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Conclusion générale Perspectives:
La spécificité de ce travail de thèse s’est reflété dans les trois axes de recherches développées : i) l’étude de l’aptitude des six variétés de blé dur à la culture in vitro ; ii) L’étude de l’effet du NaCl sur la callogénèse, le développement d’embryons somatiques et la régénération in vitro ; iii) La mise en évidence de la variation somaclonale par marqueurs moléculaires.
Une élaboration d’une concentration spécifique de 3.5 mg/l de 2.4-D a permis le développement d’un taux important de la callogénèse chez les six génotypes de blé dur, ainsi qu’un développement d’amas cellulaires assez importants, l’addition du 2.4-D est l’un des facteurs dirigeant du développement d’embryons somatiques, qui représente le point de départ d’une régénération in vitro de plantules. Cette régénération est considérablement contrôlée par la composition du milieu de culture et principalement par les régulateurs de croissance qui représentent la principale composante incitatrice de la régénération. La présente recherche s’est appuyée sur l’essai de plusieurs combinaisons hormonales. La combinaison (1 mg/l Kinétine + 2mg/l AIA) est la combinaison adéquate pour la régénération in vitro de plantules issues des six génotypes de blé dur (Waha, Beliouni, Gumgu Rkhem, Adnan-1, Beni mestina et Adnan-2). Il a été prouvé que le choix de la combinaison hormonale est fortement liée aux génotypes, chaque génotype répond spécifiquement à la culture. Le taux de régénération obtenue lors de l’essai est plus au moins faible, le taux le plus élevé a été enregistré chez la variété Beliouni avec un taux de régénération de 33.69± 1.45 %, cependant ce taux est considéré comme un taux important, car la nature récalcitrante de la plante du blé dur fait que cette dernière ne répond pas facilement à la culture in vitro. Un des atouts majeur de ce chapitre est représenté par l’effort majeur élaboré pour la compréhension du comportement in
vitro des six génotypes de blé dur. Donc la démarche du choix de la concentration du 2.4-D et
la combinaison hormonale nécessaire à la régénération représente un atout majeur pour la réussite de la culture in vitro. D’un point de vue méthodologique, le choix de l’explant est aussi important, le présent essai est réalisé à partir d’embryons matures issus des six variétés de blé dur, ce dernier est disponible tout au long de l’année, et permet à tous moment de l’essai de reprendre et rediriger nos travaux.
Comme deuxième approche principale de l’étude, une contrainte saline contrôlée a été appliquée pour l’étude de l’effet du stress salin sur la régénération in vitro. La sélection des génotypes résistants a été élaborée à travers l’application de stress salin suivant deux
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approches. La première consiste à l’application d’un stress par addition progressive de concentration de NaCl (0g/l, 4g/l, 8g/l, et 16 g/l). Cette approche nous a permis de comprendre et de mettre en évidence le mécanisme de résistance ; lequel est développé par les cals lors de l’application du stress, la longue durée de culture par des repiquages successifs permet aux cals issus des six variétés de blé dur de s’adapter progressivement aux nouvelles conditions de culture en développant des mécanismes d’adaptation spécifiques, ces derniers sont contrôlés par le mode d’absorption et exclusion des ions inorganiques (Na+ et K+ ). Lors de la présence d’un stress salin la diminution de la teneur en K+ est très remarquée chez les plantes stressées comparativement aux plantes témoins, le K+ représente l’un des minéraux les plus important, considéré comme cations inorganique majoritaire de la cellule, sa carence peut mener à la détérioration de la cellule végétale et générer une mort cellulaire. Les résultats du présent travail mettent en évidence la présence de deux types d’amas cellulaires ; le premier type représente des amas nécrosés (sensibles au NaCl), là où le développement en plante est impossible, le second type d’amas, représente des cals bien développés d’une couleur jaunâtre (jaune pâle) qui sont considérés comme cals résistants au stress salin. La présence de ce type de cals est le résultat du déclanchement d’un mécanisme de résistance, le Na+ ne constituant pas un élément essentiel chez les cellules. Cependant, son rôle reste important. Lors d’une carence de K+ entrainé par un stress salin, le Na+ rentre en compétition avec le K+ afin de maintenir en équilibre du potentiel osmotique permettant le bon développement cellulaire. Un des atouts majeurs de ce chapitre est la mise en évidence du mécanisme que développent les cellules somatiques lors de leur différentiation en plantes. Ces dernières acquièrent une capacité de résistance qui permettra la régénération de plantes résistantes au stress salin. L’une des influences du stress sévère est le développement de variations somaclonales. Pour cela la deuxième approche vise à étudier l’effet du NaCl sur la régénération in vitro. Cette approche consiste à appliquer directement lors de l’induction de l’embryogénèse somatique différentes concentrations de NaCl (0 g/l ; 4g/l et 16g/l). Les résultats obtenus mettent en évidence l’effet néfaste d’une forte concentration du NaCl (16g/l) sur le taux de la callogénèse, cependant cette concentration considérée comme sévère, n’affecte pas le taux de développement des embryons somatiques, ainsi que le taux de régénération. Car il a été démontré qu’une concentration sévère est l’un des facteurs influençant la création de variations somaclonales. Suite à ces variations, les cellules somatiques peuvent surmonter la contrainte saline et régénérer des plantes résistantes.
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L’analyse de la présence de variations somaclonales par RAPD s’est avérée assez performante pour permettre la mise en évidence de polymorphisme entre les six variétés. Les différents traitements par NaCl et le type de culture. En effet la mise en évidence des variations somaclonales a permis de déduire que le développement des variations somaclonales est contrôlé par : le type de la culture, le génotype, l’application du stress sévère.