Conditionnement de peur (fear conditioning)

Dans ce test comportemental, les souris associent un contexte nouveau et/ou un indice sonore discret à une stimulation aversive (choc électrique). Cette tâche fait intervenir l’amygdale (peur, émotions) mais aussi l’hippocampe (mémoire contextuelle).

10.2 Dispositif expérimental 1 :

Contexte A : Une boite rectangulaire fermée (27 x 27 x 27 cm) avec des barreaux au sol permettant le passage du courant. Une des parois est en plexiglas transparent afin de pouvoir filmer et observer la souris. Deux autres parois présentent des motifs visuels proximaux sous la forme de bandes blanches et noires. Dans ce cadre, deux panneaux figurant deux autres motifs sont fixés au rideau en face de la paroi translucide, constituant ainsi deux indices visuels distaux clairement identifiables. L'ensemble du dispositif est éclairé par une source de lumière blanche contrôlée. La boite est nettoyée à l'éthanol70% avant chaque passage, laissant une odeur susceptible d'être intégrée par la souris à la représentation contextuelle du dispositif.

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Contexte B : Une boite triangulaire fermée (21 x 44 x 49 x 18.5 cm) avec parois et sol lisses. Deux des trois parois sont blanches et la troisième est en plexiglas pour pouvoir filmer et observer la souris durant la procédure. Un haut-parleur permettant de délivrer un indice sonore est disposé sur le couvercle. L'ensemble du dispositif est éclairé par une source de lumière rouge. La boite est nettoyée à l’acide acétique avant chaque passage.

Le protocole expérimental comporte deux phases pour tester la consolidation et trois phases pour tester la reconsolidation.

10.2.1 La consolidation : J1 : Conditionnement :

Dans cette phase, l’animal est mis dans le contexte A pendant 5 minutes 30 secondes. Lors des deux premières minutes la souris explore le dispositif puis un son (90db) est émis pendant 30 secondes et durant les 2 dernières secondes un choc électrique (0.5mA) est déclenché. Ceci est répété une fois puis, 30 secondes après, la souris est remise dans sa cage (Figure 28).

Figure 28 : Protocole du conditionnement au contexte et au son

J2 : Test au contexte A :

La souris est mise dans le contexte A (où elle a reçu les chocs) pendant 2 minutes et l’immobilité totale de la souris appelée freezing est évaluée manuellement par périodes de 5 secondes par un expérimentateur aveugle au traitement.

Test au son en contexte modifié (contexte B) :

Deux heures après le premier test, la souris est mise dans le contexte B pendant 4 minutes en présence d’un signal sonore pendant les deux dernières minutes et le nombre de périodes de freezing est mesuré.

10.2.2 La reconsolidation : J1 : Conditionnement :

L’animal est mis dans le contexte A pendant 4 minutes 30 secondes. Lors des deux premières minutes la souris explore le dispositif puis durant les 2 dernières secondes un choc électrique

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(0.5mA) est déclenché. Ceci est répété encore une fois, puis, 30 secondes après, la souris est remise dans sa cage. Dans ce cas il n’y a pas de signal sonore (Figure 29).

Figure 29 : Protocole du conditionnement au contexte

J2 : Rappel :

Au cours de cette phase la souris est mise dans le contexte pendant 2 minutes. Les drogues sont injectées immédiatement après le rappel.

J3 : Test :

La souris est mise dans le contexte A pendant 4 minutes et le freezing est mesuré. 10.2.3 Le rappel :

J1 : Conditionnement :

Nous avons conditionné les souris de la même façon que pour la reconsolidation, (Figure 29). J2 : Rappel :

Au cours de cette phase la souris est mise dans le contexte pendant 2 minutes. L’injection des produits est faite 20 minutes avant le rappel.

J3 : Test :

La souris est mise dans le contexte A pendant 4 minutes et le freezing est mesuré. 10.2.4 L’extinction :

J1 : Conditionnement :

Nous avons conditionné les souris par le même protocole que pour la reconsolidation et le rappel (Figure 29).

J2-J5 : Extinction :

Sur 4 jours successifs, les souris ont reçu une injection d’antagoniste (SB612111) 15 minutes avant d’être placées dans le contexte A pendant 10 minutes au cours desquelles le freezing a été mesuré.

J6 : Test :

La souris est placée pendant 4 minutes dans le contexte sans injection préalable et le niveau de freezing est évalué.

81 10.3 Dispositif expérimental 2 :

Nous avons utilisé un dispositif différent pour l’étude de la reconsolidation de la mémoire de peur au son indépendante du contexte. Afin d’éviter l’association choc-contexte, nous avons utilisé trois contextes différents sur les trois jours de l’expérience.

Contexte du conditionnement : Il s’agit d’un compartiment aux murs blancs et lisses, à l’intérieur d’une boîte carrée en plastique transparent (25*25cm, hauteur 34.5cm) ; le sol est composé d’une grille en métal permettant de délivrer le choc électrique. Le dispositif est nettoyé à l’éthanol 70% entre chaque souris.

Contexte du rappel : Ce compartiment est aux murs gris en relief, à l’intérieur d’un cylindre en plastique transparent (diamètre 25cm, hauteur 34.5cm) ; le sol est gris et lisse. L’environnement est nettoyé à l’acide acétique 1% après chaque passage.

Contexte du test au son : Ce contexte est composé d’une boîte triangulaire (25*31cm, hauteur 34.5cm) avec des murs rayés noirs et blancs et un sol granuleux, nettoyé à l’eau entre chaque passage.

Le protocole expérimental comporte trois phases : J1 : Conditionnement :

Les souris ont été conditionnées de la même façon que pour la consolidation (Figure 28). J2 : Rappel :

Cette session de réactivation comporte une minute d’exploration du contexte 2 suivie du signal sonore pendant 30 secondes. Immédiatement après la souris a reçu le traitement.

J3 : Test :

La souris est mise dans le contexte 3 pendant 4 minutes en présence d’un signal sonore pendant les deux dernières minutes. Le freezing est mesuré automatiquement par le logiciel PolyFear (Imetronic, Pessac, France) et analysé ultérieurement par l’expérimentateur.

11) Mesure de l’expression de l’IEG c-Fos :