Collecte des données 1 Echantillonnage

D’après les données du recensement dernier, l’échantillonnage a permis de déterminer le nombre de ménages à enquêter et le nombre de prélèvement d’eau à faire. L’arrondissement de Zinvié compte au total 3468 ménages. L’échantillonnage des ménages ici, a été fait suivant la formule pour calculé la taille de l’échantillon ; SS=(Z-score)²*p*(1-p)/(marge d’erreur)²pour les populations infinies, pour une population finie il faut encore ajuster: SSadj =(SS)/1+((SS-1)/population )avec SS= sample size, P= proportion pour un niveau de confiance de 95% le Z-score=1,96 gratuitement sur le site www.chekmarket.com. Après avoir inséré le nombre total de ménages de l’arrondissement de Zinvié à savoir 3468, le site a permis de déterminer et afficher le nombre représentatif de ménages qui est de 346. Ce nombre a été déterminé avec une confiance de 95% et une marge d’erreur de 5%. Pour une répartition homogène, de l’échantillon de ménages, le PAS c’est-à-dire le nombre de ménages entre deux séparant deux ménages consécutifs enquêtés a été déterminé comme suit :

PAS= nombre total de ménages/nombre de ménages à visiter soit 3468/346=10. Donc le PAS est égale à 10 c’est-à-dire en un ménage est chaque fois enquêté après neuf (9) ménages consécutifs et ainsi de suite.

Le nombre de ménages par village est proportionnel à sa taille. Le tableau II ci-dessous illustre la répartition des ménages enquêtés.

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Tableau II: Répartition des ménages enquêtés

Village Nombre total de

ménage

Nombre de ménages enquêtés

Adjogansa 252 25

Dangboji 146 15

Dokomey 370 37

Gbodjè 76 8

Gbodjoko 218 22

Kpotomey 141 14

Sokan 454 45

Wawata 392 39

Yevié 582 58

Zinvié 583 58

Zoumè 254 25

Total 3468 346

Quant au nombre de ménages dont les eaux de consommation ont été prélevées et analysées, il a été déterminé par choix raisonné. Ce choix tient compte du nombre d’ouvrages fréquentés et du regroupement autour des ouvrages. Il a été estimé à 5% des ménages enquêtés.

Nombre de ménages prélevés = nombre de ménages à visités X 5% soit 346X0.05=17

Les échantillons d’eau ont été prélevés donc dans dix-sept (17) ménages dans les villages de Zinvié.

2.3.2.2 Enquête de terrain

La phase de terrain elle a pris en compte 346 ménages, 02 centres de santé, l’arrondissement de Zinvié. Les fiches d’enquêtes établies ont été utilisées pour recueillir des

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informations au sein des ménages et des centres de santé. L’enquête a permis entre autres de connaitre le type d’eau consommée par les habitants, de connaitre les conditions d’approvisionnement en eau, l’usage qu’ils font de chaque type d’eau et les maladies liées à l’eau les plus fréquentes observées dans le milieu.

2.3.2.3 Méthode de prélèvement

Le prélèvement a été fait dans les ménages et au niveau des puits de prélèvement des ménages. Pour chaque prélèvement de l’eau de puits, un à deux voire trois ménages qui utilisent ce même puits, ont été prélevés. Au total trente-deux (32) échantillons ont été prélevés pour l’analyse microbiologique dans le LCQEA.

Les échantillons d’eau ont été prélevés dans des bouteilles préalablement stérilisées à l’autoclave à la vapeur humide à la température de 121°C et à la pression d’une atmosphère.

Au niveau des puits (puits d’eau), le prélèvement a été fait à l’aide des puisettes habituellement utilisées par la population. Les échantillons sont ensuite conservés dans une glacière comportant des morceaux de glace puis transportés au Laboratoire de Contrôle de Qualité des eaux des Aliments (LCQEA). Les analyses ont été effectuées le même jour du prélèvement.

2.3.2.4 Méthode d’analyse

 Analyse bactériologique des échantillons d’eau

Cette phase comporte quatre partie : la préparation des milieux de culture et du matériel, la mise en culture, la lecture des résultats et leur report puis la destruction des boites de pétris.

 La préparation des milieux de culture et du matériel

 Préparation de milieu PCA (Germes banals)

Pour un volume de 580 ml de milieu PCA, il a été dissoudre 13,63g dans 580ml d’eau distillée, ensuite porter le milieu à ébullition pendant 1 à 2 minutes sur une plaque chauffante, laisser le milieu refroidir jusqu’à 50-60ºc puis autoclaver (15 min à 121ºc) ; le milieu est disposé après autoclavage dans le bain-marie à une température de 45 à 50ºc pour le maintenir en surfusion avant usage.

 Préparation du milieu SLANETZ et BARTLEY (Entérocoques)

Pour un volume de 580 ml de milieu SLANETZ et BARTLEY, il a été dissoudre 24,36g dans 580ml d’eau distillée, ensuite porter le milieu à ébullition dans un bain-marie jusqu’à dissolution complète, éviter un chauffage excessif ; après dissolution complète ramener le bain-marie à une température de 45 à 50ºc pour maintenir le milieu en surfusion avant usage.

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 Préparation du milieu REC (Coliformes)

Pour un volume de 580 ml de milieu REC, il a été dissoudre 21,46 g dans 580 ml d’eau distillée, ensuite porter le milieu à ébullition pendant 1 à 2 minutes sur une plaque chauffante, laisser le milieu refroidir jusqu’à 50-60ºc puis autoclaver (15min à 121ºc) ; on dispose le milieu après autoclavage dans le bain-marie à une température de 45 à 50ºc pour le maintenir en surfusion avant usage.

 Préparation du milieu Baird-Parker(BP) agar (Staphylocoques)

Pour un volume de 580 ml de milieu BP, il a été dissoudre 35,41 g dans 580 ml d’eau distillée, ensuite porter le milieu à ébullition pendant 1 à 2 minutes sur une plaque chauffante, laisser le milieu refroidir jusqu’à 50-60ºc puis autoclaver (15min à 121ºc) ; le milieu est disposé après autoclavage dans le bain-marie à une température de 45 à 50ºc pour le maintenir en surfusion avant usage., y ajouter stérilement 50ml d’émulsion de jaune d’œuf-tellurite.

 Mise en culture

L’ensemencement de l’échantillon a été fait par la méthode d’incorporation. Après la préparation des milieux de cultures, ils sont placés dans un bain mari pour éviter leur solidification avant ensemencement (surfusion). La paillasse est nettoyée et assainie à l’eau de javel et à l’alcool après avoir mis les échantillons. Avant l’ensemencement, nous avons étiqueté les boîtes de pétri. Sur chaque boîte de pétri a été inscrite :

- Numéro d’ordre de l’échantillon (code laboratoire) ; - Code du milieu de culture (ex : PCA) ;

- Température d’incubation (37°C) ;

- Volume d’échantillon (1 ml) et date de manipulation.

L’ensemencement a été fait par les seringues avec lesquelles 5ml d’eau de puits ont été prélevés et déposés dans les boîtes de pétri et les tubes. Ensuite est coulé le milieu de culture puis l’ensemble est homogénéisé en décrivant un huit(08) sur la paillasse et en faisant de sorte que le milieu ne se verse pas ni le contenu dans le couvercle. Laisser solidifier pour ensuite incuber à température adéquate et à durée recommandée en fonction du germe recherché. Soit à 37°C ou 44° pendant 24h (Coliformes fécaux, E.coli), et à 37°C pendant 24h-48h (germes banals).

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Photo 1 : Ensemencement des germes SOURCE : KPINSOTON, 2016

 Lecture des résultats

A cette étape, il est question de compter le nombre de colonie de germes qui ont poussé après l’ensemencement à une température donnée et pendant une durée déterminée. Sur le milieu chromogène après incubation à 37°C pendant 24 h, il a été dénombré les Coliformes fécaux qui ont une couleur rose et les E.coli bleu. Sur le milieu PCA après incubation à 37°C pendant 24 h à 48h, il a été dénombré des germes banals qui s’identifient par un point incolore.

Le comptage se fait en utilisant un marqueur pour identifier chaque colonie jugée comptable pour le type de germe recherché

Photo 2: La lecture des germes SOURCE : KPINSOTON, 2016

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 Destruction des boîtes de pétri

Après le dénombrement, on met les boîtes de pétri dans l’autoclave qu’on règle à 121ºc

 Analyse physique des échantillons d’eau

Les paramètres physiques (Température PH Conductivité électrique et TDS et Turbidité) ont été mesurés au laboratoire à l’aide du pH-mètre pour la température et le pH, du conductimètre pour la conductivité et le TDS puis du turbidimètre pour la turbidité.

 Procédure de mesure des paramètres physiques

Il est introduit dans l’eau préalablement prélevée dans un bécher, une sonde qui est laissée dans l’eau pour permettre à l’appareil de se stabiliser pour la lecture de la valeur. Il est à noter que ce n’est pas le même appareil qui permet de mesurer les paramètres mais des appareils différents muni chacun d’une sonde à l’exception de l’appareil de mesure de la turbidité. La mesure de la turbidité s’effectue à l’aide d’une cuve cylindrique servant à contenir l’échantillon d’essai. Dans la cuve, on verse l’échantillon d’essai jusqu’au traire de jauge.

Ensuite, on l’introduit dans l’appareil précédemment mise sous tension et calibré. Après, on appuie sur ENTER pour effectuer la mesure affichée à l’écran.