CHAPITRE 2 : CADRE, MATERIEL ET METHODES D’ETUDE
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2-1- Cadre d’étude
2-1-1- Cadre institutionnel
L’Ecole Polytechnique d’Abomey-Calavi (EPAC) est un institut universitaire étatique répondant aux normes du système LMD (Licence-Master-Doctorat). Elle s’est entourée d’enseignants et de praticiens émérites, qui mettent tout en œuvre pour offrir une bonne formation afin de sortir des cadres compétents dans les domaines technologiques. L’EPAC comprend le secteur industriel et le secteur biologique au sein duquel se trouve le département du Génie Biologie Humaine (GBH). Durant trois années, c’est celui-ci qui nous a accueillis pour notre formation en Analyses Biomédicales.
2-1-2- Cadre technique
Créée en Février 1974 par le Docteur Pierre A. BONI, la CLINIQUE D’AKPAKPA est située dans la commune de Cotonou à PK2, route de Porto-Novo à droite. Elle est à côté de la Société Béninoise de Brasserie (SOBEBRA) et en face du Cid Super Décor. C’est un ensemble de bâtiments de couleur marron abritant différentes sortes de services que sont :
- Laboratoire
Réalisé et présenté par Aurélie Roxane AGONDANOU 13 - Echographie
À l’entrée de la Clinique, en face de l’accueil se trouve le guichet, à gauche se trouvent des escaliers qui mènent à la salle de prélèvement. La deuxième porte à droite après la salle de prélèvement abrite le laboratoire. Il comporte :
-
La section Sérologie/Parasitologie-
La section Hématologie/Biochimie-
La section Bactériologie/Parasitologie-
Un vestiaire avec une douche et des placards pour le rangement des matériels de nettoyage, des tenues de ville, des blouses.2-2-Matériel et méthodes
Il s’agit d’une étude prospective se basant sur cinquante (50) échantillons de sang des patients diabétiques ou non reçus pendant la période de stage sans distinction d’âge ni de sexe .Ces patients ont été prélevés strictement à jeun et ont la glycémie et l’hémoglobine glyquée comme examen le même jour.
Nous avons eu besoin d’une centrifugeuse et un automate de marque BIOLABO pour le dosage du glucose, l’appareil HEMOCUE pour la détermination du taux d’hémoglobine glyquée A1c, autres matériel et consommables tels que les micropipettes, tubes, cônes, réactifs, portoirs, gants.
Pour chaque patient identifié, nous avons : - Noté son âge son sexe ;
- Déterminé sa glycémie à jeun ; - Déterminé son taux d’HbA1c ;
-Estimé sa glycémie moyenne à partir de son taux d’HbA1c.
Réalisé et présenté par Aurélie Roxane AGONDANOU 14 2-2-1- Phase pré-analytique
Cette phase regroupe toutes les conditions à mettre en œuvre pour la réalisation des différents examens de l’étude. Elle consiste à :
-Mettre une blouse blanche et propre ;
-Se laver les mains à l’eau et au savon et porter les gants ; -Nettoyer et désinfecter la surface de travail avec l’eau de Javel ; -Réunir le reste du matériel et organiser la paillasse ;
-Appliquer la procédure de mise en marche du spectrophotomètre ; -Faire les calibrations prévues si nécessaire.
2-2-2- Phase analytique
Dosage de la glycémie
L’échantillon est recueilli par prélèvement veineux sur tube sec et ensuite on passe à la centrifugation
Principe :
Dans la réaction de Trinder, le glucose est oxydé en D-gluconate par le glucose oxydase (GOD) avec la formation de peroxyde d'hydrogène. En présence de la peroxydase (POD), un mélange de phénol et de 4-aminoantipyrine (4-AA) est oxydé par le peroxyde d'hydrogène, pour former une coloration rouge de quinonéimine proportionnelle à la concentration de glucose dans l'échantillon
Equation de la réaction :
Glucose + O2 glucose oxydase Acide gluconique + H2O2 2H2O2 + Phénol + 4-AAP peroxydase Quinonéimine + 4 H2O
Réalisé et présenté par Aurélie Roxane AGONDANOU 15 4- AAP : Amino-4-Antipyrine
Tableau I: Mode opératoire de dosage du glucose
Blanc Standard Echantillon Réactif 1 ml 1 ml 1 ml Standard - 10µl - Echantillon - - 10µl
Homogénéiser et laisser les tubes pendant 10 minutes au bain marie. Lire l'absorbance (A) des échantillons et du standard à 500nm contre le blanc réactif.
La valeur normale de la glycémie à jeun est comprise entre 0,60 et 1,10 g /l. La glycémie peut être influencée par l’hémolyse.
Le taux de glucose dans le sang peut augmenter après une prise d’alcool et chez les fumeurs (augmentation de 10 à 40 %), lors d’un stress, lors d’une surcharge pondérale et après un repas. Le taux de glucose dans le sang peut diminuer chez le nouveau-né (les taux sont 20 % plus faibles que ceux de la mère), après un effort prolongé ou un jeûne, pendant la grossesse (la diminution est progressive jusqu’à la 18eme semaine).
Détermination du taux d’hémoglobine glyquée A1c
Le sang est recueilli par prélèvement veineux dans un tube EDTA Pour déterminer le taux d’hémoglobine glyquée A1c il faut :
Allumer l’appareil
Passer le contrôle journalier, pour ce faire, appuyer sur ‘’ push ‘’ puis sur ‘’down’’ et insérer la cartouche contrôle dans l’appareil puis le fermer, il affiche ‘’OK’’. Une minute après, enlever le contrôle
Homogénéiser l’échantillon et mettre une goutte sur une lame
Réalisé et présenté par Aurélie Roxane AGONDANOU 16 la goutte de sang, mettre aussitôt dans l’appareil puis fermer. Le résultat sort 5 minutes après.
Un taux normal d’HbA1c est compris entre 4 et 6% .Ce taux est ininterprétable en cas d’hémolyse (destruction des globules rouges), d’hémorragie, de transfusion sanguine, de traitement stimulant l’érythropoïèse, d’hémoglobinopathies ou d’insuffisance rénale grave.
Un taux d’hémoglobine glyquée élevé peut s’observer après plusieurs périodes d’hyperglycémie au cours des 120 derniers jours.
2-2-2- Phase post-analytique
Cette phase consiste à :
-Procéder aux validations technique et biologique des résultats ; -Nettoyer le spectrophotomètre ;
-Eteindre le spectrophotomètre selon la procédure d’utilisation ; -Ranger les réactifs et le reste du matériel utilisé ;
-Désinfecter la surface de travail avec l’eau de Javel ; -Enlever les gants et jeter dans la poubelle appropriée ; -Se laver les mains.
-Calcul de la glycémie moyenne à partir du taux d’HbA1c
Le calcul du taux moyen de glycémie s’est effectué à partir de la formule suivante obtenue par régression linéaire (Kuenan et coll 2009) :
Glycémie Moyenne (en g/l) = (1,59×HbA1c(%) Ŕ2,59) /5,5
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