+! )4&! ,(5.*&%/&! E)! 06*,;,)*! +C);;)&! E)! +C,/D,=,&,./! E)! >%=38%! )&!

Figure 3.2 : Hypothèse sur les mécanismes moléculaires impliquant Rab27a dans la voie de sécrétion des exosomes.

Les corps multivésiculaires sont transportés dans le cytoplasme vers la périphérie cellulaire le long des microtubules par des moteurs moléculaires comme les kinésines. Rab27a pourrait participer au transfert des MVBs vers le cytosquelette d’actine sous-cortical, rôle joué par Rab27b dans les cellules HeLa. Rab27a recruterait pour cela un effecteur capable d’interagir avec la myosine, moteur moléculaire présent sur les microfilaments d’actine. Les MVBs atteignent ainsi la membrane plasmique sur laquelle ils vont s’ancrer avant de fusionner. Rab27a pourrait à ce niveau-là participer à l’ancrage en recrutant un autre effecteur capable d’interagir directement avec la bicouche lipidique (PS) ou avec des protéines associées à celle-ci (syntaxines, SNAP). Après cette étape d’ancrage suit l’étape de fusion, libérant les ILVs dans le milieu extracellulaire. D’autre part, comme il avait été proposé dans les cellules HeLa, Rab27a pourrait empêcher la fusion des MVBs entre eux ou avec d’autres compartiments intracellulaires, leur permettant de fusionner avec la membrane plasmique.

Microtubule Corps multivésiculaire kinésine GTP Groupements géranylgéranyl Rab27a Vésicule intraluminale Microfilament d’actine Effecteur de Rab27a Transfert des MVBs des microtubules sur l’actine Ancrage des MVBs à la membrane plasmique Inhibition de la fusion avec d’autres compartiments Myosine V Effecteur de Rab27a

! "3<! >%=38=!4'*!+%!46-*6&,./!E)4!)H.4.()4b!)&!4'*!+)4!%'&*)4!&L5)4!E)!46-*6&,./b!%0%/&!E)!+)4! '&,+,4)*!5.'*!6&'E,)*!+)4!;./-&,./4!5DL4,.+.@,7')4!E)4!)H.4.()41!

aJ&+Ba89B&HD&GB&PTFCTDEMQ&NHP&HUMPMLHP&

\.'4! %0./4! (./&*6! E%/4! 5+'4,)'*4! (.EI+)4! -)++'+%,*)4! ('*,/4! 7')! >%=38%! 6&%,&! /6-)44%,*)!?!+%!46-*6&,./!E)4!)H.4.()41!M'!5.,/&!E)!0')!(6-%/,4&,7')b!/.&*)!DL5.&DI4)! )4&! 7')! >%=38%! %@,*%,&! E)! +%! (h()! ;%j./! 7')! E%/4! +)4! -)++'+)4! Q)$%!Z! )++)! 5)*()&&*%,&! +C%/-*%@)! E)4! W^_4! ?! +%! ()(=*%/)! 5+%4(,7')! )&#.'! )(5h-D)*%,&! +%! ;'4,./! E)4! W^_4! )/&*)! )'H! N+)'*! 5)*()&&%/&! E)! ;'4,.//)*! %0)-! +%! ()(=*%/)! -)++'+%,*)91! M)! 5+'4b! +%! 5*.&6,/)! >%=38=! /C6&%/&! 5%4! ,(5+,7'6)! E%/4! +%! 46-*6&,./! E)4! )H.4.()4! 5%*! +)4! +,@/6)4! ('*,/)4!%+.*4!7'C)++)!+C6&%,&!E%/4!+)4!-)++'+)4!D'(%,/)4b!/.'4!5.'0./4!,(%@,/)*!7')!E%/4! -)4! -)++'+)4! >%=38%! a.')*%,&! %'44,! +)! *S+)! )/E.446! 5%*! >G_38_! E%/4! +)4! -)++'+)4! D'(%,/)4!Z! +)! &*%/4;)*&! E)4! W^_4! E)5',4! +)! -L&.47')+)&&)! E)! (,-*.&'='+)4! 0)*4! +)! -L&.47')+)&&)! -.*&,-%+! EC%-&,/)! N)/! 5+'4! E'! *S+)! EC%/-*%@)9! N;E]RCH& 7/891! G,/4,b! +)! (6-%/,4()!E)!46-*6&,./!E)4!W^_4!4)*%,&!%+.*4!4)(=+%=+)!%'!(6-%/,4()!E)!46-*6&,./!E)4! (6+%/.4.()4!E%/4! +)47')+4! >%=38%! )4&! ?! +%! ;.,4! ,(5+,7'6)! E%/4! +)! &*%/45.*&! E)4! (6+%/.4.()4!0)*4!+%!56*,5D6*,)!E)!+%!-)++'+)!N['e'E%!)&!%+1b!3FF3=k!n'!)&!%+1b!3FF39b!)&! E%/4! +C%/-*%@)! E)! -)4! -.(5%*&,()/&4! ?! +%! ()(=*%/)! 5+%4(,7')! Nf'*.E%! %/E! ['e'E%b! 3FFK91!!

FJ&+Ba89B&HD&GB&PTFCTDEMQ&NH&\BFDHRCP&PMGRaGHP&

\.'4!%0./4!(./&*6!E%/4!+)4!(.EI+)4!UX#G!)&!KU"!7')!+%!5*.&6,/)!>%=38%b!)/!5+'4! E)!5%*&,-,5)*!?!+%!0.,)!E)!46-*6&,./!E)4!)H.4.()4!5.*&%/&!E)4!(%*7')'*4!)/E.4.(%'Hb! 5%*&,-,5)! ?! +%! 46-*6&,./! E)! ;%-&)'*4! 4.+'=+)41! $C,/D,=,&,./! E)! +C)H5*)44,./! E)! >%=38%b! +.*47'C)++)! (.E'+)! +%! 46-*6&,./! EC'/! ;%-&)'*! 4.+'=+)b! )/&*%,/)! E%/4! +%! (%a.*,&6! E)4! -%4! '/)! %'@()/&%&,./! E)! -)&&)! 46-*6&,./1! Y)&! );;)&! )4&! E./-! .55.46! ?! -)+',! .=4)*06! 4'*! +%! 46-*6&,./! E)4! )H.4.()4b! ,/E,7'%/&! '/! *S+)! E,;;6*)/&! E)! >%=38%! E%/4! +)! (6-%/,4()! (.+6-'+%,*)!E)!-D%-'/)!E)!-)4!0.,)4!E)!46-*6&,./1!U.'4!+)4!;%-&)'*4!4.+'=+)4!/C./&!5%4!+%! (h()!E65)/E%/-)!0,4T?T0,4!E)!+C)H5*)44,./!E)!>%=38%!Z!4)+./!+)4!*64'+&%&4!E'!-*,=+)!4'*! ()(=*%/)b!+%!5+'5%*&!E)4!-D,(,.e,/)4!46-*6&6)4!5%*!+)4!-)++'+)4!KU"!)&!UX#G!+)!4./&!E)! ;%j./!,/E65)/E%/&)!E)!>%=38%1!\.&*)!DL5.&DI4)!)4&!E./-!7')!>%=38%!4)*%,&!EC'/)!5%*&!

Figure 3.3 : Hypothèses sur les mécanismes moléculaires impliquant Rab27a dans la voie de sécrétion des facteurs solubles.

Nos résultats indiquent que Rab27a contrôlerait négativement la voie de sécrétion des chimiokines. Notre hypothèse est que Rab27a inhiberait l’exocytose de façon constitutive des compartiments contenant ces chimiokines. Cet effet inhibiteur serait levé dès la réception d’un stimulus, permettant l’exocytose de façon régulée. Rab27a pourrait être ainsi impliquée à deux niveaux de la voie de sécrétion : A. au niveau de l’ancrage à la membrane plasmique ou B. au niveau de l’ancrage aux microfilaments d’actine. C’est en stabilisant l’ancrage à l’un ou l’autre de ces niveaux que Rab27a empêcherait toute sécrétion en l’absence d’un stimulus.

G-CSF KC MIP3% MCP-1 Fusion G-CSF KC MIP3% MCP-1 Stimulus Fusion

A.

B.

Myosine V Microfilament d’actine G-CSF KC MIP3_% MC P-1 Fusion G-CSF KC MIP3% MCP-1 Stimulus Fusion Compartiment intracellulaire contenant des chimiokines Rab27a-GTP Rab-GTP Effecteur de Rab27a Effecteur de Rab

! "3A! ,(5+,7'6)!E%/4!+%!46-*6&,./!E)4!)H.4.()4!EC.*,@,/)!)/E.4.(%+)b!)&!EC%'&*)!5%*&!E%/4!+%! 46-*6&,./!*6@'+6)!E)!-)*&%,/4!;%-&)'*4!4.+'=+)41!!

\.'4! 4'55.4./4! 7'C,+! )H,4&)*%,&! E)4! -.(5%*&,()/&4! ,/&*%-)++'+%,*)4! E,4&,/-&4! E)4! W^_4!,(5+,7'64!E%/4!+%!46-*6&,./!E)4!)H.4.()4!)&!7',!-./&,)/E*%,)/&!-)*&%,/4!;%-&)'*4! 4.+'=+)4!N5%*(,!+)47')+4!/.'4!%0./4!,E)/&,;,6!+)!cTYX[b!fYb!WY:T"!)&!WB:TJ!9!)&!E./&!+%! 46-*6&,./!4)*%,&!*6@'+6)!5%*!>%=38%1!s/)!5*)(,I*)!DL5.&DI4)!5.'*!)H5+,7')*!+)!*S+)!E)! >%=38%!E%/4!-)&&)!4.,)!E)!46-*6&,./!4)*%,&!7')!>%=38%b!%5*I4!%0.,*!6&6!*)-*'&6)!4'*!-)4! -.(5%*&,()/&4b! 5%*&,-,5)*%,&! +)'*! %/-*%@)! ?! +%! ()(=*%/)! 5+%4(,7')b! (%,4! 4.'4! '/)! ;.*()!E,&)!l!,/)*&)!mb!)/!%&&)/E%/&!+C,/E'-&,./!E)!+%!;'4,./!5%*!'/!4&,('+'4!N;E]RCH& 7/7& "91!G,/4,b!+.*47')!+C)H5*)44,./!E)!>%=38%!)4&!,/D,=6)!E%/4!+)4!-)++'+)4b!+%!46-*6&,./!E)!-)4! -.(5%*&,()/&4! 4)! ;)*%,&! E)! ;%j./! -./4&,&'&,0)b! ,/E65)/E%(()/&! E)! &.'&! 4&,('+,b! %L%/&! 5.'*!-./467')/-)!+C%'@()/&%&,./!E)!+%!7'%/&,&6!E)!-L&.e,/)4!+,=6*6)4!E%/4!+)!(,+,)'!E)! -'+&'*)1! Y)+%! 4'55.4)! 7')! EC%'&*)4! (.+6-'+)4! 5)*()&&*%,)/&! +C%/-*%@)! E)4! 064,-'+)4! )&! >%=38%! ,/&)*0,)/E*%,&! 5.'*! 4&%=,+,4)*! +C%/-*%@)! )&! 5*60)/,*! +%! ;'4,./! E%/! +C%&&)/&)! EC'/! 4,@/%+! E)! 46-*6&,./1! $C)H,4&)/-)! E)! l!064,-'+)4! ,/)*&)4!m! %/-*6)4! ?! +%! ()(=*%/)! 5+%4(,7')! %! E6a?! 6&6! (,4)! )/! 60,E)/-)! E%/4! +)4! -)++'+)4! $5%/-*6%&,7')4! )&! +)4! -)++'+)4! /)'*.)/E.-*,/)41! O/! );;)&b! +%! 4'*)H5*)44,./! E)! X+5Kb! '/! );;)-&)'*! E)! >%=38%b! E%/4! -)4! -)++'+)4! )/&*%,/)! '/)! %'@()/&%&,./! E)4! 064,-'+)4! %/-*6)4! ?! +%! ()(=*%/)! (%,4! '/)! E,(,/'&,./! E)! +)'*! 46-*6&,./! E)! ;%j./! E65)/E%/&)! E)! >%=38%! NY.55.+%! )&! %+1b! 3FF3k! ['e'E%! )&! %+1b! 3FF3%k! U.*,,! )&! %+1b! 3FFKk! U.*,,! )&! %+1b! 3FF3k! U4'=.,! %/E! ['e'E%b! 3FF291! :.'*&%/&! +%! 4'*)H5*)44,./! E)! >%=38%! E%/4! -)4! (h()4! -)++'+)4! )/&*%i/)! '/)! %'@()/&%&,./! )&! /./! '/)! E,(,/'&,./! E)! +%! 46-*6&,./b! ,/E,7'%/&! 7')! >%=38%! 5)*()&! +%! -./4&,&'&,./!EC'/!5..+!E)!064,-'+)4!%/-*6)4!?!+%!()(=*%/)!5+%4(,7')b!E,45./,=+)4!5.'*! +%!;'4,./!+.*47'C'/!4&,('+'4!)4&!*)j'!5%*!+%!-)++'+)!N['e'E%!)&!%+1b!3FF3%k!z,!)&!%+1b!3FF391! >%=38%!5)'&!E./-!a.')*!?!+%!;.,4!+)!*S+)!E)!*6@'+%&)'*!5.4,&,;!)&!E)!*6@'+%&)'*!/6@%&,;!N0,%! X+5K9! E)! +%! 46-*6&,./! E)! @*%/'+)4! 456-,;,7')41! \.4! *64'+&%&4! 4C.55.4)/&! ?! -)'H! E)! +%! 4'*)H5*)44,./! E)! >%=38%! E%/4! +)4! -)++'+)4! /)'*.)/E.-*,/)4b! (%,4! ,+4! -.**I+)/&! %0)-! +)4! )H56*,)/-)4! EC,/D,=,&,./! .'! E)! 4'*)H5*)44,./! E)! X+5Kb! ,/E,7'%/&! '/! 5.44,=+)! *S+)! E)! >%=38%! E%/4! +C%/-*%@)! E)! 064,-'+)4! l!,/)*&)4!m! ?! +%! ()(=*%/)! 5+%4(,7')! E)4! -)++'+)4! 65,&D6+,%+)4!KU"!)&!UX#G1!!

s/!%'&*)!(6-%/,4()!5.'**%,&!)H5+,7')*!-.(()/&!+C,/D,=,&,./!E)!>%=38%!,/E',*%,&! '/)!%'@()/&%&,./!E)!+%!46-*6&,./!E)4!;%-&)'*4!4.+'=+)4!N;E]RCH& 7/7& #91!O/!);;)&b!,+!%!6&6! (./&*6! E%/4! +)4! -)++'+)4! -D*.(%;;,/)4! E)4! @+%/E)4! (6E'++.4'**6/%+)4! 7')! >%=38%!

! "JF! 5%*&,-,5%,&! ?! +C%/-*%@)! E)4! 064,-'+)4! %'! -L&.47')+)&&)! -.*&,-%+! EC%-&,/)! %5*I4! &*%/4;)*&! E)5',4!+)!*64)%'!E)!(,-*.&'='+)4!)&!%0%/&!%/-*%@)!)&!;'4,./!?!+%!()(=*%/)!5+%4(,7')1! s/)! 4'*)H5*)44,./! E)! >%=38%! )/&*%i/)! %+.*4! '/! %/-*%@)! )H-)44,;! E)4! @*%/'+)4! E)! 46-*6&,./! %'H! (,-*.;,+%()/&4! EC%-&,/)b! ,/D,=%/&! +)'*! ,/&)*%-&,./! %0)-! +%! ()(=*%/)! 5+%4(,7')! )&! E./-! +%! 46-*6&,./! E)! +)'*! -./&)/'! NM)4/.4! )&! %+1b! 3FFJ91! M%/4! +)4! -)++'+)4! KU"!)&!UX#Gb!>%=38%!5.'**%,&!E./-!(%,/&)/,*!+)4!064,-'+)4!E)!46-*6&,./!%/-*6)4!4'*!+)4! (,-*.;,+%()/&4!EC%-&,/)!)/!%&&)/E%/&!'/!4,@/%+!7',!,/E',*%,&!+%!*)5*,4)!E'!&*%/45.*&!)&!+%! ;'4,./1!X)+./!-)!(6-%/,4()b!+C,/D,=,&,./!E)!>%=38%!,/E',*%,&!)/!);;)&!'/)!%'@()/&%&,./! E)! +%! 46-*6&,./! E)4! ;%-&)'*4! 4.+'=+)4b! ?! -./E,&,./! &.'&);.,4! 7')! EC%'&*)4! 5*.&6,/)4! 5)*()&&)/&!+C%&&%-D)()/&!)&!+)!&*%/45.*&!E)4!064,-'+)4!E)!46-*6&,./!4'*!+)!-L&.47')+)&&)! EC%-&,/)1!!

$)4! E.//6)4! E)! +%! +,&&6*%&'*)! 4.'+,@/)/&! +%! @*%/E)! 0%*,6&6! E)! ;./-&,./4! 7')! +)4! 5*.&6,/)4! >%=38b! )&! 5+'4! 5%*&,-'+,I*)()/&! >%=38%b! 5)'0)/&! )H)*-)*! E%/4! +)4! 0.,)4! E)! 46-*6&,./!E)!-.(5%*&,()/&4!456-,%+,4641!\.4!*64'+&%&4!(./&*)/&!7')!>%=38%!5)'&!a.')*! E,;;6*)/&4!*S+)4!E%/4!E,;;6*)/&)4!0.,)4!E)!46-*6&,./!%'!4),/!EC'/!(h()!&L5)!-)++'+%,*)1!! !

7[&5HCP^HFDEYHP&

! >%=38%! 5%*&,-,5)! %'H! 0.,)4! E)! 46-*6&,./! E)4! )H.4.()4! )&! E)! 5+'4,)'*4! ;%-&)'*4! 4.+'=+)4!4)+./!E)4!(6-%/,4()4!(.+6-'+%,*)4!0,4,=+)()/&!E,;;6*)/&4b!(%,4!+)47')+4!`!:.'*! *65./E*)! ?! -)&&)! 7')4&,./! /.'4! 0.'E*,./4! 6&'E,)*! +)4! -.(5%*&,()/&4! ,/&*%-)++'+%,*)4! *)45./4%=+)4! E)! -)4! E)'H! &L5)4! E)! 46-*6&,./! )&! +)'*! -.(5.*&)()/&! )/! 5*64)/-)! .'! %=4)/-)!E)!>%=38%1!!

N"9! Y./-)*/%/&! +)! 0)*4%/&! l!)H.4.()4!mb! /.'4! %/%+L4)*./4! +)! /.(=*)b! +%! *65%*&,&,./! 4'=-)++'+%,*)! )&! +%! &%,++)! E)4! W^_4b! 5%*! (,-*.4-.5,)! ?! ;+'.*)4-)/-)! )&! 5%*! (,-*.4-.5,)! 6+)-&*./,7')! ?! &*%/4(,44,./b! 5',4! +)4! E65+%-)()/&4! E)! -)4! -.(5%*&,()/&4! )&! +)'*! %/-*%@)! ?! +%! ()(=*%/)! 5+%4(,7')! 5%*! (,-*.4-.5,)! ?! ./E)! 60%/)4-)/&)1! \.'4! -.(5%*)*./4!)/4',&)!/.4!E.//6)4!%0)-!+)4!*64'+&%&4!.=&)/'4!E%/4!+)4!-)++'+)4!D'(%,/)4! Q)$%! 5%*! ]4&*.d4e,b! W1! 23#.41! %;,/! E)! E6&)*(,/)*! 4,! +)4! ;./-&,./4! a.'6)4! 5%*! +%! 5*.&6,/)! >%=38%! ('*,/)! E%/4! +)4! -)++'+)4! KU"! )&! UX#G! 4./&! +)4! (h()4! 7')! -)++)4! E)4! 5*.&6,/)4! D'(%,/)4!>G_38G!)&!>G_38_1!$)!(6-%/,4()!(.+6-'+%,*)!5.'**%!)/4',&)!h&*)!-.(5+6&6! )/! E6&)*(,/%/&! 7')+4! );;)-&)'*4! E)! >%=38%! 5%*&,-,5)/&! ?! 4./! %-&,./! E%/4! +%! 0.,)! E)! 46-*6&,./!E)4!)H.4.()41!!

! "J"! N39! Y./-)*/%/&! +)! *S+)! E)! >%=38%! E%/4! +%! 46-*6&,./! E)4! ;%-&)'*4! 4.+'=+)4b! ,+! 4)*%,&! ,/&6*)44%/&! EC%/%+L4)*! 5%*! (,-*.4-.5,)! ?! ;+'.*)4-)/-)! E%/4! 7')+4! -.(5%*&,()/&4! -)++'+%,*)4! 4)! &*.'0)/&! +)4! ;%-&)'*4! 4.+'=+)4! cTYX[b! fYb! WY:T"b! WB:TJ!! )&! >G\UOX! )&! 4,! +C./!5)'&!()&&*)!)/!60,E)/-)!+)!*)-*'&)()/&!E)!>%=38%!4'*!-)4!-.(5%*&,()/&41!Y.(()! E)4!%/&,-.*54!456-,;,7')4!E)!>%=38%!/)!4./&!5%4!E,45./,=+)4b!,+!;%'E*%!,/E',*)!E%/4!+)4! -)++'+)4! +C)H5*)44,./! E)! +%! 5*.&6,/)! >%=38%! ;'4,.//6)! ?! +%! c[:1! \.'4! 5.'**./4! %+.*4! 0,4'%+,4)*! +)4! -.(5%*&,()/&4! 7',! 5.*&)/&! >%=38%! ?! +)'*! 4'*;%-)! )/! (,-*.4-.5,)! ?! ;+'.*)4-)/-)!(%,4!%'44,!)/!(,-*.4-.5,)!6+)-&*./,7')!?!&*%/4(,44,./1!:%*!(%*7'%@)!E)4! -L&.e,/)4!EC,/&6*h&b!.'!4,!/6-)44%,*)!)H5*)44,./!E)!-)4!-L&.e,/)4!;'4,.//6)4!?!'/)!%'&*)! 5*.&6,/)! ;+'.*)4-)/&)b! /.'4! 6&'E,)*./4! +)! -./&)/'! )/! -D,(,.e,/)4! E)4! -.(5%*&,()/&4! %L%/&!*)-*'&6!>%=38%1!Y)4!-.(5%*&,()/&4!4)*./&!)/4',&)!-%*%-&6*,464!N5*64)/-)!.'!/./! E)! (%*7')'*4! 456-,;,7')4! E)4! E,;;6*)/&4! -.(5%*&,()/&4! ,/&*%-)++'+%,*)49b! 5',4! +)'*! +.-%+,4%&,./b! +)'*! (.*5D.+.@,)b! +)'*4! E65+%-)()/&4! )&! +)'*! -%5%-,&6! EC%/-*%@)! ?! +%! ()(=*%/)!5+%4(,7')!4)*./&!%/%+L464!)/!5*64)/-)!)&!)/!%=4)/-)!E)!>%=38%!E%/4!+)!='&! E)!-.(5*)/E*)!+)!*S+)!E)!+%!5)&,&)!cU:%4)!E%/4!+%!46-*6&,./!E)4!;%-&)'*4!4.+'=+)41!O/;,/b! /.'4! *)-D)*-D)*./4! 7')+4! 4./&! +)4! );;)-&)'*4! E)! >%=38%! 7',! 4./&! /6-)44%,*)4! ?! 4./! ,(5+,-%&,./! E%/4! +%! 0.,)! E)! 46-*6&,./! *6@'+6)! E)4! ;%-&)'*4! 4.+'=+)41! \.'4! /.'4! E)(%/E./4! /.&%(()/&! 4,! -)! 4./&! E)4! );;)-&)'*4! E,;;6*)/&4! 7',! 4./&! ,(5+,7'64! E%/4! +%! 0.,)! E)! 46-*6&,./! E)4! )H.4.()4! )&! E%/4! +%! 0.,)! E)! 46-*6&,./! E)4! ;%-&)'*4! 4.+'=+)41! $CDL5.&DI4)! 5*,0,+6@,6)! 4)*%,&! 7')! -)! /)! 4.,&! )/! );;)&! 5%4! +)4! (h()4! );;)-&)'*4! 7',! 5%*&,-,5)/&! ?! -D%-'/)! E)4! E)'H! 0.,)4b! 5)*()&&%/&! ?! >%=38%! E)! a.')*! E,;;6*)/&)4! ;./-&,./4b! EC'/)! 5%*&! E%/4! '/)! 0.,)! E)! 46-*6&,./! -./4&,&'&,0)! )&! EC%'&*)! 5%*&! E%/4! '/)! 0.,)! E)! 46-*6&,./! *6@'+6)b! (%,4! -)+%! *)4&)! ?! E6&)*(,/)*1! O/;,/b! ,+! 4)*%,&! ,/&6*)44%/&! EC6&'E,)*! +)! *S+)! E)! >%=38%! E%/4! +%! 46-*6&,./! E)4! -D,(,.e,/)4! 5%*! +)4! -)++'+)4! ,(('/,&%,*)4b!7',!4./&!E)4!-)++'+)4!456-,%+,46)4!E%/4!-)!&L5)!E)!46-*6&,./1!$%!5+'5%*&!E)4! (6-%/,4()4!(.+6-'+%,*)4!,(5+,7'64!E%/4!+%!46-*6&,./!*6@'+6)!E)!/.(=*)'4)4!-L&.e,/)4! 5%*! +)4! E,0)*4)4! 5.5'+%&,./4! ,(('/,&%,*)4! /)! 4./&! 5%4! -.//'4! )&! +)4! 5*.&6,/)4! >%=38! 5.'**%,)/&!h&*)!E)!=.//)4!-%/E,E%&)4!?!6&'E,)*!E%/4!-)!-./&)H&)b!)/!5+'4!E)!+)'*4!*S+)4! E6a?! -.//'! E%/4! +%! 46-*6&,./! E)! @*%/'+)4! E%/4! +)4! +L(5D.-L&)4! U! NQ%EE%E! )&! %+1b! 3FF"k! X&,/-D-.(=)! )&! %+1b! 3FF"9b! /)'&*.5D,+)4! NQ)**)*.TU'**,./! )&! %+1b! 3FF<k! g.D/4./! )&! %+1b! 3F"F9b!-)++'+)4!\f!N$,'!)&!%+1b!3F"F%9!)&!5+%7')&&)4!NU,d%*,!)&!%+1b!3FFJk!U.+(%-D.0%!)&!%+1b! 3FF891!

! "J3! ! O/;,/b! +)! -*,=+%@)! 7')! /.'4! %0./4! );;)-&'6! %! *606+6! 7')! +%! 46-*6&,./! E)! -)*&%,/)4! (6&%++.5*.&6%4)4b!WW:3!)&!5*.TWW:Ab!6&%,&!E,(,/'6)!5%*!+C,/D,=,&,./!E)!>%=38%1!\.'4! /.'4! E)(%/E./4! 4,! -)&&)! E,(,/'&,./! )4&! E')! ?! +C,/-.*5.*%&,./! E)! -)4! (6&%++.5*.&6%4)4! E%/4! +)4! )H.4.()41! \.'4! %++./4! E./-! 7'%/&,;,)*! +%! 5*64)/-)! E)! WW:3! )&! N5*.T9! WW:A! 5%*!O$BXG!.'!d)4&)*/!=+.&!E%/4!+)4!)H.4.()4!E)4!-)++'+)4!KU"!.'!UX#G1!X,!+)4!)H.4.()4! 4./&!5.*&)'*4!E)!-)4!(6&%++.5*.&6%4)4b!,+4!5.'**%,)/&!;%0.*,4)*!+%!-*.,44%/-)!&'(.*%+)!)&! +%!E,446(,/%&,./!(6&%4&%&,7')b!)&!%,/4,!a.')*!'/!*S+)!5*.T&'(.*%+!7')!/.'4!/C%0./4!5%4! 6&'E,6!%'!-.'*4!E)!(./!5*.a)&!E)!&DI4)1!! ! !! !

**'4&$%(&%6-(-)%(&%!&$"&+%5-.(%&))1.!"*+%&!1)-+"$%&**

! I[&$HP&GELEDHP&NR&DCBYBEG& ! M%/4!-)&&)!6&'E)b!+)!*S+)!E)4!)H.4.()4!E%/4!+%!*65./4)!,(('/,&%,*)!&'(.*%+)b!.'! 5+'4! @6/6*%+)()/&! E%/4! +%! -*.,44%/-)! &'(.*%+)! )&! +)! E60)+.55)()/&! (6&%4&%&,7')b! )4&! E,;;,-,+)!?!(./&*)*!%0)-!-)*&,&'E)!5.'*!5+'4,)'*4!*%,4./4!Z!!

N"9! $%! 5*)(,I*)! )4&! 7')! /.'4! /C%0./4! 5%4! 5'! (./&*)*! +)! (%,/&,)/! E)! +C,/D,=,&,./! E)! +C)H5*)44,./!E)!>%=38%!!"#$!$%b!5)/E%/&!)&!?!+%!;,/!E)!+%!-*.,44%/-)!E)4!&'()'*41!O/!);;)&b! >%=38%!)4&!)H5*,(6)!&*I4!;.*&)()/&!5%*!5+'4,)'*4!5.5'+%&,./4!E)!-)++'+)4!,(('/,&%,*)4b! E./&! +)4! /)'&*.5D,+)4! 7',! )/0%D,44)/&! +)4! &'()'*4! KU"! )/! &*I4! @*%/E! /.(=*)b! -)! 7',! (%47')!+)!/,0)%'!EC)H5*)44,./!E%/4!+)4!-)++'+)4!&'(.*%+)41!!

N39! \.'4! /C%0./4! 5%4! /./! 5+'4! 5'! ()4'*)*! +%! 7'%/&,&6! EC)H.4.()4! 46-*6&64! 5%*! +)4! &'()'*4! E%/4! +%! -,*-'+%&,./! 4%/@',/)! E)4! %/,(%'H! -%*! /.'4! /)! 5.446E./4! 5%4! E)! (%*7')'*4!/.'4!5)*()&&%/&!E)!E,4&,/@')*!+)4!)H.4.()4!&'(.*%'H!E)4!%'&*)4!)H.4.()4! 5*.E',&4! E%/4! +C.*@%/,4()1! \.'4! /C%0./4! E./-! 5%4! 5'! -./;,*()*! +)! (%,/&,)/! E)! +C,/D,=,&,./!E)!+%!46-*6&,./!E)4!)H.4.()4!!"#$!$%1!$)4!&'()'*4!%'*%,)/&!5'!h&*)!E,44.-,6)4! )&! *)(,4)4! )/! -'+&'*)! %;,/! E)! 7'%/&,;,)*! +%! 46-*6&,./! !"#$!36%! %5*I4! +%! -*.,44%/-)! !"#$!$%1! Y)5)/E%/&b! ,+! L! %! =)%'-.'5! E)! -)++'+)4! )/! /6-*.4)! E%/4! +)4! &'()'*4b! )&! +)4! 6&%5)4! E)! E,44.-,%&,./!%'@()/&)/&!)/-.*)!+)!/.(=*)!E)!-)++'+)4!(.*&)41!$)4!-'+&'*)4!4)*%,)/&!E./-! ;.*&)()/&! -./&%(,/6)4! 5%*! E)4! @*.44)4! 064,-'+)4! )&! E)4! -.*54! %5.5&.&,7')4b! /)! 5)*()&&%/&! 5%4! '/)! 7'%/&,;,-%&,./! -.**)-&)! E)! +%! 46-*6&,./! E)4! )H.4.()41! M)! 5+'4b! +)4! &'()'*4!KU"!-./&*S+)4!)&!-)++)4!/C)H5*,(%/&!5%4!>%=38%!./&!E)4!&%,++)4!&*I4!D6&6*.@I/)4b!

! "JJ! +%!7'%/&,&6!E)!-)++'+)4!/6-*.&,7')4!4)*%!E./-!&*I4!E,;;6*)/&)!)/&*)!+)4!E)'H!-./E,&,./4!-)! 7',!5.'**%,&!,/E',*)!'/!=,%,4!E%/4!+)4!7'%/&,;,-%&,./41!Y)!&L5)!E)!-'+&'*)!28#$!$%!/)!/.'4! 4)(=+)!E./-!5%4!5)*()&&*)!'/)!7'%/&,;,-%&,./!;,%=+)!E)!+%!46-*6&,./!E)4!)H.4.()41!! NJ9! $)! *S+)! *6)++)()/&! a.'6! 5%*! +)4! )H.4.()4! E%/4! /.&*)! 6&'E)! %! 6&6! 5%*&,-'+,I*)()/&! *)(,4! )/! -%'4)! 5%*! +)! ;%,&! 7')! >%=38%! /C%@,&! 5%4! 456-,;,7')()/&! E%/4! +)'*! 0.,)! E)! 46-*6&,./1! O/! ,/D,=%/&! >%=38%b! /.'4! (.E'+./4! +%! 46-*6&,./! E)4! )H.4.()4! )&! E)! -D,(,.e,/)4b! -)! 7',! 4,@/,;,)! 7')! /.'4! (.E'+./4! +C)/0,*.//)()/&! &'(.*%+! E)! 5+'4,)'*4! ;%j./41!\.'4!%0./4!Eo!*6%+,4)*!E)4!)H56*,)/-)4!-.(5+6()/&%,*)4!!"#$!36%!%;,/!E)!(./&*)*! 7')! +)4! )H.4.()4! 6&%,)/&! ,(5+,7'64! E%/4! +%! (.E'+%&,./! E)4! 5.5'+%&,./4! ,(('/,&%,*)4b! (%,4! %'44,! 7'C,+4! /C%@,44%,)/&! 5%4! 4)'+4! )&! 7')! +)4! ;%-&)'*4! 4.+'=+)4! 6&%,)/&! ,(5.*&%/&4! 5.'*!5)*()&&*)!+)'*!%-&,./1!!

! \.'4!%0./4!,E)/&,;,6!'/)!5.5'+%&,./!E)!-)++'+)4!,(('/,&%,*)4b!+)4!/)'&*.5D,+)4!.'! +)4! -)++'+)4! (L6+.VE)4! 4'55*)44,0)4b! 7',! 4C%--'('+)/&! =)%'-.'5! E%/4! +)4! &'()'*4! KU"! -./&*S+)4b! (%,4! &*I4! 5)'! E%/4! +)4! &'()'*4! KU"! /C)H5*,(%/&! 5%4! >%=38%1! \.'4! %0./4! E./-! 4'55.46! 7')! -)&&)! 5.5'+%&,./! *)-*'&6)! E)! ;%j./! E65)/E%/&)! E)! >%=38%! N)&! 5)'&T h&*)!E)4!)H.4.()49!5.'0%,&!h&*)!*)45./4%=+)!E)!+C);;)&!5*.T&'(.*%+!E)!>%=38%!E%/4!-)4! &'()'*41! Y)5)/E%/&b! ,+! )4&! E,;;,-,+)! E)! 4%0.,*! 4,! +%! (.E'+%&,./! E'! *)-*'&)()/&! E)! -)4! /)'&*.5D,+)4#WMXY4!)4&!+%!-%'4)!.'!+%!-./467')/-)!E)4!E,;;6*)/-)4!E)!-*.,44%/-)1!\.'4! %'*,./4!0.'+'!(./&*)*!+)!*S+)!5*.T&'(.*%+!E)!-)4!-)++'+)4!,(('/,&%,*)4b!(%,4!Z!!

N"9! \.'4! /C%0./4! 5%4! *6'44,! ?! E65+6&)*! );;,-%-)()/&! +)4! /)'&*.5D,+)4#WMXY4! E%/4! +)4! 4.'*,4!/,!E%/4!+)4!&'()'*4!?!+C%,E)!E)!+C%/&,-.*54!456-,;,7')!%/&,T$L2c!N-+./)!"G<9!E./&! +C'&,+,4%&,./!)&!+C);;,-%-,&6!./&!5.'*&%/&!6&6!(./&*6)4!E%/4!5+'4,)'*4!6&'E)4!NM%+)L!)&!%+1b! 3FF<k! [*,E+)/E)*! )&! %+1b! 3FFA91! \.'4! 5)/4./4! 7')! +%! &'()'*! KU"! ,/E',&! +C%--'('+%&,./! EC'/)!&)++)!7'%/&,&6!E)!/)'&*.5D,+)4!E%/4!+%!4.'*,4!N*%&)b!4%/@b!&'()'*9!7'C,+!)4&!5*)47')! ,(5.44,=+)!E)!+)4!E65+6&)*!);;,-%-)()/&b!(h()!%0)-!'/)!@*%/E)!7'%/&,&6!EC%/&,-.*541!s/! @*.'5)!%!&.'&!E)!(h()!);;)-&'6!'/)!E65+6&,./!E)4!/)'&*.5D,+)4!E%/4!E)4!4.'*,4!5.*&%/&! E)4!&'()'*4!KU"!Nc*%/.&!)&!%+1b!3F""91!$)!5*.&.-.+)!'&,+,46!N,/a)-&,./!E)!+C%/&,-.*54!&.'4! +)4!a.'*4!5',4!E)'H!;.,4!5%*!a.'*!?!5%*&,*!E'!"K)_{!a.'*!E)!-*.,44%/-)9!)&!+%!;%,=+)!);;,-%-,&6!}

E)! +%! E65+6&,./! E%/4! +)! 4%/@! %5*I4! +)! "F)_{! a.'*! E)! -*.,44%/-)! -./;,*()! +%! E,;;,-'+&6! ?!}

6+,(,/)*! -)&&)! 5.5'+%&,./! ,(('/,&%,*)! E%/4! +)! -%4! E'! (.EI+)! KU"1! M)! 5+'4! E%/4! +)'*! 6&'E)b!+%!E65+6&,./!%'!4),/!E)!+%!&'()'*!)++)T(h()!/C)4&!5%4!5*64)/&6)b!.*!-C)4&!-)!5.,/&! 7',! /.'4! ,/&6*)44)! &.'&! 5%*&,-'+,I*)()/&b! )&! (h()! 4,! +%! E65+6&,./! E%/4! +)! 4%/@! 4)(=+)! );;,-%-)!)/!E6='&!E)!-*.,44%/-)b!/.4!)H56*,)/-)4!,/E,7')/&!7')!+)4!/)'&*.5D,+)4!5)'0)/&!

! "JK! -./&,/')*! ?! 4C%--'('+)*! E%/4! +%! &'()'*1! $C,/a)-&,./! E)! +C%/&,-.*54! E,*)-&)()/&! E%/4! +%! &'()'*!/)!/.'4!%!5%4!/./!5+'4!5)*(,4!EC)(5h-D)*!+)!*)-*'&)()/&!E)!-)&&)!5.5'+%&,./1!! N39!\.'4!%'*,./4!0.'+'!6&'E,)*!+)4!;./-&,./4!E)4!-)++'+)4!YM""=x#$L2Yx#$L2cx!%;,/!E)! E6&)*(,/)*!4,!)++)4!%0%,)/&!'/)!;./-&,./!,(('/.4'55*)44,0)!-+%44,7')()/&!%44.-,6)!%'H! WMXY41!$)4!/)'&*.5D,+)4!)&!WMXY4!/)!5)'0)/&!h&*)!E,4&,/@'64!/,!(.*5D.+.@,7')()/&!/,! 5D6/.&L5,7')()/&!Z! +)4! (%*7')'*4! 5*64)/&4! ?! +%! 4'*;%-)! E)! -)4! -)++'+)4! )&! +)4! )/PL()4! ,(5+,7'6)4! E%/4! +)4! E,;;6*)/&)4! ;./-&,./4! )H)*-6)4! 4./&! 5*64)/&4! %'44,! =,)/! E%/4! +)4! /)'&*.5D,+)4! 7')! E%/4! +)4! WMXY41! W%+D)'*)'4)()/&b! +C%-&,0,&6! ,(('/.4'55*)44,0)! E)4! WMXY4!)4&!(.,/4!;%-,+)!?!()&&*)!)/!60,E)/-)!+.*47')!+C./!&*%0%,++)!%0)-!E)4!(.EI+)4!EC'/! ;./E! @6/6&,7')! %'&*)! 7')! +)! ;./E! YR8_+#21! Y)-,! )4&! Eo! %'! ;%,&! 7')! +)4! );;)&4! ,(('/.4'55*)44)'*4! 456-,;,7')4! E)! +C%/&,@I/)! )H)*-64! 5%*! +)4! WMXY4! 4./&! 5+'4! ;%-,+)()/&! E6&)-&%=+)4! 7')! +)4! );;)&4! /./! 456-,;,7')41! Y)*&%,/)4! 5.5'+%&,./4! E)! WMXY4b! /.&%(()/&!-)++)4!5*64)/&)4!E%/4!+)4!.*@%/)4!56*,5D6*,7')4!N*%&)!)&!@%/@+,./4!E*%,/%/&4! +)4! &'()'*49b! /)! 4)(=+)/&! ,/D,=)*! +%! *65./4)! U! 7')! E)! ;%j./! 456-,;,7')! E)! +C%/&,@I/)! 7'C)++)4!5*64)/&)/&!Nc%=*,+.0,-D!)&!%+1b!3FF"k!W.0%D)E,!)&!%+1b!3FF<k!\%@%*%a!)&!%+1b!3FF8k! n%&%/%=)!)&!%+1b!3FF<91!Y)-,!5)'&!h&*)!60%+'6!E%/4!+)!-%4!EC'/!;./E!@6/6&,7')!YR8_$#2! 5%*!+C'&,+,4%&,./!E)!$U!]UTB!)&!]UTBB!-.(()!-,=+)4!E)4!WMXY4b!-)4!$U!5*.0)/%/&!E)!4.'*,4! &*%/4@6/,7')4! E)! ;./E! YR8_$#21! M)4! .'&,+4! E)! -)! &L5)! 4./&! (.,/4! E,45./,=+)4! +.*47')! +C./! &*%0%,++)! %0)-! E)4! 4.'*,4! E)! ;./E! _%+=#-! -.(()! -C)4&! +)! -%4! E%/4! /.&*)! 6&'E)1! $)4! WMXY4!5*64)/&)4!%'!4),/!E)4!&'()'*4!4./&!)++)4!-%5%=+)4!EC,/E',*)!'/)!4'55*)44,./!E)! +C%-&,0%&,./!E)4!$U!E65)/E%/&)!)&!,/E65)/E%/&)!E)!+C%/&,@I/)!NY.*P.!)&!%+1b!3F"F9b!(%,4! )++)4! 4./&! 5+'4! E,;;,-,+)4! ?! 5'*,;,)*! 6&%/&! E.//6! +)4! /.(=*)'H! %@*6@%&4! 7',! 4)! ;.*()/&! E%/4! +)4! 4'45)/4,./4! E)! &'()'*41! $)4! 7')+7')4! )H56*,)/-)4! 7')! /.'4! %0./4! )44%L6)4! E%/4! +)! ='&! E)! ()&&*)! )/! 60,E)/-)! '/)! %-&,0,&6! ,(('/.4'55*)44,0)! /./! 456-,;,7')! E)! +C%/&,@I/)!N5%*!4&,('+%&,./!%0)-!E)4!%/&,-.*54!%/&,TYMJ!)&!%/&,TYM3<9!?!5%*&,*!E)!WMXY4! 5'*,;,6)4!E)!+%!*%&)!.'!E)4!&'()'*4!/)!/.'4!./&!5%4!5)*(,4!E)!-./-+'*)b!)&!E)4!(,4)4!%'! 5.,/&! 4)*./&! /6-)44%,*)4! %0%/&! EC.=&)/,*! '/)! *65./4)1! \.'4! /)! -.//%,44./4! E./-! 5%4! )/-.*)!+%!*6)++)!/%&'*)!E)!-)4!-)++'+)41!!

! O/;,/b! +)! ;%,&! 7')! +C,/D,=,&,./! E)! +C)H5*)44,./! E)! >%=38%! %,&! '/! );;)&! 4'*! +)! E60)+.55)()/&!&'(.*%+!E%/4!+)!(.EI+)!KU"b!(%,4!5%4!E%/4!+)!(.EI+)!UX#G!-.(5+)H,;,)! +)! ()44%@)! 5.*&6! 5%*! -)! &*%0%,+b! +)! *)/E%/&! (.,/4! 5)*-'&%/&1! O/! );;)&b! /.'4! /)! 5.'0./4! 5%4! 5*.5.4)*! '/! (.EI+)! l!'/,0)*4)+!m! ,(5+,7'%/&! >%=38%! )&! +)4! )H.4.()4! &'(.*%'H! E%/4! +)! E60)+.55)()/&! &'(.*%+b! (.EI+)! ;.*-6()/&! '/! 5)'! 4,(5+,4&)! 6&%/&! E.//6! +%!

! "JR! E,0)*4,&6!7')!/.'4!-.//%,44./4!E%/4!+)!(./E)!E'!0,0%/&b!(%,4!,(5+,-,&)()/&!)H,@6!5%*! -)*&%,/4!a.'*/%'H!4-,)/&,;,7')41!:.'*&%/&!a)!5)/4)!7')!-)&&)!.=4)*0%&,./!)4&!%'!-./&*%,*)! &*I4! ,/&6*)44%/&)! )&! /)! ;%,&! 7')! 4.'+,@/)*! +%! 0%*,6&6! E)4! (6-%/,4()4! =,.+.@,7')4! 7',! )H,4&)/&!)&!5+'4!5%*&,-'+,I*)()/&!-)'H!(,4!)/!5+%-)!5%*!+)4!&'()'*4!5.'*!5)*()&&*)!+)'*! -*.,44%/-)1! \.'4! %0./4! 6&'E,6! ,-,! E)'H! (.EI+)4! &'(.*%'H! 7',! 5*.0,)//)/&! E'! (h()! &,44'!Z! +C65,&D6+,'(! (%((%,*)1! :.'*&%/&b! (h()! 4,! -)4! &'()'*4! 5.'44)/&! ?! +%! (h()! 0,&)44)! %5*I4! ,/a)-&,./! 4.'4T-'&%/6)b! )++)4! ./&! E)4! -.(5.*&)()/&4! &*I4! E,;;6*)/&4!Z! N"9! aC%,!5'!.=4)*0)*!7')!+)4!&'()'*4!5*,(%,*)4!7',!4)!E60)+.55)/&!/C./&!5%4!+)!(h()!%45)-&! 5DL4,7')b! +)4! KU"! 6&%/&! &*I4! 4.+,E)4! )&! E'*)4! %+.*4! 7')! +)4! UX#G! 4./&! (.++)4! )&! 4)! E,4+.7')/&!;%-,+)()/&!k!N39!+)4!KU"!,/E',4)/&!E)4!(6&%4&%4)4!E)5',4!+%!&'()'*!5*,(%,*)b! %+.*4! 7')! +)4! UX#G! 7')! /.'4! '&,+,4./4! /C)/! ,/E',4)/&! 5%4b! )&! )++)4! /)! ;.*()/&! EC%,++)'*4! 5%4!/./!5+'4!E)!/.E'+)4!E%/4!+)4!5.'(./4!%5*I4!,/a)-&,./!,/&*%0),/)'4)!-./&*%,*)()/&! %'H!-)++'+)4!KU"!k!NJ9!+)4!&'()'*4!KU"!)&!UX#G!/)!46-*I&)/&!5%4!+)4!(h()4!-D,(,.e,/)4! N-L&.e,/)4b! ;%-&)'*4! E)! -*.,44%/-)9! .'! %+.*4! )/! E)4! 7'%/&,&64! &*I4! E,;;6*)/&)4b! +C)/0,*.//)()/&! &'(.*%+! /C)4&! E./-! 5%4! +)! (h()b! +)4! 4,@/%'H! E)! -.(('/,-%&,./! ,/&)*-)++'+%,*)! N?! 5*.H,(,&6! -.(()! ?! E,4&%/-)9! )&! +)4! -./467')/-)4! 7'C,+4! ,/E',4)/&! /)! 4./&! 5%4! +)4! (h()4! k! NK9! +)4! 5.5'+%&,./4! ,(('/,&%,*)4! 7',! ,/;,+&*)/&! +C)/0,*.//)()/&! &'(.*%+! /)! 4./&! 5%4! +)4! (h()4b! +%! 5*,/-,5%+)! E,;;6*)/-)! 6&%/&! 7')! 2FT8Fp! E)4! -)++'+)4! ,(('/,&%,*)4! 5*64)/&)4! E%/4! +)4! &'()'*4! KU"! 4./&! E)4! /)'&*.5D,+)4#WMXY4! %+.*4! 7')! -)&&)! 5.5'+%&,./! /)! *)5*64)/&)! 7')! "FT3Fp! E)4! -)++'+)4! ,(('/,&%,*)4! ,/;,+&*%/&! +)4! &'()'*4! UX#G1! B+! )4&! EC%,++)'*4! '&,+)! E)! *%55)+)*! 7')! +)4! &'()'*4! UX#G! ./&! 6&6! E6-*,&)4! -.(()! ,(('/.@I/)4! %+.*4! 7')! +)4! &'()'*4! KU"! +)! 4./&! &*I4! 5)'! N>%eD(,+)0,-D! )&! %+1b! 3FFF9!k!NR9!/.'4!/.'4!,/&6*)44./4!%'!*S+)!E)4!)H.4.()4!46-*6&64!5%*!+)4!&'()'*4!E%/4!+%! -*.,44%/-)!&'(.*%+)b!)&!/.'4!%0./4!*)(%*7'6!7')!+)4!-)++'+)4!KU"!)&!UX#G!/)!5*.E',4)/&! 5%4!+)4!(h()4!7'%/&,&64!EC)H.4.()4!%0)-!)/0,*./!E)'H!;.,4!(.,/4!EC)H.4.()4!46-*6&64! 5%*!+)4!-)++'+)4!UX#G!5%*!*%55.*&!%'H!-)++'+)4!KU"!!"#$!36%b!.*!'/)!46-*6&,./!,/4';;,4%/&)! EC)H.4.()4! 5.'**%,)/&! )H5+,7')*! 7'C,+4! /C%,)/&! 5%4! EC);;)&4! 5DL4,.+.@,7')4! %55%*)/&41! \.'4! 4.(()4! E./-! )/! 5*64)/-)! E)! E)'H! &'()'*4! 7',! 4)! E60)+.55)/&! 4)+./! E)4! (6-%/,4()4! E,;;6*)/&4! )&! 7',! 4)(=+)/&! /)! 5%4! ,/&)*%@,*! E)! +%! (h()! ;%j./! %0)-! +)! 4L4&I()! ,(('/,&%,*)1! Y)*&%,/4! (6-%/,4()4! E60)+.5564! 5%*! +C'/)! 5.'*! 5.'0.,*! -*.i&*)! 5)'0)/&! /)! 5%4! h&*)! '&,+)4! 5.'*! +C%'&*)b! )&! +C,(5+,-%&,./! E)! >%=38%! E%/4! '/)! 4)'+)! E)4! E)'H!&'()'*4!/C)4&!;,/%+)()/&!5%4!4,!4'*5*)/%/&1!Y)-,!/)!;%,&!7')!*);+6&)*!+C)H,4&)/-)!E)!

! "J2! ('+&,5+)4! (6-%/,4()4! E60)+.5564! 5%*! +)4! E,;;6*)/&)4! -)++'+)4! -%/-6*)'4)4! 5.'*! 4)! E60)+.55)*1!!

8[&2ML^BCBEPMQ&BYHF&GHP&NMQQTHP&NH&GB&GEDDTCBDRCH& BJ&$HP&HUMPMLHP&NBQP&GB&FCMEPPBQFH&DRLMCBGH&K&LMNOGH&0!I&&

$C);;)&! E)4! )H.4.()4! 46-*6&64! 5%*! +)4! -)++'+)4! &'(.*%+)4! 4'*! +%! -*.,44%/-)! E)4!

Dans le document Rôle des protéines Rab27 dans la sécrétion des exosomes : implication dans l’étude des réponses immunitaires tumorales (Page 147-200)