Cette section décrit comment surmonter un problème de fonctionnement de la version actuelle de la ChemStation Agilent avec le détecteur à fluorescence (G1321A/B). Avec ces modes, il arrive parfois que les spectres ne sont pas acquis dans le fichier de données.
L'acquisition de spectres déclenchée par un pic est contrôlée par le biais de 2 paramètres du FLD : THRS (seuil) et PDPW (largeur de pic du détecteur de pics). De plus, l'effet du paramètre PKWD (Largeur de pic du détecteur) concerne uniquement le filtrage du chromatogramme.
1 Réglez les paramètres THRS, PDPW et PKWD en fonction du chromato-gramme en cours.
Des résultats optimaux sont obtenus pour l'acquisition de spectres déclen-chée par un pic lorsque le PDPW est réglé sur 2 pas en dessous du PKWD (voir « Paramètres de largeur de pic », page 133).
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Utilisation du détecteur à fluorescenceAcquisition de spectres en modes TOUS LES SPECTRES DU PIC et SPECTRES APEX UNIQUEMENT
2 Il existe 2 champs sur l'écran de configuration du FLD pour entrer le PKWD Peakwidth (Responsetime) et le THRS Threshold (visible lorsque Multi-EX ou Multi-EM est sélectionné). Les valeurs par défaut sont : PKWD = 6 (0,2 min) ; THRS = 5,000 LU.
Manuel d’utilisation du FLD Agilent 1260 109 Utilisation du détecteur à fluorescence
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Acquisition de spectres en modes TOUS LES SPECTRES DU PIC et SPECTRES APEX UNIQUEMENT
Les valeurs sélectionnées restent constantes pendant l'analyse. Le paramè-tre PDPW peut êparamè-tre modifié seulement à l'aide du champ Peakwidth du tableau de chronoprogrammation (visible lorsque Multi-EX ou Multi-EM est sélectionné).
Les paramètres THRS et PDPW ont un effet sur l'acquisition de spectres déc-lenchée par un pic. Vous pouvez modifier le paramètre THRS sur l'écran de configuration du FLD. Le paramètre PDPW n'est modifiable que par le biais du champ Peakwidth dans le Timetable.
REMARQUE Le paramètre PDPW doit être modifié en cas de changement du paramètre PKWD. À 0,0 min dans le tableau de chronoprogrammation, entrez un PDPW = PKWD - 2 (e.g. PKWD
= 0,2 min, PDPW = 0,05 min). Dans le cas d'un chromatogramme plus long avec un élargissement de pic ultérieur, vous pouvez augmenter la valeur PDPW par 1 pas en créant une entrée supplémentaire dans le Timetable.
110 Manuel d’utilisation du FLD Agilent 1260
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Utilisation du détecteur à fluorescenceAcquisition de spectres en modes TOUS LES SPECTRES DU PIC et SPECTRES APEX UNIQUEMENT
Notes :
• L'algorithme de détection de pics fonctionne de manière optimale lorsqu'un pic est réduit à 8 – 16 points de données. Le FLD acquiert les points de données avec une fréquence d'acquisition interne de 74,08 Hz (= 13,50 ms) (un signal seulement). La réduction des données est influencée par le para-mètre PDPW. Lorsque PDPW est trop faible, le détecteur de pics ne détecte aucun pic et assimile le pic à une montée et puis une descente de la ligne de base. Lorsque PDPW est trop important, le détecteur de pics assimile le pic à du bruit.
• Le détecteur de pics fonctionne en ligne sur le chromatogramme en cours.
Cela signifie que le début/sommet/fin du pic est reconnu avec un temps de retard. De plus, les points des spectres sont acquis de manière séquentielle.
Cela signifie que l'acquisition de spectres à plage large dure beaucoup plus longtemps que celle de d'un spectre à plage réduite. En cas de chromatogra-phie rapide, il est pratiquement impossible d'acquérir des spectres APEX
"propres" : les premiers et derniers points sont acquis avant ou après que la concentration la plus élevée ait pénétré dans la cuve du détecteur.
• La durée d'acquisition des spectres individuelles est montrée sur l'écran de configuration du FLD.
Manuel d’utilisation du FLD Agilent 1260 111 Utilisation du détecteur à fluorescence
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Informations sur les solvants
Informations sur les solvants
Observez les recommandations suivantes lors de l'utilisation de solvants.
• Observez les recommandations afin d'éviter le développement d'algues, voir les manuels de la pompe.
• Les petites particules peuvent obstruer les capillaires et les vannes de manière irréversible. Il faut donc toujours filtrer les solvants avec des filtres de 0,4 µm.
• L'utilisation de solvants qui pourrait avoir un effet corrosif sur les pièces du circuit est à éviter ou à minimiser. Consultez les spécifications relatives à la plage de pH fournies pour les différentes pièces comme les cuves à circula-tion, les matériaux des vannes etc. ainsi que les recommandations fournies dans les prochains chapitres.
Informations sur les solvants pour les pièces du système CPL 1260 Infinity Bio-Inert
Pour le système CPL Agilent Infinity Bio-Inert série 1260, Agilent Technologies utilise des matériaux de qualité optimale (voir « Matériaux Bio-Inert »,
page 32) dans le circuit (également appelés pièces mouillées), qui sont large-ment acceptés par les biologistes car ils sont réputés pour leur inertie opti-male par rapport aux échantillons biologiques et ils garantissent la meilleure compatibilité avec les échantillons communs et les solvants sur une large plage de pH. En clair, le circuit tout entier est dépourvu d'acier inoxydable et d'autres alliages contenant des métaux tels que le fer, le nickel, le cobalt, le chrome, le molybdène ou le cuivre, susceptibles d'interférer avec les échant-illons biologiques. Le circuit en aval de l'introduction des échantéchant-illons ne contient aucun métal quel qu'il soit.
Pour autant, il n'existe aucun matériau qui soit compatible à la fois avec les instruments HPLC polyvalents (vannes, capillaires, ressorts, têtes de pompe, cuves à circulation, etc.) et avec tous les produits chimiques et conditions d'application possibles. Cette section recommande les solvants les plus adap-tés. Les produits chimiques connus pour leur dangerosité ne doivent pas être utilisés, ou l'exposition à de tels produits doit être limitée, par exemple pour
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Utilisation du détecteur à fluorescence Informations sur les solvantsdes procédures de nettoyage de courte durée. Après utilisation de produits chimiques potentiellement agressifs, vous devez nettoyer le système avec des solvants HPLC standard compatibles.