Corrélations entre les marqueurs métaboliques du MMC et les taux de m 5 dC, dU et 8-oxodG et 8-oxodG

Les résultats montrent une association inverse entre les concentrations de folates et celles d’Hcy (r = –0,297 ; P<0,001). De plus, nous avons aussi observé une relation inverse entre concentrations de vitamine B12 et de MMA (r = –0,327 ; P<0,001) ; et entre l’âge et les concentrations de vitamine B12 (r = –0,142 ; P<0,05) (Tableau III.4).

100

Une corrélation positive était observée entre les concentrations d’Hcy et l’âge (r = 0,281, P<0,001) ; et entre les concentrations de MMA et l’âge (r = 0,345 ; P<0,001) (Tableau III.4). Les mêmes tendances sont observées entre le tabagisme et l’IMC (r = 0,118 ; P<0,05).

Nous avons aussi obtenue une corrélation positive entre les taux de MMA et le niveau de méthylation d’ADN (r = 0,142 ; P<0,05). La même tendance est obtenue entre 8-oxodG et dU (r = 0,166 ; P<0,05). Une association inverse est obtenue entre la 8-oxodG et le niveau de m5dC (r = –0,273 ; P<0,001). La 8-oxodG est négativement corrélée au ratio dU/dT (r = –0,228 ; P<0,001 ; Tableau III.4).

Nos résultats montrent que le niveau global de méthylation d’ADN n’est pas influencé de l’âge, le sexe, le tabac ainsi que l’alcoolisme chez les patients cirrhotiques.

101 Tableau III.4. Coefficients de corrélations de Spearman entre les acteurs du cycle des monocarbones et les concentrations de m5dC, dU et 8-oxodG chez les cas (cirrhose avec CHC) et témoins (cirrhose sans CHC)

VitB12 HCY MMA Age IMC Sexe Tabac Alcool m5

dC dU 8-oxodG dU/dT Folates –0,029 –0,297** –0,002 0,081 0,041 –0,082 –0,043 –0,088 –0,013 –0,005 –0,003 –0,031 Vitamine B12 –0,072 –0,327** –0,142* –0,088 –0,006 0,000 0,085 –0,058 –0,020 –0,003 0,009 Hcy 0,289** 0,281** –0,009 0,040 0,089 0,030 0,005 0,041 0,102 0,001 MMA 0,345** 0,059 0,080 0,024 –0,080 0,142* –0,026 0,008 –0,030 Age 0,137* –0,032 0,048 –0,091 –0,020 0,077 0,089 0,097 IMC 0,091 0,118* 0,072 –0,036 0,133* 0,050 0,071 Sexe 0,283** 0,277** 0,032 –0,058 –0,117 0,002 Tabac 0,207** 0,023 0,050 0,024 0,110* Alcool 0,074 0,014 –0,057 0,009 m5 dC –0,041 –0,273** –0,118* dU 0,166* 0,721** 8-oxodG –0,228**

Note. VitB12 : Vitamine B12 ; HCY : homocystéine ; IMC : Indice de Masse Corporelle ; m5dC : 5-méthylcytosine, dU: déoxyuracile, MMA :

methylmalonic acid ; 8-oxodG : 8-oxo–7,8–dihydro–2–désoxyguanosine ** P< 0.001 ; * P< 0.05

102 3.10.2. Évaluation des taux de m5dC, dU et de 8-oxodG sur l’axe CP (cas vs. témoins)

Nous avons réalisé une étude comparée des niveaux de m5dC, dU et 8-oxodG entre les témoins et patients souffrant d’un CP (analyses effectuées sur l’ADN provenant du tissu sain). Nos résultats montraient que les concentrations de m5dC et de dU étaient significativement plus élevées chez les patients ayant un CP que chez les témoins sains. En effet, on observe une hyperméthylation statistiquement significative entre les cas, comparés aux témoins (médianes : 7,9 % vs 3,6 %, respectivement ; P< 0,0001 ; Mann–Whitney U test). De plus, le niveau de misincorporation d’uracile était plus augmenté chez les cas que chez les témoins (médianes : 94,1 vs 78,4 µmol/mol ADN, P = 0,0136) (Tableau III.5).

Aucune différence significative n’était observée entre cas et témoins concernant les concentrations génomique de 8-oxodG (P = 0,204).

Une augmentation significative du ratio dU/dT était également notée chez les cas avec CP, comparés aux témoins (P< 0,0001).

Tableau III.5. Comparaison des niveaux de m5dC, de dU et de 8-oxodG chez les patients souffrant de cancer du poumon (cas) et chez les témoins (patients sans CP)

Paramètres Témoins (patients sans CP) Cas (patients avec CP)

Médiane 25 – 75 P N Médiane 25 – 75 P N* P–valuea

% m5dC 3,6 3,1 – 4,2 272 7,6 6,9 – 8,2 153 < 0,0001 dU 78,4 51,1 – 114,5 236 94,1 70,4 – 121,3 134 0,0136 8-oxodG 13,6 7,8 – 18,7 165 11,8 8,1 – 15,8 130 0,204 dU/dTx10–4 3,8 2,5 – 5,1 238 5,5 4,7 – 7,3 137 < 0,0001 Note. m5dC : CP : cancer du poumon ; 5-méthylcytosine, dU : déoxyuracile ; 8-oxodG : 8-oxo-7,8-dihydro-2-désoxyguanosine, N* : nombre de sujets ; varie à cause des valeurs manquantes pour certains paramètres

1

Valeurs exprimées en µmol/mol d’ADN

a

103 3.10.2.1. Étude comparée des niveaux de m5dC, dU et 8-oxodG sur tissu sain et tumoral

Nous avons réalisé, sur cet axe de notre étude, une étude comparative du niveau des altérations génomiques (m5dC, de dU et de 8-oxodG) sur tissu sain et tumoral provenant exclusivement des patients de Nancy disponibles au CRB (CHU, service du Pr Jean Michel Vignaud). 3.10.2.1.1. Niveaux de m5dC, de dU et 8-oxodG dans la tumeur comparée au tissu sain adjacent

Nos résultats montraient une hyperméthylation significative dans l’ADN tumoral par rapport à l’ADN du tissu sain (valeurs médianes de 7,86 % vs 7,59 %, respectivement ;

P = 0,019) (Tableau III.6).

Nous avons observé que la misincorporation d’uracile était significativement plus élevée dans la tumeur que dans le tissu sain (médianes : 111,44 vs 94,54 µmol/mol d’ADN ; respectivement, P < 0,001). De plus, le niveau de 8-oxodG est significativement plus élevé dans la tumeur que dans le tissu sain (médianes : 15,65 vs 11,8 µmol/mol ADN, respectivement ; P < 0,001 ;

Tableau III.6).

Tableau III.6. Comparaison des niveaux de m5

dC, de dU et 8-oxodG dans la tumeur et dans le tissu sain adjacent

Paramètres Tissu sain Tumeur

Médiane 25 – 75 P N Médiane 25 – 75 P N* P– Valuea

m5dC (%) 7,59 6,92 – 8,25 153 7,86 7,23 – 8,44 207 0,019 dU1 94,54 71,11 – 121,38 127 111,44 66,06 – 231,48 183 <0,001 8-oxodG1 11,84 8,14 – 15,90 130 15,65 8,52 – 32,47 163 <0,001 dU/dT (x10–4) 5,55 4,73 – 7,30 127 4,93 4,25 – 5,83 183 <0,001

Note. m5dC : 5-méthylcytosine, dU : déoxyuracile ; 8-oxodG : 8-oxo-7,8-dihydro-2-désoxyguanosine, N* : nombre de sujets ; varie à cause des valeurs manquantes pour certains paramètres

1Valeurs exprimées en µmol/mol d’ADN

104 3.10.2.2. L’histologie influence-t-elle les concentrations de m5dC, dU et 8-oxodG ?

3.10.2.2.1. Comparaison des niveaux de m5dC, dU et 8-oxodG dans le tissu sain en fonction de l’histologie (adénocarcinomes vs. carcinome épidermoïde)

Nous avons observé que les niveaux de m5dC, de misincorporation d’uracile et de 8-oxodG variaient suivant l’histologie du tissu sain (Tableau III.7). En effet, nous avons constaté une hyperméthylation significative dans les adénocarcinomes par rapport aux carcinomes épidermoïdes (médianes : 7,79 % vs 7,43 %, respectivement, P = 0,002 ; Mann–Whitney U test). La misincorporation d’uracile était significativement plus élevée dans les adénocarcinomes que dans les carcinomes épidermoïdes (médianes : 112,59 vs 80,31 µmol/mol ADN, respectivement, P = 0,003). A l’inverse, les concentrations de 8-oxodG étaient significativement plus élevées dans les carcinomes épidermoïdes que dans les adénocarcinomes (médianes : 9,39 vs 12,72 µmol/mol ADN, respectivement, P = 0.035 ; Tableau III.7).

Tableau III.7. Comparaison des niveaux de m5

dC, de dU et 8-oxodG dans le tissu sain suivant l’histologie (carcinomes épidermoïdes vs. adénocarcinomes)

Paramètres Carcinomes Épidermoïdes Adénocarcinomes

Médiane 25 – 75 P N Médiane 25 – 75 P N P– Valuea

m5dC (%) 7,43 6,88 – 7,96 86 7,79 7,33 – 8,24 57 0,002 dU1 80,31 54,89 – 105,99 79 112,59 84,51 – 171,15 48 0,003 8-oxodG1 12,72 8,72 – 18,62 81 9,39 7,95 – 16,95 39 0,035 dU/dT (x10–4) 5,25 4,21 – 6,43 79 5,68 5,06 – 6,85 48 0,238 Note. m5dC : 5-méthylcytosine, dU : déoxyuracile ; 8-oxodG : 8–oxo–7,8–dihydro–2– désoxyguanosine ; N* : nombre de sujets ; varie à cause des valeurs manquantes pour certains paramètres

1Valeurs exprimées en µmol/mol d’ADN

a Mann–Whitney U test

3.10.2.2.2. Comparaison des niveaux de m5dC, dU et 8-oxodG dans la tumeur en fonction de l’histologie: adénocarcinomes vs. carcinomes épidermoïdes

Nous avons observé aussi une variation des concentrations de m5

dC, dU et 8-oxodG en fonction de l’histologie du tissu tumoral (Tableau III.8). Nous avons constaté une hyperméthylation statistiquement significative des adénocarcinomes par rapport aux carcinomes épidermoïdes (médianes : 8,18 % vs 7,60 %, respectivement, P < 0.001). De façon similaire, on

105

observe une misincorporation d’uracile 2,5 fois plus importante dans les adénocarcinomes que dans les carcinomes épidermoïdes (médianes : 231,37 vs 89,79 µmol/mol ADN, respectivement, P <0,001). Une augmentation significative du ratio dU/dT était observée dans les adénocarcinomes par rapport aux carcinomes épidermoïdes (P <0,001).

Tableau III.8. Évaluation des niveaux de m5dC, de dU et 8-oxodG dans la tumeur (carcinomes épidermoïdes vs. adénocarcinomes)

Paramètres Carcinome Épidermoïdes Adénocarcinomes

Médiane 25 – 75 P N Médiane 25 – 75 P N P– Valuea

m5dC (%) 7,60 7,09 –8,44 113 8,18 7,65 –8,59 80 <0,001 dU1 89,79 54,16 – 163,20 98 231,37 108,13 – 347,76 74 <0,001 8-oxodG1 12,76 7,85 – 21,15 88 23,40 14,50 – 38,38 67 <0,001 dU/dT (x10–4) 4,61 4,07 – 5,41 98 5,21 4,69 – 6,09 74 <0,001 Note. m5dC : 5-méthylcytosine, dU : déoxyuracile ; 8-oxodG : 8–oxo–7,8-dihydro–2– désoxyguanosine ; N* : nombre de sujets ; varie à cause des valeurs manquantes pour certains paramètres

1

Valeurs exprimées en µmol/mol d’ADN

a Mann–Whitney U test