Les organes issus de la dissection ont été découpés en petits morceaux déposés dans des cassettes pour leur fixation. Le choix du fixateur a été porté sur le formol à 10%
tamponné pour les études morphologiques car il est moins coûteux, facile à préparer et stable. On peut les y conserver pendant longtemps sans qu’ils ne se détériorent. La durée des fixations est de 02 jours en moyenne pour les organes entiers et de 03 jours pour les coupes de petite taille.
2- Circulation
Elle a consisté à faire séjourner dans une série de liquides (alcool, xylène, paraffine), les pièces de tissus, afin de leur conférer une rigidité favorable à la coupe mince. Cette circulation s’est déroulée en trois phases : la déshydratation ; l’éclaircissement et l’imprégnation.
ABIDO Josué 80 a- La Déshydratation
Nous avons utilisé comme agent déshydratant l’éthanol car il présente une grande miscibilité à l’eau et permet un bon durcissement des tissus. La déshydratation a été progressive, par passage des pièces de tissu dans des bains d’alcool de concentration croissante, pour éviter la distorsion des structures tissulaires. Nous avons utilisé huit bains d’éthanols (70%, 80%, 90% puis cinq différents bains d’alcool absolu de 100%).
Les pièces ont séjourné pendant une heure dans chacun de ces bains.
b- L’éclaircissement
Nous avons utilisé deux bains de xylène pour l’éclaircissement. Nos manipulations ont été faites sous une hotte chimique en raison de la haute toxicité du xylène.
Dès que le premier bain de xylène commence par devenir sale (ce qui traduit une déshydratation incomplète de la pièce), nous retirons immédiatement le tissu que nous plongerons de nouveau dans un autre bain d’alcool absolu. Puis nous recommençons l’éclaircissement.
c- L’imprégnation
Nous avons utilisé trois bains de paraffine à 67°C au préalable pour l’imprégnation des tissus ; car sous cette forme fondue, la paraffine pénètre facilement les tissus. Les pièces ont séjourné environ une heure dans chacun de ces bains.
3- Enrobage
Les tissus ainsi imprégnés sont enrobés de paraffine en vue de la confection des blocs. Pour ce faire, ils sont déposés et orientés dans des moules métalliques de façon à faciliter l’étude ultérieure.
4- Coupes au microtome
Les blocs de paraffine contenant les pièces enrobées sont débités en tranches de 5µm d’épaisseur sur un microtome rotatif AO Scientific Instruments 820.
Pour cela, on introduit le bloc de paraffine dans la partie du microtome. Ce bloc est immobilisé et orienté à l’aide des vis de réglages en veillant à ce que les bords inférieurs et supérieurs soient parallèles au tranchant du rasoir.
Après avoir vérifié le parallélisme entre le bloc et le rasoir, on tourne la roue motrice du microtome à l’aide de la manivelle. Les rubans obtenus à la coupe sont disposés sur une plaque à fond noir.
5- Etalement
L’étalement des coupes sur lame porte-objet se fait sur une plaque chauffante réglée à 45°C. Pour ce faire, des lames propres et gravées sont recouvertes d’eau gélatineuse.
Les segments de ruban les mieux réussis sont alors sélectionnés à l’aide de lancette et déposés sur des larmes porte-objets. L’ensemble est déposé sur la plaque chauffante et on laisse les rubans s’étirer. A l’aide de deux lancettes, nous tirons sur les bords des rubans (tissus) pour éliminer les plis persistants ; l’excès de liquide est absorbé aves un papier buvard et on laisse les rubans adhérer aux lames. Celles-ci sont ensuite placées dans une étuve à 40°C pour le séchage. Enfin on les laisse refroidir pendant au moins 15 minutes. La préparation est alors prête pour la coloration.
6- Coloration
La coloration choisie dans le cas de notre étude est celle de l’hématéine-éosine et giemsa ; elles permettent de mettre en évidence le noyau, le cytoplasme et le collagène dans les tissus.
L’hématéine est un colorant basique qui se fixe sur les structures nucléaires tandis que l’éosine est un colorant acide ayant une affinité pour le cytoplasme et les fibres de collagènes.
ABIDO Josué 82 7- Observation microscopique
Nos observations ont été faites sur un microscope photonique de marque Olypus Bx-41muni d’une caméra JVC de ½ pouce aux grossissements 200, 400 et 600. Les images ont été transférées sur un ordinateur.
III- Technique de coloration à l’hématéine-éosine 1. Déparaffinage 3. Coloration à l’Hématéine...5 à 10 min.
4. Rinçage à l’eau
Bain d’eau ammoniacal...30sec à 1 min ;
Bain d’eau courante...15 min ; 5. Coloration à l’Eosine
Mordançage
Bain de la solution de chlorure de calcium...2 min ;
Bain de la solution de chlorure de calcium...2 min ; Rinçage à l’eau courante
Déshydratation
Méthanol70°...30sec ; Eclaircissement
Xylène...30sec
Annexe 3
Photo 6 : Photographie du dispositif Photo 7 : Appareil de mesure de la
de la prise de la pression artérielle. pression artérielle dans l’artère carotienne.
I. PREPARATION DES ANIMAUX POUR LA PRISE DE LA PA
A : Photographie du rat anesthésié B : Photographie du rat placé sur le dos
C : Epilage de la zone du cou D : Incision sur le plan médian de la partie supérieure du sternum
Photo 8: Photographie des différentes étapes de préparation des animaux (A, B, C, et D).
ABIDO Josué 84 II. CATHETERISME DE L’ARTERE CAROTIDE
A : Ecartement du plans musculaire et B1 : Dégagement du nerf pneumo- dégagement de la carotide gastrique insertion de deux fils sous la carotide
B2 : Ligature du côté céphalique avec C : Insertion d’une pince hémostatique l’un des fils du côté cardiaque
D : Hémisection de la carotide E : Introduction du cathéter en direction du cœur, ligature et enfin ouverture de la pince.
Photo 9 : Photographie des différentes étapes de l’intervention (A, B, C, D et E).
Photo 10 : Photographie des outils de la trousse à dissection.
TABLE DES MATIERES
Liste des figures et des photos……….………x
Liste des annexes ;;;;;;;;;;;……….…………..xi
1-1 Définition de la pression artérielle normale……….………5
1-2 Méthodes de mesure de la pression artérielle………..……….5
1-2-1 Mesure non invasive……….………5
1-2-2 Les variantes de la méthode non invasive………...………..6
1-2-3 Méthode invasive……….………….………7
2- Mécanismes physiologiques de régulation de la pression artérielle…….…..7
2-1 Les facteurs déterminant la pression artérielle……….…….8
2-2 Mécanisme de régulation à court terme par la voie réflexe : Baroréflexe…9 2-3 Mécanisme de régulation à long terme………..….10
3- L’hypertension artérielle (HTA)……….…..15
3-1 Définition de l’hypertension artérielle (HTA)………..…..15
3-2 Classification de l’hypertension artérielle……….……..15
3-3 Physiopathologie de l’hypertension artérielle……….……16
4- Etiologie de l'hypertension artérielle……….…………17
4-1 L’hypertension artérielle "primaire" ou "essentielle"………….…………17
4-2 L’hypertension artérielle "secondaire"………..………..18
5- Complications de l’hypertension artérielle………..…….19
6- Traitement de l’hypertension artérielle……….……19
6-1 But du traitement………...……..19
6-2 Objectifs du traitement………20
6-3 Moyens de traitement de l’HTA……… …………20
6-3-1 Moyens non pharmacologiques………...……20
6-3-2 Moyens pharmacologiques……….…….21
7- Contrôle et prévention de l’hypertension artérielle……….………..22
8- Modèles animaux d’hypertension artérielle………..23
8-1 L’HTA rénovasculaire………24
8-2 L’HTA par surcharge de sel………..……..24
8-3 L’HTA endocrinienne………...………..24
8-3-1 L’HTA induite par les minéralocorticoïdes………..…..24
8-3-2 L’HTA par régénération de la glande surrénale………..……25
8-4 L’HTA neurogénique……….……….25
8-5 L’HTA psychogénique………25
8-6 L’HTA génétique………..………..25
8-7 Autres modèles d’HTA………..….26
8-7-1 L’HTA induite par des substances cholinomimétiques……… …..……26
8-7-2 HTA induite par l’Angiotensine II………..……….26
8-7-3 HTA induite par le cadmium………...…………26
8-7-4 HTA induite par l’inhibition chronique de Monoxyde d’Azote………..26
9- Généralités sur Heliotropium indicum et Gardenia ternifolia………..27
9.1 Botanique de Heliotropium indicum………...…27
9.2 Botanique de Gardenia ternifolia………...………….28
Chapitre II : CADRE, MATÉRIEL ET MÉTHODES 1- Cadre de travail……….…………32
3.2 Analyse phytochimique des extraits aqueux………...…………35
3.3 Evaluation de la toxicité de l’extrait aqueux………..………….35
3.3.1 Choix et conditions………...………35
3.3.2 Principe de l’essai……….…………36
3.3.3 Protocole de l’essai………...………36
3.3.4 Prélèvement des organes et étude histologique……...……….36
3.3.5 Dosage de paramètres biochimiques………36
3.4 Développement de l’hypertension artérielle………37
3.5 Traitement de l’HTA avec les extraits aqueux………..……..37
3.6 Traitement de l’HTA avec la drogue de référence (le Captopril)……...…37
3.7 Les groupes expérimentaux : induction de l’hypertension artérielle et traitement……….37
3.8 Mesure de la Pression Artérielle………..………38
3.8.1 Préparation de l’animal……….39
3.8.2 Cathétérisme de l’artère carotide………..39
3.8.3 Mesure proprement dite de la pression artérielle……….……39
3.8.4 Calcul de la pression artérielle moyenne………..………40
3.9 Méthode de collecte et d’analyse des résultats………..…………..40
Chapitre III : RÉSULTATS ET DISCUSSION 1- Résultats………41
1.1 Rendement de l’extraction aqueuse des feuilles…………...………..41
1.2 Analyse phytochimique des extraits aqueux………..………….41
1.3 Evaluation de la toxicité des extraits aqueux………..………43
1.3.1 Déroulement de l’essai………...………….43
1.3.2 Evolution du poids corporel des rats au cours de l’essai de toxicité des extraits ………..………44
1.3.3 Aspect histologique des organes……….……….45
1.3.4. Taux plasmatique des ions, de la créatinine, des transaminases et des cholestérols chez les rats intoxiqués à la dose 2000 mg/kg d’extraits…..48
1.4. Développement et standardisation du modèle animal d’expérimentation..49
1.5 Mesure de l’impact de l’administration des extraits sur la pression artérielle dans le modèle d’expérimentation……….…52
2- Discussion……….…56
2.1 Extraction et screening phytochimique………...………56
2.2 Effets antihypertensifs des extraits aqueux des feuilles de Heliotropium indicum et de Gardenia ternifolia………..………57
2.3 Probables mécanismes d’action des extraits………...……….58
2.4 Toxicité des plantes……….59
Conclusion……….61
Perspectives………..……….62
Suggestions………...………..………62
Références………..………..……….63
Annexes……….75